CN104106468A - 一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104106468A CN104106468A CN201410298080.3A CN201410298080A CN104106468A CN 104106468 A CN104106468 A CN 104106468A CN 201410298080 A CN201410298080 A CN 201410298080A CN 104106468 A CN104106468 A CN 104106468A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- medium
- radix fici
- fici simplicissimae
- root
- explant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Cultivation Of Plants (AREA)
Abstract
一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:(1)取五指毛桃叶片作为外植体进行消毒;(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽;(3)将所述丛生芽置于MS繁殖培养基中进行繁殖;(4)将丛生芽切成单芽置于1/2MS生根培养基中培养得到完整的带根苗;(5)取完整的带根苗进行炼苗后移植到按质量比为泥炭土:珍珠岩=1:1的基质中,在该基质中生长一个月后移栽大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高,可在短期内提供大量五指毛桃的优质种苗,有效解决了五指毛桃的规模化育苗问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法,特别是一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法。
背景技术
五指毛桃,又名五爪龙、五指牛奶、土北芪等,来源于桑科植物粗叶榕Ficus hirta Vahl.的干燥根,为华南地区习用的中药材。五指毛桃味辛、甘,性平,有健脾补肺、利湿舒筋之功,用于脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、盗汗、风湿痹痛、产后无乳等症,是抗痨丸、喘息丸、复方川贝止咳糖浆、滋肾宁神丸、脑萎缩丸、宫炎平胶囊、宫炎平分散片、妇炎净片等多种中成药的重要原料。
五指毛桃随着市场需求量的不断增加,自然繁殖缓慢,加上滥采乱挖,致使野生资源面临枯竭。为确保五指毛桃资源的可持续利用,发展家种是唯一途径。据此,通过现代生物技术对其进行组织培养快繁技术进行了研究,试图获得大量优质的种苗,为五指毛桃生产提供种源,以满足生产上的需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法,它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良五指毛桃种苗。
本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取五指毛桃叶片作为外植体,依次用5%洗洁精水溶液浸泡5-10min、线状自来水冲洗10-15min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸吸去表面水分,得到外植体,所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水,
(2)叶片分化获得丛生芽诱导培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养30天,叶片分化后获得丛生芽,其中MS培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.5mg/L的NAA、0.1-0.5mg/L的2,4-D、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(3)丛生芽繁殖培养:将步骤(2)中得到的丛生芽置于MS繁殖培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株,其中MS繁殖培养基中含0.1-0.5mg/L的IAA、0.1-0.5mg/L的KT、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(4)无菌苗生根培养:将步骤(2)中得到的丛生芽切成单芽置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株,其中1/2MS生根培养基中含0.5-1.5mg/L的IBA、0.1-0.5mg/L的NAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到按质量比为泥炭土:珍珠岩=1:1的基质中,在该基质中生长一个月后移栽大田。移栽后一个星期内,每天早8点到晚6点喷雾3-5次,每次10min,此后每天早8点、晚6点各喷雾1次,每次10min;移栽时的温度条件为20-28℃,相对湿度75-80%,遮阳率为75%。
本发明的突出优点在于:
(1)通过生物技术对五指毛桃进行组织培养快速繁殖,在短时间内培育出大量可供大田栽培的五指毛桃幼苗,显著提高了五指毛桃种苗的繁殖系数和种苗质量,实现规模化生产,满足生产上的需要。
(2)在MS繁殖培养基中添加0.1-0.5mg/L的激动素KT可促进丛生芽的分化;添加浓度为0.1-0.5mg/L的生长激素吲哚-3-乙酸IAA可促进丛生芽的生长;
在1/2MS生根培养基上组合使用浓度为0.5-1.5mg/L的吲哚丁酸IBA和0.1-0.5mg/L的生长素萘乙酸NAA,可获得带根的完整植株,这些植株经炼苗后可直接移栽到泥炭土+珍珠岩(1:1)的基质。
(3)采用本发明所述的培养方法,得到的单芽增殖系数达到5-8倍,获得的组培苗生根率达到100%,每株平均带6-8个根,移栽泥炭土+珍珠岩(1:1)的基质中活率在94%以上;快速、便捷、高效地进行五指毛桃组织培养,实现五指毛桃组培种苗的规模化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取五指毛桃叶片作为外植体,依次用5%洗洁精水溶液浸泡5-15min、线状自来水冲洗10-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒 8-10min、无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸吸去表面水分,得到外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水,
(2)叶片分化获得丛生芽诱导培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养30天,叶片分化后获得丛生芽,其中MS培养基中添加不同浓度的6-BA、NAA和2,4-D(表1),30g/L蔗糖和4.0g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,数据分析发现,6-BA对五指毛桃丛生芽诱导具有极显著影响,NAA对五指毛桃丛生芽诱导具有显著影响,2,4-D对丛生芽的诱导影响不显著。根据丛芽数确定的最适培养基激素浓度为1.0mg/L的6-BA、0.3mg/L的NAA和0.5mg/L的2,4-D。
表1五指毛桃初代诱导培养基筛选结果
表2初代诱导培养基筛选方差分析
Note:F1-0.01(2,2)=99.0F1-0.05(2,2)=19.0F1-0.1(2,2)=9.0
(3)丛生芽繁殖培养:将步骤(2)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株,其中MS繁殖培养基中分别含1.0mg/L的6-BA和不同浓度的IAA和KT(表3)、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8。观察发现,对苗的质量有影响,当IAA浓度为0.3mg/L时芽苗为翠绿色,长势快,质量最好,有利于后期诱导生根。KT对五指毛桃 试管苗丛生芽的影响显著,根据芽增殖倍数和生长情况确定的最适培养基激素浓度为1.0mg/L的6-BA、0.3mg/L的IAA和0.3mg/L的KT。
表3不同激素水平对五指毛桃丛生芽壮苗效果的影响
注:芽增殖倍数=(40天后芽数-接种时芽数)/接种时芽数
(4)无菌苗生根培养:将步骤(2)中得到的丛生芽切成单芽置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养20天,其中1/2MS生根培养基中分别含不同浓度的的IBA和IAA(表3)、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;观察发现,生根率和平均生根数都主要受IBA浓度的影响,添加低浓度的NAA有利于提高生根率和平均生根数。培养基中添加1.0mg/L的IBA和0.3mg/L的NAA效果最好,生根率为100%,生根数达到7根以上。
表4不同激素水平对五指毛桃组培苗生根效果的影响
(5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到按质量比为泥炭土:珍珠岩=1:1的基质中,在该基质中生长一个月后移栽大田。移栽后一个星期内,每天早8点到晚6点喷雾3-5次,每次10min,此后每天早8点、晚6点各喷雾1次,每次10min;移栽时的温度条件为20-28℃,相对湿度75-80%,遮阳率为75%。
Claims (1)
1.一种五指毛桃组织培养快速繁殖方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取五指毛桃叶片作为外植体,依次用5%洗洁精水溶液浸泡5-10min、线状自来水冲洗10-15min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸吸去表面水分,得到外植体,所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水,
(2)叶片分化获得丛生芽诱导培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养30天,叶片分化后获得丛生芽,其中MS培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.5mg/L的NAA、0.1-0.5mg/L的2,4-D、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(3)丛生芽繁殖培养:将步骤(2)中得到的丛生芽置于MS繁殖培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株,其中MS繁殖培养基中含0.1-0.5mg/L的IAA、0.1-0.5mg/L的KT、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(4)无菌苗生根培养:将步骤(3)中得到的丛生芽切成单芽置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基中含0.5-1.5mg/L的IBA、0.1-0.5mg/L的NAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到按质量比为泥炭土:珍珠岩=1:1的基质中,在该基质中生长一个月后移栽大田。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410298080.3A CN104106468B (zh) | 2014-06-26 | 2014-06-26 | 一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410298080.3A CN104106468B (zh) | 2014-06-26 | 2014-06-26 | 一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104106468A true CN104106468A (zh) | 2014-10-22 |
CN104106468B CN104106468B (zh) | 2015-09-16 |
Family
ID=51703614
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410298080.3A Expired - Fee Related CN104106468B (zh) | 2014-06-26 | 2014-06-26 | 一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104106468B (zh) |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105660413A (zh) * | 2016-02-29 | 2016-06-15 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种大苞水竹叶的组织培养快速繁殖方法 |
CN108782244A (zh) * | 2018-06-04 | 2018-11-13 | 中国科学院华南植物园 | 一种龙珠果组织培养方法 |
CN111213588A (zh) * | 2020-03-11 | 2020-06-02 | 钦州市林业科学研究所 | 一种五指毛桃的简易高效组培繁殖方法 |
CN112088775A (zh) * | 2020-06-30 | 2020-12-18 | 灵山县山霖生物技术有限公司 | 一种五指毛桃试管育苗的方法 |
CN113598046A (zh) * | 2021-08-04 | 2021-11-05 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 一种粗叶榕高效组培繁育方法 |
CN114303913A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-04-12 | 广东食品药品职业学院 | 一种五指毛桃的气雾栽培方法 |
CN114946657A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-08-30 | 广东农垦热带作物科学研究所 | 一种五指毛桃组织培养方法 |
CN115380825A (zh) * | 2022-09-20 | 2022-11-25 | 广西壮族自治区药用植物园 | 五指毛桃组织培养方法及补骨脂素制备方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1229111A2 (en) * | 2001-02-06 | 2002-08-07 | Hiroshima University | Cultured cells of Ficus stipulata thunb. (= Ficus thunbergii) and a method for culturing tissues of the Ficus stipulata by using said cultured cells |
CN102232360A (zh) * | 2011-04-25 | 2011-11-09 | 安徽农业大学 | 大水榕、小水榕、尖叶榕、燕尾榕离体快繁体系构建方法 |
CN102599065A (zh) * | 2012-04-13 | 2012-07-25 | 董爱文 | 一种五爪龙的快速繁殖方法 |
CN103518625A (zh) * | 2013-11-01 | 2014-01-22 | 重庆文理学院 | 琴叶榕叶片的组织培养基及离体再生方法 |
-
2014
- 2014-06-26 CN CN201410298080.3A patent/CN104106468B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1229111A2 (en) * | 2001-02-06 | 2002-08-07 | Hiroshima University | Cultured cells of Ficus stipulata thunb. (= Ficus thunbergii) and a method for culturing tissues of the Ficus stipulata by using said cultured cells |
CN102232360A (zh) * | 2011-04-25 | 2011-11-09 | 安徽农业大学 | 大水榕、小水榕、尖叶榕、燕尾榕离体快繁体系构建方法 |
CN102599065A (zh) * | 2012-04-13 | 2012-07-25 | 董爱文 | 一种五爪龙的快速繁殖方法 |
CN103518625A (zh) * | 2013-11-01 | 2014-01-22 | 重庆文理学院 | 琴叶榕叶片的组织培养基及离体再生方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
蒋林等: "五指毛桃组织培养研究", 《中药材》, no. 8, 31 August 2004 (2004-08-31), pages 547 - 549 * |
Cited By (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105660413A (zh) * | 2016-02-29 | 2016-06-15 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种大苞水竹叶的组织培养快速繁殖方法 |
CN105660413B (zh) * | 2016-02-29 | 2017-09-26 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种大苞水竹叶的组织培养快速繁殖方法 |
CN108782244A (zh) * | 2018-06-04 | 2018-11-13 | 中国科学院华南植物园 | 一种龙珠果组织培养方法 |
CN111213588A (zh) * | 2020-03-11 | 2020-06-02 | 钦州市林业科学研究所 | 一种五指毛桃的简易高效组培繁殖方法 |
CN111213588B (zh) * | 2020-03-11 | 2022-09-02 | 钦州市林业科学研究所 | 一种五指毛桃的简易高效组培繁殖方法 |
CN112088775A (zh) * | 2020-06-30 | 2020-12-18 | 灵山县山霖生物技术有限公司 | 一种五指毛桃试管育苗的方法 |
CN113598046A (zh) * | 2021-08-04 | 2021-11-05 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 一种粗叶榕高效组培繁育方法 |
CN114303913A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-04-12 | 广东食品药品职业学院 | 一种五指毛桃的气雾栽培方法 |
CN114946657A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-08-30 | 广东农垦热带作物科学研究所 | 一种五指毛桃组织培养方法 |
CN115380825A (zh) * | 2022-09-20 | 2022-11-25 | 广西壮族自治区药用植物园 | 五指毛桃组织培养方法及补骨脂素制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104106468B (zh) | 2015-09-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104106468B (zh) | 一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法 | |
CN102499090B (zh) | 十二卷类多肉植物的离体培养方法 | |
CN103651121B (zh) | 一种白及分化、壮苗培养基 | |
CN102301951B (zh) | 一种广豆根组织培养快速繁殖方法 | |
CN103190347B (zh) | 一种茶壶枣组织培养方法 | |
CN103931497B (zh) | 一种提高火龙果组培苗成苗率的方法 | |
CN103651122B (zh) | 一种白及原球茎诱导培养基 | |
CN103348920B (zh) | 一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法 | |
CN103202229B (zh) | 一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法 | |
CN104067939A (zh) | 一种龙胆的组织培养快速繁殖方法 | |
CN104041412A (zh) | 一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法 | |
CN103704130A (zh) | 一种春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法 | |
CN101836587A (zh) | 通过花药培养获得洋桔梗再生植株的方法 | |
CN101926284B (zh) | 一种川附子组织培养及快速繁殖方法 | |
CN102860257B (zh) | 一种鱼腥草地上茎组织培养快速繁殖的方法 | |
CN103548695B (zh) | 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法 | |
CN109566417B (zh) | 一种虫草参的组织培养方法 | |
CN103609444A (zh) | 常绿萱草的组织培养法 | |
CN108142281A (zh) | 一种杜仲组织培养方法 | |
CN103202226B (zh) | 白菜组培苗快速高效生根方法 | |
CN100391333C (zh) | 安祖花无菌苗组织培养和试管苗炼苗移栽方法 | |
CN108719067A (zh) | 一种滇重楼的组培快繁方法 | |
CN101473792B (zh) | 丫蕊花组培及种植方法 | |
CN104082147B (zh) | 细柱五加的离体快速繁殖方法 | |
JP6530584B2 (ja) | カンゾウ属植物の苗の生産方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150916 Termination date: 20170626 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |