CN112255327A - 乳制品中草铵膦含量的检测方法 - Google Patents
乳制品中草铵膦含量的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112255327A CN112255327A CN202010959386.4A CN202010959386A CN112255327A CN 112255327 A CN112255327 A CN 112255327A CN 202010959386 A CN202010959386 A CN 202010959386A CN 112255327 A CN112255327 A CN 112255327A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- glufosinate
- dairy product
- ammonium
- solution
- liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-[hydroxy(methyl)phosphoryl]butanoic acid Chemical compound CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 84
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 title claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 239000005561 Glufosinate Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 54
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims abstract description 13
- WSQCDHKJWQCQBB-UHFFFAOYSA-N acetonitrile 9H-fluoren-9-ylmethyl carbonochloridate Chemical compound CC#N.C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 WSQCDHKJWQCQBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 52
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 19
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims description 17
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 16
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical group CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 8
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 3
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 3
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000002098 selective ion monitoring Methods 0.000 claims description 3
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 13
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 9
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 9
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 2
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000013582 standard series solution Substances 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 6-[3-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-3-oxopropyl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)C(CCC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)=O DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012490 blank solution Substances 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000012263 liquid product Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L paraquat dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=C[N+](C)=CC=C1C1=CC=[N+](C)C=C1 FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 238000001121 post-column derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 230000005068 transpiration Effects 0.000 description 1
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/067—Preparation by reaction, e.g. derivatising the sample
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明属于食品检测领域，公开了一种乳制品中草铵膦含量的检测方法，先用含甲酸的甲醇溶液萃取乳制品中的草铵膦，再经C18吸附杂质后，加入硼酸盐缓冲液和氯甲酸‑9‑芴基甲酯乙腈溶液进行衍生化反应，分离、过滤，对所得待测液进行测定即可。本发明通过简单的检测方法去除乳制品中的强疏水性干扰物及杂质获得目标物草铵膦衍生物，减少残留草铵膦的损失；本发明的检测方法操作简便、高效、对草铵膦回收率高，解决了现有技术方案中无法检测乳制品中草铵膦含量的问题。本发明适合用于对乳制品中残留的草铵膦含量进行检测。
Description
技术领域
本发明属于食品检测领域，涉及乳制品检测，具体地说是一种乳制品中草铵膦含量的检测方法。
背景技术
草铵膦属广谱触杀型除草剂，内吸作用不强，与草甘膦杀根不同，草铵膦先杀叶，再通过植物的蒸腾作用，在植物木质部进行传导，其速效性在百草枯和草甘膦之间。草铵膦为广谱、触杀型、灭杀性除草剂，采用杂草茎叶定向喷雾处理，几乎可以用于所有宽行种植的果树、中耕作物、蔬菜和非耕地。尽管草铵膦属于非持久性农药，但大量、任意的使用仍会在农作物上有所残留，对人、畜构成威胁。
现在对于草铵膦的检测方法一般为液相色谱法和柱前衍生法，其中柱前衍生法又包括柱前衍生后气相色谱法、柱前衍生后气相色谱-质谱法和柱前衍生后液相色谱-质谱法。然而，由于乳制品基质复杂，含有大量强疏水性干扰物，如蛋白质、脂肪、有机酸等，采用现有的方法无法很好地净化，得到乳制品中的草铵膦。液相色谱-串联质谱仪对待测液的净化程度要求高，净化不好的话，极易对仪器造成污染，因此现有技术无法很好地检测乳制品中草铵膦的含量。
发明内容
本发明的目的，是要提供一种乳制品中草铵膦含量的检测方法，以解决现有技术方案中无法检测乳制品中草铵膦含量的问题。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种乳制品中草铵膦含量的检测方法，包括依次进行的以下步骤：
1)取待测乳制品加入含甲酸的甲醇溶液，经涡旋混匀、超声提取、离心分离后，得待净化液；
2)待净化液移至装有C18的容器中，涡旋混匀，再经离心分离，得待衍生液；
3)待衍生液中依次加入硼酸盐缓冲液和氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液，涡旋混匀后，经衍生化反应，离心分离、过滤，得待测液；
4)待测液上样于高效液相色谱-串联质谱仪测定，得测定结果。
作为一种限定，涡旋混匀的温度均为室温、时间均为8～15min；
步骤1)中，离心的转速为8000～12000r/min、时间为3～8min、温度为0～4℃；
超声提取的温度为室温、时间为10～20min；
步骤2)中，离心的转速为8000～12000r/min、时间为3～8min；
步骤3)中，离心的转速为8000～12000r/min、时间为3～8min；
衍生化反应的温度为35～45℃、时间为0.5～1.5h。
作为另一种限定，步骤3)中，所述过滤过程是采用微孔滤膜过滤。
作为进一步限定，微孔滤膜的孔径为0.2μm或0.22μm。
作为第三种限定，步骤1)中，待测乳制品与含甲酸的甲醇溶液的重量体积比为1g：1～2mL；
步骤2)中，待净化液与C18的重量体积比为1mL：0.05～0.1g；
步骤3)中，待衍生液与硼酸盐缓冲液的体积比为1：0.3～0.8；
待衍生液与氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液的体积比为1：0.3～0.8。
作为第四种限定，步骤1)中，含甲酸的甲醇溶液中甲酸浓度为0.8～1.5％；
步骤3)中，氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液中氯甲酸-9-芴基甲酯浓度为8～13g/L。
作为第五种限定，步骤2)中，所述的容器为离心管。
作为第六种限定，高效液相色谱-串联质谱仪的测定条件为：
①高效液相色谱条件：色谱柱为C18色谱柱，流速0.3mL/min，柱温40℃，进样体积1μL；流动相A相为5mmol/L乙酸铵水溶液、B相为乙腈；
②质谱条件为电离方式：离子源为电喷雾离子源(ESI)、正离子扫描，检测方式为多反应选择离子监测(MRM)，雾化气、气帘气、辅助加热气均为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气。
由于采用了上述技术方案，本发明与现有技术相比，所取得的技术进步在于：
由于含甲酸的甲醇溶液显酸性，酸性条件下蛋白质会发生变性沉淀，利于提取上层清液，且在酸性条件下可以增大草铵膦的提取效率。C18能够吸附乳制品中的强疏水性干扰物和杂质，本发明通过使用C18对乳制品中的干扰物进行吸附，在有效去除乳制品中干扰物的同时，减少目标物草铵膦的损失。本发明净化试样纯度高，测试结果杂峰少，减少了对仪器的污染。并且，本发明操作简便，标准曲线线性R2＞0.995，加标回收率在60～120％之间，精密度在3.6～9.0％之间，能够高效提升试样净化效果。
本发明的检测方法适用于对乳制品中残留的草铵膦含量进行检测。
附图说明
图1是本发明实施例1中50ng/mL的草铵膦衍生物标准系列液中草铵膦衍生物对应的色谱图；
图2是本发明实施例1中待测液中草铵膦衍生物的色谱图；
图3是本发明实施例1中草铵膦衍生物的标准曲线。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明做进一步详细说明，应当理解所描述的实施例仅用于解释本发明，并不限定本发明。
下述实施例中所有的试剂如无特殊说明均为现有市售试剂，试验方法无特殊说明均采用现有的试验方法。
草铵膦标准品，纯度≥95.0％，购自南京罗迈美生物科技有限公司。
高效液相色谱—串联质谱仪，配有电喷雾离子源(xevo TQ-XS，Waters)。
实施例1一种乳制品中草铵膦含量的检测方法
本实施例为一种乳制品中草铵膦含量的检测方法，包括依次进行的以下步骤：
1)取5g乳制品(本实施例为牛奶)置于50mL离心管中，量取5mL含1％甲酸的甲醇溶液加入离心管中，室温下涡旋混匀10min，再在室温下超声萃取10min，降温至0℃，10000r/min离心5min，分离上清液，得待净化液；
其中，乳制品可以为奶粉、牛奶、乳酪等，按上述步骤的顺序操作，可以打破乳制品在含水时形成的水包油结构，从而使乳制品中含有的残留草铵膦从水包油结构的包裹中裸露出来，萃取到有机相中；
奶粉和乳酪需先调制成液体制品，调制方法是准确称取2g奶粉/乳酪置于50mL离心管中，加水经涡旋混匀后，水定容至5mL，再次混匀，即得待测的乳制品。
2)移取待净化液至0.5g的C18填料的离心管中，室温下涡旋混匀10min，室温下10000r/min离心5min，分离上清液，得待衍生液；
通过选用C18填料的离心管针对性去除乳制品中的强疏水性干扰物，如蛋白质、脂肪等，同时能够减少对草铵膦的吸附，通过简单的方法去除乳制品中杂质的同时减少目标物(草铵膦)的损失。
3)取5g硼酸钠，用水溶解，定容至100mL，制得的浓度为50g/L、pH为9的硼酸盐缓冲液，备用；
准确吸取1mL待衍生液置于5mL离心管中，加入0.5mL硼酸盐缓冲液混匀，再加入0.5mL浓度为10.0g/L的氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液，室温下涡旋混匀10min，再于40℃水浴加热器中进行衍生化反应1h，衍生化反应完成后，室温下10000r/min离心5min，分离所得上清液再经0.22μm的有机微孔滤膜过滤，得待测液；
进一步地，采用有机微孔滤膜过滤去除有机溶液中的细小颗粒物质，对色谱柱和仪器起到保护作用。
4)称取不含草胺膦的牛奶样品5g置于5mL离心管中，量取5mL含1％甲酸的甲醇溶液加入离心管中，室温下涡旋混匀10min，再在室温下超声萃取10min，降温至0℃，10000r/min离心5min，分离上清液，得到的上清液即为样品空白基质提取液；
吸取0.1mL浓度为10.0μg/mL的草铵膦溶液，用样品空白基质提取液定容至1mL，即浓度为1μg/mL的草铵膦标准溶液，用于配制标准系列液。分别吸取0μL、5μL、10μL、15μL、25μL、50μL、100μL浓度为1μg/mL的草胺膦标准溶液，用样品空白基质提取液定容至1mL，使标准系列液浓度分别为0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、15ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL。
将草铵膦标准系列液分别置于5mL离心管中，加入0.5mL硼酸盐缓冲液混匀，再加入0.5mL浓度为10.0g/L的氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液，室温下涡旋混匀10min，再于40℃水浴加热器中进行衍生化反应1h，衍生化反应完成后，室温下10000r/min离心5min，分离所得上清液再经0.22μm的有机微孔滤膜过滤，得草铵膦衍生物标准系列液；
取草铵膦衍生物标准系列液分别上样于高效液相色谱-串联质谱仪测定，得到不同草铵膦衍生物标准系列液中草铵膦衍生物对应的谱图及保留时间，其中50ng/mL的草铵膦衍生物标准系列液中草铵膦衍生物对应的谱图及保留时间参见图1；
将待测液上样于高效液相色谱-串联质谱仪测定，得到待测液的测定结果，参见图2。
测定条件为：
高效液相色谱条件：色谱柱为C18色谱柱，50mm×2.1mm，粒径为1.7μm；
流速为0.3mL/min；
柱温为40℃；
进样体积为1μL。
流动相A相为5mmol/L乙酸铵水溶液，B相为乙腈，梯度洗脱程序见表1；
表1流动相及梯度洗脱程序
| 时间(min) | A相占流动相的体积百分比(％) | B相占流动相的体积百分比(％) | Curve |
| 0.00 | 10.0 | 90.0 | |
| 0.50 | 10.0 | 90.0 | 6 |
| 2.00 | 90.0 | 10.0 | 6 |
| 2.50 | 90.0 | 10.0 | 6 |
| 2.51 | 10.0 | 90.0 | 6 |
| 4.00 | 10.0 | 90.0 | 6 |
质谱条件：离子源为电喷雾离子源(ESI)，正离子扫描；
检测方式：多反应选择离子监测(MRM)；
雾化气、气帘气、辅助加热气均为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气；
毛细管电压/(kV)：2.00；
锥孔反吹气/(L/h)：150；
脱溶剂气温度/(℃)：450；
脱溶剂气流量/(L/h)：800。
测定结果：
(1)定性测定
按照上述条件测定待测液和草铵膦衍生物标准系列液，待测液中的色谱峰保留时间与草铵膦衍生物标准系列液对应的保留时间应一致，允许偏差小于±2.0％；在扣除背景后的待测液色谱图中，定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的草铵膦标准系列液色谱图，最大允许相对偏差不超过表2中规定的范围，则可判断待测液中存在对应的被测物，如果不能确证，应重新进样，以扫描方式(有足够灵敏度)、采用增加其他确证离子的方式或用其他灵敏度更高的分析仪器来确证。
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
