CN112979817A - 一种识别抗cldn18_2抗体的单克隆抗体及其制备方法和应用 - Google Patents

一种识别抗cldn18_2抗体的单克隆抗体及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体及其制备方法和应用。所述单克隆抗体的轻链CDR1包括SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，重链CDR1包括SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。所述单克隆抗体能够特异性识别抗CLDN18.2抗体NA1‑S，且不阻断抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2的结合，能够应用于监测评估抗CLDN18.2抗体的代谢过程。

Description

一种识别抗CLDN18_2抗体的单克隆抗体及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体及其制备方法和应用。
背景技术
近年来，抗体药物以其特异性高、安全可控等优点被广泛应用于癌症、移植排异、感染性疾病、炎症性疾病及自身免疫疾病等多种疾病的临床治疗。抗体药物的药物代谢是临床前和临床试验研究中的重要检测指标。
Claudin 18是一种紧密连接蛋白，在人体中存在两种剪切异构体，Claudin 18.1和Claudin 18.2，其中Claudin 18.1主要表达于肺，Claudin 18.2（CLDN18.2）主要表达于胃粘膜已分化的上皮细胞中，具有高度组织特异性。另外，有研究表明，CLDN18.2在胃癌、胰腺癌等实体瘤中高表达，因此，CLDN18.2有可能成为胃癌、胰腺癌等实体瘤免疫治疗的有效靶标，开发针对CLDN18.2的抗体药物作为晚期实体瘤的治疗剂具有很大的潜力和广阔的前景。
CN111978402A公开了一种新型CLDN18.2结合分子NA1-S，所述NA1-S为针对CLDN18.2的单结构域抗体，由骆驼科动物中的重链抗体（VHH片段）和人IgG1的Fc片段所组成。单结构域抗体是由单个抗体可变结构域组成的抗体，因此，相比正常完整的两条蛋白重链和两条蛋白轻链组成的抗体，具有分子量小，较高的溶解度和组织渗透性以及良好的热稳定性。因此，NA1-S抗体具有广阔的发展前景，但由于其较新颖，目前没有在血液中检测该抗体的有效手段。
酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA），指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法，已被广泛应用于抗体的定量分析。
综上所述，研发一种能识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体，能够应用于抗CLDN18.2抗体的定量检测，为临床试验的生物分析提供有力的工具，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。
发明内容
针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体及其制备方法和应用，所述单克隆抗体能够和抗CLDN18.2抗体特异性结合，从而可用于ELISA法定量分析抗CLDN18.2抗体，监测评估抗CLDN18.2抗体的代谢过程。
为达上述目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体，所述单克隆抗体的轻链CDR1包括SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，重链CDR1包括SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。
本发明中，所述识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体能够特异性识别抗CLDN18.2抗体，与其他IgG1型抗体无交叉反应，且不阻断抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2的结合，无中和能力，能够应用于监测评估抗CLDN18.2抗体的代谢过程，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。
本发明中，为便于文件命名，将标题中“CLDN18.2”写为“CLDN18_2”，二者含义相同。
本发明中，所述抗CLDN18.2抗体为骆驼科动物的VHH与人IgG1的Fc片段相结合的嵌合抗体（NA1-S）。
优选地，所述单克隆抗体Fab段的轻链包括SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
优选地，所述单克隆抗体Fab段的重链包括SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
SEQ ID NO.1：
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVDYMHWYQQKSGTSPKRWVFDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYHCQQWSTNPPTFGGGTKVEIK。
SEQ ID NO.2：
DVKLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSLTSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYISYSGTTSYNPSLKSRISIIRDISKNQFFLQLTSVTTEDTATYYCARDYYTRSLYFDVWGAGTTVTVSS。
SEQ ID NO.3：
SSVDY。
SEQ ID NO.4：
DTS。
SEQ ID NO.5：
QQWSTNPPT。
SEQ ID NO.6：
GYSLTSDYA。
SEQ ID NO.7：
ISYSGTT。
SEQ ID NO.8：
ARDYYTRSLYFDV。
第二方面，本发明提供一种核酸分子，所述核酸分子包括第一方面所述的识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体的编码基因。
第三方面，本发明提供一种杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞分泌第一方面所述的识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体。
第四方面，本发明提供一种如第一方面所述的识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体的制备方法，所述方法包括：
制备杂交瘤细胞，并对所述杂交瘤细胞进行筛选，对筛选得到的杂交瘤细胞进行体内诱导或体外培养，纯化处理得到所述识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体。
优选地，所述制备杂交瘤细胞包括将经过抗CLDN18.2抗体免疫处理的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合。
优选地，在对杂交瘤细胞进行体内诱导或体外培养前，还包括进行克隆化的步骤。
优选地，所述抗CLDN18.2抗体为切掉Fc端的NA1-S。
优选地，所述免疫处理的途径为皮下注射。
优选地，所述小鼠为6~8周龄BALB/c雌鼠。
优选地，所述细胞融合为采用PEG介导融合法进行融合。
优选地，所述筛选包括通过间接酶联免疫吸附筛选高表达识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体的杂交瘤细胞。
优选地，所述克隆化包括采用有限稀释法将所述高表达识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆化，获得高表达识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
优选地，所述纯化处理包括使用亲和层析柱进行纯化。
优选地，所述亲和层析柱包括Protein A亲和层析柱。
作为优选的技术方案，所述识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体方法包括：
将经过抗CLDN18.2抗体免疫处理的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，得到杂交瘤细胞，并通过间接酶联免疫吸附筛选表达识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体的杂交瘤细胞，对筛选得到的杂交瘤细胞进行克隆化并进行体内诱导或体外培养，随后使用Protein A亲和层析柱进行纯化处理，得到所述识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体。
本发明中，在进行免疫处理前，将骆驼科动物的VHH与人IgG1的Fc片段相结合的嵌合抗体（NA1-S）用木瓜蛋白酶进行消化，然后回收VHH部分，去除Fc段，将VHH部分作为免疫抗原，大大提高了动物免疫血清的特异性，再经过细胞融合、克隆化及筛选，获得特异性识别抗CLDN18.2抗体（NA1-S）的单克隆抗体，同时不影响NA1-S抗体与CLDN18.2的结合。
第五方面，本发明提供如第一方面所述的识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体、第二方面所述的核酸分子或第三方面所述的杂交瘤细胞在制备评估抗CLDN18.2抗体代谢过程的药物或试剂盒中的应用。
第六方面，本发明提供一种抗CLDN18.2抗体的酶联免疫吸附检测试剂盒，所述试剂盒包括第一方面所述的识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体。
优选地，所述试剂盒还包括酶标板、包被缓冲液、底物、底物显色液或反应终止液中的任意一种或至少两种的组合。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
（1）本发明的识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体能够特异性识别抗CLDN18.2抗体，与其他IgG1型抗体无交叉反应，能够应用于监测评估抗CLDN18.2抗体的代谢过程；
（2）本发明的识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体不阻断抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2的结合，且无中和能力，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。
附图说明
图1为单克隆抗体3D2-2G8-3E5与NA1-S的结合特异性结果图；
图2为单克隆抗体3D2-2G8-3E5对NA1-S的中和活性结果图。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
实施例1
本实施例提供一种识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体，所述单克隆抗体Fab段的轻链为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，Fab段的重链为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，轻链CDR1为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，轻链CDR2为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，轻链CDR3为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，重链CDR1为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，重链CDR2为SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，重链CDR3为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。
所述单克隆抗体的制备方法包括以下步骤：
（1）动物免疫
采用6周龄BALB/c雌鼠，抗原为经木瓜蛋白酶消化，切掉Fc段的NA1-S（CN111978402A公开），采用常规免疫法，免疫途径为皮下注射，用75 μg NA1-S VHH段与完全弗氏佐剂等体积混合，涡旋混匀至呈油包水混合物，于小鼠背部皮下分4点注射，之后每隔两周采用相同方法进行第二、三、四次免疫，均采用不完全弗氏佐剂；
（2）细胞融合
（a）脾细胞悬液的制备
于细胞融合当天制备，取已经免疫的BALB/c小鼠，摘除眼球采血，并分离血清作为抗体检测时的阳性对照血清，颈椎脱臼处死小鼠，无菌条件下取其脾脏，制备脾细胞悬液；
（b）骨髓瘤细胞悬液的制备
提前两周复苏SP2/0细胞，保证使用时细胞处于对数生长期；
（c）饲养层细胞的制备
于细胞融合前两天制备饲养层细胞，将8周龄BALB/c小鼠颈椎脱臼处死后，浸泡于75%的酒精溶液，消毒5 min，置于平皿中，用无菌剪刀剪开腹部皮肤，暴露腹膜，并用75%的酒精冲洗腹壁；注射器先抽1 mL无菌空气和4 mL预冷的生理盐水，用镊子提起腹壁，从腹部一侧向腹腔注射，注意针尖勿伤及内脏；叩打腹壁2 min，形成细胞悬液，另取一支注射器从腹部右侧进针，在针尖刺入肌肉而未到达腹腔时，可侧向用力，牵拉侧腹，形成一个腹囊，使细胞悬液聚集在此，然后针尖刺入腹囊，抽出悬液，立即移入预冷的15 mL离心管，冰浴防止巨噬细胞贴壁，1200 rpm离心5 min，弃上清，细胞计数后用HAT培养基混悬，调整细胞至3×105个/mL，用吸管冲洗混匀后加液于96孔板，100 μL/孔，置于37℃、5% CO2培养箱培养；
（d）细胞融合
于最后一次免疫后第三天进行，采用PEG介导融合方法，取脾细胞与骨髓瘤细胞按照5:1的比例，在无血清的DMEM培养基中混匀，1500 rpm离心5 min，去掉上清，用力振动离心管，振散细胞，在1 min内加入1 mL 50％ PEG（pH 8.0，40℃）融合细胞，边加边摇动，加完后静置90秒，加入无血清的DMEM培养基终止融合，1500 rpm离心5 min，用HAT培养基重悬沉淀，分装到含有饲养层细胞的96孔细胞板中，置于37℃、5％ CO2的细胞培养箱中培养；
（3）杂交瘤细胞筛选
在细胞培养箱中培养5天后，用HAT培养基换液一次，第10天用HT培养基换液，等到融合细胞覆盖孔底30％时，采用常规间接ELISA方法筛选阳性孔，前一天用NA1-S抗体包板2μg/mL，50 μL/孔，4℃过夜，实验当天，使用1% BSA-PBS室温封闭1 h，然后每孔对应加入杂交瘤细胞培养上清80 μL，小鼠抗血清作为阳性对照，室温孵育1 h，二抗为酶标记羊抗鼠抗体，100 μL/孔，室温孵育30 min，显色后酶标仪读取OD（450 nm）值，筛选出抗体表达量高的杂交瘤细胞；
（4）杂交瘤细胞克隆化
从原始孔中得到的阳性杂交瘤细胞，可能来源于两个或者多个杂交瘤细胞，他们分泌的抗体是不同质的，为了得到完全同质的单克隆抗体，必须对杂交瘤细胞进行克隆化；
制备待克隆的杂交瘤细胞悬液，用含20％血清的HT培养基稀释至每毫升含8个细胞，同时在杂交瘤细胞悬液中加入饲养层细胞，每毫升加入5×104个细胞，按每孔接种0.1mL细胞悬液，即每孔含0.4个杂交瘤细胞，置于37℃、5％ CO2湿润培养8天，出现肉眼可见的克隆即可检测抗体，在倒置显微镜下观察，标出只有单个克隆生长的孔，取上清作抗体检测；
取抗体检测阳性孔的细胞扩大培养，并冻存，同时再进一步对阳性孔的细胞进行克隆化，用ELISA的方法对克隆化的单抗进行鉴别，经过3轮克隆化，筛选出阳性单克隆细胞株细胞（命名为3D2-2G8-3E5细胞）；
（5）制备抗体
将3D2-2G8-3E5细胞进行扩大培养，取6周龄左右的小鼠，腹腔注射0.5 mL石蜡油，一周后腹腔注射2×106个杂交瘤细胞，注射后7天可见小鼠腹部明显变大，收集腹水，离心取上清，获得单克隆抗体腹水，用Protein A吸附柱纯化抗体，最终获得所述识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体（命名为单克隆抗体3D2-2G8-3E5）。
试验例1
本试验例评估单克隆抗体3D2-2G8-3E5与NA1-S抗体结合的特异性，包括以下步骤：
（1）包被：用包被缓冲液分别稀释NA1-S及对照抗体Erbitux（Merck）至2 μg/mL，分别加入到不同的96孔板上，50 μL/孔，2~8℃过夜；
（2）洗板：用洗液洗板3次，300 μL/孔；
（3）封闭：200 μL/孔1％ BSA-PBS溶液，室温孵育1小时；
（4）洗板：用洗液洗板3次，300 μL/孔；
（5）稀释样品：用缓冲液稀释单克隆抗体3D2-2G8-3E5，然后连续5倍稀释，得到10个浓度样品，依次为：10000 ng/mL，2000 ng/mL，400 ng/mL，80 ng/mL，16 ng/mL，3.2 ng/mL，0.64 ng/mL，0.128 ng/mL，0.0256 ng/mL，0.00512 ng/mL；
（6）将稀释好的样品转移到96孔板，100 μL/孔；
（7）孵育：室温孵育1小时；
（8）洗板：用洗液洗板3次，300 μL/孔；
（9）酶结合物：羊抗鼠IgG Fc片段酶结合物IgG-HRP，用缓冲液稀释1:10000，100 μL/孔，37℃孵育30分钟；
（10）洗板：用洗液洗板3次，300 μL/孔；
（11）底物：加入TMB显色液，100 μL/孔，37℃孵育6分钟；
（12）终止：2M H2SO4，50 μL/孔；
（13）测定：酶标仪读数，波长450 nm；
（14）结果：采用4-参数方程，结果如图1所示。
由图1可知，采用两种Fc端为IgG1型的治疗性单克隆抗体（NA1-S和Erbitux）进行ELISA包板，检测单克隆抗体3D2-2G8-3E5识别NA1-S的特异性，单克隆抗体3D2-2G8-3E5仅能与NA1-S结合，不识别Erbitux，表明单克隆抗体3D2-2G8-3E5能特异性识别NA1-S的可变区，与IgG1型抗体的重链恒定区无交叉反应。
试验例2
本试验例评估单克隆抗体3D2-2G8-3E5的中和活性，包括以下步骤：
（1）包板：将重组人CLDN18.2抗原（GenScript，Z03504）用包被液稀释至1 μg/mL，加入到ELISA板中，每孔100 μL，于4℃条件下孵育过夜；
（2）洗板：第2天，将板取出，倒空液体，用300 μL洗液清洗三次并拍干残留液体；
（3）封闭：每个孔中加200 μL封闭液，室温孵育1小时；
（4）洗板：倒空液体，用300 μL洗液清洗三次并拍干残留液体；
（5）样品的稀释和加样：用缓冲液稀释抗体Biotin-labeled NA1-S至1 μg/mL，用缓冲液稀释单克隆抗体3D2-2G8-3E5至10 μg/mL，然后连续5倍稀释，共10个浓度：10000ng/mL，2000 ng/mL，400 ng/mL，80 ng/mL，16 ng/mL，3.2 ng/mL，0.64 ng/mL，0.128 ng/mL，0.0256 ng/mL，0.00512 ng/mL，随后将各稀释梯度的3D2-2G8-3E5与1 μg/mL的Biotin-labeled NA1-S等体积混合均匀，待上样；另外，用缓冲液稀释NA1-S抗体至10 μg/mL，然后连续5倍稀释，共10个浓度：10000 ng/mL，2000 ng/mL，400 ng/mL，80 ng/mL，16 ng/mL，3.2ng/mL，0.64 ng/mL，0.128 ng/mL，0.0256 ng/mL，0.00512 ng/mL，得到NA1-S的标准液；
（6）去掉封闭液，立即加入混合好的样品及NA1-S标准液，100 μL/孔，室温孵育1.5小时；
（7）洗板：倒空液体，用300 μL洗液清洗三次并拍干残留液体；
（8）二抗：混合样品用SA-HRP，用缓冲液稀释1:5000，NA1-S用羊抗人IgG Fc片段酶结合物IgG-HRP，用缓冲液稀释1:10000，100 μL/孔，37℃孵育1小时；
（9）洗板：倒空液体，用300 μL洗液清洗三次并拍干残留液体；
（10）底物：加入TMB显色液，每孔100 μL，室温避光放置10分钟；
（11）终止：加入2M H2SO4，每孔50 μL，终止反应；
（12）读板：酶标仪上读板OD（450 nm）并分析数据，结果如图2所示。
由图2可知，可检测的OD（450 nm）读值曲线随着3D2-2G8-3E5浓度的升高没有呈下降趋势，表明3D2-2G8-3E5不能阻断NA1-S抗体与CLDN18.2的结合，没有中和能力。
综上所述，本发明提供了一种识别抗CLDN18.2抗体的单克隆抗体，通过3轮克隆化实验筛选并验证了所述单克隆抗体能特异性结合抗CLDN18.2抗体，同时不影响抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2的结合，能够应用于监测评估抗CLDN18.2抗体的代谢过程，特异性显著，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
序列表
<110> 宝船生物医药科技（上海）有限公司
<120> 一种识别抗CLDN18_2抗体的单克隆抗体及其制备方法和应用
<130> 20210319
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 1
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Asp Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Val Phe
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Trp Ser Thr Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 2
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 2
Asp Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Leu Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Thr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Ile Arg Asp Ile Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Thr Arg Ser Leu Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 3
Ser Ser Val Asp Tyr
1 5
<210> 4
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 4
Asp Thr Ser
1
<210> 5
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 5
Gln Gln Trp Ser Thr Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 6
Gly Tyr Ser Leu Thr Ser Asp Tyr Ala
1 5
<210> 7
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 7
Ile Ser Tyr Ser Gly Thr Thr
1 5
<210> 8
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 8
Ala Arg Asp Tyr Tyr Thr Arg Ser Leu Tyr Phe Asp Val
1 5 10

Claims (14)

1.一种识别抗CLDN18.2抗体NA1-S的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的轻链CDR1包括SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，轻链CDR3包括SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列；
所述单克隆抗体的重链CDR1包括SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQID NO.7所示的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体Fab段的轻链包括SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体Fab段的重链包括SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括权利要求1-3任一项所述的识别抗CLDN18.2抗体NA1-S的单克隆抗体的编码基因。
5.一种杂交瘤细胞，其特征在于，所述杂交瘤细胞分泌权利要求1-3任一项所述的识别抗CLDN18.2抗体NA1-S的单克隆抗体。
6.一种如权利要求1-3任一项所述的识别抗CLDN18.2抗体NA1-S的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
制备杂交瘤细胞，并对所述杂交瘤细胞进行筛选，对筛选得到的杂交瘤细胞进行体内诱导或体外培养，纯化处理得到所述识别抗CLDN18.2抗体NA1-S的单克隆抗体。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述制备杂交瘤细胞包括将经过抗CLDN18.2抗体NA1-S免疫处理的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在对杂交瘤细胞进行体内诱导或体外培养前，还包括进行克隆化的步骤。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述纯化处理包括使用亲和层析柱进行纯化。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述亲和层析柱包括Protein A亲和层析柱。
11.根据权利要求6-10任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
将经过抗CLDN18.2抗体NA1-S免疫处理的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，得到杂交瘤细胞，筛选出表达识别抗CLDN18.2抗体NA1-S的单克隆抗体的杂交瘤细胞，对筛选得到的杂交瘤细胞进行克隆化并进行体内诱导或体外培养，随后使用Protein A亲和层析柱进行纯化处理，得到所述识别抗CLDN18.2抗体NA1-S的单克隆抗体。
12.如权利要求1-3任一项所述的识别抗CLDN18.2抗体NA1-S的单克隆抗体、权利要求4所述的核酸分子或权利要求5所述的杂交瘤细胞在制备评估抗CLDN18.2抗体NA1-S代谢过程的药物或试剂盒中的应用。
13.一种抗CLDN18.2抗体NA1-S的酶联免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的识别抗CLDN18.2抗体NA1-S的单克隆抗体。
14.根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶标板、包被缓冲液、底物、底物显色液或反应终止液中的任意一种或至少两种的组合。
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