CN111770752A - 瘤内注射制剂 - Google Patents

Abstract

公开了通过将可注射制剂直接施用到恶性肿块内，用于治疗哺乳动物中的恶性肿块的制剂和制剂用途，所述可注射制剂包含溶解或悬浮于生物相容性载体中的治疗有效量的化学治疗剂。在某些优选实施方案中，可注射制剂是紫杉烷（例如紫杉醇）、鬼臼毒素衍生物（例如依托泊苷）、或喜树碱衍生物（例如羟基喜树碱）。

Description

瘤内注射制剂

发明领域

本发明涉及用于直接注射到患有恶性疾病的哺乳动物（例如人）中的癌或肉瘤的恶性肿块内的抗癌药物的药物制剂。

发明背景

癌症是涉及异常细胞生长的一组疾病，具有侵入或扩散到身体的其它部分的潜力。超过100种类型的癌症影响人。最常见的癌症类型是：肺癌（209万例/年）；乳腺癌（209万例/年）；结肠直肠癌（180万例/年）；前列腺癌（128万例/年）；皮肤癌（非黑素瘤/年）（104万例）；和胃癌（103万例/年），其中男性中最常见的癌症是肺癌、前列腺癌、结肠直肠癌和胃癌，而女性中最常见的是乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌和宫颈癌。癌症的风险随着年龄的增长而显著增加，并且许多癌症在发达国家更常发生。随着更多人活到高龄以及随着发展中国家中发生生活方式的改变，癌症比率也逐渐增加。

癌症是全世界的死亡主因，导致2018年估计的960万例死亡。癌症的经济影响是巨大的并且逐渐增加的。从2010年起，癌症每年的总经济成本估计为1.16万亿美元/年。

癌症可以通过局部扩散，淋巴扩散到局部淋巴结或通过经由血液的血源性扩散到远处部位(称为转移)，从其原始部位扩散。当癌症通过血源性途径扩散时，它通常扩散遍布全身。然而，如在癌症转移的土壤和种子假设中假设的，癌症“种子”仅在某些选择的部位（“土壤”）中生长。

散布的肿瘤称为转移性肿瘤，而原始肿瘤称为原发性肿瘤。几乎所有癌症都可以转移，并且转移在癌症晚期很常见。转移中的典型步骤是局部侵入，侵入到血液或淋巴内，通过身体循环，外渗到新组织内，增殖和血管生成。不同类型的癌症趋于转移到特定器官，但总的来说，最常见的转移发生部位是肺、肝、脑和骨。

当早期检测并根据最佳实践进行治疗时，一些最常见的癌症类型，例如乳腺癌、宫颈癌、口腔癌和结肠直肠癌具有高治愈率。虽然主要目标是治愈癌症或显著延长寿命，但改善患者的生活质量也是重要目标。这可以通过支持或姑息护理以及社会心理支持来实现。

癌症经常用放射疗法、手术、化学疗法和/或靶向疗法（加热或寒冷方法）的某种组合来治疗，其中姑息护理在患有晚期疾病的患者中特别重要。大多数患有癌症的患者在诊断或手术时并未死于癌症，而是死于癌症的转移和复发。对于晚期癌症，如果没有新的制剂和新的治疗方法，存活的机会就很小，因为放射、手术和化学疗法以外的疗法经常是无效的。

放射疗法仅对于在癌症的早期和中期呈现临床局部疾病的患者有效，而对于具有转移的癌症的晚期无效。手术是传统方法，其中将全部或部分肿瘤从体内切除，但手术一般仅对于治疗较早期的癌症有效。超过50%的癌症患者在他们被诊断时不再是关于有效手术治疗的候选人。进一步地，外科手术可能在手术过程中通过血液循环增加肿瘤转移。

涉及破坏细胞复制或细胞代谢的化学疗法通过杀死、停止或减缓癌细胞的生长而起作用，并且可以用于缩小引起疼痛和其它问题的肿瘤。然而，由于癌细胞与正常细胞没有太大区别，化学疗法不仅杀死快速生长且分裂的迅速生长的癌细胞，还杀死或减慢快速生长且分裂的健康细胞的生长。实际上，化学疗法可以杀死比癌细胞更多的健康细胞，因为体内存在更大数目的健康细胞。因为它们快速生长且分裂而特别易受化学疗法影响的健康细胞的实例是口腔和肠衬里的细胞，以及促使头发生长的细胞。对这些健康细胞的损害可以引起副作用，例如口疮、恶心和脱发。

化学疗法还可以尤其引起下述副作用：贫血、食欲不振、出血和挫伤青（血小板减少症）、便秘、谵妄、水肿腹泻、疲劳、生育问题、脱发、感染和嗜中性粒细胞减少症、口和喉问题、恶心和呕吐、神经问题、皮肤和指甲变化、心脏毒性、肺毒性和骨髓毒性。尽管副作用经常在化学疗法已完成后好转或消失，但对于具有远处转移的晚期癌症，副作用经常导致患者太虚弱而无法忍受进一步的化学疗法，并且对患者体内的细胞(且特别是对心脏、骨髓和胃肠道)的严重副作用可能导致许多晚期患者拒绝进一步治疗。

抗癌药物的极端副作用由此类药物的弱靶特异性引起。药物循环通过患者的大多数正常器官以及预期的靶肿瘤。导致副作用的弱靶特异性也减少了化学疗法的功效，因为仅一部分药物是正确靶向的。化学疗法的功效通过抗癌药物在靶肿瘤内的弱保留进一步减少。

多年来，用于恶性疾病的化学疗法限于经口、静脉内、动脉内、腹膜内腔和胸膜腔注射。

存在被批准用于在美国销售的许多可注射的多西他赛制剂，例如，强度为20 mg/ml、20 mg/2ml、20 mg/0.5ml、40 mg/ml、80 mg/2ml、80 mg/4ml、80 mg/8ml、120 mg/6ml、130 mg/13 ml、140 mg/7ml、160 mg/8ml、160 mg/16ml、200 mg/10ml和200 mg/20ml。2015年10月，美国Eagle Pharmaceuticals宣布与Teikoku签订许可协议，用于多西他赛注射剂新制剂的销售。描述了无需事先稀释的Eagle多西他赛制剂，并且可以20 mg/ml单剂量小瓶或者80 mg/4 ml或160 mg/8 ml的多剂量小瓶获得。每毫升的无醇制剂含有20 mg多西他赛，连同27.5 mg大豆油、585.0 mg聚山梨醇酯80、10.0 mg柠檬酸和442.2 mg聚乙二醇300。对于Eagle制剂，FDA指出无需事先稀释，并且药剂可以直接加入输注液中，所述输注液可以由0.9%氯化钠溶液或5%右旋糖溶液的250 mL输液袋或瓶组成，其中最终浓度在0.3 mg/mL和0.74 mg/mL之间。据称该产品受FDA橙皮书中列出的两项美国专利 – 美国专利号8,940,786和美国专利号9,308,195保护。存在与多西他赛制剂有关的其它专利和专利申请，例如，美国专利公开号2008/0319048，其描述了多西他赛的冻干产物，其中磷脂和乙醇用作冻干溶剂，以及美国专利号5,714,512，其也是该专利家族的一部分，并且涉及基本上由溶解于表面活性剂中的多西他赛组成的制剂，所述表面活性剂选自基本上不含乙醇的聚山梨醇酯、聚氧乙烯化植物油和聚乙氧基化蓖麻油。美国专利号5,698,582也是该专利家族的一部分，并且涉及包含溶解于表面活性剂中的多西他赛的制剂，所述表面活性剂选自基本上不含乙醇的聚山梨醇酯或聚乙氧基化蓖麻油。

FDA根据21 U.S.C. §355(b)(2) (也称为“505(b)(2)申请)批准的多西他赛注射剂分为两个范畴。一种类型由两个瓶组成，其中一个瓶含有主要药物的浓缩物，而另一个瓶含有稀释剂。将两个瓶均匀地预混合，然后在使用前添加葡萄糖或盐水用于稀释。另一种类型仅由一个瓶组成，其中在使用前直接添加葡萄糖和盐水，以稀释主要药物的浓缩物。这种类型的产品也称为“即用型”。

下表1提供了已根据505(b)(2)批准的FDA批准的多西他赛注射制剂的概述：

表1

如由表1可以看出的，由每个公司开发的浓度和规格都是不同的，但所有产品在临床施用前都需要通过5%葡萄糖溶液或0.9%盐水稀释至指定浓度（0.3~0.74mg/mL）。

下表2显示了取决于不同制造商，在稀释前商购可得的多西他赛注射剂组合物之间的差异（mg/mL）：组合物含有大量聚山梨醇酯80、乙醇或PEG，以促进多西他赛在最终静脉内注射前在水中的分散。

表2

紫杉醇是另一种众所周知的化学治疗剂，其已被批准用于在美国使用。它可以6 mg/ml的浓度从许多制药公司作为可注射制剂获得。它也可以100 mg小瓶获得，作为静脉内（IV）输注的悬浮液使用。紫杉醇注射剂的商购可得制剂含有50%蓖麻油和50%乙醇，伴随或不伴随聚山梨醇酯80。所有目前可获得的紫杉醇注射制剂都仅用于静脉内注射，因为当包括在静脉内注射剂中时，蓖麻油已知可能引起不良反应（敏感性）。

预防化学疗法的副作用或保护免于化学疗法的副作用，对癌症患者将是很大的益处。因此，本发明的目标是提供能够将化学疗法直接施用于哺乳动物（例如人）中的恶性肿块的递送系统和方法，所述哺乳动物不遭受现有技术治疗的副作用和毒性。

发明目的和概述

本发明的一个目的是提供用于治疗动物中的恶性肿块的制剂和方法。

本发明的另一个目的是提供用于将化学治疗剂施用于动物（例如人）的方法，其降低了目前由此类试剂的施用经历的不良副作用。

本发明的另一个目的是提供可用于本发明的方法中的紫杉烷的稳定制剂。

根据上述目的和其它目的，本发明涉及溶解或悬浮于药学上可接受的载体中的化学治疗剂的可注射药物制剂，用于直接施用到哺乳动物（例如人）中的恶性肿块内。在某些优选实施方案中，可注射药物制剂是稳定的。

本发明还涉及治疗哺乳动物中的恶性肿块的方法，其包括将可注射制剂直接施用到恶性肿块内，所述可注射制剂包含治疗有效量的溶解或悬浮于生物相容性载体中的化学治疗剂。在某些实施方案中，恶性肿块可以位于哺乳动物中选自以下的位置中：脑、头部、眼、口、舌、颈部、甲状腺、胃肠系统、肝脏、胰腺、胆囊、肺、呼吸系统、泌尿生殖系统、乳房、淋巴系统、心血管系统、神经系统、皮肤、胸腔、胸膜、间皮瘤、肺癌、肌肉骨骼系统、腹部，具有原发性或继发性性质。恶性肿块可以是已从哺乳动物的另一个器官转移的恶性肿块。在某些优选实施方案中，生物相容性载体包含聚乙二醇（PEG）或植物油。在某些优选实施方案中，包含化学治疗剂的制剂是稳定的。在某些优选实施方案中，化学治疗剂包含油溶性抗癌药物。在某些优选实施方案中，化学治疗剂既是水不溶性的又是油不溶性的。

对于某些类型的癌症，存在有限的转移位置。在此类情况下，本发明是特别有用的，因为肿瘤和转移可以通过注射更容易地治疗并且从而根除。

在某些优选实施方案中，通过注射器或纤维镜的针施用可注射制剂。

在某些优选实施方案中，化学治疗剂包含紫杉烷。在某些优选实施方案中，紫杉烷是紫杉醇、或者其类似物或前药或其药学上可接受的盐。在某些优选实施方案中，化学治疗剂含有紫杉醇和大豆油。在某些优选实施方案中，化学治疗剂含有紫杉醇。在其它优选实施方案中，紫杉烷是多西他赛。在其它优选实施方案中，化学治疗剂包含鬼臼毒素衍生物，例如依托泊苷或替尼泊苷。在某些优选实施方案中，化学治疗剂包括喜树碱衍生物，例如羟基喜树碱（例如10-羟基喜树碱或7-乙基-10-羟基喜树碱，包括键合7-乙基-10-羟基喜树碱的酚羟基的衍生物）。

在某些实施方案中，恶性肿块为

（i）皮肤、眼、舌、口、甲状腺、乳房、子宫颈、子宫、肛门、前列腺、阴道、骨肉瘤、尿道癌等的浅表恶性疾病，并且化学治疗剂可以使用注射器直接注射到恶性肿块内，或

（ii）鼻咽的癌症，并且化学治疗剂可以通过鼻咽镜用注射器或针注射到恶性肿块内；或

（iii）肝脏、肾脏和胆囊的癌症，并且化学治疗剂可以使用注射器在超声的辅助下通过皮肤注射到恶性肿块内、或经由腹腔镜手术过程中在腹壁中形成的孔注射到恶性肿块内；或

（iv）卵巢、输卵管、胰腺、淋巴结转移或腹腔的直接腹膜侵入的癌症，并且化学治疗剂可以通过腹腔镜手术的孔用针注射到恶性肿块内；或

（v）食道、胃、十二指肠、小肠的癌或肉瘤，并且化学治疗剂可以通过肠镜、或者通过在腹腔镜手术过程中形成的孔、或在胸腔镜手术过程中形成的孔用针注射到恶性肿块内；或

（vi）大肠和直肠的癌或肉瘤，并且化学治疗剂可以通过结肠镜检查或通过腹腔镜手术的腹壁孔用针注射到恶性肿块内；或

（vii）咽喉、肺和气管的癌或肉瘤，并且化学治疗剂可以用纤维支气管镜的针注射到恶性肿块内；或

（viii）肺或气管的癌，化学治疗剂可以在超声、x射线、CT扫描、MR扫描的辅助下，或经由胸腔镜手术的孔用注射器注射；或

（ix）膀胱的癌或肉瘤，并且化学治疗剂可以通过膀胱镜、或通过在腹腔镜手术过程中在腹壁中形成的孔用针注射到恶性肿块内；

（x）子宫的癌或肉瘤，并且化学治疗剂可以用宫腔镜的注射器注射到恶性肿块内；或通过在腹腔镜手术过程中在腹壁中形成的孔注射到恶性肿块内；

（xi）咽和喉的癌或肉瘤，并且化学治疗剂可以通过喉镜用针注射到恶性肿块内；或

（xii）脑的癌，并且化学治疗剂可以在X射线、CT扫描或MR扫描的帮助下，在相应的颅骨中钻洞后，用针注射到恶性肿块内；或

（xii）睾丸、附睾、阴茎和/或阴道的癌，并且化学治疗剂可以无需稀释用针直接注射到恶性肿块内。

本发明进一步部分涉及用于本发明的方法（直接注射到恶性肿块内）中的可注射制剂。在此类实施方案中，可注射制剂包含以下或由以下组成：一种或多种化学治疗剂连同药学上可接受的赋形剂，所述赋形剂溶解或悬浮化学治疗剂，使得它能够直接注射到恶性肿块内。优选地，可注射制剂是生物相容的，并且仅含有公认为安全（GRAS）的试剂。

本发明进一步部分涉及紫杉烷的可注射制剂，其包含在药学上可接受的注射用载体中的治疗有效量的紫杉烷、其类似物或前药、或其药学上可接受的盐，所述载体包含以下或由以下组成：具有约PEG 200至约PEG 400的分子量的PEG；和/或涉及紫杉烷的稳定可注射制剂，其包含在药学上可接受的注射用载体中的治疗有效量的紫杉烷、其类似物或前药、或其药学上可接受的盐，所述载体由以下组成：具有约PEG 200至约PEG 400的分子量的PEG、中链甘油三酯或药学上可接受的植物油。在某些优选实施方案中，植物油是大豆油。在某些优选实施方案中，中链甘油三酯选自己酸、辛酸、癸酸、月桂酸及其混合物。在某些优选实施方案中，紫杉烷是紫杉醇或多西他赛。对于紫杉醇，药学上可接受的注射用载体优选为中链甘油三酯。

本发明还部分涉及鬼臼毒素衍生物的可注射制剂，其包含在药学上可接受的注射用载体中的治疗有效量的鬼臼毒素衍生物，所述载体包含以下或由以下组成：具有约PEG200至约PEG 400的分子量的PEG；和/或涉及鬼臼毒素衍生物的稳定可注射制剂，其包含在药学上可接受的注射用载体中的治疗有效量的鬼臼毒素衍生物、其类似物或前药、或其药学上可接受的盐，所述载体由以下组成：具有约PEG 200至约PEG 400的分子量的PEG、中链甘油三酯或药学上可接受的植物油。在某些优选实施方案中，植物油是大豆油。在某些优选实施方案中，中链甘油三酯是选自己酸、辛酸、癸酸、月桂酸及其混合物的中链甘油三酯。在某些优选实施方案中，鬼臼毒素衍生物是替尼泊苷、依托泊苷或其混合物。在某些优选实施方案中，用于鬼臼毒素衍生物的药学上可接受的载体是PEG，例如具有约PEG 200至约PEG400的分子量的PEG。

在某些实施方案中，本发明涉及喜树碱或其衍生物的可注射制剂，其包含在药学上可接受的注射用载体中的治疗有效量的羟基喜树碱（喜树碱衍生物），所述载体包含以下或由以下组成：PEG，例如具有约PEG 200至约PEG 400的分子量的PEG；或喜树碱衍生物的稳定可注射制剂，其包含在药学上可接受的注射用载体中的治疗有效量的羟基喜树碱、其类似物或前药、或其药学上可接受的盐，所述载体由以下组成：PEG，例如具有约PEG 200至约PEG 400的分子量的PEG、中链甘油三酯或药学上可接受的植物油，且最优选PEG。

本发明进一步涉及试剂盒，其包括含有结晶、粉末或冻干的化学治疗剂的第一小瓶，以及含有将化学治疗剂递送至肿瘤所需的药学上可接受的赋形剂的第二小瓶，所述药学上可接受的赋形剂包括具有约PEG 200至约PEG 400的分子量的PEG、中链甘油三酯、乙醇或药学上可接受的植物油。

在某些实施方案中，化学治疗剂不溶于水。在某些实施方案中，化学治疗剂是紫杉烷（例如紫杉醇、多西他赛）、羟基喜树碱、替尼泊苷、依托泊苷、D Dantinomycin、卡莫司汀等，并且可注射组合物优选含有作为非水溶剂的一种或多种有机赋形剂，其包括但不限于大豆油、蓖麻油、芝麻油、花生油、中链甘油三酯、椰子油、鱼油、棉籽油、玉米油、橄榄油、桃仁油或任何其它药学上可接受的注射用油，其可以充分溶解或悬浮化学治疗剂，以将其注射到所需部位例如恶性肿块内。在某些实施方案中，可注射组合物不含其它溶剂。在其它实施方案中，可注射制剂含有醇。在其它实施方案中，可注射制剂不含任何醇。在其它实施方案中，可注射组合物进一步含有一种或多种药学上可接受的赋形剂，例如但不限于油酸乙酯、苯甲酸苄酯、聚山梨醇酯、PEG、胆固醇、磷脂、丙二醇、甘油、乙醇、烟酰胺、二甲基亚砜、肉豆蔻异丙醇、二甲基乙酰胺、表面活性剂（例如非离子型表面活性剂）等。在某些优选实施方案中，可注射组合物用于直接注射到局部癌组织内，并不预期用于静脉注射。在某些实施方案中，可注射组合物包括两种或更多种化学治疗剂。

中链甘油三酯是其脂肪酸具有6-12个碳原子的脂肪族尾的甘油三酯。可在本发明中用作溶剂的中链甘油三酯的实例包括己酸、辛酸、癸酸、月桂酸及其混合物。

在本发明的某些实施方案中，提供了紫杉烷的可注射制剂，其包含在药学上可接受的注射用载体中的治疗有效量的紫杉烷、其类似物或其药学上可接受的盐，所述载体包含以下或由以下组成：约70%至约100%的药学上可接受的水醇溶剂（例如乙醇）。在某些优选实施方案中，紫杉烷是紫杉醇。在其它优选实施方案中，紫杉烷是多西他赛。

为了使本文所述的发明被更充分地理解，出于本公开内容的目的提供了下述定义：

术语“患者”广泛地指待用本文公开的组合物和方法治疗的任何动物。本文制剂和方法可以对任何动物例如任何脊椎动物提供治疗，所述脊椎动物包括但不限于人（优选实施方案）、灵长类动物、犬、猫、马、牛等。在优选实施方案中，患者是人。患者（例如人）可以患有晚期疾病或较小程度的疾病，例如低肿瘤负荷。在一些实施方案中，患者处于增生性疾病（例如癌症）的早期。在其它实施方案中，患者处于增生性疾病的晚期（例如晚期癌症）。

如本文使用的，术语“单位剂量”指适合作为用于哺乳动物受试者的单元剂量的物理上离散的单位。

术语“包含”是包括性术语，其被解释为意指含有、包含、覆盖或包括该术语之后列出的要素，但不排除其它未叙述的要素。

“治疗有效量”意指这样的量，当施用于动物用于治疗疾病时，所述量足以产生所需疗效（例如，以影响对于该疾病的治疗）。

如本文使用的，术语疾病的“治疗（treating）”或“治疗（treatment）”包括预防疾病在动物中发生（预防性治疗），所述动物可能易患疾病，但尚未经历或未显示出疾病的症状；抑制疾病（减慢或阻止其发展）；提供来自疾病的症状或副作用的缓解（包括姑息治疗）；以及缓解疾病（引起疾病消退）。

术语“组合物”和“制剂”在本文可互换使用。

如应用于本发明的制剂的术语“稳定的”意指出于本发明的目的，当贮存于5℃至20℃，且优选5℃至40℃的温度下至少14天的时期时，该制剂具有可接受水平的杂质。为了本发明的目的，杂质的可接受水平被视为等于或小于制剂中所含药物总量的2%的杂质总水平。在其中药物是紫杉烷例如紫杉醇的其它实施方案中，稳定性也可以定义为含有对于此类紫杉烷通常发现的各个杂质的量。例如，对于紫杉醇，稳定性可以定义为含有以下的制剂：等于或小于0.8%的浆果赤霉素、等于或小于0.4%的乙酯侧链、等于或小于0.8%的10-脱乙酰基紫杉醇、等于或小于0.6%的7-表-10-脱乙酰基紫杉醇、等于或小于0.6%的7-表-10紫杉醇、和/或等于或小于0.1%的其它最大杂质。因此，在某些实施方案中，稳定性基于总杂质；并且在其它实施方案中，基于上一句话中提到的一种或多种杂质。

附图简述

图1提供了在实施例16（紫杉醇油）中的化学疗法的第一次注射后，不同小鼠组随着时间过去的存活。

发明详述

本发明将参考各种具体和优选实施方案和技术进行描述，然而，应当理解，可以做出许多变化和修改，同时保留本发明的精神和范围。

在目前实践中，大多数潜在可治愈的实体瘤的标准治疗是经常随后为化学疗法的手术切除。对于主要的癌症杀手，例如肺癌、乳腺癌和结肠直肠癌，在手术后仍具有残留癌细胞的患者中，在手术切除肿瘤后施用化学疗法可能根除微转移性疾病（使用常规成像技术无法检测到的疾病）。然而，这种治疗经常是不成功的，并且化学疗法经常受到由此类试剂引起的副作用的限制（如上文先前解释的）。

化学治疗剂

在本发明的优选实施方案中，将治疗有效量的一种或多种药学上可接受的化学治疗剂掺入本发明的可注射制剂内。

任何化学治疗（例如抗癌）剂（药物）可以用于直接注射到动物（例如人）的恶性肿块内。优选地，化学治疗剂溶于油，因为癌细胞的膜具有双脂质层结构。因此，如果药物是脂溶性的，则它可以容易地进入癌细胞。注射到癌症的静脉或动脉内的化学治疗剂可能被携带离开肿瘤，而不进入癌细胞，并且因此功效（例如，细胞杀死效应）很弱。相比之下，当将脂质溶解的化学治疗剂直接注射到肿瘤内时，它可以在更长的持续时间内发挥其效应，并且可以更容易地进入癌细胞。

可用于本发明的制剂中的化学治疗剂的实例包括紫杉烷、或其类似物或前药及其盐。紫杉烷是二萜化学治疗剂，其部分通过破坏微管功能而起作用，导致细胞分裂的抑制。

优选地，紫杉烷选自紫杉醇、多西他赛、卡巴他赛、紫杉二烯、浆果赤霉素III、紫杉素A、短叶老鹳草素和紫杉斯品D、或其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，紫杉烷选自紫杉醇、多西他赛和卡巴他赛、或其药学上可接受的盐。在某些优选实施方案中，紫杉烷是紫杉醇、其类似物或前药、和/或其药学上可接受的盐。

如本文使用的，紫杉醇的“类似物”指通过替换紫杉醇的一个或多个原子或官能团而生成的化合物。最众所周知的紫杉醇类似物是半合成类似物多西他赛（Taxotere®），其已被批准用于治疗广泛范围的癌症，包括肺癌、乳腺癌和前列腺癌。其它紫杉醇衍生物包括但不限于卡巴他赛（Jevtana®）(被批准用于治疗前列腺癌)、DJ-927（Tesetaxel®）、XRP9881（Larotaxel®）、BMS-275183、Ortataxel®和RPR 109881A，以及BMS-184476。如本文使用的，紫杉醇的“前药”指它在施用于受试者后转换为紫杉醇的化合物。紫杉醇前药的实例包括但不限于DHA-紫杉醇（Taxoprexin®）和紫杉醇polyglumex（Opaxio®），这两者均处于临床开发中。

如本文使用的，紫杉烷的“药学上可接受的盐”在合理的医学判断范围内，适用于与患者的组织接触，而无过度毒性、刺激性、变应性反应等等，与合理的利益/风险比相称，并且对于其预期用途有效，以及在可能时紫杉烷的两性离子形式。术语“盐”指紫杉烷的相对无毒的无机和有机酸加成盐。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等等。这些可以包括基于碱金属和碱土金属的阳离子，例如钠、锂、钾、钙、镁等等，及无毒铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等等。

紫杉醇已显示在药物难治性卵巢癌中具有显著的抗肿瘤和抗癌效应，并且已在广泛多样的肿瘤模型中显示极佳的抗肿瘤活性，以及当以非常低的剂量使用时抑制血管生成（Grant等人，Int. J. Cancer，2003）。然而，紫杉醇的弱水溶性呈现了关于人施用的问题，因为当经口递送无效时，固有地不溶于或弱溶解于水性介质中的药物的递送可能是严重受损的。因此，目前使用的紫杉醇制剂（例如Taxol®）需要Cremophor®和/或乙醇来溶解药物。

制剂施用

用于本发明的可注射制剂和治疗中的化学治疗剂优选以本领域技术人员已知的治疗有效量给药。在某些实施方案中，治疗有效量是产生最大疗效的量。在其它实施方案中，治疗有效量产生的疗效小于最大疗效。例如，治疗有效量可以是这样的量，其产生疗效，同时避免与产生最大疗效的剂量相关的一种或多种副作用。临床和药理学领域的技术人员能够通过常规实验，即通过监测受试者对试剂施用的反应，并且相应地调整剂量，来确定治疗有效量。关于另外的指导，参见例如，Remington: The Science and Practice of Pharmacy，第22版，Pharmaceutical Press，London，2012，以及Goodman & Gilman's ThePharmacological Basis of Therapeutics，第12版，McGraw-Hill，New York，N.Y.，2011，所述参考文献的全部公开内容引入本文作为参考。

紫杉醇（Abraxane®）被批准用于治疗转移性乳腺癌（推荐剂量为每3周经过30分钟静脉内260 mg/m²。对于非小细胞肺癌，推荐剂量为在每个21天周期的第1、8和15天时，经过30分钟100 mg/m²。对于胰腺的腺癌，abraxane的推荐剂量为在每个28天周期的第1、8和15天时，经过30-40分钟静脉内125 mg/m²）。它作为无菌冻干粉末供应，用于在使用前重构（使用0.9%氯化钠注射液用于重构）。该制剂包含用于可注射悬浮液的白蛋白结合的纳米颗粒，具有约130 nm的平均粒度。经由直接注射的紫杉醇施用的剂量根据本发明，并且因此，与常用的静脉内剂量相比，可以是降低的。另一方面也是可能的是，紫杉醇剂量可以是增加的，因为体内其它组织不以与静脉内施用相同的程度暴露于药物，导致减少的副作用。

根据本发明的紫杉醇的合适剂量的实例在下表3中阐述。使用的注射液体的量根据肿瘤的大小或体积。

表3

如上文指出的，本发明的制剂的潜在应用包括直接施用（例如注射）到体内的恶性癌症或肉瘤肿块内。在某些实施方案中，潜在的治疗部位包括但不限于下述癌症或肿瘤：肝细胞癌、肝转移性癌症、晚期肝细胞癌、胰腺癌、腺癌、肥大细胞瘤或肥大细胞肿瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、黑素瘤、视网膜母细胞瘤、乳腺肿瘤、结肠直肠癌、组织细胞肉瘤、脑肿瘤、星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、神经瘤、神经母细胞瘤、结肠癌、子宫颈癌、肉瘤、前列腺肿瘤、膀胱肿瘤、网状内皮组织肿瘤、肾母细胞瘤、卵巢癌、骨癌、骨肉瘤、肾癌、或头颈癌、口腔癌、喉癌、或口咽癌、乳腺癌、泌尿生殖道癌、肺癌、胃肠癌、表皮样癌、黑素瘤。在本发明的更广泛含义上，本发明的制剂和治疗可以用于治疗增生性疾病，其选自过度增殖性病况，例如增生、纤维化（尤其是肺的，以及其它类型的纤维化，例如肾纤维化）、血管生成、牛皮癣、动脉粥样硬化和血管中的平滑肌增生，例如血管成形术后的狭窄或再狭窄。在某些实施方案中，制剂和治疗用于除胰腺癌外的胃肠癌。在一些实施方案中，增生性疾病是癌症。在一些实施方案中，增生性疾病是非癌性疾病。在一些实施方案中，增生性疾病是良性或恶性肿瘤，并且涵盖在原始器官或组织和/或肿瘤的任何其它位置中的转移。在一些实施方案中，提供了治疗原发性肿瘤的方法。在一些实施方案中，提供了治疗已从原发性肿瘤转移的癌症的方法。在一些实施方案中，提供了治疗处于晚期的癌症的方法。在一些实施方案中，提供了治疗乳腺癌（HER2阳性或HER2阴性）的方法，所述乳腺癌包括例如晚期乳腺癌、IV期乳腺癌、局部晚期乳腺癌和转移性乳腺癌。在一些实施方案中，提供了治疗肺癌的方法，所述肺癌包括例如非小细胞肺癌（NSCLC，例如晚期NSCLC）、小细胞肺癌（SCLC，例如晚期SCLC）、以及肺中的晚期实体瘤恶性肿瘤。在一些实施方案中，提供了治疗卵巢癌、头颈癌、胃恶性肿瘤、黑素瘤（包括转移性黑素瘤）、结肠直肠癌、胰腺癌和实体瘤（例如晚期实体瘤）中的任一种的方法。

在本发明的方法中，化学治疗剂优选经由（直接）注射直接施用到体内的癌症或肉瘤的恶性肿块内。对于皮肤、眼、舌、口、甲状腺、乳房、子宫颈、子宫、肛门、前列腺、阴道、骨肉瘤、尿道癌等的浅表恶性疾病，化学治疗剂可以用注射器直接注射到恶性肿块内，而无需稀释。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂用注射器直接注射到恶性肿块内。这个实施方案可特别用于例如肝脏、肾脏、胆囊、卵巢、输卵管、胰腺、淋巴结转移或腹腔的直接腹膜侵入的癌症。

在另外的实施方案中，本发明可特别用于例如皮肤、眼、舌、口、甲状腺、乳房、子宫颈、子宫、肛门、前列腺、阴道、骨肉瘤、尿道癌等的浅表恶性疾病。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂通过鼻咽镜用注射器或针注射到恶性肿块内。这个实施方案可特别用于例如鼻咽的癌症。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂使用注射器在超声的辅助下通过皮肤注射到恶性肿块内、或经由腹腔镜注射到恶性肿块内。这个实施方案可特别用于例如肝脏、肾脏和胆囊的癌症。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂用针经腹腔镜注射到恶性肿块内。这个实施方案可特别用于例如卵巢、输卵管、胰腺、淋巴结转移或腹腔的直接腹膜侵入的癌症。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂通过肠镜、或经由具有腹腔镜或胸腔镜手术的组合疗法注射到恶性肿块内。这个实施方案可特别用于例如食道、胃、十二指肠和/或小肠的癌或肉瘤。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂通过结肠镜检查、或具有腹腔镜手术的组合疗法用针注射到恶性肿块内。这个实施方案可特别用于治疗例如大肠和/或直肠的癌或肉瘤。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂用纤维支气管镜的针注射到恶性肿块内。这个实施方案可特别用于治疗例如咽喉、肺和/或气管的癌或肉瘤。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂在超声、x射线、CT扫描、MR扫描的帮助下，或经由胸腔镜手术的胸壁孔用注射器注射。这个实施方案可特别用于治疗例如肺和胸腔癌、胸腔淋巴瘤或胸腔中的淋巴结转移。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂通过膀胱镜、或通过在腹腔镜手术过程中在腹壁中形成的孔用针注射到恶性肿块内。这个实施方案可特别用于治疗例如膀胱的癌或肉瘤。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂经由宫腔镜用注射器或针注射到恶性肿块内。这个实施方案可特别用于治疗例如子宫的癌或肉瘤、子宫颈癌、子宫内膜癌。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂通过喉镜用针注射到恶性肿块内。这个实施方案可特别用于治疗例如咽和/或喉的癌或肉瘤。

在本发明的某些实施方案中，本发明的可注射制剂在X射线、CT扫描或MR扫描的帮助下，在相应的颅骨中钻洞后，用针注射到恶性肿块内。这个实施方案可特别用于治疗例如脑的癌症。

本领域技术人员将了解，用于不同器官的癌症或肉瘤的剂量取决于待治疗肿块的大小或体积。

在某些优选实施方案中，制剂包含以下或由以下组成：在5 ml药学上可接受的载体（例如PEG300）中的治疗有效剂量（例如，约60 mg）的紫杉醇。在某些优选实施方案中，紫杉醇的浓度为在5 ml药学上可接受的载体（例如PEG 300）中的约30mg紫杉醇。在此类制剂中，作为可注射制剂的紫杉醇的浓度为6 mg/ml。一般而言，剂量是约1至10 ml溶液或悬浮液，其取决于肿块的大小或体积。使用的药物的体积优选地应该小于肿块的8%；否则液体将流出注射部位。

在某些实施方案中，本发明的可注射制剂施用多于一次。例如，在某些实施方案中，可注射制剂每周、每月或每两个月施用一次。注射次数和注射之间的时间在本领域技术人员的知识内，并且部分取决于肿瘤的大小。

在某些实施方案中，使用纤维镜施用可注射制剂，特别是在难以经由注射到达的地方。纤维镜的使用被视为微创手术。考虑了通过使用纤维镜、腹腔镜、胸腔镜或其它医疗器械，可以将化学治疗剂施用于脑内、胸腔内或腹膜内腔内的肿瘤。例如，在其中原发性肿瘤已转移的某些实施方案中，本发明的可注射制剂施用于原发性恶性肿块和任何继发性肿瘤。借助于本发明，治疗多个部位容易得多，因为在过去，由于对癌症患者的创伤，外科医生很难同时在患者的多于两个器官中，例如同时在腹部、肺和脑中进行手术。

本发明的方法既允许对患者的更少创伤，又允许杀死癌细胞，而不是正常细胞（这在化学治疗剂全身施用时发生）。化学治疗剂直接注射入恶性肿瘤内也极大地降低或消除了许多常见的副作用。例如，用化学治疗剂直接注射到恶性肿瘤内替换手术预防舌或口腔癌患者的面部毁容、乳腺癌患者的乳房丧失、肉瘤患者的腿截肢、子宫颈癌或早期子宫癌患者的子宫丧失。化学治疗剂直接注射到恶性肿瘤内还降低或消除了副作用，例如骨髓抑制、神经毒性、肺损伤、肺纤维化、急性心脏毒性、左心室功能不全、心力衰竭、心内传导障碍和心律不齐、心包炎、肌肉和/或关节疼痛、胃肠反应和/或脱发。

如在癌症转移的土壤和种子假设中假设的，癌症“种子”仅在某些选择的部位（“土壤”）中生长。如果转移灶和恶性肿瘤的原发性肿块很小，则它不会威胁患者的生命。如果肿瘤很大，则它可以在CT扫描或MR扫描或纤维镜的帮助下容易地检测到。在纤维镜和/或腹腔镜的辅助下，本发明的制剂（含有化学治疗或抗癌药物）可以直接注射到大肿瘤内，而不影响正常（周围）组织，使得能够杀死癌细胞，使得能够阻止或延迟恶性肿块的生长（例如，使肿块变小或使肿瘤缩小），并且使晚期癌症患者能够与肿瘤一起生活（以与寄生虫一起生活的人患者类似的方式）。当将化学治疗药物或抗癌药物注射到肿瘤内时，该药物将沿着血管或淋巴管流动至转移灶，并且它将杀死转移细胞。化学治疗剂注射到肿瘤内导致对患者的很少创伤，并且可以例如每月重复多次。直接注射也可以同时施用于原发性肿瘤和癌症已转移到的继发性肿瘤。

组合疗法

在本发明的某些实施方案中，化学治疗剂（例如紫杉醇）与另外的（一种或多种）试剂组合施用，以治疗癌症或肉瘤。例如，在某些实施方案中，化学治疗剂是紫杉烷（例如紫杉醇），并且连同一种或多种抗体一起施用，所述抗体例如阿仑珠单抗、布伦妥昔单抗维多汀、西妥昔单抗、吉妥珠单抗、奥佐米星、abritumomab tiuxetan、尼妥珠单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、或曲妥珠单抗、或如美国专利公开号2018/0222983中所述的拮抗性FGFR3抗体，所述专利在此整体引入作为参考。在其它实施方案中，治疗可以进一步包括用其它抗体的治疗，所述抗体例如针对IL-6、HGF、PGE-2、PGF、TGF-β、PDGF-BB、MCP-1和MMP-9或其受体中的一种或多种的抗体。在另一个实施方案中，该化合物或组合物是或包括neu-1唾液酸酶抑制剂，例如磷酸奥司他韦，其可以预防由这些配体-受体相互作用触发的受体二聚化，并因此预防下游活化。在其它实施方案中，该化合物或组合物是或包括由这些不同的配体-受体相互作用触发的转录激活物的小分子抑制剂，尤其包括转录激活物例如NF-kb和Stat-3的抑制剂。可以用于破坏这些不同的配体受体相互作用的效应的其它治疗剂是miRNA治疗剂，其破坏通过上述不同的配体-受体相互作用上调的靶基因的转录后活性。

可以与本发明的制剂和方法组合使用的其它治疗剂包括但不限于水溶性或不水溶性抗癌药物、多柔比星或卡铂、细胞凋亡的诱导剂或有丝分裂抑制剂或抗微管抑制剂、烷化剂、核苷或核苷酸类似物、拓扑异构酶抑制剂。任选地，细胞凋亡的诱导剂或有丝分裂抑制剂或抗微管抑制剂包含以下或由以下组成：雷替曲塞或等价物，或Tomudex®；多柔比星或等价物，或Adriamycin®；氟尿嘧啶或5-氟尿嘧啶或等价物；埃坡霉素或者埃坡霉素A、B、C、D、E或F或等价物；伊沙匹隆（也称为氮杂埃坡霉素B）或等价物，或BMS-247550^TM；长春新碱（也称为醛基长春碱）或等价物，或Oncovin®；长春碱(vinblastin)、长春碱(vinblastine)、长春地辛、长春氟宁、长春瑞滨或Navelbine®或等价物；或者其任何组合，并且任选地，烷化剂包含以下或由以下组成：替莫唑胺（TMZ）（Temodar®、Temodal®或Temcad®），顺氯氨铂或等价物；顺铂或等价物；顺二氨二氯铂（II）（CDDP）或等价物；卡铂或等价物；奥沙利铂（oxaloplatin）或等价物；环磷酰胺（cytophosphane）或等价物，或者Endoxan®、Cytoxan®、Neosar®或Revimmune®；双氯乙基甲胺或等价物；氮芥（chlormethine）或等价物；氮芥（mustine）或等价物；氮芥（nitrogen mustard）或类似物；苯丁酸氮芥或等价物，或Leukeran®；或其组合，并且任选地，拓扑异构酶抑制剂包含以下或由以下组成：依托泊苷或等价物，或者Eposin®、Etopophos®、Vepesid®或VP-16®；安吖啶或等价物；托泊替康或等价物，或Hycamtin®；替尼泊苷或等价物，或者Vumon®或VM-26®；表鬼臼毒素或等价物；喜树碱或等价物；伊立替康或等价物，或Camptosar®；或前述任何的组合。

在一些实施方案中，另外的化学治疗剂是以下中的任一种（并且在一些实施方案中，选自以下）：阿霉素、秋水仙碱、环磷酰胺、放线菌素、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、丝裂霉素、氨甲蝶呤、米托蒽醌、氟尿嘧啶、卡铂、卡莫司汀（BCNU）、Navelbine®（长春瑞滨）、蒽环（Doxil®）、甲基-CCNU、顺铂、依托泊苷、干扰素、喜树碱及其衍生物、苯芥胆甾醇、托泊替康（topetecan）、长春碱、长春新碱、他莫昔芬、哌泊舒凡、nab-5404、nab-5800、nab-5801、伊立替康、HKP、奥他赛、吉西他滨（Gemzar®）、Herceptin®、长春瑞滨、卡培他滨（Xeloda®）、Alimta®、Avastin®、Velcade®、Tarceva®、Neulasta®、拉帕替尼（GW57016）、索拉非尼、其衍生物、本领域已知的化学治疗剂等等。

在一些实施方案中，化学治疗剂是涉及肿瘤生长的其它因子的拮抗剂，所述其它因子例如EGFR、ErbB2（也称为Herb）、ErbB3、ErbB4或TNF。有时，还对患者施用一种或多种细胞因子可能是有益的。在一些实施方案中，治疗剂是生长抑制剂。关于生长抑制剂的合适剂量是目前使用的剂量，并且由于生长抑制剂和紫杉烷的组合作用（协同作用），可以是减少的。

在一些实施方案中，化学治疗剂是除抗VEGF抗体、HER2抗体、干扰素和HGfβ拮抗剂外的化学治疗剂。

制造

本发明的可注射制剂可以以本领域技术人员已知的各种方式中的任一种制备以供使用。制剂可以预先以无菌形式制备并贮存直至需要时，伴随任选包括有效量的防腐剂。可替代地，可以优选以固体形式贮存可注射制剂的活性成分（化学治疗剂，例如抗癌药物），并且在它待施用之前不久的某个时间，即在使用前一小时或更短，或优选在使用前约十五分钟，将该制剂重构成可注射制剂。在此类情况下，化学治疗剂与水性液体分开贮存。

在使用之前，化学治疗剂（例如紫杉烷）优选包含在药学上可接受的载体中。药学上可接受的载体的实例包括PEG、植物油、中链甘油三酯、水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等等中的一种或多种，以及其组合。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨糖醇或氯化钠。药学上可接受的载体必须与组合物的组分和（例如人）患者两者相容。非水性溶剂的其它实例包括丙二醇和其它二醇、可代谢油、水性载体（包括水和醇/水溶液）、以及乳液或悬浮液（例如盐水和缓冲介质）。

在某些优选实施方案中，本发明的制剂包含以下或由以下组成：化学治疗剂连同油、中链甘油三酯或PEG。在某些优选实施方案中，PEG具有约100至约600，优选约200至约400，或优选约200至约300的分子量，且最优选地，PEG选自PEG 200、PEG 300、PEG 400和前述任何的混合物。在某些优选实施方案中，化学治疗剂是紫杉烷（例如紫杉醇）。

在某些实施方案中，化学治疗剂不溶于水。在某些实施方案中，化学治疗剂是紫杉烷（例如紫杉醇、多西他赛）、羟基喜树碱、替尼泊苷、依托泊苷、D Dantinomycin、卡莫司汀等。在此类实施方案中，可注射组合物优选含有作为非水溶剂的一种或多种有机赋形剂，其包括但不限于大豆油、蓖麻油、芝麻油、花生油、中链甘油三酯、椰子油、鱼油、棉籽油、玉米油、橄榄油、桃仁油或任何其它药学上可接受的注射用油，其可以充分溶解或悬浮化学治疗剂，以将其注射到所需部位例如恶性肿块内。在某些实施方案中，可注射组合物不含其它溶剂。在其它实施方案中，可注射制剂含有醇。在其它实施方案中，可注射制剂不含任何醇。在其它实施方案中，可注射组合物进一步含有一种或多种药学上可接受的赋形剂，例如但不限于油酸乙酯、苯甲酸苄酯、聚山梨醇酯、PEG、胆固醇、磷脂、丙二醇、甘油、乙醇、烟酰胺、二甲基亚砜、肉豆蔻异丙醇、二甲基乙酰胺、表面活性剂（例如非离子型表面活性剂）等。在某些优选实施方案中，可注射组合物用于直接注射到局部癌组织内，并不预期用于静脉注射。在某些实施方案中，可注射组合物包括两种或更多种化学治疗剂。

如果紫杉烷（例如紫杉醇）用蓖麻油（类似于下文讨论的通过EaglePharmaceuticals销售的产品）或聚山梨醇酯80溶解，则它难以通过注射器或纤维镜的小针抽出。另一方面，如果它用乙醇稀释，则药物的浓度是不稳定的，并且产生太高水平的杂质。

在某些优选实施方案中，用于溶解紫杉烷（例如紫杉醇或多西他赛）的溶剂具有在例如约1 mm²/s至约2000 mm²/s的范围内的粘度。下表4中阐述了可用于本发明中的某些溶剂的粘度的实例：

表4

下表5提供了某些优选化学治疗剂在生物相容性药物溶剂中的溶解度，所述生物相容性药物溶剂可以用于本发明的可注射制剂中。

表5

在某些实施方案中，可以使用溶剂的组合，以便制备本发明的注射制剂。合适的组合例如在下表6中提供：

表6

通过任何常规的混合方法，手动地或通过使用混合设备来实现制剂（液体或悬浮液）的形成或重构。颗粒材料可以作为单位剂量贮存于无菌环境中，并且容器可以包括关于待添加以实现制剂的先前粘度的液体载体（例如无菌水，例如注射用水）的量的说明。

在某些实施方案中，制剂包括药学上可接受的表面活性剂。合适的表面活性剂包括聚山梨醇酯，例如但不限于聚山梨醇酯80（Tween 80）及其任何组合或混合物。在某些其它实施方案中，基质可以是药学上可接受的表面活性剂和溶剂的组合。其它基质可以包括硬脂酰富马酸钠、二乙醇胺鲸蜡基硫酸酯、异硬脂酸酯、聚乙氧基化蓖麻油、苯扎氯铵、nonoxyl 10、辛苯聚醇9、月桂基硫酸钠、脱水山梨糖醇酯（脱水山梨糖醇单月桂酸酯、脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、脱水山梨糖醇三油酸酯、脱水山梨糖醇三硬脂酸酯、脱水山梨糖醇月桂酸酯、脱水山梨糖醇油酸酯、脱水山梨糖醇棕榈酸酯、脱水山梨糖醇硬脂酸酯、脱水山梨糖醇二油酸酯、脱水山梨糖醇倍半异硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半硬脂酸酯、脱水山梨糖醇三异硬脂酸酯）、卵磷脂、其药学上可接受的盐及其组合或混合物。

在某些优选实施方案中，表面活性剂包含药学上可接受的亲水性表面活性剂，例如非离子型表面活性剂。非离子型表面活性剂优选以这样的量包括在内，所述量足以在稀释后抑制药物从药学上可接受的注射用介质（例如水溶液）中沉淀出来。非离子型表面活性剂与药物形成稳定的胶束，可以使药物增溶，并且可以对药物赋予另外的光稳定性。

使用HLB值作为粗略指导，亲水性表面活性剂被视为HLB值大于10，特别是12至17的那些。亲水性非离子型表面活性剂在水中比在油中更可溶（HLB高于10）。可用于本发明的制剂中的药学上可接受的非离子型表面活性剂包括但不限于，例如聚氧乙烯化合物、乙氧基化醇、乙氧基化酯、乙氧基化酰胺、聚氧丙烯化合物、丙氧基化醇、乙氧基化/丙氧基化的嵌段聚合物和丙氧基化酯、烷醇酰胺、氧化胺、多元醇的脂肪酸酯、乙二醇酯、二甘醇酯、丙二醇酯、甘油酯、聚甘油基脂肪酸酯、脱水山梨糖醇酯、蔗糖酯和葡萄糖（右旋糖）酯。进一步的实例是天然或聚乙氧基化的蓖麻油与环氧乙烷的反应产物。乙氧基化的蓖麻油可以具有25至100摩尔环氧乙烷/分子，优选35至60摩尔环氧乙烷/分子的环氧乙烷含量。天然或聚乙氧基化的蓖麻油可以以约1:35至约1:60的摩尔比与环氧乙烷反应，伴随聚乙氧基化的组分从产物中的任选去除。可用于本发明中的非离子型亲水性表面活性剂进一步包括烷基葡糖苷；烷基麦芽糖苷；烷基硫代葡糖苷；月桂基聚乙二醇甘油酯；聚氧乙烯烷基醚；聚氧乙烯烷基酚；聚乙二醇脂肪（单和二）酸酯；聚乙二醇甘油脂肪酸酯；聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；聚甘油基脂肪酸酯；聚氧乙烯甘油酯；聚氧乙烯固醇及其类似物；聚氧乙烯植物油、聚氧乙烯氢化植物油；多元醇和选自以下的至少一个成员在固醇中的反应混合物：脂肪酸、甘油酯、植物油、氢化植物油；糖酯、糖醚；蔗糖甘油酯；脂肪酸盐、胆汁盐、磷脂、磷酸酯、羧酸酯、硫酸酯、磺酸酯。更具体地，非离子型表面活性剂可以包含例如聚氧乙烯脂肪醇酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯（Spans）、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯（例如聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯（Tween 80）、聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单硬脂酸酯（Tween 60）、聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯（Tween 20）和其它Tween）、脱水山梨糖醇酯、甘油酯例如Myrj和甘油三乙酸酯（三醋精）、聚乙二醇、鲸蜡醇、鲸蜡硬脂醇、硬脂醇、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆、泊洛沙胺、聚氧乙烯蓖麻油衍生物（例如Cremophor®RH40、Cremphor A25、Cremphor A20、Cremophor® EL）和其它Cremophor、磺基琥珀酸酯、烷基硫酸酯（SLS）；PEG甘油脂肪酸酯，例如PEG-8甘油辛酸酯/癸酸酯（Labrasol）、PEG-4甘油辛酸酯/癸酸酯（Labrafac Hydro WL 1219）、PEG-32甘油月桂酸酯（Gelucire 444/14）、PEG-6甘油单油酸酯（Labrafil M 1944 CS）、PEG-6甘油亚油酸酯（Labrafil M 2125 CS）；丙二醇单和二脂肪酸酯，例如丙二醇月桂酸酯、丙二醇辛酸/癸酸酯；Brij® 700、抗坏血酸-6-棕榈酸酯、硬脂胺、十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯甘油三蓖麻油酸酯及其任何组合或混合物。尽管聚乙二醇（PEG）本身不充当表面活性剂，但各种PEG-脂肪酸酯具有有用的表面活性剂特性。在PEG-脂肪酸单酯中，最有用的是月桂酸、油酸和硬脂酸的酯。其实例包括PEG-8月桂酸酯、PEG-8油酸酯、PEG-8硬脂酸酯、PEG-9油酸酯、PEG-10月桂酸酯、PEG-10油酸酯、PEG-12月桂酸酯、PEG-12油酸酯、PEG-15油酸酯、PEG-20月桂酸酯和PEG-20油酸酯。聚乙二醇脂肪酸酯也适合用作本发明的组合物中的表面活性剂，例如PEG-20二月桂酸酯、PEG-20二油酸酯、PEG-20二硬脂酸酯、PEG-32二月桂酸酯、PEG-32二油酸酯、PEG-20月桂酸甘油酯、PEG-30月桂酸甘油酯、PEG-40月桂酸甘油酯、PEG-20油酸甘油酯和PEG-30油酸甘油酯。亲水性表面活性剂可以进一步包含前述任何的混合物。

聚山梨醇酯80，本发明的制剂中尤其优选的亲水性非离子型表面活性剂，是在蛋白质肠胃外制剂中常用的表面活性剂，以使空气-水界面的变性降到最低。聚山梨醇酯80有时还用于小分子的可注射溶液制剂中，目的是由于胶束形成的溶解度增强。聚山梨醇酯是脱水山梨糖醇酯的非离子型表面活性剂。可用于本发明中的聚山梨醇酯包括但不限于聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80（Tween 80）及其任何组合或混合物。其它合适的优选表面活性剂包括泊洛沙姆、泊洛沙姆407和transcutol。表面活性剂可以是适用于药物组合物中的任何表面活性剂。合适的表面活性剂也可以是离子型亲水性表面活性剂或疏水性表面活性剂。合适的亲水性表面活性剂可以是阴离子、阳离子、两性离子或非离子型的，尽管非离子型亲水性表面活性剂是目前优选的。

在某些实施方案中，药学上可接受的注射用溶剂（载体）中的化学治疗剂的浓度为约1 mg/1ml至约50 mg/ml。在某些优选实施方案中，药学上可接受的注射用溶剂（载体）中的化学治疗剂的浓度为约10 mg/5ml至约500 mg/5ml。

在某些实施方案中，可注射制剂可以包括缓冲剂。缓冲剂以适当的量使用，以将制剂的pH调整至可注射范围，例如约pH 6至约pH 8，且优选约pH 7。缓冲剂可以是例如磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氨丁三醇、碳酸钠、碳酸氢钠、葡甲胺、精氨酸、三乙醇胺和柠檬酸。可注射制剂可以含有两种或更多种缓冲剂。

在某些实施方案中，可注射制剂可以包括等渗剂，以将本文制剂的渗透压调整至可注射范围。等渗剂可以是例如氯化钠和D-甘露醇。优选地，等渗剂是氯化钠。

在某些优选实施方案中，用于化学治疗剂的药学上可接受的载体包括水（例如，水性载体）。本文使用的术语“水”定义为纯净水，或其相同或更高等级；并且在将各种成分溶解于其中后，此类水需要进行灭菌，或者已灭菌的水（例如注射用水）在步骤自始至终在无菌条件下进行的过程中使用。另外，本文使用的术语“注射用水”包括在将基质或试剂溶解于上文提到的“水”（作为原材料）内之后，通过无菌过滤器等灭菌的水。

在本发明的某些实施方案中，将本发明的可注射制剂预混合并贮存于药学上可接受的容器（例如小瓶）中，用于以后使用。在此类实施方案中，优选可注射制剂是根据例如由政府监管机构，例如美国食品和药物管理局（“FDA”）提供的指南，提供足够稳定性的制剂。在其它实施方案中，设想化学治疗剂是分开供应的，并且在注射到例如人患者的肿瘤内之前的短时间内或立即，与非活性的药学上可接受的成分（例如本文所述的那些）混合在一起。在此类实施方案中，化学治疗剂（例如紫杉烷）可以贮存于一个容器中，并且药学上可接受的注射用载体贮存于另一个容器中，药学上可接受的载体是水性液体或有机液体。在将两个容器的内容物混合之后，优选地形成药学上可接受的可注射制剂，其在某些实施方案中可以是悬浮液，并且可以提供化学治疗剂的持续释放。本发明的可注射制剂可以通过下述步骤进行施用；即，从装有本文制剂的小瓶中，经由针将内容物转移到注射器内，然后直接施用到肿瘤内。

此外，在某些实施方案中，本文制剂可以包含一个容器，例如小瓶，其含有结晶或冻干的化学治疗剂，或者化学治疗剂的晶体可以被分离，干燥，然后放入容器例如小瓶内，以得到粉末填充的制剂。冻干制剂或粉末填充制剂可以通过将该小瓶的内容物与第二小瓶混合进行施用，所述第二小瓶含有将化学治疗剂递送至肿瘤所需的药学上可接受的赋形剂。例如，第二小瓶可以包含用于化学治疗剂的可注射溶液或悬浮液，并且通过正好在使用前将第一小瓶的化学治疗剂与第二小瓶的可注射悬浮液混合来制备最终制剂。进一步地，第二容器的可注射悬浮液或溶液可以进行灭菌和/或进行超声处理和/或例如通过过滤进行灭菌，然后填充到小瓶中。化学治疗剂的颗粒可以填充到小瓶内，然后通过γ照射进行灭菌。化学治疗颗粒和悬浮液（或溶液）介质可以临时混合，以便在施用前将化学治疗颗粒悬浮或溶解于注射用媒介物中。

根据本发明的可注射制剂可以用于伴随化学治疗剂持续释放至少3小时，或者至少4小时、5小时、6小时、12小时、24小时、30小时、36小时、48小时或更长时间来施用。

优选实施方案的详细描述

根据本发明的抗癌制剂的下述实施例不应以任何方式解释为限制本发明，而仅是本文所述的各种制剂的实例。考虑了如下所述的本发明的可注射制剂可以大约在待治疗患者的时间制备，例如，一个小瓶可以含有化学治疗剂（例如，紫杉醇），而另一个小瓶可以含有溶剂和适合于注射的任何其它任选的药物赋形剂，然后可以在如本文所述直接注射到患者中的肿瘤内之前，将这些材料混合。可替代地，还考虑了本文所述的制造方法可以用于制备预混合的可注射制剂（优选如本文所定义是稳定的），然后将这种可注射制剂在可接受的贮存条件下贮存于药学上可接受的容器（例如小瓶）中，用于以后使用。还考虑了下文阐述的制造方法的按比例扩大。

实施例1 –紫杉醇与PEG 300

将400 ml PEG 300在25℃下置于烧杯内，然后将液体加热至85-95℃。然后伴随混合（烧杯的内容物处于剪切条件下），将4.5克无水紫杉醇加入烧杯中。向烧杯中加入另外量的PEG 300，直至体积达到450 ml。在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将3 ml滤液填充到小瓶内并密封。在其制备后，紫杉醇溶液是无色透明的，具有7.96的pH值。紫杉醇溶液的含量和杂质在表7中提供。

表7

结果：该分批中的杂质在5℃和20℃下是稳定的，但在40℃下是不稳定的。

实施例2 –紫杉醇与大豆油

将730 ml大豆油在25℃下置于烧杯内，然后将液体加热至85-95℃。然后伴随混合（烧杯的内容物处于剪切条件下），将4.5克无水紫杉醇加入烧杯中。由于无水紫杉醇是不溶解的，因此将300 ml脱水乙醇加入烧杯中，以溶解紫杉醇。将所得溶液维持在70-80℃下，以蒸发乙醇。向烧杯中加入另外量的大豆油，直至体积达到750 ml。在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将5ml滤液填充到小瓶内并密封。

在其制备后，紫杉醇溶液是淡黄色透明的，具有7.63的pH值。紫杉醇溶液在各种贮存条件下的含量和杂质显示于表8中。

表8

结果：在5℃和20℃下的样品是澄清且透明的，并且在40℃下的样品具有明显的絮凝物，其可能是紫杉醇沉淀。

实施例3 –紫杉醇/75%乙醇

将150 ml脱水乙醇在25℃下置于烧杯内，然后伴随混合（烧杯的内容物处于剪切条件下），将1.2克无水紫杉醇加入烧杯中。向烧杯中加入另外量的注射用水（无菌的），直至体积达到200 ml。在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将5 ml滤液填充到小瓶内并密封。在其制备后，紫杉醇溶液是无色透明的，具有7.97的pH值。紫杉醇溶液在各种贮存条件下的含量和杂质显示于表9中。

表9

结果：随着时间的增加，大多数杂质显著增加，并且总杂质在20天后超过标准。

实施例4 –紫杉醇与脱水乙醇和柠檬酸

将730 ml脱水乙醇在25℃下置于烧杯内，然后伴随混合（烧杯的内容物处于剪切条件下），将4.5克紫杉醇加入烧杯中。加入少量柠檬酸，直至溶液具有3.5-4.5的pH。然后向烧杯中加入另外量的脱水乙醇，直至体积达到750 ml。在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将5 ml滤液填充到小瓶内并密封。在其制备后，紫杉醇溶液是无色透明的。表10提供了关于紫杉醇制剂在各种贮存条件下的杂质数据。

表10

结果：杂质在所有温度下都是稳定的，并且10-脱乙酰基紫杉醇在40℃下显示增加的趋势。

实施例5 –紫杉醇与中链甘油三酯

将450 ml中链甘油三酯在25℃下置于烧杯内，并且将液体加热至85-95℃。然后伴随混合（烧杯的内容物处于剪切条件下），将4.5克无水紫杉醇加入烧杯中。由于紫杉醇未完全溶解，因此将300 ml脱水乙醇加入烧杯中，以溶解紫杉醇。将所得溶液维持在70-80℃下，以蒸发乙醇。然后将溶液冷却至室温（25℃）。在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将3 ml滤液填充到小瓶内并密封。在其制备后，紫杉醇溶液是无色透明的，具有5.65的pH值。表11提供了关于紫杉醇制剂在各种贮存条件下的杂质数据。

结果：在20℃下贮存6个月后，产物是稳定的。

表11

实施例6 –紫杉醇与1,2-丙二醇

将450 ml的1,2-丙二醇在25℃下置于烧杯内，并且将液体加热至55-60℃。然后伴随混合（烧杯的内容物处于高速剪切下），将4.5克无水紫杉醇加入烧杯中。由于紫杉醇未完全溶解，因此将温度上升至85-90℃，然后溶液变得澄清。然后将溶液冷却至室温。在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将3 ml滤液填充到小瓶内并密封。在其制备后，紫杉醇溶液是无色透明的，具有9.2的pH值。表12提供了关于紫杉醇制剂在各种贮存条件下的杂质数据。

结果：在20℃下的6个月贮存后，产物是稳定的。

表12

实施例7 –多西他赛与75%乙醇

将150 ml脱水乙醇在25℃下置于烧杯内，然后伴随混合（烧杯的内容物处于剪切条件下），将0.8克无水多西他赛加入烧杯中。向烧杯中加入另外量的注射用水，直至体积达到200 ml。在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将5 ml滤液填充到小瓶内并密封。在其制备后，多西他赛溶液是无色透明的，具有5.0的pH值。表13提供了关于多西他赛制剂在各种贮存条件下的杂质数据。

表13

结果：制剂是不稳定的。

实施例8 多西他赛与脱水乙醇和柠檬酸

将400 ml脱水乙醇在25℃下倒入烧杯内，然后伴随混合，将1.6克无水多西他赛加入烧杯中。搅拌液体。加入少量柠檬酸，直至溶液具有3.5-4.5的pH。在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将5ml滤液填充到小瓶内并密封。多西他赛溶液是无色且透明的。表14提供了关于多西他赛制剂在各种贮存条件下的杂质数据。

表14

结果：制剂在5℃和25℃下是稳定的。

实施例9 –多西他赛与中链甘油三酯

将450 ml中链甘油三酯在25℃下置于烧杯内，并且将液体加热至85℃-95℃。然后伴随混合（烧杯的内容物处于高速剪切下），将3克无水多西他赛加入烧杯中。在冷却至室温（约25℃）后，在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将3 ml滤液填充到小瓶内并密封。在其制备后，多西他赛溶液是无色且透明的，具有5.1的pH值。多西他赛溶液的含量为100.0%，其中在生产的第0天时未检测到总杂质。表15提供了关于多西他赛制剂在各种贮存条件下的杂质数据。

表15

结果：在不同温度下6个月后，该制剂中的所有杂质都没有显著增加并且是相对稳定的。

实施例10 –多西他赛与PEG 300

将450 ml PEG 300在25℃下置于烧杯内，并且将液体加热至85℃-95℃。然后伴随混合（烧杯的内容物处于高速剪切下），将3克无水多西他赛加入烧杯中。在冷却至室温（约25℃）后，在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将3 ml滤液填充到小瓶内并密封。在其制备后，多西他赛溶液是无色透明的，具有5.4的pH值。表16提供了关于多西他赛制剂在各种贮存条件下的杂质数据。

表16

结果：在常温下，制剂是稳定的。

实施例11- 多西他赛与大豆油

将450 ml大豆油在25℃下置于烧杯内，并且将液体加热至85℃-95℃。然后伴随混合（烧杯的内容物处于高速剪切下），将3克无水多西他赛加入烧杯中。在冷却至室温（约25℃）后，在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将3 ml滤液填充到小瓶内并密封。在其制备后，多西他赛溶液是微黄透明的，具有5.6的pH值。表17提供了关于多西他赛制剂在各种贮存条件下的杂质数据。

表17

结果：该制剂在低于25℃下是稳定的。在40℃下，从第二个月开始存在沉淀，其可能已减缓释放效应。

实施例12 –多西他赛与1,2丙二醇

将450 ml 1,2-丙二醇在25℃下置于烧杯内，并且将液体加热至85℃-95℃。然后伴随混合（烧杯的内容物处于高速剪切下），将3克无水多西他赛加入烧杯中。在冷却至室温（约25℃）后，在施加氮气的同时，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，然后将3 ml滤液填充到小瓶内并密封。在其制备后，多西他赛溶液是无色且透明的，具有5.5的pH值。表18提供了关于多西他赛制剂在各种贮存条件下的杂质数据。

表18

结果：该制剂对温度敏感，并且随着贮存温度的增加，杂质明显增加。在40℃下，杂质和总杂质增加并且含量明显降低。在3个月后，白色混浊在不同温度下开始出现。这可能是由于过饱和导致的沉淀。

实施例13 –羟基喜树碱与PEG300

将300 ml PEG 300在25℃下置于烧杯内，并且将液体加热至85℃至95℃。然后将3克羟基喜树碱加入烧杯中，并且溶解（烧杯的内容物处于高速剪切下）。在冷却至室温（约25℃）后，在氮气保护下，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，并且将5 ml滤液填充到小瓶内。然后将产物密封并在121℃下灭菌15分钟。在其制备后，羟基喜树碱溶液是微黄透明的，具有在8.2-8.7的范围内的pH值，含量为104.2%，而总杂质为0.6%。

实施例14 –替尼泊苷与PEG300

将10 g 替尼泊苷加入烧杯中的500 ml PEG 300中，然后加热到100℃。替尼泊苷在高速剪切下完全溶解。在冷却至室温（约25℃）后，在氮气保护下，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，并且将5 ml滤液填充到小瓶内。然后将产物密封，在121℃下灭菌15分钟。替尼泊苷溶液是无色且透明的，具有5.7的pH值。在灭菌后，含量为99.3%，而总杂质为1.3%。

实施例15 –依托泊苷与PEG300

将15g依托泊苷加入200 ml PEG 300中，然后将混合物加热至55-65℃。依托泊苷通过高速剪切完全溶解。在冷却至室温（约25℃）后，在氮气保护下，使所得溶液通过0.22微米的过滤器，并且将5 ml滤液填充到小瓶内。然后将产物密封并在121℃下灭菌15分钟。在其制备后，依托泊苷溶液是无色且透明的，具有4.5的pH值。依托泊苷溶液的含量为94.5%，而总杂质为0.8%。

在复苏三代后，处于对数生长期的细胞进行消化，并且悬浮于完全培养基中。计算细胞数目，其中预计细胞数目超过3×10⁷/ml。裸鼠的右腋窝部分通过乙醇进行消毒。细胞悬浮液用0.15ml的剂量进行皮下注射。在注射后，圆形半透明液泡鼓起。在注射后每天观察裸鼠的状态和肿瘤的生长。通过直径大于5 mm的可触知肿瘤的皮下生长标准，来判断肿瘤皮下移植的裸鼠模型的成功。45只小鼠成功建立肿瘤模型。所有的小鼠都是5周龄的雌性，且具有16-22g的体重。成功的裸鼠随机分成四组：阳性对照组中11只，高剂量组中11只，低剂量组中11只，以及阴性对照组中12只。在分组后，在阳性对照组中施用静脉内注射，而其它组通过瘤内注射施用不同的测试产物或空白溶剂。下表19提供了关于依托泊苷注射和所使用方案的信息。表20提供了在依托泊苷注射之前和之后，在裸鼠中的平均肿瘤体积。

表19：依托泊苷注射使用方案

表20：在依托泊苷注射之前和之后，在裸鼠中的平均肿瘤体积

通过电子游标卡尺测量肿瘤的最长直径a（mm）和最短直径b（mm）。裸鼠的肿瘤体积通过下式进行计算：TV = ab²/2，而相对肿瘤体积（RTV）获得为RTV = Vt/Vo。Vo是在注射前的肿瘤体积，而Vt用于测量在第一次注射后几天的肿瘤体积。阳性组的肿瘤体积很小，因为该静脉内注射组中的小鼠的食欲由于严重的不利反应而减少。在注射后十二（12）天，LV12/NV=49.3%，显示了肿瘤生长的抑制效应。表21提供了在药物施用后每组测试小鼠的存活时间。阴性对照组的所有小鼠在注射后20天都是活的。阴性组的所有小鼠的肿瘤体积都大于1500mm3。出于伦理原因，在注射后21天将小鼠杀死。值得注意的是，低剂量组的三只小鼠在注射后存活了20天。表22提供了与依托泊苷的阳性对照组相比，高剂量组和低剂量组的中值存活时间和30%存活时间的比较。

表21：在药物施用后每组的存活时间

表22：与依托泊苷的阳性对照组相比，高剂量组和低剂量组的中值存活时间和30%存活时间的比较

对于其它组的体积，局部注射获得比阴性对照注射更好的结果。尽管表观结果并不比静脉内注射更好，但这是由于依托泊苷的大剂量静脉内注射的毒性效应降低了小鼠的食欲。对于小鼠的存活时间，低剂量组的MST为15天，静脉内组的MST为9天。两组的MST比率为1.67（15/9=167%），且高于125%的标准。当与阴性组相比较时，大剂量的依托泊苷的静脉内注射具有较差的结果。尽管阴性组的小鼠预计在21天后死亡，但低剂量组中的三只小鼠在第一次注射后21天仍是活的。接受低剂量的依托泊苷的局部瘤内注射的小鼠的总体存活长于阴性组的存活。因此，低剂量组的局部瘤内注射优于静脉内注射和阴性对照组。然而，结果将通过局部注射剂量的进一步降低得到改善。

实施例16 - 紫杉醇的瘤内注射

在实施例16中，在随机化初步研究中比较了在肝癌的皮下移植的裸鼠模型中，通过紫杉醇油溶液的瘤内注射相对于紫杉醇溶液的静脉内注射，小鼠的中值存活时间。

方法：

研究设计和实施：完成了在裸鼠中的人肿瘤异种移植模型的随机化体内抗肿瘤实验。使用的动物是健康的，并且所有的小鼠都是雄性的。小鼠都为5-6周龄，并且称重为19-24.5克。

裸鼠中的肿瘤模型的建立：

每只裸鼠的右腋窝通过乙醇进行灭菌。肝癌细胞（Hepg2）悬浮液用0.15 mL/剂量的剂量进行皮下注射。癌细胞的浓度为3*10⁷/mL。缓慢注射悬浮液，并且在注射后形成圆形半透明泡。在注射后每天观察裸鼠的健康和肿瘤的体积，并且每3天测量具有肿瘤最大直径和最小直径的裸鼠。当肿瘤的体积达到约50 mm³时，建立了肿瘤的皮下移植的裸鼠模型。

2周后完成对实验动物的随机分组和药物施用。裸鼠的肿瘤长到体积约250 mm³。将五十只裸鼠随机分配成各10只小鼠的五组。组1是阴性对照组，组2是高剂量组，组3是中等剂量组，组4是低剂量组，而组5是阳性对照组。在分组后，组1小鼠的肿瘤实验每3周用空白溶剂（8 μL中链油）直接注射一次，或直至肿瘤的大小达到体积2000 mm³。出于动物伦理考虑，当其肿瘤的体积大于2,000 mm³时，将小鼠处死并且终止实验。其它3组（组2、3和4）小鼠的肿瘤实验每3周用紫杉醇油溶液直接注射一次。组2每只小鼠的肿瘤用32 μL紫杉醇油溶液直接进行注射，所述紫杉醇油溶液含有480 μg紫杉醇（小鼠LD50的紫杉醇静脉内注射量的2倍）。组3每只小鼠的肿瘤用16 μL紫杉醇油溶液直接进行注射，所述紫杉醇油溶液含有240 μg紫杉醇（与小鼠的I.V. LD50相同的量）。组4每只小鼠的肿瘤用8 μL紫杉醇油溶液直接进行注射，所述紫杉醇油溶液含有120 μg紫杉醇（小鼠的I.V. LD50的量的1/2）。对于组5（阳性对照组），每只小鼠在小鼠的尾静脉中用100 μL含有120 μg紫杉醇的紫杉醇溶液进行注射。当肿瘤达到体积2000 mm³时，组2、3和4的小鼠未被处死，因为不断增长的肿瘤体积可能是由于紫杉醇的毒性效应，其需要进行评估，并且也因为小鼠处于治疗下。表23提供了关于小鼠中的分组和药物施用的信息。

表23：实验动物中的随机分组和药物施用

小鼠的静脉内LD50为12 mg/kg。小鼠的平均重量为20 g，并且因此120μg为小鼠的LD50量的一半。6 mg/kg小鼠的这个量大于在人患者中将注射的量。用于人患者的剂量是1.73*135 mg/m2=233.5 mg。人体的剂量除以60 kg，其为3.9 mg/kg。

阴性对照组（肿瘤仅用中链油进行注射）的小鼠与4个测试组就肿瘤体积、死亡率、存活时间、体重进行比较。组5（具有注射到小鼠的尾静脉内的药物的阳性对照组）的小鼠与3个药物测试组就肿瘤体积、死亡率、存活时间和体重进行比较。对于组2、3、4和5中的小鼠，在小鼠死亡后，检查死亡小鼠的肿瘤，并且紫杉醇的浓度与其它测试组的小鼠进行比较。小鼠的肿瘤体积如下进行测量且计算：通过电子游标卡尺测量肿瘤的最长直径a（mm）和最短直径b（mm）。相对肿瘤体积（RTV）为Vt/Vo。Vo用于代表在药物施用的第一天时的肿瘤体积，而Vt用于代表在第一次施用后的时间的肿瘤体积。

在阳性对照组中的小鼠静脉内注射中使用的紫杉醇注射剂由紫杉醇、乙醇和聚氧乙烯蓖麻油组成。用于局部注射的紫杉醇油溶液含有紫杉醇和中链油。每ml注射溶液含有15mg紫杉醇。每个瓶含有2ml。

结果：

主要终点是在注射后每个不同组的小鼠的中值存活时间。次要终点是在第一次注射后每个不同组的小鼠的30%存活时间、在注射后的肿瘤体积以及肿瘤中的药物浓度。

统计分析：

这个试验设计为比较小鼠的中值存活时间。计算与静脉内阳性对照组相比，每个不同剂量组的中值存活时间的增加百分比，并且评估标准是当MST的T/C%大于125%时。

组1、2、3、4和5的结果在下表24和25中提供。

表24 –在药物注射之前和之后的平均肿瘤体积（mm³）

表25 –在注射后的不同时间的相对肿瘤增殖

在注射后十二天，HV>MV>NV>PV>LV，但在注射后24天时，NV > LV > PV >HV>MV。肿瘤的体积并非敏感指标，因为肿瘤的体积取决于许多因素，例如食欲和由小鼠吃掉的食物以及抗癌药物的局部毒性效应。另外，剂量并非个体化的。在注射后十二天之前，HV和MV的体积大于LV，因为较高浓度的紫杉醇的局部毒性效应引起HV和MV组的肿瘤肿胀大于LV组。

低剂量组、中等剂量组和高剂量组的中值存活时间长于静脉内组的MST。对于IV组的中值存活时间为22天，对于高剂量组它为27天，对于中等剂量组它为26天，对于低剂量组它为28天。与静脉内组PCG相比，低剂量组的相对MST为127%，其大于125%的评估标准。与IV组（阳性对照组）相比，测试组的相对MST由T/C（%）表示。

在具有直接注射到肿瘤内的药物的三个药物测试组中，发现在注射后12天之前，低剂量组的肿瘤体积是最小的，低剂量组的相对增殖率也是最小的。这一发现提示给予第二次注射的最佳时间是在第一次注射后的1-2周。因此，在第二个剂量后改变了注射计划。对于30%存活时间，低剂量组是最长的，相对于IV对照组为154.2%，且相对于阴性对照组为142.3%。

静脉内组相对于阴性组的总体存活为约100%，意味着对于肝癌而言，静脉内注射并不优于姑息治疗。图1提供了在化学疗法的第一次注射后，不同小鼠组随着时间过去的存活。表26提供了测试组的存活数据。在30%存活时间下，低剂量组存活最久，它为IV对照组的154.2%，它为阴性对照组的142.3%。

表26

将局部注射的小鼠和静脉内注射的小鼠的肿瘤组织磨碎，并且通过HPLC法检测紫杉醇的含量。对于PCG，检测到的紫杉醇的量很小，并且可以忽略不计。这确认了没有药物在治愈肝癌方面是有效的。中等剂量和低剂量组的肿瘤内的紫杉醇为注射剂量的约63-66%。对于高剂量组，小鼠的肿瘤内的紫杉醇为注射剂量的约46.7%。

上文现象显示了如果局部注射，则紫杉醇油溶液具有持续释放的作用。如果紫杉醇的静脉内注射在治愈癌细胞方面有效，那么水不溶性特性的抗癌药物的局部注射结果应该好得多。

实验显示了在局部注射组中抑制小鼠肿瘤生长中的效应大于在静脉内注射组的小鼠中的效应。还显示了瘤内注射的小鼠的存活大于静脉内注射组。与静脉内组相比，瘤内注射具有在肿瘤中更高浓度的抗癌药物。该实验显示了最佳剂量应该根据肿瘤的大小进行个体化，并且注射之间的间隔应该为1-2周。表27提供了测试组和阳性对照组的小鼠肿瘤中的紫杉醇量。

表27：测试组和阳性对照组的小鼠肿瘤中的紫杉醇量

结论

在前面的说明书中，已参考具体示例性实施方案及其实施例描述了本发明。然而，显而易见的是，可以对其做出各种修改和改变，而不脱离如随附权利要求中阐述的本发明的更广泛精神和范围。对于本领域技术人员还显而易见的是，在本文未具体提到的手术和术后治疗期间，本发明的局部抗癌制剂可以以另外的方式改变或在许多另外的术前条件中使用。另外，考虑了可以在本文未具体提到的另外部位（包括局部）处利用此类制剂。此类明显的修改被视为在所附权利要求的范围内。因此，本说明书应以说明性方式而非限制性意义来看待。

Claims (15)

1.一种药物组合物，其包含溶解或悬浮于药学上可接受的生物相容性载体中的治疗有效量的化学治疗剂的可注射制剂，用于治疗哺乳动物中的恶性肿块，其中所述组合物直接施用到所述恶性肿块内。

2.权利要求1的药物组合物，其中所述恶性肿块位于哺乳动物中选自以下的位置中：脑、头部、眼、鼻咽、口、舌、颈部、甲状腺、胃肠系统、肝脏、胰腺、胆囊、肺、呼吸系统、泌尿生殖系统、肾脏、膀胱、乳房、淋巴系统、心血管系统、神经系统、皮肤、胸腔、胸膜、间皮瘤、肺癌、肌肉骨骼系统、腹部，具有原发性或继发性性质。

3.权利要求2的药物组合物，其中所述恶性肿块从所述哺乳动物中的另一个器官转移。

4.权利要求2的药物组合物，其中所述可注射制剂通过注射器或纤维镜的针进行施用。

5.权利要求4的药物组合物，其中所述化学治疗剂是水不溶性化合物，其选自紫杉烷、鬼臼毒素衍生物或喜树碱衍生物。

6.权利要求5的药物组合物，其中所述水不溶性化合物是选自紫杉醇和多西他赛的紫杉烷。

7.权利要求5的药物组合物，其中所述水不溶性化合物是羟基喜树碱。

8.权利要求5的药物组合物，其中所述生物相容性载体选自PEG、植物油和中链甘油三酯。

9. 权利要求1的药物组合物，其中所述化学治疗剂是紫杉醇，并且所述生物相容性载体是中链甘油三酯。

10. 权利要求1的药物组合物，其中所述恶性肿块为

（i）皮肤、眼、舌、口、甲状腺、乳房、子宫颈、子宫、肛门、前列腺、阴道、骨肉瘤、尿道癌、阴茎、睾丸和附睾的浅表恶性疾病，并且所述化学治疗剂无需稀释用注射器直接注射到所述恶性肿块内；或

（ii）鼻咽的癌症，并且所述化学治疗剂通过鼻咽镜用注射器或针注射到所述恶性肿块内；或

（iii）肝脏、肾脏和胆囊的癌症，并且所述化学治疗剂使用注射器在超声的辅助下通过皮肤注射到所述恶性肿块内，或通过在腹腔镜手术过程中在患者的腹壁中形成的孔注射到所述恶性肿块内；或

（iv）卵巢、输卵管、胰腺、淋巴结转移或腹腔的直接腹膜侵入、腹部淋巴瘤的癌症，并且所述化学治疗剂通过在腹腔镜手术过程中在患者的腹壁中形成的孔，用注射器注射到所述恶性肿块内；或

（v）食道、胃、十二指肠、小肠的癌或肉瘤，并且所述化学治疗剂通过肠镜用针注射到所述恶性肿块内，或通过在腹腔镜手术过程中在患者的腹壁中形成的孔经由长注射器注射到所述恶性肿块内，或通过在胸腔镜手术过程中在患者的胸壁中形成的孔进行注射；

（vi）大肠和直肠的癌或肉瘤，并且所述化学治疗剂通过结肠镜检查用针注射到所述恶性肿块内，或通过在腹腔镜手术过程中在患者的腹壁中形成的孔使用注射器进行注射；或

（vii）肺和气管的癌或肉瘤，并且所述化学治疗剂使用纤维支气管镜的针注射到所述恶性肿块内；或

（viii）肺的癌，并且所述化学治疗剂在超声、x射线、CT扫描或MR扫描的使用下用注射器进行注射，或通过在胸腔镜手术过程中在患者的胸壁中形成的孔进行注射；或

（ix）膀胱的癌或肉瘤，并且所述化学治疗剂通过膀胱镜用针注射到所述恶性肿块内，或通过在腹腔镜手术过程中在患者的腹壁中形成的孔进行注射；或

（x）子宫的癌或肉瘤，并且所述化学治疗剂的可注射制剂用注射器或宫腔镜的针注射到所述恶性肿块内；或通过在腹腔镜手术过程中在患者的腹壁中形成的孔进行注射；或

（xi）鼻咽和喉的癌或肉瘤，并且所述化学治疗剂通过喉镜用针注射到所述恶性肿块内；或

（xii）脑的癌，并且所述化学治疗剂在X射线、CT扫描或MR扫描的使用下，在相应的颅骨中钻洞后，用注射器或纤维镜的针注射到所述恶性肿块内；或

（xiii）恶性淋巴瘤或具有转移的淋巴结，并且所述化学治疗剂使用针通过患者的皮肤注射到所述恶性肿块内，或者通过在腹腔镜手术过程中在患者的腹壁中形成的孔、或通过在胸腔镜手术过程中在患者的胸壁中形成的孔进行注射。

11. 一种化学治疗剂的稳定的瘤内可注射制剂，其包含在药学上可接受的生物相容性注射用载体中的治疗有效量的选自以下的化学治疗剂：紫杉烷、鬼臼毒素衍生物、喜树碱衍生物、其类似物或前药、其药学上可接受的盐及其混合物，所述载体由具有约PEG 200至约PEG 400的分子量的PEG、中链甘油三酯或药学上可接受的植物油组成。

12.权利要求11的瘤内注射制剂，其中所述植物油是大豆油。

13.权利要求11的瘤内注射制剂，其中所述中链甘油三酯是选自己酸、辛酸、癸酸、月桂酸及其混合物的中链甘油三酯。

14.权利要求11的瘤内可注射制剂，其中所述紫杉烷是紫杉醇或多西他赛，所述鬼臼毒素衍生物选自依托泊苷、替尼泊苷及其混合物，并且所述喜树碱衍生物是羟基喜树碱。

15. 一种瘤内可注射制剂试剂盒，其包括含有结晶、粉末或冻干的化学治疗剂的第一小瓶，以及含有将化学治疗剂递送至肿瘤所需的药学上可接受的赋形剂的第二小瓶，所述药学上可接受的赋形剂包括具有约PEG 200至约PEG 400的分子量的PEG、中链甘油三酯、乙醇、醇、药学上可接受的植物油、聚山梨醇酯、药学上可接受的稀释剂、以及前述任何的混合物。

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