| 相对丰度(基峰) | ＞50％ | ＞20％至50％ | ＞10％至20％ | ≤10％ |
| 允许的相对偏差 | ±20％ | ±25％ | ±30％ | ±50％ |
根据测定待测液中草铵膦的含量，选定浓度相近的草铵膦标准系列液进行高效液相色谱-串联质谱仪测定、分析。待测液和草铵膦衍生物标准系列液中草铵膦的响应值在仪器检测的线性范围内。对草铵膦衍生物标准系列液及待测液等体积进样测定。参见图1、图2可知，待测液测定的草铵膦衍生物色谱图与草铵膦标准系列液测定的草铵膦衍生物色谱图的保留时间一致，为1.52min(偏差为-0.65％)，草铵膦衍生物的保留时间、监测离子对、定量离子对、去簇电压及碰撞能量，参见下表3：
表3草铵膦衍生物标准系列液的测定结果一览表
待测液每次进行测量，以每次上机的标准溶液的保留时间作为参照，待测液的测定结果在允许偏差范围内。在测定过程中草铵膦衍生物标准系列液与待测液的保留时间在上机过程中略有偏差，其它参数(如定量离子对、定性离子对、Cone、Collision)均为固定参数，均一致。
(2)定量测定
实验采用外标法单离子定量测定，为减少基质的影响，定量用草铵膦衍生物标准系列液应采用空白待测液配制。根据待测液中草铵膦的含量，选定浓度相近的草铵膦衍生物标准系列液进行高效液相色谱-串联质谱仪测定、分析。待测液和草铵膦标准系列液中草铵膦的响应值均应在仪器检测的线性范围内。取草铵膦衍生物的峰面积为纵坐标，草铵膦标准系列液的浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，参见图3，得到线性回归方程：y＝389.755x-322.431，R2＝0.9986。
将待测液测定的峰面积代入线性回归方程，计算得待测液的浓度为0.0092mg/kg。
实施例2～5乳制品中草铵膦含量的检测方法
实施例2～5分别为一种乳制品中草铵膦含量的检测方法，它们的步骤与实施例1基本相同，不同之处仅在于工艺参数的不同，具体详见表4：
表4实施例2～5各项参数一览表
实施例2～5的测定结果如下：
(1)定性测定
表5实施例2～5的保留时间及偏差一览表
| 实施例 | 实例2 | 实例3 | 实例4 | 实例5 |
| 保留时间 | 1.54 | 1.53 | 1.52 | 1.53 |
| 偏差 | 0.65％ | 0.00％ | -0.65％ | 0.00％ |
由表5可以看出，待测液中的色谱峰保留时间与草铵膦标准系列液对应的保留时间偏差允许偏差小于±2.0％，实施例2～5均在允许偏差范围内，满足对于保留时间偏差的要求。
(2)定量测定
实验采用外标法单离子定量测定，为减少基质的影响，定量用标准应采用空白待测液配制草铵膦标准溶液。根据待测液中草铵膦的含量，选定浓度相近的草铵膦标准系列液进行高效液相色谱-串联质谱仪测定、分析。待测液和草铵膦标准系列液中草铵膦的响应值均应在仪器检测的线性范围内。取草铵膦衍生物的峰面积为纵坐标，草铵膦标准系列液的浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，得到实例2～5的标准工作曲线及检测结果如表6所示。
表6实施例2～6的标准工作曲线及检测结果一览表
实施例2～5其它部分的内容，与实施例1相同。
需要注意，实施例1～5，仅是本发明的较佳实施例，并非是对本发明所作的其他形式的限定，任何熟悉本专业的技术人员都可能利用上述技术内容作为启示加以变更或改型为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明权利要求的技术实质，对以上实施例所作出的简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明权利要求保护的范围。
Claims (8)
1.一种乳制品中草铵膦含量的检测方法，其特征在于，该检测方法包括依次进行的以下步骤：
1）取待测乳制品加入含甲酸的甲醇溶液，经涡旋混匀、超声提取、离心分离后，得待净化液；
2）待净化液移至装有C18的容器中，涡旋混匀，再经离心分离，得待衍生液；
3）待衍生液中依次加入硼酸盐缓冲液和氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液，涡旋混匀后，经衍生化反应，离心分离、过滤，得待测液；
4）待测液上样于高效液相色谱-串联质谱仪测定，得测定结果。
2.根据权利要求1所述的乳制品中草铵膦含量的检测方法，其特征在于，
步骤1）中，离心的转速为8000~12000 r/min、时间为3~8 min、温度为0~4 ℃；
超声提取的温度为室温、时间为10~20 min；
步骤2）中，离心的转速为8000~12000 r/min、时间为3~8 min；
步骤3）中，离心的转速为8000~12000 r/min、时间为3~8 min；
衍生化反应的温度为35~45 ℃、时间为0.5~1.5 h。
3.根据权利要求1所述的乳制品中草铵膦含量的检测方法，其特征在于，步骤3）中，所述过滤过程是采用微孔滤膜过滤。
4.根据权利要求3所述的乳制品中草铵膦含量的检测方法，其特征在于，微孔滤膜的孔径为0.2 μm或0.22 μm。
5.根据权利要求1所述的乳制品中草铵膦含量的检测方法，其特征在于，
步骤1）中，待测乳制品与含甲酸的甲醇溶液的重量体积比为1 g：1~2 mL；
步骤2）中，待净化液与C18的重量体积比为1 mL：0.05~0.1 g；
步骤3）中，待衍生液与硼酸盐缓冲液的体积比为1：0.3~0.8；
待衍生液与氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液的体积比为1：0.3~0.8。
6.根据权利要求1所述的乳制品中草铵膦含量的检测方法，其特征在于，
步骤1）中，含甲酸的甲醇溶液中甲酸浓度为0.8~1.5%；
步骤3）中，氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液中氯甲酸-9-芴基甲酯浓度为8~13 g/L。
7.根据权利要求1所述的乳制品中草铵膦含量的检测方法，其特征在于， 步骤2）中，所述的容器为离心管。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的乳制品中草铵膦含量的检测方法，其特征在于，高效液相色谱-串联质谱仪的测定条件为：
①高效液相色谱条件：色谱柱为C18色谱柱，流速0.3 mL/min，柱温40 ℃，进样体积1 μL；流动相A相为5 mmol/L乙酸铵水溶液、B相为乙腈；
②质谱条件为电离方式：离子源为电喷雾离子源、正离子扫描，检测方式为多反应选择离子监测，雾化气、气帘气、辅助加热气均为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010959386.4A CN112255327B (zh) | 2020-09-14 | 2020-09-14 | 乳制品中草铵膦含量的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010959386.4A CN112255327B (zh) | 2020-09-14 | 2020-09-14 | 乳制品中草铵膦含量的检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112255327A true CN112255327A (zh) | 2021-01-22 |
| CN112255327B CN112255327B (zh) | 2023-06-13 |
Family
ID=74232206
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010959386.4A Active CN112255327B (zh) | 2020-09-14 | 2020-09-14 | 乳制品中草铵膦含量的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112255327B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115290796A (zh) * | 2022-08-19 | 2022-11-04 | 广电计量检测(福州)有限公司 | 一种草甘膦及其代谢产物残留的检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103822995A (zh) * | 2014-03-16 | 2014-05-28 | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 食品中草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸残留量的测定方法 |
| CN103837388A (zh) * | 2014-03-16 | 2014-06-04 | 刘靖靖 | 一种用于强极性农药残留检测的前处理方法 |
| EP3466510A1 (en) * | 2017-10-05 | 2019-04-10 | NofaLab B.V. | Method for detecting pesticides in food products |
-
2020
- 2020-09-14 CN CN202010959386.4A patent/CN112255327B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103822995A (zh) * | 2014-03-16 | 2014-05-28 | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 食品中草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸残留量的测定方法 |
| CN103837388A (zh) * | 2014-03-16 | 2014-06-04 | 刘靖靖 | 一种用于强极性农药残留检测的前处理方法 |
| EP3466510A1 (en) * | 2017-10-05 | 2019-04-10 | NofaLab B.V. | Method for detecting pesticides in food products |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| STEFAN EHLING ET AL: "Analysis of Glyphosate and Aminomethylphosphonic Acid in Nutritional Ingredients and Milk by Derivatization with Fluorenylmethyloxycarbonyl Chloride and Liquid Chromatography −Mass Spectrometry", 《J. AGRIC. FOOD CHEM.》 * |
| YANG LIAO ET AL: "Validation and application of analytical method for glyphosate and glufosinate in foods by liquid chromatography-tandem mass spectrometry", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 * |
| 叶瑞洪 等: "分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定果蔬、牛奶、植物油和动物肌肉中残留的61种有机磷农药", 《色谱》 * |
| 张燕 等: "分散固相萃取/衍生化-高效液相色谱-串联质谱法同时测定水和食品中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸残留", 《食品安全质量检测学报》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115290796A (zh) * | 2022-08-19 | 2022-11-04 | 广电计量检测(福州)有限公司 | 一种草甘膦及其代谢产物残留的检测方法 |
| CN115290796B (zh) * | 2022-08-19 | 2024-02-27 | 广电计量检测(福州)有限公司 | 一种草甘膦及其代谢产物残留的检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112255327B (zh) | 2023-06-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102735784B (zh) | 一种超高效液相色谱-串联四级杆质谱同时测定中药中100种农药残留的方法 | |
| CN104535664B (zh) | 一种同时检测芝麻酱中多种霉菌毒素的方法 | |
| CN109521135B (zh) | 一种固相萃取结合uplc-ms/ms快速测定板栗中14种毒素的方法 | |
| CN111007185A (zh) | 一种测定食用植物酵素中农药残留的方法 | |
| CN105891374A (zh) | 一种同时测定再造烟叶中8种防腐剂的检测方法 | |
| CN110780009B (zh) | 一种超高效液相色谱-串联质谱法同时检测果蔬中7种酰胺类农药残留的方法 | |
| CN112834642A (zh) | 高油复杂基质样品前处理技术结合uplc-msms测定191种农药残留的方法 | |
| CN106950298A (zh) | 一种同时检测新会陈皮中真菌毒素和农药残留的方法 | |
| CN105372353A (zh) | 一种食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量的测定方法 | |
| Zhang et al. | Disposable pipette extraction (DPX) coupled with liquid chromatography–tandem mass spectrometry for the simultaneous determination of pesticide residues in wine samples | |
| CN112229929A (zh) | 一种在线gpc-gc-ms/ms非靶向快速筛查茶叶中农药残留的方法 | |
| CN105866315B (zh) | 一种电子烟烟液中氨基酸的测定方法 | |
| CN103123345B (zh) | 一种快速检测土壤中的苯氧乙酸类除草剂的方法 | |
| CN110779995A (zh) | 一种检测乳制品中残留农药含量的方法 | |
| CN112255327A (zh) | 乳制品中草铵膦含量的检测方法 | |
| CN113325103A (zh) | 一种同时测定毛发中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己的分析方法 | |
| CN112326817A (zh) | 一种鉴别茴香蜂蜜的方法 | |
| Jiang et al. | Rapid determination of dimethoate in nanoliter of juice using surface desorption atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometry | |
| CN108982703B (zh) | 一种多酚类物质的液质联用检测方法 | |
| CN113433233A (zh) | 果蔬中乙烯利的离心超滤-离子色谱-三重四级杆质谱检测方法 | |
| CN112946153B (zh) | 一种同时测定塑料桶装植物油中多种污染物的方法 | |
| CN114280206A (zh) | 香辛料及其制品中真菌毒素的检测方法 | |
| CN114034799A (zh) | 一种葡萄中氟唑菌酰胺残留量的检测方法 | |
| CN103149289A (zh) | 一种烟草中2,4-d残留量的测定方法 | |
| CN102901778A (zh) | 检测乳或乳制品中氯霉素的预处理方法及乳或乳制品中氯霉素检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 050000 No. 68 stone Copper Road, Hebei, Shijiazhuang Applicant after: JUNLEBAO Dairy Group Co.,Ltd. Address before: 050000 No. 68 stone Copper Road, Hebei, Shijiazhuang Applicant before: THE SHIJIAZHUANG JUNLEBAO DAIRY Co.,Ltd. |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 050000 No. 68 stone Copper Road, Hebei, Shijiazhuang Patentee after: Junlebao Dairy Group Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: 050000 No. 68 stone Copper Road, Hebei, Shijiazhuang Patentee before: JUNLEBAO Dairy Group Co.,Ltd. Country or region before: China |