CN111848751B - 一种新冠病毒s蛋白优势抗原表位肽及其用途 - Google Patents

一种新冠病毒s蛋白优势抗原表位肽及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN111848751B
CN111848751B CN202010560551.9A CN202010560551A CN111848751B CN 111848751 B CN111848751 B CN 111848751B CN 202010560551 A CN202010560551 A CN 202010560551A CN 111848751 B CN111848751 B CN 111848751B
Authority
CN
China
Prior art keywords
epitope peptide
protein
test strip
dominant epitope
protein dominant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010560551.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111848751A (zh
Inventor
刘华
李玉林
张怡青
王云龙
王继创
程蕾
王运从
蒋静雯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhengzhou Beisaitai Biotechnology Co ltd
HENAN BIOENGINEERING RESEARCH CENTER
Original Assignee
Zhengzhou Beisaitai Biotechnology Co ltd
HENAN BIOENGINEERING RESEARCH CENTER
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhengzhou Beisaitai Biotechnology Co ltd, HENAN BIOENGINEERING RESEARCH CENTER filed Critical Zhengzhou Beisaitai Biotechnology Co ltd
Priority to CN202010560551.9A priority Critical patent/CN111848751B/zh
Publication of CN111848751A publication Critical patent/CN111848751A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111848751B publication Critical patent/CN111848751B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本发明属于冠状病毒检测技术领域，具体涉及一种新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽及其用途。所述S蛋白优势抗原表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述S蛋白优势抗原表位肽可与新冠病毒抗体特异性结合，避免假阳性的情况出现。

Description

一种新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽及其用途
技术领域
本发明属于冠状病毒检测技术领域，具体涉及一种新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽及其用途。
背景技术
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)为β属的冠状病毒，是目前已知的第7种可感染人类的冠状病毒，其余6种分别是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV。该疾病以发热、干咳、乏力为主要表现，常伴有气促和呼吸困难等，在严重病例中，新冠肺炎可导致严重急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克，多功能衰竭甚至死亡。
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异IgM和IgG抗体检测写进了国家卫生健康委于2020年3月3日发布的“新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)”，作为临床确诊标准，国家药品监督管理局(NMPA)也应急审批了广州万孚(胶体金试纸条)、英诺特(唐山)(胶体金试剂条)等多个抗体检测试剂盒。徐万洲等在19例核酸检测阴性但基于临床症状确诊的COVID-19患者中，有16例患者IgM阳性，其阳性率达到84.21％，有18例患者IgG阳性，其阳性率达到94.74％，说明抗体的检测可以有效地弥补核酸检测漏检的风险，发挥其在新型冠状肺炎的及时诊治及防控中的作用。但临床现也有反映出现了较多的假阳性，困扰临床决策。
特异IgM和IgG免疫测定假阳性通常有以下两个方面的原因，一是试剂盒所用抗原本身的特异性及阳性判断值(Cut-offvalue)的设定；二是患者标本中存在导致免疫测定假阳性的内源性或外源性干扰物质。而试剂盒所用抗原本身的特异性是检测特异性的基础。这是由抗原决定簇和抗体的抗原结合区的空间构象决定的。抗体抗原结合区的空间构象是由该区的氨基酸序列来决定源。氨基酸的序列则由基因序列决定。抗体的特异性，并不是针对抗原，而是针对某个特定的空间构象。这就是为什么有的抗体可以识别到2个毫不相干的抗原。比如抗梅毒抗体，同时可以识别心磷脂。因此，优选特异性抗原片段对减少特异IgM和IgG免疫测定的假阳性有重要意义。
SARS-CoV-突出蛋白S(spikeprotein)位于病毒粒子表面，在β属冠状病毒之间相对比较保守，与其它6种冠状冠状病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV)的S蛋白全长具有一定的同源性，检测时容易发生交叉反应性，因此筛选出同源性低，免疫性强的S蛋白片段进行组合，避免交叉反应性，是十分重要的。
发明内容
本发明提供一种新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽，以解决现有技术中新冠病毒检测特异性差的问题。
本发明的第二目的在于提供了一种抗体。
本发明的第三目的在于提供一种标记复合物。
本发明的第四目的在于提供一种试纸条。
本发明的第五目的在于提供一种试剂盒。
本发明的目的还在于提供了上述中的任意一项或几项的用途。
本发明的新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽采用如下技术方案：一种新冠病毒S蛋白优
势抗原表位肽，其特征在于，所述S蛋白优势抗原表位肽的氨基酸序列如SEQ IDNO.1
所示，所述S蛋白优势抗原表位肽可与新冠病毒抗体特异性结合。
本发明的抗体采用如下技术方案：一种抗体，所述抗体通过采用如上所述的S蛋白优势抗原表位肽作为免疫原免疫动物制备得到。例如，可通过将所述S蛋白优势抗原表位肽用于免疫动物，制备得到抗所述S蛋白优势抗原表位肽的抗体。本发明的抗体可为单克隆抗体或多克隆抗体，其可用于制备新冠病毒检测试剂(例如，用作制备免疫层析试纸条的原料)或作为阳性对照等。
本发明的标记复合物采用如下技术方案：一种标记复合物，所述标记复合物的组成包括如权利要求1所述的S蛋白优势抗原表位肽和标记物，所述标记物包括但不限于下述中的任意一种：胶体金、荧光免疫微球或HRP。
本发明的试纸条采用如下技术方案：一种试纸条，制备所述试纸条的原料包括下述中的任意一种或几种的组合：如上所述的S蛋白优势抗原表位肽、如上所述的抗体和如上所述的标记复合物。
作为进一步优选的技术方案，所述试纸条包括样品垫、结合垫、包被膜和吸水垫，所述结合垫上包被有如权利要求3所述的标记复合物；所述包被膜上设有检测线和质控线，所述检测线上包被有所述S蛋白优势抗原表位肽，所述质控线上包被有羊抗鼠IgM。
作为进一步优选的技术方案，所述标记复合物采用包括所述S蛋白优势抗原表位肽和胶体金在内的原料制备得到。
本发明的试剂盒采用如下技术方案：一种试剂盒，所述试剂盒包括下述中的任意一种或几种的组合：如上述任意一项所述的试纸条、如上所述的S蛋白优势抗原表位肽、如上所述的抗体和如上所述的标记复合物。
本发明的用途采用如下技术方案：如上所述的新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽/如上所述的抗体/如上所述的标记复合物/如上述任意一项所述的试纸条/如上所述的试剂盒中的任意一项或几项在制备新冠病毒检测试剂中的应用。
本发明的有益效果是：本发明的新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽可与新冠病毒抗体(对IgG、IgM均可检测)特异性结合，可有效避免新冠病毒检测假阳性的情况。
本发明的新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽与其他冠状病毒不会发生特异性结合，可有效提高冠状病毒检测的特异性，避免将其他冠状病毒检测为新冠病毒的情况出现。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1新冠病毒(SARS-CoV-2)S蛋白优势抗原表位肽的筛选及制备1.1利用生物信息学手段，结合以往经验，筛选出来的S蛋白优势抗原表位肽的氨基酸序列为：NNATNVVIKVCEFQFCNDPF LGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLE GKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGF SALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYN SASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFT GCVIAWNSNN LDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDIST EIYQAGSTPCNGVEGFNCYF PLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKS(SEQ ID NO.1)
1.2根据COVID-19中S蛋白优势抗原表位肽，经密码子优化后，由苏州金唯智生物科技有限公司合成，并连接在pET28a质粒中，测序正确后，该重组质粒命名为：pET28a-COVID-19。取﹣80℃下保存的大肠杆菌BL21(DE3)菌株，活化培养后，采用CaCl2法制备感受态细胞。将含目的基因的重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中，获得重组工程菌株。对工程菌株表达条件(诱导温度、诱导时间、IPTG浓度)进行优化，目的蛋白以包涵体形式存在，通过镍柱亲和层析，以及利用梯度透析对包涵体蛋白进行复性，利用SDS-PAGE与Western Blot对复性蛋白进行鉴定，得到了免疫原性良好的复性蛋白，下述简称为S1蛋白。
具体步骤如下：
1.2.1感受态细胞制备
(1)从BL21(DE3)平板中挑取单克隆，置于50mL LB液体培养基中，37℃摇床培养3小时，至OD＝0.5时方可进行下一步；
(2)在无菌条件下，将活化后的BL21(DE3)菌液转移至离心管中，冰浴10min；
(3)4000r/min离心5min，弃上清，将离心管倒置尽可能减少上清残留；
(4)加入10mL提前预冷的0.1mol/L的CaCl2溶液，重悬沉淀；
(5)4000r/min离心5min，弃上清，将离心管倒置尽可能减少上清残留；
(6)加入2mL提前预冷的0.1mol/L的CaCl2溶液，重悬沉淀；
(7)在无菌条件将感受态细胞分装至无菌EP管中，若制备后无需立刻使用时可加入20％甘油，置于-70℃保存。
1.2.2重组质粒转化
采用制备的感受态细胞将确认序列正确的重组质粒进行转化。
(1)采用无菌枪头吸取200μL BL21(DE3)感受态细胞，随后加入2μL确定序列正确的重组质粒，混匀后，冰浴30min；
(2)将离心管立刻转入提前预热至42℃的水浴锅中，静置90s；
(3)随后将离心管立即转入冰中，冷却5min；
(4)取1.3mL LB液体培养基加入至转化后菌液中，200rpm，37℃摇床过夜培养；
(5)无菌条件下，蘸取少量菌液在氨苄卡那霉素平板划线，37℃恒温培养12-16h。
1.2.3蛋白表达
转化后菌种在一定的培养条件下，通过加入诱导剂能够促使蛋白表达。蛋白表达主要包括：目的蛋白初步诱导表达；目的蛋白表达与否；诱导条件的探究；大量诱导表达。
(1)无菌条件下，取1支无菌试管，加入5mL含氨苄LB培养基，从平板中挑取3-5个单克隆至培养基中；
(2)37℃过夜培养，作为诱导表达时初始菌液；
(3)取少量初始菌液接种至250mL液体培养基中继续培养2-3h；
(4)按1:1比例进行扩瓶培养；
待菌液培养至OD＝2.0，加入IPTG使其终浓度为0.5mmol/L，37℃诱导6h。
1.3按照1.2的方法，分别制备SARS-CoV-2、HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV的全长S蛋白，下述分别简称为S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8(按照上述病毒列出的顺序依次分别对应)蛋白。
实施例2分别采用上述表达纯化得到的S1-S8蛋白免疫兔子
包括下述步骤：
(1)将抗原蛋白S1-S8分别溶于生理盐水中(可以溶解为0.8mg/mL的抗原溶液)；
(2)与等体积的弗氏完全佐剂超声法混匀(此时抗原浓度约0.4mg/mL)；
(3)经腹部皮下多点注射免疫大约有4周龄的兔子(注射约0.3mL)；
(4)2周后用等量抗原与不完全弗氏佐剂同上法混匀后免疫；
(5)再过1周后连续每周用以上的方法(抗原与不完全佐剂混合均匀后免疫)加强免疫1次(抗原减半)，共3次
(6)分离纯化分别得到兔多抗血清R1-R8(按照次序依次与S1-S8相对应)：按照(1)-(5)操作对兔子进行免疫，在最后一次免疫结束后再过一周进行采血:具体操作步骤：10％水合氯醛配置方法：称取10.00g的水合氯醛溶于100ml的纯化水中，得到10％水合氯醛。麻醉方式：4-5ml/kg的剂量，经家兔腹腔静脉给药，并边注射边观察家兔的反应情况。当观察到家兔呼吸减慢，肌肉松弛良好钳夹无自主活动，角膜反射迟钝，可视为适宜的麻醉效果。选取采血点：在第三肋间胸骨左缘3mm周围，用手指按压，心脏搏动最强点即为采血点。抽血：一只手的手指找准出血点，另一只手持注射器经肋间向心脏穿刺，针头刺入心脏即有血液进入注射器，取得所需血量后(每只大约30ml左右)，迅速将针头拔出，进针点再用75％乙醇消毒。离心收集血清：将采集的血清放在在37℃温箱2h,进而取出放在4℃冰箱2h，5000rpm/min,10min,用移液枪吸取上清，即为兔多抗血清(N1-N8蛋白免疫所对应的兔多抗血清即为R1-R8)。
实施例3试纸条的制备
3.1试纸条K1的制备
胶体金标记物的制备
(1)取1ml胶体金(万分之一)置于离心管中，加入K2CO3调pH至7.0；
(2)加入标记物S1蛋白，标记40min
(3)15000r/min离心15min弃上清加入保护液(5％酪蛋白)；
包被膜制备
(1)取PVC底板，揭去其中间贴纸，将NC膜粘贴于PVC底板上；
(2)将XYZ三维点膜喷金仪参数设置为划膜，清洗泵管后，标定划膜管道与包被膜的位置；
(3)将羊抗鼠1mg/ml(质控线工作液)填充于1号泵管中，S1蛋白1mg/ml(检测线工作液)填充于3号泵管中，调试出液管位置，确保质控线与检测线间隔5mm；
(4)以1.5μL/cm的速度进行划膜，将制备好的包被膜置于37℃干燥箱中4h。
试纸条组装
揭开包被有S1蛋白胶板下方的双面胶条(包被膜)；取一条标记有S1蛋白的金垫，使金垫(7mm)上缘沿包被膜的下缘重叠1-2mm。贴上取样品垫(21mm)，使其下缘至胶板下缘平齐处粘贴，重叠压住金垫宽度1-2mm的下沿，并用揭下来的双面胶条光滑面将其压平。将胶板最上方的双面胶条揭开，把吸水垫沿包被膜贴在胶板的上方，要求吸水垫与包被膜重叠1-2mm，并压平。调整切条机的切条宽度，将全板切成宽度为4.0mm的试纸条，即为K1(S2-S8包被、标记及试纸条组装方法与S1蛋白一样；试纸条的整体结构与本领域常用免疫层析试纸条相同，此处不再赘述)。
