CN112352681A - 一种促进大花独蒜兰种子萌发的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种促进大花独蒜兰种子萌发的方法，所述方法包括以下步骤：(1)种子采收及预处理：待大花独蒜兰蒴果变成黄色成熟后，采收回实验室，经自然稍稍干燥，取出种子,干燥后保存备用；(2)种子无菌化处理；(3)无菌播种处理：用一次性大号的注射器吸取种子溶液,将种子溶液尽可能少的均匀地转移到pH为5.8的无菌萌发培养基上，轻轻晃动培养皿,以使得种子均匀分散开；(4)接种完成后，将培养皿放在温度为25(±1)℃，光照强度为800‑1200lx，光照12h/d的条件下进行培养。采用本发明的方法处理大花独蒜兰种子，不仅可以大幅度缩短大花独蒜兰种子萌发所需的时间，同时还可以显著提高大花独蒜兰种子的萌发率。

Description

一种促进大花独蒜兰种子萌发的方法
技术领域
本发明涉及兰科植物繁殖技术领域，特别涉及一种促进大花独蒜兰种子萌发的方法。
背景技术
兰科植物(Orchidaceae)属于被子植物门单子叶植物纲，全世界分布约有700属35000余种(Dressler，1993；Cribb，2003)，其种类数量仅次于菊科植物，位列第二大科(郎楷永，1994)。它外形优美，颜色鲜艳，极具观赏价值和药用价值。
大花独蒜兰(Pleione grandiflora Rolfe)是独蒜兰属(Pleione)春花独蒜兰组(Sect.Humiles)的一种岩生或附生草本，多生长于林下或林缘等地有苔藓覆盖的岩石上，也有部分生长在有苔藓覆盖的树干上。该种是独蒜兰属中观赏价值很高的种，适宜用作小型盆栽花卉，其花型似卡特兰，花期4-5月，华葶从无叶的老假鳞茎基部发出,直立,长达10-15cm；花单生，偶有双生，花色丰富，具有白色、粉色、粉红色、紫色等多种颜色，花朵较大，长度能达到5-5.5cm,宽3-4cm；。大花独蒜兰只有1枚叶片，该种与同属其它种相比，主要区别在于花朵唇瓣上的褶片是片层状且呈不规则撕裂状，通常5-7条褶片。主要分布在云南省的腾冲、大理、临沧、景东、蒙自、元阳、西藏墨脱、越南北部，海拔大约2600-2900m的山林。大花独蒜兰的种子细小，不具有胚乳，种子萌发成苗比较困难，自然状态下，有性繁殖率低，主要是以假鳞茎分株繁殖的无性繁殖方式来延续后代，繁殖速度慢且数量有限。
目前，独蒜兰属中已有一些种的无菌萌发方面的研究报道。在MS培养基上，低浓度的细胞分裂素(6-BA或KT)对独蒜兰(Pleione bulbocodioides)种子萌发有良好的促进作用；生根培养基是1/2MS+IBA 1.0+AC 1g/L最好。毛唇独蒜兰(Pleione hookeriana)在TH+NAA 0.2mg/L+6-BA 1mg/L下丛生芽的出芽率93％，增殖倍数比1/2MS多。秋花独蒜兰(Pleione maculate)种子在B5液体培养基中诱导的原球茎最多，其快速增殖培养基为：花宝0.3％+糖2％+BA 0.5mg/L。生长激素NAA、2，4-D对云南独蒜兰(Pleione yunnanensis)种子无菌萌发具有促进作用，激素组合6-BA 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L有利于原球茎的增殖与生长。白花独蒜兰(Pleione albiflora)在KC+CM 100mg/L+AC 2g/L的培养基上进行种子萌发，在MS+NAA 1.0+6-BA 0.2的培养基上进行原球茎增殖，在花宝2号(N:P:K＝20:20:20)2g/L+NAA 0.5g/L+香蕉匀浆100ml/L+AC 2g/L培养基上生根和移栽。二叶独蒜兰(Pleionescopulorum)的无菌种子萌发培养基为：MS+NAA 0.2mg/L。
从独蒜兰属中已发表的无菌萌发条件来看，各个种的无菌培养条件差异较大，从种子萌发、原球茎增殖、生根培养基诱导根系生成、萌发过程中生长激素的使用和使用激素的种类等都各有不同。
采用传统方法处理大花独蒜兰种子，种子萌发困难、萌发率低，萌发周期较长，而现有技术中又鲜有能够提早大花独蒜兰种子萌发的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种促进大花独蒜兰种子萌发的方法，该方法对大花独蒜兰种子具有提早萌发时间及提高萌发率的作用。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种促进大花独蒜兰种子萌发的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)种子采收及预处理：待大花独蒜兰蒴果变成黄色成熟后，采收回实验室，经自然稍稍干燥，用解剖刀切开果荚,小心的取出种子,装入称量纸做成的种子干燥袋中,将干燥袋放置于密封的干燥皿内经氯化锂缓慢脱水干燥后,将种子保存于Asone高硼硅玻璃密封样品瓶中,再将样品瓶放置于带变色硅胶的密封盒子中,保存备用；
(2)种子无菌化处理：用称量纸做成种子包，从密封的样品瓶中取出少量的大花独蒜兰种子装入种子包，将种子包密封后，在超净工作台上，放入装有75％酒精的烧杯中，灭菌5-10s，无菌水冲洗3-5次，然后在10％NaCLO溶液中消毒7min，再次用无菌水冲洗3-5次；在无菌条件下，取出种子包，用消过毒的无菌剪刀，剪开种子包，放入无菌水中，摇匀，制成无菌的种子溶液；
(3)无菌播种处理：在超净工作台上,用一次性大号的注射器吸取种子溶液,将种子溶液尽可能少的均匀地转移到pH为5.8的无菌萌发培养基上，轻轻晃动培养皿,以使得种子均匀分散开；所述无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 0.5～3.0mg/L+2,4-D 1.0～2.0mg/L+蔗糖10～30g/L+活性炭0.2％～0.75％(w/v)；
(4)接种完成后，将培养皿放在温度为25(±1)℃，光照强度为800-1200lx，光照12h/d的条件下进行培养。
进一步地，步骤(3)中所述无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 1.0～3.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+蔗糖15～25g/L+活性炭0.2％～0.5％(w/v)。
进一步地，步骤(3)中所述无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.2％(w/v)。
进一步地，步骤(3)中所述无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 3.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.2％(w/v)。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
采用本发明的方法处理大花独蒜兰种子，不仅可以大幅度缩短大花独蒜兰种子萌发所需的时间，同时还可以显著提高大花独蒜兰种子的萌发率，21-30天即可使得大花独蒜兰种子达到90％以上的萌发率，种子萌发整齐。
附图说明
图1是大花独蒜兰的干种在显微镜下的照片；
图2是长出芽点的大花独蒜兰种子在显微镜下的照片；
图3是萌发后的大花独蒜兰种子在显微镜下的照片。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
需要说明的是，以下实施例中的试验材料采自云南省林业和草原科学院兰花种质资源收集与保存温室，试验用具均采用市面上能够购买得到的常规产品。
实施例1：
(1)种子采收及预处理：待大花独蒜兰蒴果变成黄色成熟后，采收回实验室，经自然稍稍干燥，用解剖刀切开果荚,小心的取出种子,装入称量纸做成的种子干燥袋中,将干燥袋放置于密封的干燥皿内经氯化锂缓慢脱水干燥后,将种子保存于Asone高硼硅玻璃密封样品瓶中,再将样品瓶放置于带变色硅胶的密封盒子中,保存备用；
(2)种子无菌化处理：用称量纸做成种子包，从密封的样品瓶中取出少量的大花独蒜兰种子装入种子包，将种子包密封后，在超净工作台上，放入装有75％酒精的烧杯中，灭菌5-10s，无菌水冲洗3-5次，然后在10％NaCLO溶液中消毒7min，再次用无菌水冲洗3-5次；在无菌条件下，取出种子包，用消过毒的无菌剪刀，剪开种子包，放入无菌水中，摇匀，制成无菌的种子溶液；
(3)无菌播种处理：在超净工作台上,用一次性大号的注射器吸取种子溶液,将种子溶液尽可能少的均匀地转移到pH为5.8的无菌萌发培养基上，轻轻晃动培养皿,以使得种子均匀分散开；所述无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 1.0mg/L+蔗糖10g/L+活性炭0.4％(w/v)；
(4)接种完成后，将培养皿放在温度为25(±1)℃，光照强度为800-1200lx，光照12h/d的条件下进行培养。
实施例2：
本实施例与实施例1相同的特征不在赘述，不同的特征在于：
本实施例中的无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.2％(w/v)。
实施例3：
本实施例与实施例1相同的特征不在赘述，不同的特征在于：
本实施例中的无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 2.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.75％(w/v)。
实施例4：
本实施例与实施例1相同的特征不在赘述，不同的特征在于：
本实施例中的无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 3.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.2％(w/v)。
实施例5：
本实施例与实施例1相同的特征不在赘述，不同的特征在于：
本实施例中的无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 2.0mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.2％(w/v)。
实施例6：
本实施例与实施例1相同的特征不在赘述，不同的特征在于：
