CN112305104A - 一种禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,用于测定36种兽药中的1种或多种在禽畜肉中的残留量,包括如下步骤:(1)样品前处理:取待测样品进行酶解,得酶解液;向所述酶解液中加入均质子和甲酸乙腈溶液,涡旋,离心,得第一上清液;将所述第一上清液加入分散固相萃取管中,涡旋,离心,得第二上清液;向第二上清液中加入均质子和无水硫酸盐,混匀,离心,得第三上清液;将第三上清液与水混合,过滤,得待测样液;(2)液相色谱‑质谱测定:将所述待测样液进行液相色谱‑质谱分离测定;(3)根据测定结果定量计算禽畜肉中36种兽药的残留量。
Description
技术领域
本发明属于食品添加剂检测领域,具体涉及一种禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法。
背景技术
β-受体激动剂类药物由于其可促进动物体肌肉生长、脂肪分解,增加瘦肉比例,被滥用于畜牧养殖过程中。此类药物也被称之为“瘦肉精”。传统意义上的“瘦肉精”主要是盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺等,近年来又出现了新型“瘦肉精”如苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定和巴氯芬等药物,我国农业部已禁止此类传统和新型瘦肉精药物在畜牧生产中的使用,然而其滥用情况却屡禁不止。同时,为了降低在动物运输过程中由于动物应激而造成的突然死亡,普萘洛尔、阿替洛尔和美托洛尔等β-受体阻滞剂类药物被用作镇静剂非法注射到动物体内。我国有关禁止将β-阻断剂作为兽药使用的明确规定很少,然而在《世界反兴奋剂条列》中将其作为兴奋剂在体育赛事中的禁止使用。目前禽畜肉中上述多组分兽药残留的同时测定方法较少,从而导致其不能被有效监控。
公开号为CN110208394A的中国专利文献公开了一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法。该方法包括如下步骤:(1)待测样品前处理:向待测样品中加入乙酸盐缓冲液和第一酶,混匀后放置于水浴中酶解,得到酶解液;向所述酶解液中加入氨水乙腈溶液和无水硫酸盐,混匀,离心,得到第一上清液;将所述第一上清液进行基质分散性固相萃取,得到第二上清液,经氮气吹干后复溶,滤膜过滤,得到待测样品液。(2)在所述待测样品前处理之后,采用超高效液相色谱-串联质谱法来检测待测样品液中多种特定成分的含量;所述待测样品为畜肉,所述多种特定成分为莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗。该方法仅限于莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗,满足不了实际检测工作中同时测定多组分兽药残留量的需要,并且需要氮吹、复溶等操作耗时且容易使得相应兽药残留量损失。因此,亟需开发一种简便快速测定禽畜肉中多组分兽药残留量的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术仅限于对莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗进行测定,以及现有方法中需要氮吹、复溶,操作步骤耗时并且容易使得相应兽药残留量损失等问题的不足,提供一种可以实现多达36种药物残留检测的用于禽畜中兽药残留量测定的方法。
其所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实施。
一种禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,用于测定以下36种兽药中的1种或多种在禽畜肉中的残留量:马布特罗、克伦潘罗、克伦丙罗、溴氯布特罗、溴布特罗、奥西那林、赛布特罗、异克舒令、克仑塞罗、妥布特罗、马喷特罗、非诺特罗、福莫特罗、拉贝特罗、异克伦潘罗、丙卡特罗、特布他林、塞曼特罗、氯丙那林、喷布特罗、齐帕特罗、班布特罗、利托君、苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定、巴氯芬、沙美特罗、克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、R-美托洛尔、多巴胺、甲氧酪胺、普萘洛尔和阿替洛尔,其特点为,包括如下步骤:
(1)样品前处理:
取待测样品进行酶解,得酶解液;向所述酶解液中依次加入均质子和甲酸乙腈溶液,涡旋,离心,得第一上清液;
将所述第一上清液加入分散固相萃取管中,涡旋,离心,得第二上清液;
向第二上清液中依次加入均质子和无水硫酸盐,混匀,离心,得第三上清液;
将第三上清液与水混合,过滤,得待测样液;
(2)液相色谱-质谱测定:
将所述待测样液进行液相色谱-质谱分离测定;
(3)根据测定结果定量计算禽畜肉中36种兽药的残留量。
作为本技术方案的进一步改进,步骤(2)中的液相色谱条件如下:
a)色谱柱:ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1mm×100mm,1.8μm)或者性能相当;
b)柱温:30~40℃(优选40℃);
c)流动相:A为0.1%(体积百分比)甲酸水(含5mmol/L乙酸铵),B为乙腈;
d)流速:0.3~0.4mL/min(优选0.4mL/min);
e)进样量:1~5μL(优选1μL);
f)洗脱方式:梯度洗脱;
步骤(2)中的质谱条件如下:
a)电喷雾离子源(ESI);
b)正离子扫描方式;
c)动态多反应监测(DMRM)模式;
d)气帘气:172~207kPa(优选207kPa);
e)干燥气:276~379kPa(优选379kPa);
f)喷针电压:4500~5500V(优选5500V);
g)离子源温度:400~550℃(优选550℃);
h)碰撞气:41~62kPa(优选62kPa)。
作为本发明的优选实施例之一,所述均质子为陶瓷均质子,其规格为适用于50mL萃取管,加入量为1~2粒;待测样品与所述甲酸乙腈溶液的比例为每5g待测样品对应体积百分比为5%的10ml甲酸乙腈溶液。
也作为本技术方案的进一步改进,所述甲酸乙腈溶液中甲酸与乙腈的体积比为1:99-5:95(优选5:95)。
还作为本技术方案的进一步改进,所述分散固相萃取管中添加有增强型脂质去除剂。
也作为本发明的优选实施例之一,所述第三上清液与水混合体积比为1:1~1:2(优选1:1)。
作为本技术方案的更进一步改进,所述梯度洗脱程序为:初始流动B为5%(体积百分比,下同),保持1min;1.0~2.0min,B由5%升至20%;2.2~5.0min,B由20%升至30%;5.0~7.0min,B由30%升至95%,保持1min;8.0~8.1min,B由95%降至5%,保持到10min。
进一步,定量计算禽畜肉中36种兽药的残留量时,其中,马布特罗、溴氯布特罗、溴布特罗、西布特罗、克仑塞罗、妥布特罗、马喷特罗、非诺特罗、福莫特罗、丙卡特罗、特布他林、西马特罗、氯丙那林、班布特罗、利托君、可乐定、赛庚定、苯乙醇胺A、克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、R-美托洛尔、多巴胺、普萘洛尔和阿替洛尔采用内标法定量。
也进一步,定量计算禽畜肉中36种兽药的残留量时,其中,克伦潘罗、克伦丙罗、奥西那林、异克舒令、拉贝特罗、异克伦潘罗、齐帕特罗、巴氯芬、沙美特罗、喷布特罗和甲氧酪胺采用基质加标曲线法定量。
其中,所述禽畜肉为牛肉、羊肉、猪肉或鸡肉。
采用上述技术方案的测定方法,相比于现有技术,具有以下优点:
1、本发明所述的样品前处理方法,利用有机溶液对禽畜肉样品中36种性质差别大的兽药进行提取,并用增强型脂质去除剂进行净化,所得待测样液通过液相色谱-质谱联用法进行多组分兽药残留量的检测;该方法可快速提取并测定常规禽畜肉中可能残留的36种兽药,较之现有技术,本发明具有节约时间、提高测定准确度,能够最大程度对禽畜肉中目前可能使用的瘦肉精类药物和β-受体阻滞剂类药物进行监管的特点。
方法中,采用先酶解将部分结合态兽药转变为游离态再进行有机溶液提取,有利于充分有效地监测目标多组分兽药残留,进一步采用陶瓷均质子进行样品提取时间,有利于样品提取过程的均匀性,提高检测化合物的回收率。
2、本发明所述的样品前处理方法,采用甲酸乙腈溶液进行提取,甲酸与乙腈的体积比为1:99-5:95(优选5:95),甲酸乙腈溶液不仅可以有效提取禽畜肉中的36种兽药,同时还可以沉淀酶解液中大量的蛋白质;由于所述36种兽药大部分含有羟基,加入甲酸有利于抑制羟基离子化,增加其在乙腈中的分配比例,从而提高提取效率。
3、本发明所述的样品前处理方法,所述分散固相萃取管中添加的增强型脂质去除剂,是一种新型吸附剂材料,能够选择性去除高脂肪含量基质样品中的主要脂质组分,而不会造成待测兽药意外损失。然后向萃取管中加入无水硫酸盐(例如无水硫酸镁)进行反萃取,有效去除水分且不与甲酸反应,保证待测样品溶液能够和流动相更好地融合,从而提高待测兽药的回收率,并且降低基质效应以增强质谱响应。
4、本发明采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用对所述禽畜肉中36种兽药残留进行测定,待测兽药残留在10min内完成分离并测定,采用内标法和基质加标曲线法可以更好地去除样品基质效应,提高检测灵敏度。
附图说明
图1是本发明禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法的工艺流程图;
图2是本发明的牛肉阴性样品添加36种兽药的提取离子流色谱图,图2a至图2d分别给出了多种兽药的提取离子流色谱图;
图3是本发明的猪肉阳性样品中克伦特罗(图3b)、莱克多巴胺(图3a)、沙丁胺醇(图3c)和特布他林(图3d)的提取离子流色谱图;
图4是本发明的前处理方法与对比例1中经过氮吹、复溶等操作对于部分兽药回收率的影响对比图;
图5是本发明的内标法定量和对比例2中外标法定量对于部分兽药回收率影响的对比图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步详细地阐述本发明的技术特点。
仪器与试剂
ExionLCTMAD-SCIEX Triple QuadTM6500超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪(美国SCIEX公司);
CU-600电热恒温水槽(上海一恒科学仪器有限公司);
WH-861涡旋混合器(太仓市华利达实验设备有限公司);
TGL-20M台式高速冷冻离心机(湖南湘仪离心机仪器有限公司);
ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1mm×100mm,1.8μm)色谱柱(安捷伦科技(中国)有限公司);
36种兽药的标准品和内标物质二苯拉明、盐酸可乐定-D4、克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D3以及沙丁胺醇-D3均购自北京振翔科技有限公司,以甲醇为溶剂分别配制成36种兽药的1000mg/L混合标准储备液和5种内标物质的100mg/L混合内标储备液,使用时稀释至所需要的浓度;乙酸钠(分析纯,国药集团化学试剂有限公司);甲酸(质谱纯,美国Fisher公司);甲醇(色谱纯,美国Merk公司);乙腈(色谱纯,美国Merk公司);β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶(上海安谱实验科技股份有限公);EMR-Lipid分散固相萃取管(15mL,内含增强型脂质去除剂,安捷伦科技(中国)有限公司);陶瓷均质子(适合15mL的萃取管,安捷伦科技(中国)有限公司);无水硫酸镁(分析纯);试验用水由Milli-Q超纯水系统制备。
1、质谱条件的优化
36种兽药化合物结构中含有胺基,在电喷雾正离子模式下分别将质量浓度为1mg/L的36种混合标准溶液和5种内标溶液针泵进样进行扫描获得[M+H]+分子离子峰。然后以分子离子为母离子进行子离子扫描,选择响应较高的两个子离子,以动态多反应监测模式(DMRM)进行检测,并优化去簇电压(DP)和碰撞电压(CE),使得母离子和子离子响应最优。同位素内标物质只选择信噪比最强的子离子,二苯拉林选择响应较好的两个子离子。西马特罗的子离子响应不高,基质干扰容易造成其线性差,在分析时选择三个子离子进行定性和定量分析。优化的质谱参数见下表1。
表1:36种兽药的质谱参数
备注:表1中的“*”表示定量离子
2、标准曲线和线性范围
(1)将采用本发明所述样品前处理所得空白基质提取液稀释36种混合标准溶液,得到质量浓度为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0μg/L的混合标准溶液系列,各个质量浓度混合标准溶液中内标浓度均为2μg/L,上机测定得到36种兽药化合物各自的色谱峰,以本发明所述25种兽药化合物的峰面积与相应内标的峰面积之比为纵坐标,其对应质量浓度为横坐标绘制标准曲线,以本发明所述11种兽药化合物的峰面积为纵坐标,其对应质量浓度为横坐标绘制标准曲线;
(2)上述所得36种兽药化合物的标准曲线,其线性相关系数r2均大于0.988,36种兽药化合物在0.1-5μg/L质量浓度范围内具有良好线性关系。
(3)以3倍标准偏差作为方法的检出限,10倍标准偏差作为方法的定量限,得到36种兽药化合物的检出限在0.026-0.30μg/kg之间,定量限在0.087-1.0μg/kg之间。
3、样品的测定
实施例1
本实施例所述禽畜肉样品为加入36种兽药混合标准溶液的牛肉阴性样品,加标量为4μg/kg,所述禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,如图1所示,具体包括如下步骤:
(1)样品前处理,具体包括如下步骤:
称取5g牛肉阴性样品肉糜,添加36种兽药混合标准溶液适量,使得样品中加标量为4μg/kg,涡旋混匀,放置约30min后,加入0.2moL/L乙酸钠(pH5.2)溶液5.0mL,再加入β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶溶液50μL,200μL100μg/L内标标准溶液,涡旋混匀,于37℃±2℃下恒温水浴16h进行酶解;
待上述酶解液冷却至室温后,加入1粒陶瓷均质子和10mL5%(体积百分比)甲酸乙腈溶液,涡旋,离心,得第一上清液;
取上述第一上清液到EMR-Lipid分散固相萃取管(内含增强型脂质去除剂)中,涡旋,离心,得第二上清液;
取上述第二上清液到50mL离心管中,加入1粒陶瓷均质子和3mg无水硫酸镁,涡旋,离心,得第三上清液;
取上述第三上清液1mL,加入1mL水混合,过0.22μm有机滤膜,制得待测样液。
(2)采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪对上述待测样液进行36种兽药的检测:
所述超高效液相色谱条件为:
色谱柱:ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1mm×100mm,1.8μm);
柱温:40℃;
流动相:A为0.1%(体积百分比)甲酸水(含5mmol/L乙酸铵),B为乙腈;
流速:0.400mL/min;
进样量:1μL;
洗脱方式:梯度洗脱;
其中,梯度洗脱程序为:按体积百分比,初始流动B为5%,保持1min;1.0~2.0min,B由5%升至20%;2.2~5.0min,B由20%升至30%;5.0~7.0min,B由30%升至95%,保持1min;8.0~8.1min,B由95%降至5%,保持到10min。
三重四极杆质谱条件:
质谱采用电喷雾离子源(ESI);
正离子扫描方式;
动态多反应监测(MRM)模式;
气帘气压力:207kpa;
干燥气压力:379kpa;
喷针电压:5500V;
离子源温度:550℃;
碰撞气压力:62kpa;
其中,监测离子对、去簇电压和碰撞电压等参数见表1。
测定结果见图2,表明了采用本发明方法可对36种兽药残留的同时检出。
实施例2
本实施例所述禽畜肉样品为猪肉阳性样品,所述禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,具体包括如下步骤:
称取1.25g猪肉阳性样品粉末,加入3.75g超纯水搅拌15min混匀,得到肉糜状复原样品5.00g,加入0.2moL/L乙酸钠(pH5.2)溶液8.0mL,再加入β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶溶液50μL,200μL 100μg/L内标标准溶液,涡旋混匀,于37℃±2℃下恒温水浴16h进行酶解;
待上述酶解液冷却至室温后,加入1粒陶瓷均质子和10mL5%甲酸乙腈溶液,快速振摇涡旋提取2min,4000rpm离心5min,得第一上清液;
取上述第一上清液到EMR-Lipid分散固相萃取管(内含增强型脂质去除剂)中,快速振摇涡旋2min,4000rpm离心5min,得第二上清液;
取上述第二上清液到50mL离心管中,加入1粒陶瓷均质子和3mg无水硫酸镁,涡旋,离心,得第三上清液;
取上述第三上清液1mL,加入1mL水混合,过0.22μm有机滤膜,制得待测样液。
(2)采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪对上述待测样液进行36种兽药残留的检测:
所述超高效液相色谱条件为:
色谱柱:ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1mm×100mm,1.8μm);
柱温:40℃;
流动相:A为0.1%(体积百分比)甲酸水(含5mmol/L乙酸铵),B为乙腈;
流速:0.400mL/min;
进样量:1μL;
洗脱方式:梯度洗脱;
其中,梯度洗脱程序为:按体积百分比,初始流动B为5%,保持1min;1.0~2.0min,B由5%升至20%;2.2~5.0min,B由20%升至30%;5.0~7.0min,B由30%升至95%,保持1min;8.0~8.1min,B由95%降至5%,保持到10min。
三重四极杆质谱条件:
电喷雾离子源(ESI);
正离子扫描方式;
动态多反应监测(DMRM)模式;
气帘气压力:207kpa;
干燥气压力:379kpa;
喷针电压:5500V;
离子源温度:550℃;
碰撞气压力:62kpa;
其中,监测离子对、去簇电压和碰撞电压等参数见表1。
测定结果见图3,表明了该猪肉阳性样品中含有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林,采用内标法定量,测得该猪肉阳性样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林含量分别为2.75、3.42、3.84和4.44μg/kg。
4、方法的验证:
4.1回收率
将36种兽药的100μg/L混合标准溶液加入到空白牛肉样品(即牛肉阴性样品)中,使得加标量分别为0.5、1、5μg/kg,按照本发明实施例1所述禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法进行试验,每个加标浓度下进行6次平行测定,取平均值,根据加标量和测定结果计算牛肉样品中36种兽药的回收率,见表2,在3个加标浓度水平下,牛肉样品种36种兽药的回收率在67.4%-116%之间。
4.2精密度
准确称取三份5.0g添加有1.0μg/kg的羊肉肉糜状样品,分别标记为1、2、3,按照本发明实施例1所述禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法进行试验,且每份进行平行测定,结果见表3,36种兽药在羊肉样品中的相对标准偏差(RSD)在1.22%-13.6%范围内。
表2:牛肉样品中36种兽药的回收率
表3:羊肉样品的测定值精密度
对比例1
本对比例的禽畜肉样品为实施例1中牛肉阴性样品添加36种兽药混合标准溶液所得加标量分别为0.5、1.0、5.0μg/kg的样品,采用与实施例1相同的测定流程,区别仅在于对样品前处理中取第三上清液进行氮吹至干,然后用1mL含0.1%甲酸水与乙腈(v:v=5:95)混合溶液复溶,过膜,上机测定。
样品中36种兽药在三个加标浓度下,部分兽药的平均回收率与本发明测定所得平均回收率对比图见图4,采用上述样品前处理氮吹、复溶步骤容易导致部分兽药回收率偏低,测定误差较大。
对比例2
本对比例的禽畜肉样品为实施例1中牛肉阴性样品添加36种兽药混合标准溶液所得加标量分别为0.5、1.0、5.0μg/kg的样品,采用与实施例1相同的测定流程,区别仅在于样品前处理过程中不加入内标,36种兽药均采用基质加标外标法定量。
样品中36种兽药在三个加标浓度下,部分兽药的平均回收率与本发明测定所得平均回收率对比图见图5,部分兽药基质干扰较大,采用上述外标法定量容易导致其回收率偏低,测定误差较大。
本发明提供的技术方案可同时测定36种兽药残留量,也可以测定其中的几种,并且优化了样品前处理过程,减少氮吹、复溶等操作,节约时间并提高检测准确度,适用于禽畜肉中多组分兽药残留量的测定。与现有技术相比,在实施例2中猪肉阳性样品中除了现有技术测定的3种瘦肉精,还包括特布他林,相比现有技术,测定物质更多。并且,在对比例1中明确说明了按照现有技术进行处理时,有些兽药的回收率很低,满足不了准确定量要求。
很显然,上述实施例仅仅是为了清楚地说明本发明技术方案所做的举例,而并非对实施方式的限定。任何本领域技术人员,在上述说明的基础上还可以做出各种改动,因此本发明的保护范围应当以权利要求限定的范围为准。
Claims (10)
1.一种禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,用于测定以下36种兽药中的1种或多种在禽畜肉中的残留量:马布特罗、克伦潘罗、克伦丙罗、溴氯布特罗、溴布特罗、奥西那林、赛布特罗、异克舒令、克仑塞罗、妥布特罗、马喷特罗、非诺特罗、福莫特罗、拉贝特罗、异克伦潘罗、丙卡特罗、特布他林、塞曼特罗、氯丙那林、喷布特罗、齐帕特罗、班布特罗、利托君、苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定、巴氯芬、沙美特罗、克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、R-美托洛尔、多巴胺、甲氧酪胺、普萘洛尔和阿替洛尔,其特征在于,包括如下步骤:
(1)样品前处理:
取待测样品进行酶解,得酶解液;向所述酶解液中依次加入均质子和甲酸乙腈溶液,涡旋,离心,得第一上清液;
将所述第一上清液加入分散固相萃取管中,涡旋,离心,得第二上清液;
向第二上清液中依次加入均质子和无水硫酸盐,混匀,离心,得第三上清液;
将第三上清液与水混合,过滤,得待测样液;
(2)液相色谱-质谱测定:
将所述待测样液进行液相色谱-质谱分离测定;
(3)根据测定结果定量计算禽畜肉中36种兽药的残留量。
2.根据权利要求1所述的禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,其特征在于,步骤(2)中的液相色谱条件如下:
a)色谱柱:ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1mm×100mm,1.8μm)或者性能相当;
b)柱温:30~40℃;
c)流动相:A为含5mmol/L乙酸铵的体积百分比为0.1%的甲酸水,B为乙腈;
d)流速:0.3~0.4mL/min;
e)进样量:1~5μL;
f)洗脱方式:梯度洗脱;
步骤(2)中的质谱条件如下:
a)电喷雾离子源(ESI);
b)正离子扫描方式;
c)动态多反应监测(DMRM)模式;
d)气帘气:172~207kPa;
e)干燥气:276~379kPa;
f)喷针电压:4500~5500V;
g)离子源温度:400~550℃;
h)碰撞气:41~62kPa。
3.根据权利要求1所述的禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,其特征在于,所述均质子为陶瓷均质子,其规格为适用于50mL萃取管,加入量为1~2粒;待测样品与所述甲酸乙腈溶液的比例为每5g待测样品对应体积百分比为5%的10ml甲酸乙腈溶液。
4.根据权利要求1或3所述的禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,其特征在于,所述甲酸乙腈溶液中甲酸与乙腈的体积比为1:99-5:95。
5.根据权利要求1所述禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,其特征在于,所述分散固相萃取管中添加有增强型脂质去除剂。
6.根据权利要求1所述禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,其特征在于,所述第三上清液与水混合体积比为1:1~1:2。
7.根据权利要求2所述禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,其特征在于,所述梯度洗脱程序为:按体积百分比,初始流动B为5%,保持1min;1.0~2.0min,B由5%升至20%;2.2~5.0min,B由20%升至30%;5.0~7.0min,B由30%升至95%,保持1min;8.0~8.1min,B由95%降至5%,保持到10min。
8.根据权利要求1所述禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,其特征在于,定量计算禽畜肉中36种兽药的残留量时,其中,马布特罗、溴氯布特罗、溴布特罗、西布特罗、克仑塞罗、妥布特罗、马喷特罗、非诺特罗、福莫特罗、丙卡特罗、特布他林、西马特罗、氯丙那林、班布特罗、利托君、可乐定、赛庚定、苯乙醇胺A、克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、R-美托洛尔、多巴胺、普萘洛尔和阿替洛尔采用内标法定量。
9.根据权利要求1所述禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,其特征在于,定量计算禽畜肉中36种兽药的残留量时,其中,克伦潘罗、克伦丙罗、奥西那林、异克舒令、拉贝特罗、异克伦潘罗、齐帕特罗、巴氯芬、沙美特罗、喷布特罗和甲氧酪胺采用基质加标曲线法定量。
10.根据权利要求1所述禽畜肉中36种兽药残留量的测定方法,其特征在于,所述禽畜肉为牛肉、羊肉、猪肉或鸡肉。
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