CN112022792A - 一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法，它涉及染发剂的制备方法，特别涉及一种中药染发剂的制备方法。本发明的目的是要解决现有染发剂加入有毒有害物质，且易致癌、易过敏、易损伤发质等问题。制备方法：一、制备栀子水提液；二、制备发酵基质；三、发酵，得到豆豉；四、制备培养液；五、制备米糠发酵液；六、协同发酵，得到鲜豆豉；七、制备栀豉水溶液；八、混合、提取、干燥，得到可食用的药食同源中药染发剂。优点：聚谷氨酸的含量增加，且着色力强；栀子蓝色素产量高。色牢度不易褪色。本发明主要用于制备染发剂。

Description

一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法
技术领域
本发明涉及染发剂的制备方法，特别涉及一种中药染发剂的制备方法。
背景技术
老年人白发、青年人须发早白一直困扰着众多爱美的人群，另外，年轻人为了追求时尚的潮流，常常喜欢改变头发的颜色，染发成为一种快速且常用的解决方法。然而普通染发剂通常含有苯二胺和双氧水等成分，频繁染发易致癌，而且会导致体质敏感的人皮肤过敏，还会使头发干燥、断裂甚至脱发。染发剂中的铅、汞、砷等重金属还可能损害肝、肾等脏器的功能。有研究表明，长期染发的人，患淋巴瘤的几率增加70％，患白血病的几率是普通人的3.8倍。安全纯天然无添加的染发剂是人们迫切呼吁和需求的产品。
常规的染发剂的染发原理是将染料分子渗透入头发表皮和/或皮质实现半永久或永久型染发。
近年来，生物表面活性剂由于其可降低表面张力、可降解、无毒、两亲特性等受到广泛关注，被广泛应用于原油开采、医药、化妆品以及食品加工等行业。
发明内容
本发明的目的是要解决现有染发剂加入有毒有害物质，且易致癌、易过敏、易损伤发质等问题，而提出一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法。
一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法，具体是按以下步骤制备的：
一、制备栀子水提液：将栀子粉碎，过8～10目筛，得到栀子粉，向栀子粉中加水微波提取，在微波功率200W～400W条件下加热时间为3min～5min，得到栀子水提液；所述栀子水提液中含栀子生药量24g/100mL～30g/100mL；
二、制备发酵基质：①、向栀子水提液加入NaCl，得到含NaCl栀子水提液，所述含NaCl栀子水提液中NaCl的浓度为20g/L～80g/L；②、将大豆浸泡于含NaCl栀子水提液中，浸泡12h～36h，分离得到浸泡后大豆和浸泡后含NaCl栀子水提液，将浸泡后大豆装袋，并在温度为121℃和压力为0.105MPa的条件下灭菌20min～40min，然后过滤，并冷却至温度为15～25℃，得到发酵基质；所述大豆的质量与含NaCl栀子水提液的体积比为(80～100)g:100mL；
三、发酵：按照接种量为2mL/250g将枯草芽孢杆菌标准菌株接种于发酵基质上，所述枯草芽孢杆菌标准菌株的活菌含量为107CFU/mL～109CFU/mL，摇匀后在温度后25～40℃培养至pH值达到10～11为止，然后继续在温度为25～40℃培养12h～36h，得到豆豉；
四、制备培养液：①、将米糠粉碎，过30～50目筛，得到米糠粉；②、将米糠粉加入温水中，然后再功率为100W～200W下超声分散18min～20min，得到米糠水溶液；所述温度为温度为50℃～60℃的水；所述米糠粉与温水的质量比为1:4～6；③、将米糠水溶液与蜂蜜混合，搅拌均匀得到培养液；所述米糠水溶液与蜂蜜的质量比为5:3；
五、制备米糠发酵液：①、接种：以步骤四得到的培养液作为米曲霉培养基，将米曲霉菌种子液接种于米曲霉培养基中，至米曲霉培养基中米曲霉菌种子液的体积分数为6％～8％，得到接种后米曲霉培养基，所述米曲霉菌种子液的活菌含量为107CFU/mL～109CFU/mL；②、恒温摇床发酵：按照容器容积的1/5将接种后米曲霉培养基转移至容器内，然后置于恒温摇床中，在温度为25～30℃和转速100r/min～200r/min下，以起始pH为6.5～7.5进行恒温发酵7d～15d，过滤，得到米糠发酵液；
六、协同发酵：将米糠发酵液与豆豉混合，搅匀后在温度为15～25℃培养16h～24h，得到鲜豆豉；所述米糠发酵液与豆豉的质量比为1～3:2～4；
七、制备栀豉水溶液：将鲜豆豉浸泡于步骤二②中得到的浸泡后含NaCl栀子水提液中，浸泡12h～60h，过滤，得到栀豉水溶液；所述鲜豆豉的质量与步骤二②中得到的浸泡后含NaCl栀子水提液的体积比为1g:(6～10)mL；
八、混合、提取、干燥：①、将菊花和玫瑰花混合并粉碎，过50～70目筛，得到菊花-玫瑰花粉体混合物；所述菊花与玫瑰花的质量比为3～5:5～7，②、以栀豉水溶液作为提取剂，将菊花-玫瑰花粉体混合物加入栀豉水溶液中，在温度为70～90℃下提取1h～2h，过滤，得到染发剂初液；所述染发剂初液中含菊花生药量120g/L～130g/L，含玫瑰花生药量182g/L～200g/L；③、对染发剂初液进行真空冷冻干燥，得到可食用的药食同源中药染发剂。
本发明原理及优点：
一、本发明制备的可食用的药食同源中药染发剂中多聚谷氨酸含量增加，本发明通过盐水浸泡后的大豆接种枯草芽孢杆菌发酵后，再与蜂蜜，米糠协同发酵，显著增加染发剂中的聚谷氨酸的含量，且着色力强，保持60d～80d不褪色。
二、本发明制备的可食用的药食同源中药染发剂中栀子蓝色素产量增加，蜂蜜、米糠与盐水浸泡后的大豆促进枯草芽孢杆菌生物活性，增加鲜豆豉中的β-葡萄糖甘酶含量，栀子苷通过β-葡萄糖甘酶促进京尼平的产生；此外米糠通过协同发酵后活性肽含量升高氨基酸组成丰富，含有6种氨基酸，分别为蛋氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸和异亮氨酸，和豆豉的小分子氨基酸；京尼平和小分子氨基酸充分反应，通过产生高含量的小分子氨基酸有利于反应向正反应方向进行，使栀子蓝色素产量高。
三、本发明添加菊花和玫瑰花，菊花和玫瑰花的抑菌成分通过脂肽迅速溶解在水中，促进有效成分渗透到毛囊抑制头皮真菌。
四、本发明制备的可食用的药食同源中药染发剂中表面活性剂含量增加，促进染发后的色牢度不易褪色。蜂蜜、米糠中的米糠多糖(通过米曲霉发酵)和米糠活性肽促进枯草芽孢杆菌发酵产生高含量的脂肽。脂肽最早由Arima于1968年发现存在于枯草芽孢杆菌的代谢产物中，主要由环状肽链和脂肪酸链组成，其中环状肽链主要由1-L-谷氨酸、2-L-亮氨酸、3-D-亮氨酸、4-L一缬氨酸、5-L-天冬氨酸、6-D-亮氨酸以及7-L-亮氨酸由肽键相互连接而成，脂肪酸链由12～l6个不同长度的脂肪酸组成。脂肽是表面活性较为显著的一种生物表面活性剂，脂肽含量高可使水的表面张力由72mN/m下降到28mN/m，在121℃处理2h，仍具有较强的乳化活性，耐盐度可达21％。较强的乳化活性具有乳化，浸润，渗透的作用，本发明制备的可食用的药食同源中药染发剂通过高温作用于头发，迅速使溶于栀子蓝色素的水溶液乳化，浸润，渗透到头发上，加上多聚谷氨酸的锁水性，促进染发后的色牢度不易褪色。
五、米糠中活性肽含量增加，促进活性肽的与毛囊充分结合并被吸收。由于染发剂中含有大量的脂肽，可以促进活性肽快速透过皮肤屏障，与毛囊充分结合并被吸收，激活毛囊DP细胞，促使其分裂、增殖，休眠的毛囊逐渐苏醒，毛母细胞也随之大量分裂从而合成出健康的毛发，恢复其正常的毛发生长周期。在对毛囊干细胞生长代谢的研究中发现，当毛囊进入休止期后，导入某些活性肽，能让原本处于休眠状态的毛囊干细胞被激活，开启新一轮毛发生长周期。
附图说明
图1是γ-PGA质量分数柱形图；
图2是发酵时间-γ-PGA质量分数曲线图，图中1表示实施例1至3得到的可食用的药食同源中药染发剂的发酵时间-γ-PGA质量分数曲线图，2表示对比例1至3得到的未协同发酵的染发剂的发酵时间-γ-PGA质量分数曲线图。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式是一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法，具体是按以下步骤制备的：
一、制备栀子水提液：将栀子粉碎，过8～10目筛，得到栀子粉，向栀子粉中加水微波提取，在微波功率200W～400W条件下加热时间为3min～5min，得到栀子水提液；所述栀子水提液中含栀子生药量24g/100mL～30g/100mL；
二、制备发酵基质：①、向栀子水提液加入NaCl，得到含NaCl栀子水提液，所述含NaCl栀子水提液中NaCl的浓度为20g/L～80g/L；②、将大豆浸泡于含NaCl栀子水提液中，浸泡12h～36h，分离得到浸泡后大豆和浸泡后含NaCl栀子水提液，将浸泡后大豆装袋，并在温度为121℃和压力为0.105MPa的条件下灭菌20min～40min，然后过滤，并冷却至温度为15～25℃，得到发酵基质；所述大豆的质量与含NaCl栀子水提液的体积比为(80～100)g:100mL；
三、发酵：按照接种量为2mL/250g将枯草芽孢杆菌标准菌株接种于发酵基质上，所述枯草芽孢杆菌标准菌株的活菌含量为107CFU/mL～109CFU/mL，摇匀后在温度后25～40℃培养至pH值达到10～11为止，然后继续在温度为25～40℃培养12h～36h，得到豆豉；
四、制备培养液：①、将米糠粉碎，过30～50目筛，得到米糠粉；②、将米糠粉加入温水中，然后再功率为100W～200W下超声分散18min～20min，得到米糠水溶液；所述温度为温度为50℃～60℃的水；所述米糠粉与温水的质量比为1:4～6；③、将米糠水溶液与蜂蜜混合，搅拌均匀得到培养液；所述米糠水溶液与蜂蜜的质量比为5:3；
五、制备米糠发酵液：①、接种：以步骤四得到的培养液作为米曲霉培养基，将米曲霉菌种子液接种于米曲霉培养基中，至米曲霉培养基中米曲霉菌种子液的体积分数为6％～8％，得到接种后米曲霉培养基，所述米曲霉菌种子液的活菌含量为107CFU/mL～109CFU/mL；②、恒温摇床发酵：按照容器容积的1/5将接种后米曲霉培养基转移至容器内，然后置于恒温摇床中，在温度为25～30℃和转速100r/min～200r/min下，以起始pH为6.5～7.5进行恒温发酵7d～15d，过滤，得到米糠发酵液；
六、协同发酵：将米糠发酵液与豆豉混合，搅匀后在温度为15～25℃培养16h～24h，得到鲜豆豉；所述米糠发酵液与豆豉的质量比为1～3:2～4；
七、制备栀豉水溶液：将鲜豆豉浸泡于步骤二②中得到的浸泡后含NaCl栀子水提液中，浸泡12h～60h，过滤，得到栀豉水溶液；所述鲜豆豉的质量与步骤二②中得到的浸泡后含NaCl栀子水提液的体积比为1g:(6～10)mL；
八、混合、提取、干燥：①、将菊花和玫瑰花混合并粉碎，过50～70目筛，得到菊花-玫瑰花粉体混合物；所述菊花与玫瑰花的质量比为3～5:5～7，②、以栀豉水溶液作为提取剂，将菊花-玫瑰花粉体混合物加入栀豉水溶液中，在温度为70～90℃下提取1h～2h，过滤，得到染发剂初液；所述染发剂初液中含菊花生药量120g/L～130g/L，含玫瑰花生药量182g/L～200g/L；③、对染发剂初液进行真空冷冻干燥，得到可食用的药食同源中药染发剂。
《伤寒论》原方记载栀子豉汤的煎煮方法采用先煎栀子后下淡豆豉的方法，先煎栀子使栀子苷溶出，被后下淡豆豉中的β-葡萄糖苷酶或经肠道微生物的β-葡萄糖苷酶水解为京尼平，淡豆豉是大豆与青蒿、桑叶经微生物发酵而成，微生物中的蛋白酶可将大豆中的蛋白质分解成多种氨基酸，京尼平化学性质不稳定，在氧的作用下易与淡豆豉中的氨基酸结合生成栀子蓝，栀子蓝为天然食品着色剂。
本实施方式制备的可食用的药食同源中药染发剂，一是利用β-葡萄糖苷酶将栀子中的栀子苷降解为京尼平，再利用蛋白酶将大豆水解为氨基酸，再将两种溶液混合在一定条件下反应制成药食同源中药染发剂。
本实施方式制备的可食用的药食同源中药染发剂着色力强，纯天然无添加，染发后头发顺滑，解决了普通染发剂刺激性强、易过敏、易损伤发质使头发干枯的问题，且不对人体产生毒副作用。该染发剂是基于栀子豉汤原方基础上开发，所以本实施方式制备的可食用的药食同源中药染发剂在保证着色力强情况下，该染发剂使用安全，可食用，适用于对天然染发剂需求的人群。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤三中所述枯草芽孢杆菌保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为：CICC 24713。其他与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二之一不同点是：步骤五①中所述米曲霉菌种子液中米曲霉为北京北纳创联生物技术研究院生产，资源编号BNCC181413。其他与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是：步骤八③中在所述真空冷冻干燥分为预冻、一次干燥和解析干燥3个阶段。其他与具体实施方式一至三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式四的不同点是：所述预冻具体操作如下：在真空度为0.15mbar和温度为-40℃下预冻4h。其他与具体实施方式四相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式四或五之一不同点是：所述一次干燥具体操作如下：先在真空度为0.15mbar和温度为-30℃下干燥3h；再升温至-20℃，并在真空度为0.15mbar和温度为-20℃下干燥3h；再升温至-10℃，并在真空度为0.15mbar和温度为-10℃下干燥8h；再升温至-5℃，并在真空度为0.15mbar和温度为-5℃下干燥3h；最后升温至0℃，并在真空度为0.15mbar和温度为0℃下干燥3h。其他与具体实施方式四或五相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式四至六之一不同点是：所述解析干燥具体操作如下：先在真空度为0.15mbar和温度为10℃下干燥2h；再升温至20℃，并在真空度为0.15mbar和温度为20℃下干燥2h；再升温至30℃，并在真空度为0.15mbar和温度为30℃下干燥2h；最后升温至40℃，并在真空度为0.15mbar和温度为40℃下干燥8h。其他与具体实施方式四至六相同。
本发明内容不仅限于上述各实施方式的内容，其中一个或几个具体实施方式的组合同样也可以实现发明的目的。
采用下述试验验证本发明效果：
实施例1：一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法，具体是按以下步骤制备的：
一、制备栀子水提液：将栀子粉碎，过8～10目筛，得到栀子粉，向栀子粉中加水微波提取，在微波功率300W条件下加热时间为5min，得到栀子水提液；所述栀子水提液中含栀子生药量27g/100mL；
二、制备发酵基质：①、向栀子水提液加入NaCl，得到含NaCl栀子水提液，所述含NaCl栀子水提液中NaCl的浓度为50g/L；②、将大豆浸泡于含NaCl栀子水提液中，浸泡24h，分离得到浸泡后大豆和浸泡后含NaCl栀子水提液，将浸泡后大豆装袋，并在温度为121℃和压力为0.105MPa的条件下灭菌30min，然后过滤，并冷却至温度为20℃，得到发酵基质；所述大豆的质量与含NaCl栀子水提液的体积比为90g:100mL；
三、发酵：按照接种量为2mL/250g将枯草芽孢杆菌标准菌株接种于发酵基质上，所述枯草芽孢杆菌标准菌株的活菌含量为107CFU/mL～109CFU/mL，摇匀后在温度后34℃培养至pH值达到10为止，然后继续在温度为34℃培养12h，得到豆豉；
四、制备培养液：①、将米糠粉碎，过30～50目筛，得到米糠粉；②、将米糠粉加入温水中，然后再功率为100W～200W下超声分散18min～20min，得到米糠水溶液；所述温度为温度为55℃的水；所述米糠粉与温水的质量比为1:5；③、将米糠水溶液与蜂蜜混合，搅拌均匀得到培养液；所述米糠水溶液与蜂蜜的质量比为5:3；
五、制备米糠发酵液：①、接种：以步骤四得到的培养液作为米曲霉培养基，将米曲霉菌种子液接种于米曲霉培养基中，至米曲霉培养基中米曲霉菌种子液的体积分数为7％，得到接种后米曲霉培养基，所述米曲霉菌种子液的活菌含量为107CFU/mL～109CFU/mL；②、恒温摇床发酵：按照容器容积的1/5将接种后米曲霉培养基转移至容器内，然后置于恒温摇床中，在温度为28℃和转速150r/min下，以起始pH为6.9进行恒温发酵11d，过滤，得到米糠发酵液；
六、协同发酵：将米糠发酵液与豆豉混合，搅匀后在温度为20℃培养16h，得到鲜豆豉；所述米糠发酵液与豆豉的质量比为2:3；
七、制备栀豉水溶液：将鲜豆豉浸泡于步骤二②中得到的浸泡后含NaCl栀子水提液中，浸泡36h，过滤，得到栀豉水溶液；所述鲜豆豉的质量与步骤二②中得到的浸泡后含NaCl栀子水提液的体积比为1g:8mL；
八、混合、提取、干燥：①、将菊花和玫瑰花混合并粉碎，过50～70目筛，得到菊花-玫瑰花粉体混合物；所述菊花与玫瑰花的质量比为4:6，②、以栀豉水溶液作为提取剂，将菊花-玫瑰花粉体混合物加入栀豉水溶液中，在温度为80℃下提取1.5h，过滤，得到染发剂初液；所述染发剂初液中含菊花生药量124g/L，含玫瑰花生药量193g/L；③、对染发剂初液进行真空冷冻干燥，得到可食用的药食同源中药染发剂。
实施例1步骤三中所述枯草芽孢杆菌保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为：CICC 24713。
实施例1步骤五①中所述米曲霉菌种子液中米曲霉为北京北纳创联生物技术研究院生产，资源编号BNCC 181413。
实施例1步骤八③中在所述真空冷冻干燥分为预冻、一次干燥和解析干燥3个阶段；
所述预冻具体操作如下：在真空度为0.15mbar和温度为-40℃下预冻4h；
所述一次干燥具体操作如下：先在真空度为0.15mbar和温度为-30℃下干燥3h；再升温至-20℃，并在真空度为0.15mbar和温度为-20℃下干燥3h；再升温至-10℃，并在真空度为0.15mbar和温度为-10℃下干燥8h；再升温至-5℃，并在真空度为0.15mbar和温度为-5℃下干燥3h；最后升温至0℃，并在真空度为0.15mbar和温度为0℃下干燥3h；
所述解析干燥具体操作如下：先在真空度为0.15mbar和温度为10℃下干燥2h；再升温至20℃，并在真空度为0.15mbar和温度为20℃下干燥2h；再升温至30℃，并在真空度为0.15mbar和温度为30℃下干燥2h；最后升温至40℃，并在真空度为0.15mbar和温度为40℃下干燥8h。
实施例2：本实施例与实施例1不同点是：步骤三中摇匀后在温度后34℃培养至pH值达到10为止，然后继续在温度为34℃培养24h，得到豆豉；步骤六中将米糠发酵液与豆豉混合，搅匀后在温度为20℃培养20h，得到鲜豆豉。其他与实施例1相同。
实施例3：本实施例与实施例1不同点是：步骤三中摇匀后在温度后34℃培养至pH值达到10为止，然后继续在温度为34℃培养36h，得到豆豉；步骤六中将米糠发酵液与豆豉混合，搅匀后在温度为20℃培养24h，得到鲜豆豉。其他与实施例1相同。
对比例1：不与米糠发酵液进行协同发酵
一、制备栀子水提液：将栀子粉碎，过8～10目筛，得到栀子粉，向栀子粉中加水微波提取，在微波功率300W条件下加热时间为5min，得到栀子水提液；所述栀子水提液中含栀子生药量27g/100mL；
二、制备发酵基质：①、向栀子水提液加入NaCl，得到含NaCl栀子水提液，所述含NaCl栀子水提液中NaCl的浓度为50g/L；②、将大豆浸泡于含NaCl栀子水提液中，浸泡24h，分离得到浸泡后大豆和浸泡后含NaCl栀子水提液，将浸泡后大豆装袋，并在温度为121℃和压力为0.105MPa的条件下灭菌30min，然后过滤，并冷却至温度为20℃，得到发酵基质；所述大豆的质量与含NaCl栀子水提液的体积比为90g:100mL；
三、发酵：按照接种量为2mL/250g将枯草芽孢杆菌标准菌株接种于发酵基质上，所述枯草芽孢杆菌标准菌株的活菌含量为107CFU/mL～109CFU/mL，摇匀后在温度后34℃培养至pH值达到10为止，然后继续在温度为34℃培养28h，得到豆豉；
四、制备栀豉水溶液：将豆豉浸泡于步骤二②中得到的浸泡后含NaCl栀子水提液中，浸泡36h，过滤，得到栀豉水溶液；所述鲜豆豉的质量与步骤二②中得到的浸泡后含NaCl栀子水提液的体积比为1g:8mL；
五、混合、提取、干燥：①、将菊花和玫瑰花混合并粉碎，过50～70目筛，得到菊花-玫瑰花粉体混合物；所述菊花与玫瑰花的质量比为4:6，②、以栀豉水溶液作为提取剂，将菊花-玫瑰花粉体混合物加入栀豉水溶液中，在温度为80℃下提取1.5h，过滤，得到染发剂初液；所述染发剂初液中含菊花生药量124g/L，含玫瑰花生药量193g/L；③、对染发剂初液进行真空冷冻干燥，得到未协同发酵的染发剂。
对比例2：本对比例与对比例1不同点是：步骤三中继续在温度为34℃培养44h，得到豆豉。其他与对比例1相同。
对比例3：本对比例与对比例1不同点是：步骤三中继续在温度为34℃培养60h，得到豆豉。其他与对比例1相同。
γ-PGA的含量测定：
①、采用660nm波长分别对实施例1至3得到的可食用的药食同源中药染发剂和对比例1至3得到的未协同发酵的染发剂的吸光度值进行检测，
②、将染发剂(所述染发剂实施例1至3得到的可食用的药食同源中药染发剂或对比例1至3得到的未协同发酵的染发剂)与水混合，得到染发剂水溶液，所述染发剂与水的体积比为1:2；从染发剂水溶液中制备得到的γ-PGA钠盐粗品，γ-PGA钠盐粗品用1mol·L-1硫酸调节pH值为2，静置至出现白色絮状沉淀为止，在转速为5000rpm下离心10min，收集沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀，冷冻干燥即得γ-PGA；将γ-PGA加水溶解，用212nm波长比色测定γ-PGA的吸光度值；
③、用212nm的吸光度值与660nm的吸光度值的比值表示γ-PGA的菌体相对单位产量，每个样品检测3次，将3次(A、B和C分别表示第一次、第二次和第三次)记录在表1中，并计算均值，以表1数据单次测量结果绘制柱形，如图1所示，图1是γ-PGA质量分数柱形图；实施例1至3中以步骤三中继续在温度为34℃培养时间和步骤六中在温度为20℃培养时间之和作为发酵时间，对比例1至3中以步骤三中继续在温度为34℃培养时间作为发酵时间，并以发酵时间为横坐标，以表1中γ-PGA质量分数均值为纵坐标绘制曲线图，如图2所示，图2是发酵时间-γ-PGA质量分数曲线图，图中1表示实施例1至3得到的可食用的药食同源中药染发剂的发酵时间-γ-PGA质量分数曲线图，2表示对比例1至3得到的未协同发酵的染发剂的发酵时间-γ-PGA质量分数曲线图。
表1
Figure BDA0002703894840000091
表1中γ-PGA的分子量约为100万至400万道尔顿。
通过表1、图1和图2可知，本发明通过盐水浸泡后的大豆接种枯草芽孢杆菌发酵后，再与蜂蜜，米糠协同发酵后发现染发剂中的聚谷氨酸的含量显著提高。
脂肽含量测定：
将染发剂(所述染发剂为实施例1至3得到的可食用的药食同源中药染发剂或对比例1至3得到的未协同发酵的染发剂)与水按1:2混合，得到染发剂水溶液，在温度为4℃和转速为12000r/min下将染发剂水溶液离心15min，去除菌体；并将上清液过0.45μm微孔滤膜后，取lmL入色谱瓶中，进入高效液相色谱(HPLC)系统，得到脂肽的出峰图，根据峰面积计算脂肽含量。HPLC系统为Waters 600型仪器，配制Waters 2489紫外/可见光检测器；色谱柱为Kromasil公司的Kromasil C18(填料粒度为5μm，柱长×柱内径为250.0mm×4.6mm)；流速为1mL/min；柱温为35℃，检测波长为205mm；流动相A为水(含体积比0.05％三氟乙酸)，流动相B为乙腈，洗脱程序2h，体积比分别为A10％和B 90％。其中脂肽标品购买于Sigma公司，溶于20％乙腈溶液中，配制成浓度为0.3904g/L的标准品溶液，测得脂肽含量，每个样品检测3次，将3次(A、B和C分别表示第一次、第二次和第三次)记录在表1中，并计算均值，如表2所示。
表2
Figure BDA0002703894840000101
通过表2可知，蜂蜜、米糠中的米糠多糖(通过米曲霉发酵)和米糠活性肽促进枯草芽孢杆菌发酵产生高含量的脂肽。
栀子蓝OD值的含量测定：
对实施例1至3得到的可食用的药食同源中药染发剂和对比例1至3得到的未协同发酵的染发剂中栀子蓝OD值的含量进行测定，如表3所示。
表3
组别 栀子蓝OD值的含量
实施例1 0.288
实施例2 0.585
实施例3 0.434
对比例1 0.158
对比例2 0.375
对比例3 0.338
通过表3可知，蜂蜜、米糠与盐水浸泡后的大豆促进枯草芽孢杆菌生物活性，增加鲜豆豉中的β-葡萄糖甘酶含量，栀子苷通过β-葡萄糖甘酶促进京尼平的产生；此外米糠通过协同发酵后活性肽含量升高氨基酸组成丰富，含有6种氨基酸，分别为蛋氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸和异亮氨酸，和豆豉的小分子氨基酸；京尼平和小分子氨基酸充分反应，通过产生高含量的小分子氨基酸有利于反应向正反应方向进行，使栀子蓝色素产量高。
染发剂色牢度时间检测：
取30人20岁健康成年女性的头发，头发在采样前未经烫、染等处理，发长约30cm，发质黑色，有光泽，按照30人的头发分成3组，A组、B组和C组，每组10人的头发，A组采用实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，B组采用实施例2得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，C组采用实施例3得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，具体过程如下：首先将头发用水洗净，用毛巾擦净头发上的水分，将染发剂(所述染发剂为实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂、实施例2得到的可食用的药食同源中药染发剂和实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂)与水混合，搅拌成糊状，涂抹在头发上，加热至45℃，并在温度为45℃下保持30min～40min；观察头发颜色褪色情况，记录在表4中。
表4
Figure BDA0002703894840000111
通过表4可知，本发明制备的可食用的药食同源中药染发剂中表面活性剂含量增加，促进染发后的色牢度不易褪色。较强的乳化活性具有乳化，浸润，渗透的作用，本发明制备的可食用的药食同源中药染发剂通过高温作用于头发，迅速使溶于栀子蓝色素的水溶液乳化，浸润，渗透到头发上，加上多聚谷氨酸的锁水性，促进染发后的色牢度不易褪色。
脱发治愈检测：
选择一般性脱发(一般性脱发是指头发明显开始稀疏，头发整体开始减少)女性90人，分成3组，A组、B组和C组，每组30人，A组采用实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，B组采用实施例2得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，C组采用实施例3得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，具体过程如下：首先对患者进行洗头，用毛巾擦净头发上的水分，将染发剂(所述染发剂为实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂、实施例2得到的可食用的药食同源中药染发剂和实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂)与水混合，搅拌成糊状，涂抹在头发上，加热至45℃，并在温度为45℃下保持30min～40minn，每天涂抹一次。效果记录在表5中。
选择脂溢性脱发(脂溢性脱发是全部头发稀疏脱落较重)女性90人，分成3组，D组、E组和F组，每组30人，D组采用实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，E组采用实施例2得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，F组采用实施例3得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，具体过程如下：首先对患者进行洗头，用毛巾擦净头发上的水分，将染发剂(所述染发剂为实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂、实施例2得到的可食用的药食同源中药染发剂和实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂)与水混合，搅拌成糊状，涂抹在头发上，加热至45℃，并在温度为45℃下保持30min～40minn，每天涂抹一次。效果记录在表5中。
选择陈年性脱发(陈年性脱发是头顶部头发脱落)女性90人，分成3组，G组、H组和I组，每组30人，G组采用实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，H组采用实施例2得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，I组采用实施例3得到的可食用的药食同源中药染发剂进行染发，具体过程如下：首先对患者进行洗头，用毛巾擦净头发上的水分，将染发剂(所述染发剂为实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂、实施例2得到的可食用的药食同源中药染发剂和实施例1得到的可食用的药食同源中药染发剂)与水混合，搅拌成糊状，涂抹在头发上，加热至45℃，并在温度为45℃下保持30min～40minn，每天涂抹一次。效果记录在表5中。
表5
Figure BDA0002703894840000121
Figure BDA0002703894840000131
通过表5可知，米糠中活性肽含量增加，促进活性肽的与毛囊充分结合并被吸收。由于染发剂中含有大量的脂肽，可以促进活性肽快速透过皮肤屏障，与毛囊充分结合并被吸收，激活毛囊DP细胞，促使其分裂、增殖，休眠的毛囊逐渐苏醒，毛母细胞也随之大量分裂从而合成出健康的毛发，恢复其正常的毛发生长周期。在对毛囊干细胞生长代谢的研究中发现，当毛囊进入休止期后，导入某些活性肽，能让原本处于休眠状态的毛囊干细胞被激活，开启新一轮毛发生长周期。

Claims (7)

1.一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法，其特征在于它是按以下步骤制备的：
一、制备栀子水提液：将栀子粉碎，过8～10目筛，得到栀子粉，向栀子粉中加水微波提取，在微波功率200W～400W条件下加热时间为3min～5min，得到栀子水提液；所述栀子水提液中含栀子生药量24g/100mL～30g/100mL；
二、制备发酵基质：①、向栀子水提液加入NaCl，得到含NaCl栀子水提液，所述含NaCl栀子水提液中NaCl的浓度为20g/L～80g/L；②、将大豆浸泡于含NaCl栀子水提液中，浸泡12h～36h，分离得到浸泡后大豆和浸泡后含NaCl栀子水提液，将浸泡后大豆装袋，并在温度为121℃和压力为0.105MPa的条件下灭菌20min～40min，然后过滤，并冷却至温度为15～25℃，得到发酵基质；所述大豆的质量与含NaCl栀子水提液的体积比为(80～100)g:100mL；
三、发酵：按照接种量为2mL/250g将枯草芽孢杆菌标准菌株接种于发酵基质上，所述枯草芽孢杆菌标准菌株的活菌含量为107CFU/mL～109CFU/mL，摇匀后在温度后25～40℃培养至pH值达到10～11为止，然后继续在温度为25～40℃培养12h～36h，得到豆豉；
四、制备培养液：①、将米糠粉碎，过30～50目筛，得到米糠粉；②、将米糠粉加入温水中，然后再功率为100W～200W下超声分散18min～20min，得到米糠水溶液；所述温度为温度为50℃～60℃的水；所述米糠粉与温水的质量比为1:4～6；③、将米糠水溶液与蜂蜜混合，搅拌均匀得到培养液；所述米糠水溶液与蜂蜜的质量比为5:3；
五、制备米糠发酵液：①、接种：以步骤四得到的培养液作为米曲霉培养基，将米曲霉菌种子液接种于米曲霉培养基中，至米曲霉培养基中米曲霉菌种子液的体积分数为6％～8％，得到接种后米曲霉培养基，所述米曲霉菌种子液的活菌含量为107CFU/mL～109CFU/mL；②、恒温摇床发酵：按照容器容积的1/5将接种后米曲霉培养基转移至容器内，然后置于恒温摇床中，在温度为25～30℃和转速100r/min～200r/min下，以起始pH为6.5～7.5进行恒温发酵7d～15d，过滤，得到米糠发酵液；
六、协同发酵：将米糠发酵液与豆豉混合，搅匀后在温度为15～25℃培养16h～24h，得到鲜豆豉；所述米糠发酵液与豆豉的质量比为1～3:2～4；
七、制备栀豉水溶液：将鲜豆豉浸泡于步骤二②中得到的浸泡后含NaCl栀子水提液中，浸泡12h～60h，过滤，得到栀豉水溶液；所述鲜豆豉的质量与步骤二②中得到的浸泡后含NaCl栀子水提液的体积比为1g:(6～10)mL；
八、混合、提取、干燥：①、将菊花和玫瑰花混合并粉碎，过50～70目筛，得到菊花-玫瑰花粉体混合物；所述菊花与玫瑰花的质量比为3～5:5～7，②、以栀豉水溶液作为提取剂，将菊花-玫瑰花粉体混合物加入栀豉水溶液中，在温度为70～90℃下提取1h～2h，过滤，得到染发剂初液；所述染发剂初液中含菊花生药量120g/L～130g/L，含玫瑰花生药量182g/L～200g/L；③、对染发剂初液进行真空冷冻干燥，得到可食用的药食同源中药染发剂。
2.根据权利要求1所述的一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法，其特征在于步骤三中所述枯草芽孢杆菌保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为：CICC24713。
3.根据权利要求1或2所述的一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法，其特征在于步骤五①中所述米曲霉菌种子液中米曲霉为北京北纳创联生物技术研究院生产，资源编号BNCC 181413。
4.根据权利要求3所述的一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法，其特征在于步骤八③中在所述真空冷冻干燥分为预冻、一次干燥和解析干燥3个阶段。
5.根据权利要求4所述的一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法，其特征在于所述预冻具体操作如下：在真空度为0.15mbar和温度为-40℃下预冻4h。
6.根据权利要求4所述的一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法，其特征在于所述一次干燥具体操作如下：先在真空度为0.15mbar和温度为-30℃下干燥3h；再升温至-20℃，并在真空度为0.15mbar和温度为-20℃下干燥3h；再升温至-10℃，并在真空度为0.15mbar和温度为-10℃下干燥8h；再升温至-5℃，并在真空度为0.15mbar和温度为-5℃下干燥3h；最后升温至0℃，并在真空度为0.15mbar和温度为0℃下干燥3h。
7.根据权利要求4所述的一种可食用的药食同源中药染发剂的制备方法，其特征在于所述解析干燥具体操作如下：先在真空度为0.15mbar和温度为10℃下干燥2h；再升温至20℃，并在真空度为0.15mbar和温度为20℃下干燥2h；再升温至30℃，并在真空度为0.15mbar和温度为30℃下干燥2h；最后升温至40℃，并在真空度为0.15mbar和温度为40℃下干燥8h。
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