本实施例中的无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L+蔗糖10g/L+活性炭0.4％(w/v)。
实施例7：
本实施例与实施例1相同的特征不在赘述，不同的特征在于：
本实施例中的无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 2.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.75％(w/v)。
实施例8：
本实施例与实施例1相同的特征不在赘述，不同的特征在于：
本实施例中的无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 3.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.4％(w/v)。
实施例9：
本实施例与实施例1相同的特征不在赘述，不同的特征在于：
本实施例中的无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 3.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+蔗糖20g/L。
实施例10：
本实施例与实施例1相同的特征不在赘述，不同的特征在于：
本实施例中的无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+活性炭0.2％(w/v)。
实施例11(对比例)：
本实施例中的大花独蒜兰种子采用常规方法进行处理。
数据统计与分析：
大花独蒜兰种子萌发前后状态参照图1-图3。
以培养皿中种子形成绿色记为种子萌发，待生长3个月后计数100粒种子中长成颗粒状的原球茎数量，以100粒种子中的原球茎数量计算原球茎诱导率。结果如表1，实施例4能够使得大花独蒜兰较好的增殖，实施例2能够使得大花独蒜兰原球茎生长较好且快。
表1不同处理的培养基对大花独蒜兰原球茎诱导的影响
Table1 Effects of different media formulas on Pleione grandifloraprotocorm induction
Figure BDA0002792938740000061
上述实施例仅仅是本发明的部分实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制；任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (4)

1.一种促进大花独蒜兰种子萌发的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)种子采收及预处理：待大花独蒜兰蒴果变成黄色成熟后，采收回实验室，经自然稍稍干燥，用解剖刀切开果荚,小心的取出种子,装入称量纸做成的种子干燥袋中,将干燥袋放置于密封的干燥皿内经氯化锂缓慢脱水干燥后,将种子保存于Asone高硼硅玻璃密封样品瓶中,再将样品瓶放置于带变色硅胶的密封盒子中,保存备用；
(2)种子无菌化处理：用称量纸做成种子包，从密封的样品瓶中取出少量的大花独蒜兰种子装入种子包，将种子包密封后，在超净工作台上，放入装有75％酒精的烧杯中，灭菌5-10s，无菌水冲洗3-5次，然后在10％NaCLO溶液中消毒7min，再次用无菌水冲洗3-5次；在无菌条件下，取出种子包，用消过毒的无菌剪刀，剪开种子包，放入无菌水中，摇匀，制成无菌的种子溶液；
(3)无菌播种处理：在超净工作台上,用一次性大号的注射器吸取种子溶液,将种子溶液尽可能少的均匀地转移到pH为5.8的无菌萌发培养基上，轻轻晃动培养皿,以使得种子均匀分散开；所述无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA0.5～3.0mg/L+2,4-D 1.0～2.0mg/L+蔗糖10～30g/L+活性炭0.2％～0.75％(w/v)；
(4)接种完成后，将培养皿放在温度为25(±1)℃，光照强度为800-1200lx，光照12h/d的条件下进行培养。
2.根据权利要求1所述的促进大花独蒜兰种子萌发的方法，其特征在于：步骤(3)中所述无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 1.0～3.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+蔗糖15～25g/L+活性炭0.2％～0.5％(w/v)。
3.根据权利要求1所述的促进大花独蒜兰种子萌发的方法，其特征在于：步骤(3)中所述无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.2％(w/v)。
4.根据权利要求1所述的促进大花独蒜兰种子萌发的方法，其特征在于：步骤(3)中所述无菌萌发培养基包括1/2MS+6-BA 3.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.2％(w/v)。
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