CN110250009B - 一种利用白术丛生芽扩繁白术栽子种苗的方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种利用白术丛生芽扩繁白术栽子种苗的方法及其应用，所述方法包括以下步骤：1)以保存的白术组培苗为基础扩繁材料，用白术组培苗茎尖和腋芽进行丛生芽分化诱导；2)对通过丛生芽分化诱导形成的丛生芽进行生长培养；3)对通过生长培养的丛生芽进行生根诱导培养；4)对通过生根诱导培养的丛生芽进行壮苗培养；5)对通过壮苗培养的丛生芽进行炼苗处理(敞瓶炼苗、基质炼苗)；6)对通过炼苗处理的丛生芽进行苗圃移栽和管理，生产白术栽子(白术种苗)；7)对苗圃生产的白术栽子进行分级和包装。

Description

一种利用白术丛生芽扩繁白术栽子种苗的方法及其应用

技术领域

本发明涉及药材种苗繁殖技术领域，具体而言，涉及一种利用白术丛生芽扩繁白术栽子种苗的方法及其应用。

背景技术

白术(Atractylodes macrocephala koidz.)为菊科多年生草本植物，高50-60cm，根状茎肥大成块状。白术以干燥根茎入药，性温，味甘苦。有健脾益气、利尿化湿的功效，主治脾虚泄泻、水肿、痰饮等症。在这个快速发展的时代，白术市场需求量大增，寻找一种含量稳定、品质好的药材、迫在眉睫。

根据我国中药材的栽培现状，白术生产过程中长期只种不选，品种退化，药材产量和质量逐年下降，化学成分含量不稳定，无法满足市场需求。为了改善这种现状,提高白术药材的质量和产量，本发明以白术组培苗茎尖或腋芽诱导的白术丛生芽为材料，离体培养，再通过对培养技术进行优化，筛选出最佳培养基组成，这种方法获得的再生植株遗传性相对稳定，繁殖系数显著提高，为今后在生产上快速示范推广大量优质种苗。有助于品种的推广应用。此外，建立白术的高效快繁技术，能够提纯复壮和快速繁殖优良品种，并且建立最佳培养环境，筛选方案，为它的可持续发展奠定了一定的基础。为白术建立稳定、可靠、全面的质量控制方法提供科学依据。

有鉴于此，完成了该方法的系统的研究，在进行技术研究用总结的基础上提出本发明申请。

发明内容

本发明的第一目的为了改善我国中药材的栽培现状，白术生产过程中长期只种不选，品种退化，而且块根繁殖难以在短期内大面积种植，药材产量和质量逐年下降，化学成分含量不稳定，无法满足市场需求。本发明提供了一种白术种苗繁殖技术，这种方法获得再生植株遗传性相对稳定，繁殖速度快，整个繁殖过程仅需要55-70天，为白术建立稳定、可靠、全面的质量控制方法提供科学依据。

本发明的第二个目的在于提供一种所述方法在温室大棚白术种苗的应用，该应用可以在保持高成活率的同时繁殖系数显著提高，同时得到一种大小均匀，典型性状一致性，畸形比例为零无性白术栽子。为遗传性稳定、健壮、优势白术类型种苗扩繁提供了理论与实践依据。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

1)以保存的白术组培苗为基础扩繁材料，对其进行丛生芽分化诱导；

2)对通过丛生芽分化诱导形成的丛生芽进行生长培养；

3)对通过生长培养的丛生芽进行生根诱导培养；

4)对通过生根诱导培养的丛生芽进行壮苗培养；

5)对通过壮苗培养的丛生芽进行炼苗处理(敞瓶炼苗、基质炼苗)；

6)对通过炼苗处理的丛生芽进行苗圃移栽和管理，生产白术栽子(白术种苗)；

7)对苗圃生产的白术栽子进行分级和包装。

(1)采用本发明的方法可以对白术丛生芽种苗进行快速的无性繁殖，高效地提供优势种群Ⅱ的白术种苗，通过无性繁殖的方式稳定其遗传性状，扩大群体数量，有利于优势群体的种质资源的保存、评价与利用。此外，本发明的方法能够快速繁殖，整个过程仅需55-70天。

优选地，所述步骤1)包括a、白术组培苗中外植体的选择：无菌培养体系中白术优势种群Ⅱ的健壮单株作为外植体；b、对a中所述外植进行修剪处理：根据外植体的大小和腋芽的多少将其修剪成1-2.5cm长一叶一芽的小腋芽,每株可修剪成3-5个小腋芽；c、对b中获得的小腋芽进行丛生芽分化诱导:将每个小腋芽直接接种到支撑垫(腋芽托，下同)上，每瓶1个小腋芽，并于光照时间10-20h/d，光强1500-2000lx，温度24±2℃的培养室中培养10-15d，其中，所述腋芽诱导分化培养基1/2MS液体培养基，其组分按质量体积浓度计包括：1.0-2.0mg/L 6-BA、0.4-0.8mg/L NAA、0.1-0.5mg/L IBA、0.2-0.6mg/L GA3、35-50g/L蔗糖，pH为5.8-6.0。

其中，所用培养瓶为圆柱形的500ml玻璃瓶，每瓶倒80～100ml液体培养基，液面上加一个支撑垫，接种时支撑垫的一半浸在丛生芽分化诱导液体培养基中。

优选地，所述步骤2)对步骤1)丛生芽分化诱导形成的丛生芽进行生长培养，具体步骤如下：当步骤1)中丛生芽分化诱导形成的丛生芽长到1-2cm后，将原有培养基吸出，灌入生长培养基，培养7-11天左右，即可长满瓶。

其中，所述生长培养基为MS液体培养基，20-40g/L蔗糖每瓶倒80-100ml液体培养基，支撑垫的一半浸在液体生长培养基中。

优选的，所述步骤2)中每瓶转接1个小腋芽，经分化诱导，平均每瓶可长出3.5-5.5个丛生芽，每个丛生芽可修剪成4-7个小腋芽，增值倍数为14-38.5。

优选的，步骤3)对通过生长培养的丛生芽进行生根诱导培养，具体步骤如下：将步骤2)培养的丛生芽修剪成1-2cm长的小腋芽后，按1-5芽/瓶转接到生根诱导培养基中，并于光照10-20h/d，光强1500-2000lx，温度24±2℃的培养室中培养7-12d。

优选地，所述生根诱导培养的具体步骤如下：将步骤2)培养的白术丛生芽剪切后按3芽/瓶“品字形”排列转接到生根培养基中并于光照10-20h/d，光强1500-2000lx，温度24±2℃的培养室中培养7-12d。

其中，所述液体生根诱导培养基是1/4MS液体培养基，其组分按质量体积浓度计包括：0.1-0.7mg/L NAA、0.2-0.5mg/L IBA，蔗糖30-50g/L，pH为5.8-6.0。

优选的，所述步骤4)对通过生根诱导培养的丛生芽进行壮苗培养；具体步骤如下：将步骤3)中丛生芽诱导生根液体培养基吸出，再灌入壮苗液体培养基，并于光照10-20h/d，光强1500-2000lx，温度24±2℃的培养室中培养7-10d。

其中，所述壮苗培养基是MS液体培养基+20-40g/L蔗糖；

优选的，所述步骤5)中炼苗为：在步骤4)中的壮苗培养完成后，将生根壮苗培养基置于炼苗室常温闭瓶炼苗0-3d，旋松所述生根培养基的培养瓶盖0-2d，全开所述瓶盖1-3d；

优选地，所述炼苗为：在步骤4)中的生根壮苗培养完成后，将生根壮苗培养瓶置于炼苗室常温闭瓶炼苗2d，旋松所述生根培养基的培养瓶盖1d，全开所述瓶盖2d。

优选的，在步骤5)敞瓶炼苗完成后将白术苗置于清水中，洗去根部培养液，捞出，移栽至穴盘基质中，每2-4d喷水1次，3-4d后喷施1g/L的多菌灵或甲基托布津，隔5-7d再喷施1次以防病菌。14-15d后逐渐减少喷水的次数，并每6-8天喷施一次低浓度的营养液，生长20-30天，待有新根长出，即可定植于富含腐殖质的沙质土壤中。

优选的，步骤5)所述低浓度营养液的组分为1/8MS营养液。

优选地，步骤5)所述的穴盘基质为泥炭土：珍珠岩按2:1比例配成的混合物。

优选地，步骤5)所述的长出新根是指新生根系将基质包裹，形成稳定的根系基质系统。

优选的，在步骤6)对通过炼苗处理(闭瓶炼苗、旋盖炼苗、敞瓶炼苗、基质炼苗)的丛生芽苗进行苗圃移栽和管理，生产白术栽子(白术种苗)。

于4-6月移栽至苗圃的白术丛生芽苗，返青期间(移栽30-40天)进行适当遮阳，每5-7天浇水一次，每7-10天喷施一次1g/L多菌灵以防病菌，返青期后，去掉遮阳设备，在白术丛生芽苗的行间施一定量的农家肥，进行人工除草，按照白术种苗生产技术规程(DB42/T328-2005)的要求进行栽培管理。

优选的，在步骤6)中所得的白术无性栽子，大小均匀，皆是典型白术优势种群的种苗类型，无畸形，明显优于种子栽子。

优选的，在步骤7)对苗圃生产的白术栽子进行分级和包装，具体步骤如下：将步骤6)所得典型白术优势种群的种苗，依据白术种苗等级标准，按根茎重、根数、根茎直径和感观指标分为一、二、三等。进行分级和包装。

本发明的另一方面涉及所述在温室大棚白术载苗中的应用。

本发明的方法可以周年在温室大棚进行生产，丛生芽扩繁周期为25天，增殖14-38.5倍/周期，每年繁殖14个周期，年繁殖系数稳定在1:120000-400000，术载苗成活率达到98％，得苗率为1:117600-392000。可得到大量的优势种群无性白术栽子。

本发明的优势：

(1)本发明通过组织培养技术的应用，对传统的白术栽培种分类型进行提纯复壮、恢复其品种特性，提高了白术品种选育过程中对资源材料的鉴定筛选的准确性，为品种选育打下坚实的资源材料基础。

(2)本发明通过组织培养技术的应用，对白术品种选育进程中鉴定筛选出的优势类型的典型单株进行快速繁殖，通过无性繁殖的方式稳定其遗传性状，克服了有性繁殖后代(白术种子栽子)性状持续分离的现象，为品种选育奠定基础。

(3)本发明通过组织培养技术的应用，迅速扩大白术栽培种各类型无性繁殖后代(白术丛生芽栽子)数量，为种质资源的保存、评价与利用提供技术支撑。

(4)本发明通过组织培养技术的应用，特别有利于白术优势类型的品种优势在白术药材生产中及时得到应用。

(5)本发明通过组织培养技术的应用与准确的性状鉴定相结合，缩短了白术品种选育年限，加速了白术优良品种选育进程。

(6)本发明通过组织培养技术的应用，以白术组培苗取代白术种子，通过白术丛生芽进行无性栽子生产，取代了传统的以种子繁殖生产与供给白术种苗(白术种子栽子)方式，实现了白术丛生芽栽子种苗的纯度高、质量好、后代性状稳定、植株健壮、药材生产能力强的目标，在白术品种选育与良种繁育技术领域具有突破性的创新意义。

(7)本发明还提供了所述方法的具体操作流程与优化方案：白术组培苗-丛生芽分化诱导-丛生芽生长培养-丛生芽生根诱导培养-丛生芽壮苗培养--丛生芽炼苗处理(敞瓶炼苗、基质炼苗)-苗圃移栽和管理-白术丛生芽栽子分级与包装。

(8)本发明还提供了该方法的应用效果的验证实例。

具体实施方式

下面将结合实施实例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施实例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施实例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施实例1

选取选择无菌培养体系中白术优势种群、优良单株、健壮、幼嫩的白术苗作为外植体，对外植进行修剪处理：根据外植体的大小和腋芽的多少将其修剪成1-2.5cm长一叶一芽的小腋芽,每株可修剪成3-5个小腋芽，放置于培养皿中。

按照以下步骤繁殖白术种苗：

1.以保存的白术组培苗为基础扩繁材料，对其进行丛生芽分化诱导：使用经过高压灭菌的医用镊子、医用剪刀，将处理好的小腋芽按1个/每瓶直接接种到装有丛生芽分化诱导液体培养基支撑垫(腋芽托，下同)上：1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.4mg/L NAA+0.1mg/LIBA+0.2mg/L GA3+35g/L蔗糖，pH为5.8。并于光照时间10h/d，光强1500lx，温度24±2℃的培养室中培养10d。

其中，所用培养瓶为圆柱形的300ml玻璃瓶，每瓶倒60～80ml液体培养基，液面上加一个支撑垫，接种时支撑垫的一半浸在丛生芽分化诱导液体培养基中。

2.对丛生芽分化诱导形成的丛生芽进行生长培养：在灭菌超净工作台上，将步骤1中丛生芽分化诱导形成的丛生芽长到1-2cm后，将原有培养基吸出，灌入生长液体培养基：MS+20g/L蔗糖，每瓶倒80-100ml，支撑垫的一半浸在液体生长培养基中。培养11天左右，即可长满瓶。

其中每瓶转接1个小腋芽，经分化诱导，平均每瓶可长出3.5-5.5个丛生芽，每个丛生芽可修剪成4-7个小腋芽，增值倍数为14-38.5。

3.对通过生长培养的丛生芽进行生根诱导培养：在灭菌超净工作台上，将步骤2培养的丛生芽修剪成1-2cm长的小腋芽后，按1-5芽/瓶转接到生根诱导液体培养基中：1/4MS+0.1mg/L NAA+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖，pH为5.8。培养4-6d后，观察到有新根长出。

4.对通过生根诱导培养的丛生芽进行壮苗培养：在灭菌超净工作台上，待新根长出0.5-1.5cm时，将丛生芽诱导生根液体培养基吸出，再灌入壮苗液体培养基：MS+20g/L蔗糖，pH为5.8。并于光照10h/d，光强1500lx，温度24±2℃的培养室中，培养7-10d。

5.对通过壮苗培养的丛生芽进行炼苗处理(敞瓶炼苗、基质炼苗)；将生根壮苗培养基置于炼苗室常温闭瓶炼苗0d，旋松所述生根培养基的培养瓶盖0d，全开所述瓶盖3d；敞瓶炼苗完成后将白术苗置于清水中，洗去根部培养液，捞出，移栽至装有泥炭土：珍珠岩按2:1比例配成的混合物穴盘基质中，每2d喷水1次，3d后喷施1g/L的多菌灵或甲基托布津，隔5d再喷施1次以防病菌。15d后逐渐减少喷水的次数，并定期喷施一次组分为1/8MS的营养液，生长20-30天，待有新生根系将基质包裹，形成稳定的根系基质系统，即可定植于富含腐殖质的沙质土壤中。

6.对通过炼苗处理的丛生芽进行苗圃移栽和管理，生产白术栽子(白术种苗)；将4-6月移栽至苗圃的白术苗丛生芽，返青期间(移栽30-40天)阴湿天气不需要遮阳设备，每5天浇水一次，每7天喷施一次1g/L多菌灵以防病菌，返青期后，在白术丛生芽苗的行间施一定量的农家肥，进行人工除草，按照白术种苗生产技术规程(DB42/T 328-2005)的要求进行栽培管理。10月下旬到11月上旬起挖根茎，勿伤主芽和根状茎表皮，(所得的白术无性栽子，大小均匀，皆是典型白术优势种群Ⅱ的种苗类型，无畸形，明显优于种子栽子。)置室内通风处摊放5-10天，待外皮发白时，贮藏待种。

7.对苗圃生产的白术栽子进行分级和包装，将所得典型白术优势种群的种苗，依据白术种苗等级标准，按根茎重、根数、根茎直径和感观指标分为一、二、三等。进行分级和包装。

实施实例2

选取选择无菌培养体系中白术优势种群、优良单株、健壮、幼嫩的白术苗作为外植体，对外植进行修剪处理：根据外植体的大小和腋芽的多少将其修剪成1-2.5cm长一叶一芽的小腋芽,每株可修剪成3-5个小腋芽，放置于培养皿中。

按照以下步骤繁殖白术种苗：

1.以保存的白术组培苗为基础扩繁材料，对其进行丛生芽分化诱导：使用经过高压灭菌的医用镊子、医用剪刀，将处理好的小腋芽按1个/每瓶直接接种到装有丛生芽分化诱导液体培养基支撑垫(腋芽托，下同)上：1/2MS+1.5mg/L 6-BA+0.6mg/L NAA+0.3mg/LIBA+0.4mg/L GA3+45g/L蔗糖，pH为5.9。并于光照时间15h/d，光强1800lx，温度24±2℃的培养室中培养12d。

其中，所用培养瓶为圆柱形的300ml玻璃瓶，每瓶倒60-80ml液体培养基，液面上加一个支撑垫，接种时支撑垫的一半浸在丛生芽分化诱导液体培养基中。

2.对丛生芽分化诱导形成的丛生芽进行生长培养：在灭菌超净工作台上，将步骤1中丛生芽分化诱导形成的丛生芽长到1-2cm后，将原有培养基吸出，灌入生长液体培养基：MS+30g/L蔗糖，每瓶倒80-100ml，支撑垫的一半浸在液体生长培养基中。培养7—11天左右，即可长满瓶。

其中每瓶转接1个小腋芽，经分化诱导，平均每瓶可长出3.5-5.5个丛生芽，每个丛生芽可修剪成4～7个小腋芽，增值倍数为14-38.5。

3.对通过生长培养的丛生芽进行生根诱导培养：在灭菌超净工作台上，将步骤2培养的丛生芽修剪成1-2cm长的小腋芽后，按1-5芽/瓶转接到生根诱导液体培养基中：1/4MS+0.4mg/L NAA+0.3mg/L IBA+40g/L蔗糖，pH为5.9。培养4-6d后，观察到有新根长出。

4.对通过生根诱导培养的丛生芽进行壮苗培养：在灭菌超净工作台上，待新根长出0.5～1.5cm时，将丛生芽诱导生根液体培养基吸出，再灌入壮苗液体培养基：MS+30g/L蔗糖，pH为5.9。并于光照15h/d，光强1800lx，温度24±2℃的培养室中,培养7-10d。

5.对通过壮苗培养的丛生芽进行炼苗处理(敞瓶炼苗、基质炼苗)；将生根壮苗培养基置于炼苗室常温闭瓶炼苗1d，旋松所述生根培养基的培养瓶盖1d，全开所述瓶盖1d；敞瓶炼苗完成后将白术苗置于清水中，洗去根部培养液，捞出，移栽至装有泥炭土：珍珠岩按2:1比例配成的混合物穴盘基质中，每2d喷水1次，3d后喷施1g/L的多菌灵或甲基托布津，隔5d再喷施1次以防病菌。15d后逐渐减少喷水的次数，并定期喷施一次组分为1/8MS的营养液，生长20-30天，待有新生根系将基质包裹，形成稳定的根系基质系统，即可定植于富含腐殖质的沙质土壤中。

6.对通过炼苗处理的丛生芽进行苗圃移栽和管理，生产白术栽子(白术种苗)；将4-6月移栽至苗圃的白术苗丛生芽，返青期间(移栽30-40天)在干燥、强阳光下进行适当遮阳，每6天浇水一次，每8天喷施一次1g/L多菌灵以防病菌，返青期后，去掉遮阳设备，在白术丛生芽苗的行间施一定量的农家肥，进行人工除草，按照白术种苗生产技术规程(DB42/T328-2005)的要求进行栽培管理。10月下旬到11月上旬起挖根茎，勿伤主芽和根状茎表皮，(所得的白术无性栽子，大小均匀，皆是典型白术优势种群的种苗类型，无畸形，明显优于种子栽子。)置室内通风处摊放5-10天，待外皮发白时，贮藏待种。

7.对苗圃生产的白术栽子进行分级和包装，将所得典型白术优势种群Ⅱ的种苗，依据白术种苗等级标准，按根茎重、根数、根茎直径和感观指标分为一、二、三等。进行分级和包装。

实施实例3

选取选择无菌培养体系中白术优势种群、优良单株、健壮、幼嫩的白术苗作为外植体，对外植进行修剪处理：根据外植体的大小和腋芽的多少将其修剪成1-2.5cm长一叶一芽的小腋芽,每株可修剪成3-5个小腋芽，放置于培养皿中。

按照以下步骤繁殖白术种苗：

1.以保存的白术组培苗为基础扩繁材料，对其进行丛生芽分化诱导：使用经过高压灭菌的医用镊子、医用剪刀，将处理好的小腋芽按1个/每瓶直接接种到装有丛生芽分化诱导液体培养基支撑垫(腋芽托，下同)上：1/2MS+2.0mg/L 6-BA+0.8mg/L NAA+0.5mg/LIBA+0.6mg/L GA3+50g/L蔗糖，pH为6.0。并于光照时间20h/d，光强2000lx，温度24±2℃的培养室中培养10-15d。

其中，所用培养瓶为圆柱形的300ml玻璃瓶，每瓶倒60～80ml液体培养基，液面上加一个支撑垫，接种时支撑垫的一半浸在丛生芽分化诱导液体培养基中。

2.对丛生芽分化诱导形成的丛生芽进行生长培养：在灭菌超净工作台上，将步骤1中丛生芽分化诱导形成的丛生芽长到1-2cm后，将原有培养基吸出，灌入生长液体培养基：MS+40g/L蔗糖，每瓶倒80～100ml，支撑垫的一半浸在液体生长培养基中。培养7—11天左右，即可长满瓶。

其中每瓶转接1个小腋芽，经分化诱导，平均每瓶可长出3.5-5.5个丛生芽，每个丛生芽可修剪成4-7个小腋芽，增值倍数为14～38.5。

3.对通过生长培养的丛生芽进行生根诱导培养：在灭菌超净工作台上，将步骤2培养的丛生芽修剪成1-2cm长的小腋芽后，按1-5芽/瓶转接到生根诱导液体培养基中：1/4MS+0.7mg/L NAA+0.5mg/L IBA+50g/L蔗糖，pH为6.0。培养4-6d后，观察到有新根长出。

4.对通过生根诱导培养的丛生芽进行壮苗培养：在灭菌超净工作台上，待新根长出0.5-1.5cm时，将丛生芽诱导生根液体培养基吸出，再灌入壮苗液体培养基：MS+40g/L蔗糖，pH为6.0。并于光照20h/d，光强2000lx，温度24±2℃的培养室中,培养7-10d。

5.对通过壮苗培养的丛生芽进行炼苗处理(敞瓶炼苗、基质炼苗)；将生根壮苗培养基置于炼苗室常温闭瓶炼苗3d，旋松所述生根培养基的培养瓶盖2d，全开所述瓶盖1d；敞瓶炼苗完成后将白术苗置于清水中，洗去根部培养液，捞出，移栽至装有泥炭土：珍珠岩按2:1比例配成的混合物穴盘基质中，每2d喷水1次，3d后喷施1g/L的多菌灵或甲基托布津，隔5d再喷施1次以防病菌。15d后逐渐减少喷水的次数，并定期喷施一次组分为1/8MS的营养液，生长20-30天，待有新生根系将基质包裹，形成稳定的根系基质系统，即可定植于富含腐殖质的沙质土壤中。

6.对通过炼苗处理的丛生芽进行苗圃移栽和管理，生产白术栽子(白术种苗)；将4-6月移栽至苗圃的白术苗丛生芽，返青期间(移栽30-40天)在阴湿天气不需要遮阳设备，每7天浇水一次，每10天喷施一次1g/L多菌灵以防病菌，返青期后，在白术丛生芽苗的行间施一定量的农家肥，进行人工除草，按照白术种苗生产技术规程(DB42/T 328-2005)的要求进行栽培管理。10月下旬到11月上旬起挖根茎，勿伤主芽和根状茎表皮，(所得的白术无性栽子，大小均匀，皆是典型白术优势种群Ⅱ的种苗类型，无畸形，明显优于种子栽子。)置室内通风处摊放5-10天，待外皮发白时，贮藏待种。

7.对苗圃生产的白术栽子进行分级和包装，将所得典型白术优势种群Ⅱ的种苗，依据白术种苗等级标准，按根茎重、根数、根茎直径和感观指标分为一、二、三等。进行分级和包装。

实施实例4

选取选择无菌培养体系中白术优势种群Ⅱ、优良单株、健壮、幼嫩的白术苗作为外植体，对外植进行修剪处理：根据外植体的大小和腋芽的多少将其修剪成1-2.5cm长一叶一芽的小腋芽,每株可修剪成3-5个小腋芽，放置于培养皿中。

按照以下步骤繁殖白术种苗：

1.以保存的白术组培苗为基础扩繁材料，对其进行丛生芽分化诱导：使用经过高压灭菌的医用镊子、医用剪刀，将处理好的小腋芽按1个/每瓶直接接种到装有丛生芽分化诱导液体培养基支撑垫(腋芽托，下同)上：1/2MS+2.0mg/L 6-BA+0.6mg/L NAA+0.3mg/LIBA+0.6mg/L GA3+50g/L蔗糖，pH为5.9。并于光照时间20h/d，光强1800lx，温度24±2℃的培养室中培养10-15d。

其中，所用培养瓶为圆柱形的300ml玻璃瓶，每瓶倒60～80ml液体培养基，液面上加一个支撑垫，接种时支撑垫的一半浸在丛生芽分化诱导液体培养基中。

2.对丛生芽分化诱导形成的丛生芽进行生长培养：在灭菌超净工作台上，将步骤1中丛生芽分化诱导形成的丛生芽长到1-2cm后，将原有培养基吸出，灌入生长液体培养基：MS+30g/L蔗糖，每瓶倒80-100ml，支撑垫的一半浸在液体生长培养基中。培养7-11天左右，即可长满瓶。

其中每瓶转接1个小腋芽，经分化诱导，平均每瓶可长出3.5-5.5个丛生芽，每个丛生芽可修剪成4-7个小腋芽，增值倍数为14～38.5。

3.对通过生长培养的丛生芽进行生根诱导培养：在灭菌超净工作台上，将步骤2培养的丛生芽修剪成1-2cm长的小腋芽后，按1-5芽/瓶转接到生根诱导液体培养基中：1/4MS+0.5mg/L NAA+0.2mg/L IBA+40g/L蔗糖，pH为5.9。培养4-6d后，观察到有新根长出。

4.对通过生根诱导培养的丛生芽进行壮苗培养：在灭菌超净工作台上，待新根长出0.5-1.5cm时，将丛生芽诱导生根液体培养基吸出，再灌入壮苗液体培养基：MS+30g/L蔗糖，pH为5.9。并于光照20h/d，光强2000lx，温度24±2℃的培养室中,培养7-10d。

5.对通过壮苗培养的丛生芽进行炼苗处理(敞瓶炼苗、基质炼苗)；将生根壮苗培养基置于炼苗室常温闭瓶炼苗2d，旋松所述生根培养基的培养瓶盖1d，全开所述瓶盖2d；敞瓶炼苗完成后将白术苗置于清水中，洗去根部培养液，捞出，移栽至装有泥炭土：珍珠岩按2:1比例配成的混合物穴盘基质中，每2d喷水1次，3d后喷施1g/L的多菌灵或甲基托布津，隔5d再喷施1次以防病菌。15d后逐渐减少喷水的次数，并定期喷施一次组分为1/8MS的营养液，生长20-30天，待有新生根系将基质包裹，形成稳定的根系基质系统，即可定植于富含腐殖质的沙质土壤中。

6.对通过炼苗处理的丛生芽进行苗圃移栽和管理，生产白术栽子(白术种苗)；将4-6月移栽至苗圃的白术苗丛生芽，返青期间(移栽30-40天)在干燥、阳光强的天气进行适当遮阳，每5天浇水一次，每10天喷施一次1g/L多菌灵以防病菌，返青期后，去掉遮阳设备，在白术丛生芽苗的行间施一定量的农家肥，进行人工除草，按照白术种苗生产技术规程(DB42/T328-2005)的要求进行栽培管理。10月下旬到11月上旬起挖根茎，勿伤主芽和根状茎表皮，(所得的白术无性栽子，大小均匀，皆是典型白术优势种群Ⅱ的种苗类型，无畸形，明显优于种子栽子。)置室内通风处摊放5-10天，待外皮发白时，贮藏待种。

7.对苗圃生产的白术栽子进行分级和包装，将所得典型白术优势种群Ⅱ的种苗，依据白术种苗等级标准，按根茎重、根数、根茎直径和感观指标分为一、二、三等。进行分级和包装。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (12)

1.一种利用白术丛生芽扩繁白术栽子种苗的方法，所述方法包括以下骤：

1）以保存的白术组培苗为基础扩繁材料，对其进行丛生芽分化诱导；

所述丛生芽分化诱导培养基1/2MS液体培养基，其组分按质量体积浓度计包括：1.0-2.0mg/L 6-BA、0.4-0.8mg/L NAA、0.1-0.5 mg/L IBA、0.2-0.6 mg/L GA₃、35-50g/L蔗糖，pH为5.8-6.0；

2）对通过丛生芽分化诱导形成的丛生芽进行生长培养，生长培养基为1/2MS液体培养基；

3）对通过生长培养的丛生芽进行生根诱导培养；

生根诱导培养基是1/4MS液体培养基，其组分按质量体积浓度计包括：0.1-0.7mg/LNAA、0.2-0.5 mg/L IBA，蔗糖30-50g/L，pH为5.8-6.0；

4）对通过生根诱导培养的丛生芽进行壮苗培养，壮苗培养基是：MS+20-40g/L蔗糖；

5）对通过壮苗培养的丛生芽进行炼苗处理；

6）对通过炼苗处理的丛生芽进行苗圃移栽和管理，生产白术栽子；

7）对苗圃生产的白术栽子进行分级和包装；

所述步骤1）包括a、白术组培苗中外植体的选择：无菌培养体系中白术优势种群的健壮单株作为外植体；b、对a中所述外植进行修剪处理：根据外植体的大小和腋芽的多少将其修剪成1-2.5cm长一叶一芽的小腋芽，每株可修剪成3-5个小腋芽；c、对b中获得的小腋芽进行丛生芽分化诱导：将每个小腋芽直接接种到支撑垫上，每瓶1个小腋芽，并于光照时间10-20h/d，光强1500-2000lx，温度24±2℃的培养室中培养10-16d。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所用培养瓶为圆柱形的300ml玻璃瓶，每瓶倒60~80ml液体培养基，液面上加一个支撑垫，接种时支撑垫的一半浸在丛生芽分化诱导液体培养基中。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2）对步骤1）丛生芽分化诱导形成的丛生芽进行生长培养，具体步骤如下：当步骤1）中丛生芽分化诱导形成的丛生芽长到1-2cm后，将原有培养基吸出，灌入生长培养基，培养7-11天左右，即可长满瓶；

其中，所述生长培养基每瓶倒80~100ml，支撑垫的一半浸在液体生长培养基中；

所述步骤2）中每瓶转接1个小腋芽，经分化诱导，平均每瓶可长出3.5-5.5个丛生芽，每个丛生芽可修剪成4-7个小腋芽，增殖倍数为14-38.5。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）对通过生长培养的丛生芽进行生根诱导培养，具体步骤如下：将步骤2）培养的丛生芽修剪成1-2cm长的小腋芽后，按1-5芽/瓶转接到生根诱导培养基中，并于光照10-20h/d，光强1500-2000lx，温度24±2℃的培养室中培养7-12d。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述生根诱导培养的具体步骤如下：将步骤2）培养的白术丛生芽剪切后按3芽/瓶“品字形”排列转接到生根诱导培养基中并于光照10-20h/d，光强1500-2000lx，温度24±2℃的培养室中培养7-12d。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4）对通过生根诱导培养的丛生芽进行壮苗培养；具体步骤如下：将步骤3）中生根诱导培养基吸出，再灌入壮苗培养基，并于光照10-20h/d，光强1500-2000lx，温度24±2℃的培养室中培养7-12d。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5）中炼苗为：在步骤4）中的壮苗培养完成后，将壮苗培养基置于炼苗室常温闭瓶炼苗2-3d，旋松所述壮苗培养基的培养瓶盖1-2d，全开所述瓶盖1-3d。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤5）敞瓶炼苗完成后将白术苗置于清水中，洗去根部培养液，捞出，移栽至穴盘基质中，每2-4d喷水1次，3-4d后喷施1g/L的多菌灵或甲基托布津，隔5-7d再喷施1次以防病菌；14-15d后逐渐减少喷水的次数，并每6-8天喷施一次低浓度的营养液，生长20-30天，待有新根长出，即可定植于富含腐殖质的沙质土壤中；

步骤5）所述低浓度的营养液的组分为1/8MS营养液；

步骤5）所述新根长出是指新生根系将基质包裹，形成稳定的根系基质系统。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤5）所述的穴盘基质为泥炭土：珍珠岩按2:1比例配成的混合物。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤6）对通过炼苗处理的丛生芽进行苗圃移栽和管理，生产白术栽子；

于4-6月移栽至苗圃的白术丛生芽苗，返青期间进行适当遮阳，5-7天浇水一次，7-10天喷施一次1g/L多菌灵以防病菌，返青期后，去掉遮阳设备，在白术丛生芽苗的行间施一定量的农家肥，进行人工除草，按照白术种苗生产技术规程DB42/T 328-2005的要求进行栽培管理；10月下旬到11月上旬起挖根茎，勿伤主芽和根状茎表皮，置室内通风处摊放在屋里5天，待外皮发白时，贮藏待种；

在步骤6）中所得的白术栽子，大小均匀，皆是典型白术优势种群的种苗类型，无畸形，明显优于种子栽子。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤7）对苗圃生产的白术栽子进行分级和包装，具体步骤如下：将步骤6）所得典型白术优势种群的种苗，依据白术种苗等级标准，按根茎重、根数、根茎直径和感观指标分为一、二、三等；进行分级和包装。

12.权利要求1-11中任意一项所述方法在白术丛生芽种苗的快速繁殖中的应用。