3.2按照上述3.1的方法，分别将S2-S8蛋白与胶体金结合后制成金垫、将S2-S8蛋白包被于包被膜的检测线处，分别制备SARS-CoV-2、HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV的总抗体检测试纸条K2-K8。
实施例4
用实施例3制备得到的试纸条K1-K8蛋白分别对实施例2制备得到的兔多抗血清R1-R8进行检测，检测结果如下表1所示
表1
R1 R2 R3 R4 R5 R6 R7 R8
K1 + + — — — — — —
K2 + + — — + — + —
K3 — — + + — — — +
K4 — + — + + — + —
K5 — + — — + — — +
K6 — — — + — + — —
K7 — + — — — + + —
K8 — — + — — — + +
由上表1可知，只有本发明的S1蛋白(新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽)不与其他冠状病毒S蛋白抗体反应，表现出良好的特异性。
检测步骤：将制备后的试纸条平放于桌面上，吸取80μL样品，在试纸条样品垫2/3处滴加样品并开始计时，10min后通过荧光分析仪进行检测记录检测的荧光值。
试纸条结果的判读
试纸条在滴加样品10min后，放置于紫外分析仪观察或荧光分析仪下检测，若试纸条中C线(质控线)无荧光，不论与T线(检测线)有无荧光，都说明该试纸条无效或者需重新加样；若试纸条中C线(质控线)有荧光，T线(检测线)无荧光或荧光信号较弱，判定所检测样本为阴性；试纸条T线(检测线)有明显荧光，判定检测样本为阳性。
实施例5临床标本检测
2018年由于该病毒未传播，所以2018年保存的临床发热病人血清样本应为阴性，实际上全长S蛋白检测出现6份假阳性。具体结果如下表2所示：
表2
2018年临床血清100份阳性率 临床确认总抗体阳性标本10份
K1 0/100 10/10
K2 6/100 10/10
由表2可知，本发明的S1蛋白(新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽)相对于新冠病毒全长S蛋白，与新冠病毒抗体的结合有更好的特异性，采用以S1蛋白为原料制备得到的试纸条用于检测新冠病毒的准确性更好，可有效避免假阳性的情况出现。
备注：上述100份阴性血清来源于河南省中医院2018年收集的临床上发热病人血清，10份阳性血清来源于郑州市疾病预防控制中心。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 河南省生物工程技术研究中心
郑州倍赛泰生物科技有限公司
<120> 一种新冠病毒S蛋白优势表位抗原及其用途
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 410
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys
1 5 10 15
Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp
20 25 30
Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe
35 40 45
Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly
50 55 60
Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr
65 70 75 80
Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu
85 90 95
Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly
100 105 110
Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr
115 120 125
Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala
130 135 140
Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn
145 150 155 160
Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu
165 170 175
Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile
180 185 190
Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg
195 200 205
Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala
210 215 220
Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn
225 230 235 240
Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr
245 250 255
Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe
260 265 270
Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg
275 280 285
Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys
290 295 300
Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn
305 310 315 320
Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe
325 330 335
Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile
340 345 350
Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys
355 360 365
Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly
370 375 380
Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala
385 390 395 400
Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser
405 410

Claims (8)

1.一种新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽，其特征在于，所述S蛋白优势抗原表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述S蛋白优势抗原表位肽能够与新冠病毒抗体特异性结合。
2.一种多克隆抗体，其特征在于，所述抗体通过采用如权利要求1所述的S蛋白优势抗原表位肽作为免疫原免疫动物制备得到。
3.一种标记复合物，其特征在于，所述标记复合物的组成包括如权利要求1所述的S蛋白优势抗原表位肽和标记物，所述标记物包括下述中的任意一种：胶体金、荧光免疫微球或HRP。
4.一种试纸条，其特征在于，制备所述试纸条的原料包括下述中的任意一种或几种的组合：如权利要求1所述的S蛋白优势抗原表位肽、如权利要求2所述的抗体和如权利要求3所述的标记复合物。
5.根据权利要求4所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括样品垫、结合垫、包被膜和吸水垫，所述结合垫上包被有如权利要求3所述的标记复合物；所述包被膜上设有检测线和质控线，所述检测线上包被有所述S蛋白优势抗原表位肽，所述质控线上包被有羊抗鼠IgM。
6.根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于，所述标记复合物采用包括所述S蛋白优势抗原表位肽和胶体金在内的原料制备得到。
7.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括下述中的任意一种或几种的组合：如权利要求4-6中任意一项所述的试纸条、如权利要求1所述的S蛋白优势抗原表位肽、如权利要求2所述的抗体和如权利要求3所述的标记复合物。
8.如权利要求1所述的新冠病毒S蛋白优势抗原表位肽/如权利要求2所述的抗体/如权利要求3所述的标记复合物/如权利要求4-6中任意一项所述的试纸条/如权利要求7所述的试剂盒中的任意一项或几项在制备新冠病毒检测试剂中的应用。
CN202010560551.9A 2020-06-18 2020-06-18 一种新冠病毒s蛋白优势抗原表位肽及其用途 Active CN111848751B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010560551.9A CN111848751B (zh) 2020-06-18 2020-06-18 一种新冠病毒s蛋白优势抗原表位肽及其用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010560551.9A CN111848751B (zh) 2020-06-18 2020-06-18 一种新冠病毒s蛋白优势抗原表位肽及其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111848751A CN111848751A (zh) 2020-10-30
CN111848751B true CN111848751B (zh) 2023-09-29

Family

ID=72987525

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010560551.9A Active CN111848751B (zh) 2020-06-18 2020-06-18 一种新冠病毒s蛋白优势抗原表位肽及其用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111848751B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11202103404PA (en) 2020-04-02 2021-04-29 Regeneron Pharma Anti-sars-cov-2-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments
CN112630426B (zh) * 2020-11-17 2023-12-22 上海优晶生物科技有限公司 一种用于检测新型冠状病毒covid-19的胶体金试纸条
CN114524864B (zh) * 2020-11-23 2023-03-31 广东菲鹏生物有限公司 SARS-CoV-2相关多肽
CN112229994B (zh) * 2020-12-10 2021-03-16 丹娜(天津)生物科技股份有限公司 一种基于磁微粒化学发光的新型冠状病毒抗体检测试剂盒

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2640416A1 (en) * 2008-10-03 2010-04-03 The Governors Of The University Of Alberta Bifunctional fusion molecules for the delivery of antigens to professional antigen-presenting cells
CN103724406A (zh) * 2013-11-20 2014-04-16 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 一种具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其应用
CN110981944A (zh) * 2019-11-11 2020-04-10 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 非洲猪瘟病毒t细胞抗原多肽及其抗原表位筛选的elispot检测方法
CN111187354A (zh) * 2020-02-20 2020-05-22 北京新创生物工程有限公司 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)IgM/IgG抗体检测试剂盒
CN111217920A (zh) * 2020-03-10 2020-06-02 河北精硕生物科技有限公司 新冠病毒n-s优势表位融合蛋白、制备方法、应用，及表达蛋白、微生物、应用，试剂盒

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2640416A1 (en) * 2008-10-03 2010-04-03 The Governors Of The University Of Alberta Bifunctional fusion molecules for the delivery of antigens to professional antigen-presenting cells
CN103724406A (zh) * 2013-11-20 2014-04-16 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 一种具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其应用
CN110981944A (zh) * 2019-11-11 2020-04-10 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 非洲猪瘟病毒t细胞抗原多肽及其抗原表位筛选的elispot检测方法
CN111187354A (zh) * 2020-02-20 2020-05-22 北京新创生物工程有限公司 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)IgM/IgG抗体检测试剂盒
CN111217920A (zh) * 2020-03-10 2020-06-02 河北精硕生物科技有限公司 新冠病毒n-s优势表位融合蛋白、制备方法、应用，及表达蛋白、微生物、应用，试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
伦永志 ; 刘奔 ; 董雯 ; 孙杰 ; 潘凌鸿 ; .两种严重急性呼吸综合征冠状病毒S蛋白结构特征及抗原表位比较.浙江大学学报(医学版).(03),全文. *
廖亚金 ; 易成功 ; 彭志鑫 ; 廖洋 ; 袁增强 ; .新型冠状病毒诊断技术展望.军事医学.(04),全文. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111848751A (zh) 2020-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111848751B (zh) 一种新冠病毒s蛋白优势抗原表位肽及其用途
CN111848752B (zh) 一种新冠病毒n蛋白优势抗原表位肽及其应用
CN112225797A (zh) 一种抗SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体及应用
CN109781980A (zh) 非洲猪瘟病毒快速检测卡及其应用
CN102746382B (zh) 心脏型脂肪酸结合蛋白b细胞表位肽及其抗体和应用
CN111518176B (zh) 一种用于新型冠状病毒抗体双抗原夹心检测的配对抗原、检测试纸及其制备方法
CN112094326B (zh) 一种新冠病毒抗原及其应用
CN102887943B (zh) 氨基末端脑钠肽的b细胞表位肽段及其应用
CN105675873B (zh) 一种检测试剂盒及其应用
CN108823172A (zh) 大熊猫促黄体素β亚基单克隆抗体的制备及应用
CN114624452A (zh) 一种抗大熊猫prl单克隆抗体、杂交瘤细胞株及prl酶联免疫检测方法
CN111574608B (zh) 牛细粒棘球蚴病的特异性检测抗原及其应用
US6153392A (en) Devices and methods comprising an HBcAg from hepatitis B virus
CN109970851A (zh) Ccv病毒m蛋白的单抗及其制备方法、免疫胶体金试纸条的制备方法
CN115925867A (zh) 一种肿瘤标志物单克隆抗体及其应用
CN112979817A (zh) 一种识别抗cldn18_2抗体的单克隆抗体及其制备方法和应用
CN105622752A (zh) 降钙素原单克隆抗体对及其制备方法与应用
CN112946294A (zh) 新型冠状病毒2019-nCoV抗体检测试纸条及其制备方法与应用
CN110540969A (zh) 人肺炎支原体表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获elisa试剂盒
CN110183530A (zh) 瘦素免疫原、杂交瘤细胞、单克隆抗体、多克隆抗体及应用
CN113355291B (zh) 抗丝状支原体丝状亚种p0071蛋白的单克隆抗体及其应用
CN113462675B (zh) 一种ApuA蛋白抗原多肽及应用
CN109705221B (zh) C肽免疫原及其单克隆抗体对及该抗体对在c肽磁微粒化学发光免疫试剂中的应用
CN115290895A (zh) 人pd-l1蛋白第162位赖氨酸的甲基化修饰在预测恶性肿瘤免疫治疗敏感性的应用
CN116819103B (zh) 一种大熊猫tsh酶联免疫检测方法及单克隆抗体

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant