CN108136217B - 用于治疗膀胱癌的制剂 - Google Patents

用于治疗膀胱癌的制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN108136217B
CN108136217B CN201780002340.XA CN201780002340A CN108136217B CN 108136217 B CN108136217 B CN 108136217B CN 201780002340 A CN201780002340 A CN 201780002340A CN 108136217 B CN108136217 B CN 108136217B
Authority
CN
China
Prior art keywords
bladder
plip
paclitaxel
bladder cancer
formulations
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201780002340.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108136217A (zh
Inventor
G·V·贝塔格里
N·温卡德森
M·G·厄夫来因
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Western University of Health Sciences
TesorRx Pharma LLC
Original Assignee
Western University of Health Sciences
TesorRx Pharma LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Western University of Health Sciences, TesorRx Pharma LLC filed Critical Western University of Health Sciences
Priority to CN202110437727.6A priority Critical patent/CN113181118A/zh
Publication of CN108136217A publication Critical patent/CN108136217A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108136217B publication Critical patent/CN108136217B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127Liposomes
    • A61K9/1277Processes for preparing; Proliposomes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/335Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243Platinum; Compounds thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0034Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127Liposomes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

公开了用于制备和使用化学治疗剂的前体脂质体和脂质体制剂的组合物和方法。化学治疗剂的前体脂质体和脂质体制剂以及包含这种制剂的药物和剂型可以与膀胱癌和尿路上皮癌的治疗方案一起使用。因此,本发明的制剂,药物和剂型适合于通过膀胱内施用治疗膀胱癌和治疗尿路上皮癌。根据本发明的制剂包含(a)紫杉烷(例如紫杉醇,多西他赛)或顺铂,(b)第一磷脂,二棕榈酰磷脂酰胆碱(DMPC)和(c)第二磷脂,二肉豆蔻基磷脂酰甘油(DMPG)。所述前体脂质体制剂在与水性载体接触时形成脂质体。

Description

用于治疗膀胱癌的制剂
相关申请的交叉引用
本申请要求都在2016年1月7日提交的美国申请号62/275,941和62/275,936的优先权以及在2016年11月11日提交的美国申请号62/421,137的优先权。
技术领域
本文所述的发明涉及治疗药物的前体脂质体(proliposomal)和脂质体制剂,以及它们在治疗膀胱癌中的用途。
背景技术
用于治疗膀胱癌的化学治疗剂的施用通常涉及使用导尿管将试剂直接膀胱内施用到膀胱中。然而,这种施用化学治疗剂的方法对于使用化学治疗剂,例如紫杉醇
Figure BDA0001540710660000011
来治疗膀胱癌提供了障碍(Hadaschik等人,“Paclitaxel and cisplatin asintravesical agents against non-muscle-invasive bladder cancer”BJUI.101:1347-1355(2008);Mugabe等人,“Paclitaxel incorporated in hydrophobically derivatizedhyperbranched polyglycerols for intravesical bladder cancer therapy”BJUI.103:978-986(2008))。更具体地,紫杉醇例如在膀胱内的pH环境中沉淀,其中pH可以在4.5至8范围内,从而不再具有生物利用度。尽管紫杉醇可以溶解于二甲基亚砜(DMSO)中,但是在溶液中保持用于膀胱癌治疗的有效剂量的所需的DMSO的量不是药学上可接受的。因此,需要配制可以膀胱内施用而不在膀胱内沉淀的化学治疗剂的稳定制剂。通过本文所述的组合物和方法满足这种需求,其将治疗剂量的化学治疗剂配制成自由流动的前体脂质体粉末分散体,所述前体脂质体粉末分散体可以在宽范围的pH值下分散在水性介质中而不导致药物沉淀。
发明内容
本发明涉及用于制备和使用化学治疗剂的前体脂质体和脂质体制剂的组合物和方法。在各个方面,本发明的组合物是包含(a)紫杉烷或顺铂(作为化学治疗剂),(b)二棕榈酰磷脂酰胆碱(dipalmitoyl phosphatidylcholine) (DMPC)和(c)二肉豆蔻基磷脂酰甘油(DMPG)的前体脂质体粉末分散体。a:b:c的重量比为1:(1.3-4.5):(0.4-2.5)。
在本发明的一些方面,前体脂质体粉末分散体中的化学治疗剂是紫杉烷。用于制备本发明的制剂的紫杉烷的实例包括但不限于紫杉醇,多西他赛,卡巴他赛,替司他赛,DJ-927, TPI 287,拉罗他赛,奥他他赛,DHA-紫杉醇或它们的组合。例如,紫杉烷可以是(a)多西他赛,并且a:b:c的重量比是1:(1.3-2.0):(0.4-2.0)。
在其他方面,所述化学治疗剂是顺铂。除了(a)顺铂,(b)DMPC,和(c)DMPG之外,根据本发明的前体脂质体粉末分散体还可以包括(d)胆固醇,且具有1:(2.5-4.5):(1.0-2.5):(0.5-1)的重量比a:b:c:d。
在本发明的各个方面,所述前体脂质体粉末分散体可以包括(a)紫杉醇,(b)DMPC,和 (c)DMPG,其重量比a:b:c为1:(1.3-3.8):(0.4-1.5)。除了(a)紫杉烷或顺铂,(b)DMPC,和(c)DMPG 之外,本发明的制剂可以包括(d)胆固醇,并且具有1:(1.3-3.8):(0.4-1.5):(0.5-1)的a:b:c:d重量比。
在一些方面,本发明涉及包含本发明的任何前体脂质体粉末分散体和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在其他方面,本发明涉及包含任何药物组合物的剂型。
在其他方面,本发明涉及制备紫杉烷或顺铂的脂质体制剂的方法。脂质体制剂可以通过在水性载体中水合(hydrating)本发明的任何前体脂质体粉末分散体来制备。本发明的制剂还可以通过以下来制备:搅拌(sturring)、混合和/或均质化将第一脂质和第二脂质分散在水性载体中,以形成分散体;将紫杉烷或顺铂加入到第一脂质和第二脂质的分散体中;将第一脂质,第二脂质和紫杉烷或顺铂的分散体均质化,以获得掺入紫杉烷或顺铂的脂质体;将所述脂质体均质化以获得分散体中的纳米级脂质体颗粒;以及加入冷冻保护剂/冻干保护剂。在本发明的一些方面,分散体可以被冻干以形成前体脂质体粉末分散体。在其他方面中,均质化步骤可以在高压下和/或在高于脂质的Tc/Tg的温度下进行。
在本发明的一些方面中,本发明涉及包含本发明的任何脂质体制剂的药物组合物。
本发明还涉及通过向患者施用本发明的药物组合物来治疗患者中的膀胱癌的方法。在一些方面,所述药物组合物可以通过膀胱内递送来施用,并且所述癌症是非肌肉浸润性膀胱癌。在本发明的某些方面,紫杉烷或顺铂在4.5至8的任何pH下仍然在膀胱中可溶解。
本发明进一步涉及通过向患者施用本发明的药物组合物来治疗患者中的上尿路上皮癌的方法。在一些方面,为了治疗上尿路上皮癌,可将所述药物组合物施用到输尿管和/或肾盂中。
附图说明
图1显示了使用根据实施例6的用于制备脂质体的方法制备的掺入紫杉醇的脂质体在光学显微镜下的显微照片(条块表示100μm)。
图2显示了如实施例8中所讨论的,用10mg/kg前体脂质体膀胱内紫杉醇制剂(PLIP-001,在图2中称为TSD-001),15mg/kg PLIP-001,15mg/kg abraxane或盐水治疗的第0天,第7 天和第14天的动物体重图。
图3描述了在施用10mg/kg PLIP-001(PLIP-001在图3中称为TSD-001),15mg/kgPLIP-001,15mg/kg abraxane或盐水的第14天的动物的平均体重。
图4显示了在施用10mg/kg PLIP-001(PLIP-001在图4中称为TSD-001),15mg/kgPLIP-001,15mg/kg abraxane或盐水后的第14天的动物的平均膀胱重量。
图5显示了在动物施用10mg/kgPLIP-001(PLIP-001在图5中称为TSD-001),15mg/kg PLIP-001,15mg/kg abraxane或盐水后的第14天的平均肿瘤面积。
图6显示了在动物施用10mg/kg PLIP-001,15mg/kg PLIP-001,15mg/kg abraxane或盐水后的第14天使用组织学方法测量的平均肿瘤面积。
图7显示了在动物施用0.5mg/kg PLIP-001(PLIP-001在图7中称为TSD-001),2.5mg/kg PLIP-001,5mg/kg PLIP-001,5mg/kg紫杉醇(溶解于DMSO的纯紫杉醇)或盐水21天后的第21天的平均肿瘤面积。
图8显示了在21天的治疗下膀胱内施用0.5mg/kg PLIP-001,2.5mg/kg PLIP-001,5mg /kg PLIP-001,以及未配制的紫杉醇后的第21天的血浆紫杉醇水平。
图9显示了在PLIP-001和Abraxane施用到分离的雄性猪膀胱(离体)后,来自低温切片的组织中的紫杉醇浓度。
具体实施方式
本发明涉及用于制备和使用化学治疗剂的前体脂质体和脂质体制剂的组合物和方法。本发明的制剂以及包含这种制剂的药物和剂型可以与膀胱癌的治疗方案一起使用。本发明的制剂、药物和剂型适合于将化学治疗剂施用于膀胱以及输尿管和肾盂。本发明的制剂、药物和剂型可以防止配制的化学治疗剂在对膀胱内环境典型的pH水平下在尿液水环境中沉淀,其范围可以是4.5至8。
通过本发明的组合物和方法治疗各种类型的膀胱癌,包括非肌肉浸润性膀胱癌(NMIBC)。本发明的前体脂质体和脂质体制剂可以用于治疗尿路上皮癌,也称为移行性细胞癌。尿路上皮癌是最常见的膀胱癌类型,约占全部膀胱癌的90%。这些癌症通常在大约75%的病例中是浅表性的,在这些病例中它们没有进入膀胱壁的更深层。本发明的制剂也可以用于治疗其他类型的膀胱癌,例如鳞状细胞癌或腺癌。
大多数浅表性肿瘤(即局限于膀胱黏膜和固有层的那些肿瘤)由泌尿科医师通过膀胱镜手术和选择性膀胱内药物疗法进行治疗。虽然这些浅表性膀胱癌经常复发并且可能是多灶性的,但是治疗后的存活率通常是优异的。然而,如果癌症已经穿透膀胱的肌肉壁(即,癌症已经发展成侵入膀胱壁的更深层的肌肉浸润性膀胱癌,并且可能接近器官例如子宫,阴道,或前列腺),预后通常更差。大约50%患有肌肉浸润性膀胱癌的患者将发展成转移性疾病。因此,对用于膀胱癌的有效治疗存在明确需要。
前体脂质体和脂质体制剂
本发明治疗膀胱癌的方法包括施用包含水溶性差的掺入药物的脂质体的脂质体悬浮液。所述脂质体可以是纳米级脂质体。脂质体掺入化学治疗剂或化学治疗剂的组合。脂质体可通过水合本发明的前体脂质体粉末分散体来制备。前体脂质体粉末分散体是干燥粉末,所述干燥粉末可以如本领域已知的那样形成,例如通过铸膜方法,例如以下实施例1-4和美国专利号9,445,995和6,759,058中所述,其全部内容在此引入。脂质体制剂可以通过将前体脂质体粉末分散体分散在水性载体中来制备。
脂质体制剂也可以通过如下面实施例6中所述的不含有机溶剂的方法来制备。通常,可以通过搅拌,混合和/或均质化来将第一脂质和第二脂质分散在水性载体中以形成分散体。然后可以将紫杉烷或顺铂加入到第一脂质和第二脂质的分散体中,并且可以将第一脂质,第二脂质和紫杉烷或顺铂的分散体均质化以获得掺入紫杉烷或顺铂的脂质体。可以将脂质体进一步均质化以获得分散体中的纳米级脂质体颗粒。可以将冻干保护剂/冷冻保护剂加入到分散体中。如果需要,可以将分散体冻干以获得紫杉烷或顺铂的前体脂质体粉末分散体。更通常,这种方法可以用于与任何脂质或磷脂组合形成水溶性差的药物(例如紫杉烷或顺铂)的制剂。可以用于制备本发明的制剂的方法的合适磷脂的实例包括二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC),二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPSC),二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC),蛋磷脂酰胆碱(egg-PC),大豆磷脂酰胆碱(soy-PC),二肉豆蔻基磷脂酰甘油(DMPG),1,2-二肉豆蔻酰基-磷脂酸(DMPA),二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG),磷酸二棕榈酰酯(DPP),1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸-外消旋-甘油(DSPG),1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷脂酸(DSGPA),磷脂酰丝氨酸(PS)和鞘磷脂(SM),或任何上述磷脂的组合。
本发明的前体脂质体粉末分散体和脂质体包括磷脂组分,所述磷脂组分包括第一磷脂二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)和第二磷脂二肉豆蔻基磷脂酰甘油(DMPG)。
本发明的前体脂质体粉末分散体至少包含(a)化学治疗剂,(b)第一磷脂DMPC和(c)第二磷脂DMPG,这些化合物互相分散并在与水溶液接触时形成脂质体。例如,前体脂质体粉末分散体可以包含(1.0):(1.0-4.5):(0.4-2.5)范围的(a):(b):(c)的重量/重量比的(a),(b)和(c)。除了成分(a)-(c)之外,前体脂质体粉末分散体还可以包含(d)胆固醇。因此,前体脂质体制剂可以包含(a):(b):(c):(d)的重量/重量比在(1.0):(1.0-4.5):(0.1-2.5):(0.1-2.0)范围的(a)、(b)、(c)、(d)。
当将磷脂例如DMPC和DMPG置于水环境中时,亲水性头部以线性构型聚集在一起,其疏水性尾部基本上相互平行对齐。第二行分子随后与第一行尾对尾对齐,因为疏水性尾部试图避免水环境。为了最大程度地避免与水环境接触,即在双层的边缘,同时使表面积与体积之比最小化,从而实现最小的能量构象,将称为磷脂双层或薄层的两行磷脂汇聚到脂质体中。在如此进行时,脂质体(或磷脂球体)捕获一些水性介质,并且在球体的芯中可能有其中溶解或悬浮的任何物质。这包括本发明的前体脂质体粉末分散体的各种组分,例如化学治疗剂。
根据本发明的方法,在通常通过膀胱内递送到膀胱中,来施用一种或多种化学治疗剂之前,将包含化学治疗剂的前体脂质体粉末分散体在水或另一种药学上可接受的水性载体(例如盐水)中水合,使得形成脂质体,将化学治疗剂包封在脂质体内。除了水或水性载体之外,所得的脂质体悬浮液可包含冻干保护剂/冷冻保护剂,例如甘露醇,蔗糖或海藻糖。通常,脂质体制剂的冻干保护剂/冷冻保护剂组分与药物组分(冻干保护剂/冷冻保护剂:药物)的w / w比率为约(0.5:1.0)至(5.5:1.0)。例如,用于根据本发明的治疗方法的脂质体悬浮液可以通过混合包含(1.0):(1.0-4.5):(0.1-2.5):(0.5-5.5)的(a)化学治疗剂,(b)DMPC和(c)DMPG,和(e)冻干保护剂/冷冻保护剂的前体脂质体粉末分散体来制备。
本发明的前体脂质体和脂质体制剂可以适应本领域已知的用于治疗膀胱癌的各种化学治疗剂。本发明包括但不限于紫杉烷,包括紫杉醇,多西他赛,DJ-927,TPI 287,拉罗他赛,奥他他赛,DHA-紫杉醇,卡巴他赛和替司他赛,顺铂或它们的混合物,以及与其他化学治疗剂的组合。
例如,包含紫杉烷衍生物药物的本发明的前体脂质体粉末分散体(“脂质体膀胱内紫杉烷 (PLIT)制剂”)可以包含(a)紫杉烷、(b)第一磷脂DMPC和(c)第二磷脂DMPG。前体脂质体粉末分散体可以包含选自(1.0):(1.0-3.8):(0.2-1.5)或其中的任何比率的(a):(b):(c)的重量/重量比的 (a)、(b)、(c)。例如,在本发明的前体脂质体分散体中,紫杉醇:DMPC:DMPG的(a):(b):(c)的重量/重量比可以分别是(1.0):(3.15):(1.00);或(1.0):(3.20):(1.05);或(1.0):(3.25):(1.10);或 (1.0):(1.43):(0.567)比率或其中所含的任何比率。本发明的前体脂质体粉末分散体可以基本上由(a)紫杉烷、(b)DMPC和(c)DMPG以所示的重量/重量比中的任何一个组成,或它可以由那些组分以那些比率中的任何一个比率组成。
除了紫杉烷、DMPC和DMPG之外,本文所述的前体脂质体粉末分散体还可以包含(d)胆固醇。因此,根据本发明的前体脂质体粉末分散体可以包含选自(1.0):(1.0-3.8):(0.4-1.5)(0.5-1) 或其中包含的任何比率的(a):(b):(c):(d)的重量/重量比。例如,本发明的前体脂质体粉末分散体可以包含(a)紫杉醇,第一磷脂(b)DMPC,第二磷脂(c)DMPG和(d)胆固醇,其中(a):(b):(c):(d) 的重量/重量比是(1.0):(3.40):(1.25):(0.70);或(1.0):(3.45):(1.30):(0.75);或 (1.0):(3.50):(1.35):(0.80);或其中包含的任何比率。本发明的前体脂质体粉末分散体可以基本上由(a)紫杉烷、(b)DMPC、(c)DMPG和(d)胆固醇以所示重量/重量比中的任何一个组成,或它可以由那些组分以那些比率中的任何一个比率组成。
或者,本发明的前体脂质体和脂质体制剂可以例如包含通常称为顺铂的顺式二胺二氯铂 (II)作为化学治疗剂。包含顺铂的本发明的前体脂质体粉末分散体(“前体脂质体膀胱内顺铂 (PLIC)制剂”)可以包含(a)顺铂、(b)第一磷脂DMPC和(c)第二磷脂DMPG。顺铂的前体脂质体粉末分散体可以包含选自(1.0):(2.5-4.5):(1-2.5)或其中的任何比率的(a):(b):(c)的重量/重量比的 (a)、(b)、(c)。例如,(a):(b):(c)的重量/重量比可以是(1.0):(2.7):(1.2);或(1.0):(2.75):(1.21);或 (1.0):(2.76):(1.22);或(1.0):(2.77):(1.2);或(1.0):(2.78):(1.22);或其中包含的任何比率。在(a) 为顺铂的前体脂质体粉末分散体中,(a):(b):(c)的重量/重量比可以是(1.0):(2.7):(1.2);或 (1.0):(2.75):(1.21);或(1.0):(2.76):(1.22);或(1.0):(2.77):(1.2);或(1.0):(2.78):(1.22);或其中包含的任何比率。本发明的前体脂质体粉末分散体可以基本上由(a)顺铂、(b)DMPC和(c)DMPG 以所示的重量/重量比中的任何一个组成,或它可以由那些组分以那些比率中的任何一个比率组成。
在根据本发明的前体脂质体粉末分散体中,(a):(b):(c)的重量/重量比可以是(1.0):(4.1):(2.1);或(1.0):(4.15):(2.25);或(1.0):(4.16):(2.26);或(1.0):(4.17):(2.27);或其中的任何比率。在(a)为顺铂的前体脂质体分散体中,第一磷脂(b)为DMPC,且第二磷脂(c)为DMPG, (a):(b):(c)的重量/重量比可以是(1.0):(4.1):(2.1);或(1.0):(4.15):(2.25);或(1.0):(4.16):(2.26);或 (1.0):(4.17):(2.27);或其中包含的任何比率。本发明的前体脂质体粉末分散体可以基本上由(a) 顺铂、(b)DMPC和(c)DMPG以所示重量/重量比中的任何一个组成,或它可以由那些组分以那些比率中的任何一个比率组成。
除了(a)顺铂、(b)DMPC和(c)DMPG之外,顺铂的前体脂质体粉末分散体可以包含(d)胆固醇。这种顺铂制剂可以包含选自(1.0):(2.5-4.5):(1.0-2.5):(0.5-1)或其中包含的任何比率的 (a):(b):(c):(d)的重量/重量比。(a):(b):(c):(d)的重量/重量比可以是例如(1.0):(2.7):(1.2):(0.6);或 (1.0):(2.75):(1.21):(0.65);或(1.0):(2.76):(1.22):(0.7);或(1.0):(2.77):(1.2):(0.75);或 (1.0):(2.78):(1.22):(0.8);或(1.0):(2.78):(1.22):(0.9);或其中包含的任何比率。
本发明的脂质体粉末分散体和脂质体制剂可以用于施用到需要化学治疗剂(例如紫杉醇、多西他赛、顺铂等)的个体的药物制剂或剂型。可以施用根据本发明的药物制剂或剂型以治疗膀胱癌。更特别地,在治疗应用中,药物制剂或剂型以足以去除所有症状或至少部分缓解膀胱癌症状中的至少一种的量向已患有膀胱癌的个体施用。对于该用途有效的化学治疗剂剂量取决于膀胱癌的阶段、严重性和过程、先前的治疗、个体的健康状况、体重、对药物的反应和/或治疗医师的判断。
如下面实施例1-4所述,为了制备化学治疗剂的前体脂质体粉末分散体,可以将化学治疗剂(例如紫杉醇)与脂质一起溶解在乙醇中,并且可以使用旋转闪蒸蒸发器浇铸薄膜。可以使用生理盐水或水或任何其他药学上可接受的水性载体使干燥的薄膜水合。这提供脂质体分散体。然后使用EmulsiflexTM-C5(Avestin,Canada)或类似的高压均质器或本领域已知的可获得所需粒度的合适仪器来挤出脂质体分散体。在本发明的脂质体中,颗粒可以是纳米级。本发明的脂质体通常可以具有高达700nm,高达500nm,高达250nm,高达200nm或高达100 nm的粒度。
对于本发明的脂质体分散体,可以在外部加入合适的赋形剂并进行冻干以获得前体脂质体粉末分散体,即赋形剂“外部”加入。例如,根据本发明的前体脂质体粉末分散体可以与至少一种药学上可接受的赋形剂混合。示例性的药学上可接受的赋形剂包括但不限于:(a)冷冻保护剂,填充剂或增量剂,例如甘露醇,淀粉,乳糖(例如乳糖一水合物),蔗糖,葡萄糖,海藻糖和硅酸;(b)粘合剂,例如纤维素衍生物,包括羟丙基甲基纤维素(其可作为BenecelTM 市售可得),羟丙基纤维素(其可作为KlucelTM(Ashland Inc-Covington,KY)市售可得),淀粉,藻酸盐,明胶,聚乙烯吡咯烷酮,蔗糖和阿拉伯树胶,(c)吸收促进剂,例如季铵化合物。
膀胱内递送
本发明的制剂和剂型可以用于将治疗剂量的化学治疗剂(例如紫杉烷,例如紫杉醇,多西他赛和/或顺铂)膀胱内递送到膀胱。膀胱内治疗包括通过插入尿道导管将治疗剂直接灌输到膀胱中。在膀胱内灌输的典型方案中,无菌导管插入可以用直导管或coude(男性)导管进行。将膀胱完全排空。包含治疗的适配器的导管尖端注射器可以在注射器的尖端插入以防止在插入期间溢出或飞溅。或者,可以将连接到药瓶的上漆的管插入导管中,并且通过重力流或温和注射来灌输化学治疗剂。可以评估患者的疼痛。注射器或药瓶可以用管完好地取出。将导管挤压封闭,并按照指示取出导管或插塞导管,使用无菌纱布帮助吸收任何液滴。如果患者在保持溶液时有困难,可以使用Foley导管,并且在灌输之后可以将导管塞插入导管的末端,从而使化学治疗剂在膀胱中保留规定的时间量,通常为一至两个小时。取决于患者的移动性,导管可以在期望的停留时间结束时被取出,或患者可以连接到尿液引流袋以排出化学治疗剂。一旦导管被适当地取出并丢弃,检查会阴区域是否有泄漏,并重新评估患者的疼痛。指示患者尝试保留治疗1至2小时。从历史上看,患者被指示躺下并每隔15分钟从左侧向右侧重新定位,然后再向后从导管移动气泡,并确保药物与膀胱的所有区域接触。
在下面的美国专利申请公开中描述了用于部署那些设备到膀胱中的膀胱内药物递送设备和方法的实施例:U.S.20150165178;U.S.2012/0203203;U.S.2012/0089122;U.S.2012/0089121;U.S.2011/0218488;U.S.2011/0202036;U.S.2011/0152839;U.S.2011/0060309; U.S.2010/0331770;U.S.2010/0330149;U.S.2010/0003297;U.S.2009/0149833;和U.S. 2007/0202151,其全部在此全文并入。
除了膀胱内递送之外,本发明的制剂和剂型可以使用本领域已知的合适的导管设备和方案施用到输尿管和/或肾盂中。化学治疗剂的这种递送可以用于治疗例如上尿路上皮癌。
当本发明的制剂和剂型从药物递送设备递送时,制剂和剂型可以各种形式包封在设备中,这取决于设备将前体脂质体粉末分散体、脂质体制剂、药物制剂和剂型释放到膀胱内的尿和/ 或肾脏系统的其他部分中的具体机制。剂型可以是固体、半固体或其他非液体形式(例如粉末或压缩粉末),其有利地可以促进在使用该设备之前稳定地储存化学治疗剂,并且有利地可以允许以比如果试剂以液体溶液或悬浮液的形式包封的可能体积小的体积储存化学治疗剂。
当使用本发明的制剂时,在膀胱内递送之后,化学治疗剂可以在典型的4.5-8的尿液pH 下保持可溶解于人尿液中。而且,本发明的制剂允许化学治疗剂粘附到膀胱壁,并且化学治疗剂可以在排出的尿液中持续长达3天。
肠胃外施用
本发明的前体脂质体粉末分散体、脂质体制剂、药物制剂和剂型可以用于制备用于将治疗剂量的紫杉烷(例如紫杉醇或多西他赛)或顺铂的肠胃外递送到患者的组合物。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、肌肉内、脑室内或皮下途径施用。
可以按常规形式制备可注射组合物,其为液体溶液或悬浮液,适于在注射之前在液体中溶解或悬浮的固体形式,或作为乳液。注射剂、溶液和乳液还可以包含一种或多种赋形剂。合适的赋形剂例如是水,盐水,右旋糖,甘油或乙醇。此外,如果需要的话,待施用的药物组合物还可以包含少量的无毒辅助物质,例如润湿剂或乳化剂,pH缓冲剂,稳定剂,增溶剂和其他这样的试剂,例如醋酸钠,脱水山梨糖醇单月桂酸酯,三乙醇胺油酸酯和环糊精。
本领域已知的合适的药物赋形剂可以与根据本发明的前体脂质体粉末分散体组合以产生药物制剂或剂型。
联合治疗
根据本发明的脂质体粉末分散体、脂质体制剂、药物制剂和剂型可与其他治疗剂组合施用,所述其他治疗剂降低严重性或消除与化学疗法有关的副作用,包括恶心,呕吐,食欲不振,腹泻,味觉丧失,可能发生的脱发,麻木/刺痛/寒冷/手脚发蓝变色,手臂或腿部疼痛/发红/肿胀,反射消失,失去平衡,走路困难,肌肉痉挛/抽搐/虚弱,颈部或背部疼痛,口腔或舌部疼痛,关节疼痛,腿部或脚部肿胀,精神/情绪改变,头痛,心跳快速/不规则,尿出血,看起来像咖啡渣的呕吐物,黑血或血便,排尿疼痛或困难,腰部或侧面疼痛或视力改变(例如,视力模糊,看颜色困难)。
在某些情况下,将根据本发明的前体脂质体粉末分散体、药物制剂和剂型与另一种治疗剂一起施用是合适的。例如,紫杉醇前体脂质体粉末分散体可以药物制剂或剂型的形式使用,所述药物制剂或剂型作为包括吉西他滨的组合疗法的一部分施用,用于治疗膀胱癌。根据本发明的顺铂前体脂质体粉末分散体可以用于作为包括5-氟尿嘧啶(5-FU)的组合疗法的一部分施用的药物制剂或剂型,用于治疗膀胱癌。紫杉醇前体脂质体粉末分散体也可以用于作为包括前体脂质体顺铂制剂的组合疗法的一部分施用的药物制剂或剂型。
在使用联合疗法的情况下,其他试剂不必在相同的药物组合物中施用,并且可以由于不同的物理和化学特性而通过不同的途径施用。例如,可以根据确定的方案进行初始施用,然后基于观察的效果,可以进一步修改剂量、施用模式和施用次数。
根据癌症的阶段和类型、患者的状况以及所使用的化合物的实际选择,多种治疗剂可并发(例如同时、基本上同时或在相同治疗方案内)或依次施用。在治疗方案期间确定施用顺序和每种治疗剂的重复施用次数可以基于对所治疗疾病的评估和个体的状况。
这种组合的单种化学治疗剂以分开的或组合的药物制剂依次或同时施用。例如,(多个) 单种治疗剂可以以组合的药物制剂同时施用。本领域技术人员将理解已知治疗剂的合适剂量。
根据本发明的组合可方便地表现为以药物组合物的形式与药学上可接受的稀释剂或载体一起使用。
实施例
以下实施例1-4分别描述了前体脂质体膀胱内紫杉醇(PLIP)制剂PLIP-003、PLIP-006、 PLIP-021和PLIP-023的制备。上述PLIP制剂的制备通过如下进行:分别将如表1-4中所述的每种制剂的所有药物和脂质成分通过放置在50℃的水浴中一起溶解在500mL圆底烧瓶中的10mL乙醇中。通过使用旋转闪蒸蒸发器(Buchi)在减压下干燥,从脂质成分和乙醇混合物中浇铸薄膜。在室温下和在减压(150至200毫巴)下完全干燥该膜过夜。通过将烧瓶置于50℃的水浴中,使用20mL盐水使膜水合。使用Buchi旋转闪蒸蒸发器旋转烧瓶,导致形成脂质体分散体。然后在室温下在高压下使用Nano
Figure BDA0001540710660000091
高压均质器均质化该分散体以产生尺寸范围为100-200nm大小颗粒的单层脂质体。然后使用
Figure BDA0001540710660000092
-C5均质器挤出制备的分散体。使用孔径大小从1μm减小到0.2μm的聚碳酸酯薄膜进行挤出。最终挤出时,分别加入如表1-4中所述的量的甘露醇,并将该混合物冻干以获得前体脂质体粉末分散体。
实施例1.PLIP-003。
表1
成分
紫杉醇(mw=853.9Da) 24mg
DMPG(mw=688.9Da;Tc=23℃) 25.2mg
DMPC(mw=677.9Da;Tc=24℃) 77.5mg
甘露醇 100mg
实施例2.PLIP-006。
表2
成分
紫杉醇(mw=853.9Da) 25.2mg
DMPG(mw=688.9Da;Tc=23℃) 33.8mg
DMPC(mw=677.9Da;Tc=24℃) 84.4mg
胆固醇(mw=386.65Da) 20.1mg
甘露醇 27mg
实施例3.PLIP-021。
表3
成分
紫杉醇 27.4mg
DMPG 12.2mg
DMPC 90.4mg
甘露醇 50mg
实施例4.PLIP-023。
表4
成分
紫杉醇 25.2mg
DMPG 18.2mg
DMPC 90.4mg
甘露醇 50mg
实施例5.体外分析PLIP-003、PLIP-006、PLIP-021和PLIP-023的效果。采用基于磺基罗丹明B(SRB)测定方法来测定紫杉醇制剂PLIP-003、PLIP-006、PLIP-021和PLIP-023对人膀胱上皮癌细胞系T24(
Figure BDA0001540710660000101
HTB-4TM)、5637(
Figure BDA0001540710660000102
HTB-9TM)和HT-1376(
Figure BDA0001540710660000103
CRL-1472TM)的抑制浓度(IC)50。为了用于测定,紫杉醇制剂在生理盐水中再分散至2-5mg/mL 紫杉醇的浓度。分散的制剂形成澄清的溶液。纯的未配制的紫杉醇溶液([6mg/100μL]在DMSO 中)用作对照制剂。
将细胞以5×103个细胞/孔的密度接种到96孔板上,并在37℃和5%CO2下培养24h。将分散的紫杉醇制剂和纯药物对照物加入到铺板的细胞培养物的培养基中。在用制剂处理72小时的时间后,吸出培养基。通过向各孔中缓慢加入100μl的10%三氯乙酸(TCA)来固定处理过的细胞,并将板在4℃温育至少1小时。在温育后,将板用自来水洗涤五次,而不使水直接流入孔中,将板在室温下风干,并且将50μl的0.4%w/v SRB(在1%乙酸中)加入到每个孔中。将板在室温下在SRB溶液中温育20至30分钟。之后,板用1%乙酸洗涤5次,并在室温下风干。通过将100μl的10mM Tris碱溶液加入到每个孔中并允许Tris溶液溶解SRB经5至10分钟来检测结合蛋白质的SRB。使用酶标仪在565nm的吸光度下读板。表5报告PLIP-003、PLIP-006、PLIP-021、PLIP-023和未配制的紫杉醇的IC50值。
表5
Figure BDA0001540710660000111
实施例6.如下进行用于制备纳米级水溶性差的掺入药物的脂质体囊泡的替代方法:
1.称量脂质成分DMPC和DMPG并转移到水性介质中;
2.水性介质保持在比脂质成分的Tc/Tg更高的温度;
3.通过使脂质混合物静置或通过搅拌、混合和/或均质化来使脂质水合;
4.将水溶性差的药物(改性紫杉烷,例如紫杉醇,或含铂药物,例如顺铂)加入到脂质分散体中,使药物和脂质的混合物继续搅拌,
5.为了获得脂质体,将包含脂质和药物的分散体在高压和高于脂质的Tc/Tg的温度下均质化。均质化持续到药物被掺入到脂质体中。通过在显微镜下观察脂质体没有任何药物晶体来证实药物掺入;
6.一旦药物被掺入,随后的均质化在高于、处于或低于脂质的Tc/Tg下轻微进行,以获得掺入纳米级药物的脂质体囊泡;和
7.将合适的冷冻保护剂/冻干保护剂加入到脂质体囊泡中,接着冻干以获得载药前体脂质体。
制备掺入纳米级药物的脂质体囊泡的上述替代方法的优点包括不需要使用有机或苛性溶剂,例如乙醇、氯仿和/或醚。此外,这种方法涉及过程中所包括的单元操作数量较少和/或仪器数量较少。与实施例1-4中所述的铸膜方法相比(两小时制备时间,与两天相比),该方法还需要显著较少的时间来获得掺入药物的脂质体囊泡。这是一个简单、快速和经济的方法。
实施例7.PLIP-001。如实施例6中所述制备掺入纳米级水溶性差的药物的脂质体囊泡的替代方法用于制备包含表6中所述成分的紫杉醇制剂PLIP-001。基于重量/重量比,PLIP成分的量可以按照PTX的量按比例调节。
表6.PLIP-001
成分
紫杉醇 6mg
DMPG 3.4mg
DMPC 8.6mg
甘露醇 15mg
无菌水 1mL
实施例8.PLIP-001在原位小鼠模型中对人膀胱癌的功效评估。紫杉醇(PTX)对转移性膀胱癌具有高度活性;因此,PTX是辅助膀胱内疗法预防NMIBC复发和进展的潜在候选物。 PTX是亲脂性的。现有制剂(例如紫杉醇/
Figure BDA0001540710660000121
不溶解于酸性膀胱内水环境。如果适当地配制,PTX的亲脂特性为尿路上皮渗透和递送到粘膜下创造了潜力。以下研究证明PLIP-001 配制的PTX成功递送至膀胱,以及PLIP-001概念的体外和体内证明。
利用原位小鼠模型评估紫杉醇的前体脂质体制剂。膀胱癌细胞系如KU7/GFP克隆6用于这些研究。KU7/GFP克隆6用绿色荧光蛋白稳定转染,且这些细胞系用于所有体内研究。Watanabe等人描述了KU7/GFP克隆6细胞系。将细胞在补充有10%FCS的改良的最小必需培养基中培养,并在37℃,5%CO2下温育。由KU7/GFP细胞产生的肿瘤在体外产生。将肿瘤植入雌性小鼠的膀胱中。在植入KU7/GFP肿瘤后的七天,将小鼠分成以下四个实验治疗组,其中小鼠接受以下任一:10mg紫杉醇/kg体重(10mg/kg),以PLIP-001(第1组)施用; 15mg/kg,以PLIP-001(第2组)施用;15mg/kg,以由Celgene公司制造的紫杉醇的纳米颗粒白蛋白结合形式的Abraxane(第3组)施用;或盐水(第4组)。在肿瘤植入后第0天,第7天和第14天施用前述制剂和盐水。
表7、8和9分别显示治疗第0天、第7天和第14天第1-4组各组中动物的体重和平均体重值。图2显示治疗第0天、第7天和第14天的动物体重图。
表7.在肿瘤植入后,PLIP-001治疗第0天的体重。
Figure BDA0001540710660000131
表8在肿瘤植入后PLIP-001治疗的第7天的体重。
Figure BDA0001540710660000132
表9在肿瘤植入后PLIP-001治疗的第14天的体重(图3)。
Figure BDA0001540710660000141
在表10中报告在治疗的第14天测量的第1-4组中治疗的小鼠的膀胱重量(B-W)。表6中报告各组的膀胱重量比较的统计学分析,并且在表11中报告处理组的膀胱大小。
表10膀胱重量
Figure BDA0001540710660000142
表11统计学分析
G1vsG2 GlvsG3 G3vsG2
T-检验 0.223 0.832 0.146
G1vsG4 G2vsG4 G3vsG4
T-检验 0.167 0.257 0.140
表12.膀胱大小
Figure BDA0001540710660000151
(在表中,*表示肿瘤存在于膀胱外部,当小鼠接种癌细胞时可能由于膀胱穿孔而发生。当肿瘤位于膀胱外时,化学治疗药物的膀胱内施用预计不会对肿瘤产生影响)。
实施例9.通过测量肿瘤面积评估紫杉醇前体脂质体制剂的功效。KU-7-GFP人膀胱癌原位
Figure BDA0001540710660000152
模型:表达GFP的人膀胱癌细胞系KU-7来自Anticancer Inc.细胞系库。使用 KU-7-GFP膀胱癌细胞通过膀胱内灌输移植动物。用氯胺酮、乙酰丙嗪和赛拉嗪的混合物麻醉动物。手术区域使用碘和酒精进行消毒。在下腹中线切割之后适当暴露膀胱后,膀胱用24-G 血管导管插入导管,引流并通过在膀胱衬里中用针头划割来损害。将KU-7-GFP(100μl 2×106) 细胞灌输到膀胱中,并放置荷包环以封闭尿道,以使细胞保留1小时。然后使膀胱返回到腹腔。将腹壁切口用6-0外科缝合线在一个层中封闭。在手术期间将动物保持在异氟烷麻醉下。上述操作的所有程序在7倍放大显微镜(Olympus)下进行。在HEPA过滤下将动物保存在屏障设施中。
在肿瘤细胞植入后的第7天,在肿瘤植入后第7天将五十只动物随机分成五组(每个治疗组包含n=10只小鼠)。所有小鼠的所有组的治疗在同一天开始,这被认为是研究第0天。表 13和14显示了研究设计。使用24G/3/4”IV导管膀胱内灌输新鲜重构制剂(50μL),并使用荷包环结来打结尿道。该制剂在膀胱中保持1小时。在1小时后,将荷包环切开,使膀胱自然排空。在第0天、第7天、第14天和第21天采取相同的程序。
结果:与盐水组相比,用前体脂质体紫杉醇(PLIP)制剂治疗的动物显示膀胱肿瘤面积减少。纯药物治疗组由于在溶解状态中(在DMSO中)的药物的过度暴露而损失六只动物,这可能导致全身毒性。图8显示了平均血浆水平,其显示PLIP组中药物最小程度地暴露于全身循环,而溶解于DMSO中的纯药物导致显著的紫杉醇血浆水平,这对于治疗膀胱癌是不期望的。基于较低剂量,研究较高剂量并与市售产品
Figure BDA0001540710660000162
进行比较。10mg/kg的PLIP制剂显示与15mg/kg的Abraxane类似的效果。增加PLIP制剂的剂量显示肿瘤面积的一些减少(图5、 6和7)。
表13.研究设计1
试剂 剂量 计划 途径 n
1 PLIP-001 0.5mg/ 每周一次,持续4周 膀胱内灌输 10
2 PLIP-001 2.5mg/ 每周一次,持续4周 膀胱内灌输 10
3 PLIP-001 5mg/k 每周一次,持续4周 膀胱内灌输 10
4 在DMSO中的PTX 5mg/k 每周一次,持续4周 膀胱内灌输 10
5 盐水 50μL 每周一次,持续4周 膀胱内灌输 10
表14.研究设计2
试剂 剂量 计划 途径 n
1 PLIP-001 10mg/kg 每周一次,持续2周 膀胱内灌输 10
2 PLIP-001 15mg/kg 每周一次,持续2周 膀胱内灌输 10
3 Abraxane 15mg/kg 每周一次,持续2周 膀胱内灌输 10
4 盐水 50μL/小鼠 每周一次,持续2周 膀胱内灌输 10
表15.研究设计1在治疗四周后的最终肿瘤面积
Figure BDA0001540710660000161
表16.研究设计1在治疗四周后的最终组织学肿瘤面积
Figure BDA0001540710660000171
(在表中,*表示膀胱外的肿瘤)。
表17研究设计2在治疗两周后的通过荧光方法测量的最终肿瘤面积
Figure BDA0001540710660000172
实施例10.在研究设计2的小鼠中评估转移瘤:第1组(10mg/kg PLIP-001),第2组(15mg /kg PLIP-001)和第3组(15mg/kg Abraxane)。表18、19和20显示在以下器官中的转移瘤发生率:肝脏、肠系膜、膈肌和肾脏。
表18.第1组中的转移瘤
Figure BDA0001540710660000181
表19.第2组中的转移瘤
Figure BDA0001540710660000182
表20.第3组中的转移瘤
Figure BDA0001540710660000191
表21.原位裸鼠模型的膀胱内治疗反应总结
Figure BDA0001540710660000192
(EV=膀胱外扩张,即存在于膀胱外的肿瘤)
实施例11.紫杉醇(PTX)对转移性膀胱癌具有高度活性,因此,PTX是辅助膀胱内疗法预防N-IBC复发和进展的潜在候选物。PTX是亲脂性的。现有制剂(例如紫杉醇/Abraxane)不溶解于典型的酸性膀胱内水环境。如果适当地配制,PTX的亲脂特性为尿路上皮渗透和递送到粘膜下创造了潜力。该研究的目的是证明PTX成功递送(使用脂质体)到膀胱,以及PLIP的概念的体外和体内证明。
使用体外人膀胱癌细胞系(T24,KU7)来评估IC50值。体内研究在接种KU7-GFP细胞系的裸鼠中进行。在KU7膀胱肿瘤接种后,进行每周(x3)膀胱内灌输(3组:PLIP;PTX/DMSO或PTX/Nab;或盐水)并测量肿瘤生长。药代动力学研究在大鼠种类中进行。还进行GLP依从的急性放大毒理学/毒代动力学研究。比较(PLIP vs Abraxane)离体猪膀胱模型和PTX组织浓度。
研究No.1结果:抵抗T24人膀胱癌的IC50对于PLIP是0.01,而对于Abraxane PTX制剂是0.5μg/mL。PLIP在显著减小肿瘤大小和改进对盐水的完全反应率方面是有效的(图7/表 22)。PLIP证明全身暴露于PTX大大降低,死亡率低于PTX/DMSO。在体外分离的猪膀胱模型中,PLIP(vs Abraxane)允许紫杉醇从膀胱内脂质体优异地转移到膀胱的尿道上皮和尿道上皮下层,而没有全身暴露和相关的毒性。参见图9。
表22
Figure BDA0001540710660000201
(*在该表中表示与盐水对照物相比在统计学上显著p<0.05的差异)
这些数据确定PLIP在体外条件下在人尿中稳定,在体外和体内对试验的人膀胱肿瘤细胞系具有高度活性,并且递送比Abraxane更高浓度的PTX到尿道上皮组织,具有可忽略的全身水平的PTX。
实施例12.使用猪膀胱的体外粘附/融合/运输研究。
实验:从屠宰场(n=3)(雄性)获得新鲜的猪膀胱,并排出任何剩余的尿液。将切除的膀胱用冷的Kerb缓冲剂洗涤。然后洗涤切下的膀胱并储存在冷Tyrode缓冲剂中,直到实验开始。膀胱用5mL Tyrode缓冲剂(37℃)通过尿道冲洗。将冻干的PLIP和Abraxane制剂(6mg)用5mL Tyrode缓冲剂(37℃)重构。通过尿道将制剂(5mL)加入膀胱中。加入后立即将0.5mL施用的制剂取出以评估零时(T0)样品。然后将膀胱置于150mL Tyrode缓冲剂(37℃)中,在水浴振荡器中2小时。在2小时后,排空膀胱内容物并收集样品用于分析。用5mLTyrode缓冲剂(37℃) 冲洗膀胱并收集样品用于分析(该步骤进行两次)。切开膀胱并切出小部分(重量为1-2g)。将一片组织用于冷冻切片机切片。在-15℃下进行冷冻切片机,将10×50μm切片收集到Eppendorf 管中进行提取。切割切片直至到达肌肉层(在其中难以切断)。使用甲醇进行切片或整片的提取,并使用用于测定制剂的HPLC方法进行分析。结果显示,PLIP可以穿透尿路上皮层,并且能够比Abraxane更好地递送药物(图9)。然而,在尿路上皮层的2500μm以外没有观察到药物水平。固有层深度为2500μm。这是一个重要的发明属性,因为PLIP制剂将紫杉醇递送至膀胱非肌肉的解剖限度以防止肿瘤生长,同时不显示药物的任何全身暴露。
实施例13.在雌性Sprague-Dawley大鼠中的药代动力学研究。在雌性SpragueDawley大鼠的膀胱中进行单次膀胱内施用之后,评估血浆PK曲线和PLIP相对于
Figure BDA0001540710660000217
的膀胱浓度。PLIP和Abraxane一次施用2小时膀胱内灌输期,接着进行24小时投配后(post-dose) 观察期(表23)。
表23雌性SD大鼠膀胱内PK研究设计
Figure BDA0001540710660000211
*目标剂量是基于约0.300kg/大鼠的平均体重。
在异氟烷麻醉下,通过使用尿道膀胱内导管接着进行2小时膀胱保留期缓慢推注到膀胱中,对动物施用PLIP或
Figure BDA0001540710660000212
2小时的暴露时间是基于技术可行性,并基于大鼠的尿量计算最大剂量体积。在投配/保留期结束时,通过轻轻触诊膀胱通过腹壁,从膀胱排出剂量制剂。在这个研究期间,评估包括死亡率检查和临床观察。在第1天在以下目标时间点收集用于PK分析的血浆样品:投配前和灌输开始后1,2,3,4,6和24小时。在24小时结束时,收集膀胱并速冻以分析紫杉醇浓度。
不存在关于死亡率或临床观察的PLIP相关作用。在3mg/mL(1.5mg/动物)的浓度下具有 2小时保留时间的PLIP的单次膀胱内灌输导致在所有治疗的动物中不可定量的血浆紫杉醇水平(定量下限[LLOQ]=1ng/mL])。在相同剂量(1.5mg/动物)的
Figure BDA0001540710660000213
比较组中获得类似的结果,不同之处在于两个动物的浓度分别为在灌输开始后2.17小时的1.04ng/mL和在灌输开始后3小时的1.76ng/mL,。这些发现支持了这样的结论:PLIP在大鼠中的最大可行剂量下通过膀胱内施用途径施用时不具有全身生物利用度。
在灌输开始后6小时和24小时的膀胱组织分析结果表明,在PLIP或
Figure BDA0001540710660000214
之后,紫杉醇吸收到膀胱中;然而,在6小时时,结果在每个治疗组内变化。在6小时后膀胱中的紫杉醇浓度在4只PLIP治疗的动物中的1只和4只
Figure BDA0001540710660000215
治疗的动物中的3只中在约300ng/g范围内。在PLIP组中,所有治疗的动物中的一只动物具有最低膀胱紫杉醇浓度(大约40ng/g),而该组中的两只动物具有在大约1800-1900ng/g范围内的值。在
Figure BDA0001540710660000216
治疗组中,一只动物的膀胱浓度为大约8500ng/g,而剩下的三只动物都在300ng/g范围内。6 小时时的数据可变性的原因尚未知,但可能与机械性按摩膀胱后在膀胱中剩余的残留剂量制剂有关,以帮助使灌输物无效。在灌输开始后24小时,膀胱紫杉醇浓度明显低于6小时的紫杉醇浓度,这可能是由尿流帮助从膀胱内表面除去残留剂量制剂以及潜在的代谢或进一步分布紫杉醇所预期的。
表24体内膀胱紫杉醇药物浓度
Figure BDA0001540710660000221
实施例14.制备前体脂质体膀胱内顺铂(PLIC)制剂PLIC-002。
PLIC-002的制备通过将18.4mg顺铂溶解在15mL水中来进行。顺铂水溶液在室温下与 3ml包含表25中列出的脂质成分的乙醇溶液组合。使用
Figure BDA0001540710660000222
-C5均质器挤出制备的分散体。使用孔径大小从1μm减小到0.2μm的聚碳酸酯薄膜进行挤出。为了最终挤出,将100mg 甘露醇与挤出物混合,并将混合物冻干以获得前体脂质体。
表25 PLIC-002.
成分
顺铂(mw=300Da) 18.4mg
DMPG(mw=688.9Da;Tc=23℃) 22mg
DMPC(mw=677.9Da;Tc=24℃) 51mg
胆固醇(mw=386.65Da) 16mg
甘露醇 100mg
实施例15.PLIC-009的制备。PLCP-009的制备通过将9.8mg顺铂溶解在11mL盐水溶液中来进行。顺铂水溶液在室温下与4ml包含表26中的脂质成分的乙醇溶液结合。然后使用EmusiFlexTM-C5均质器挤出制备的分散体。使用孔径大小从1μm减小到0.2μm的聚碳酸酯薄膜进行挤出。为了最后挤出,将26mg甘露醇与挤出物混合,将混合物冻干以获得前体脂质体。
表26.PLIC-009。
成分
顺铂 9.8mg
DMPG 22.2mg
DMPC 40.8mg
甘露醇 26mg
实施例16.顺铂(CPN)前体脂质体制剂的有效性的体外分析
采用基于磺基罗丹明B(SB)测定方法来测定顺铂制剂PLIC-002和PLIC-009对人膀胱癌上皮细胞系T24(
Figure BDA0001540710660000231
HTB-4TM),5637(
Figure BDA0001540710660000232
HTB-9TM)和HT-1376(
Figure BDA0001540710660000233
CRL-1472TM) 的抑制浓度IC50。为了用于测定,将顺铂制剂在生理盐水中再分散至2mg/mL顺铂的浓度。再分散的制剂形成澄清溶液。使用生理盐水中的1mg/mL纯顺铂溶液(未配制的)作为对照。不使用较高浓度的纯顺铂,因为顺铂不会在生理盐水中形成高于1mg/mL的澄清溶液。
将细胞以5×103个细胞/孔的密度接种到96孔板上,并在37℃和5%CO2下培养24h。将 2mg/mL顺铂制剂和1mg/mL纯药物对照物以100μL剂量加入到板细胞培养物的培养基中。在用制剂治疗72h后,吸出培养基。然后通过向各孔中缓慢加入100μl 10%三氯乙酸(TCA)来固定处理过的细胞,并将板在4℃下温育至少1h。在温育后,板用自来水洗涤五次,而不直接将水直接流入孔中,将板在室温下风干,并且将50μl 0.4%w/v SRB(在1%乙酸中)加入到每个井中。使板在室温下在SRB溶液中温育20至30分钟。之后,板用1%乙酸洗涤5次,并在室温下风干。通过将100μl 10mM Tris碱溶液加入到每个孔中并允许Tris溶液溶解SRB 经5至10分钟来检测结合蛋白质的SRB。使用酶标仪在565nm吸光度下读板。表27报告 PLIC-002、PLIC-009和纯药物溶液的IC50值。
表27
制剂 细胞系 IC50(μg/mL)
PLIC-002 T24 1.283
PLIC-002 5637 0.692
PLIC-002 HT1376 2.292
PLIC-009 T24 0.8658
PLIC-009 5637 0.394
PLIC-009 HT1376 没有试验
纯药物 T24 0.788
纯药物 5637 0.441
纯药物 HT1376 1.11
实施例17.多西他赛制剂(DTL-102716)的有效性的体外分析
表28
成分
DMPC 8.6mg
DMPG 3.4mg
无水多西他赛,USP 6mg
甘露醇 15mg
1mL
使用与上述实施例6中所述相同的方法制备多西他赛制剂。制剂中的平均粒度(Zave)为 380nm。如上文针对紫杉醇所述,使用体外基于磺基罗丹明B(SRB)测定方法来测定多西他赛制剂对KU-7细胞系的抑制浓度IC50。多西他赛制剂的IC50为0.0005ng/mL。

Claims (8)

1.前体脂质体粉末分散体在制备用于治疗膀胱癌的药物组合物中的应用,所述前体脂质体粉末分散体由以下物质组成:
(a)紫杉醇,
(b)二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱DMPC,以及
(c)二肉豆蔻酰磷脂酰甘油DMPG,
其中a:b:c的重量比为1.0:1.43:0.567。
2.权利要求1所述的应用,其中,所述药物组合物进一步包括甘露醇、蔗糖或海藻糖。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其中,所述膀胱癌是非肌肉浸润性膀胱癌。
4.含脂质体的脂质体悬浮液在制备用于治疗膀胱癌的药物中的应用,其中所述脂质体由以下物质组成:
(a)紫杉醇,
(b)二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱DMPC,以及
(c)二肉豆蔻酰磷脂酰甘油DMPG,
其中a:b:c的重量比为1.0:1.43:0.567。
5.根据权利要求4所述的应用,其中,所述药物进一步包括甘露醇、蔗糖或海藻糖。
6.根据权利要求5所述的应用,其中,所述紫杉醇在4.5~8的任何pH下,在膀胱中保持是可溶解的。
7.根据权利要求4至6中任一项所述的应用,其中,所述膀胱癌是非肌肉浸润性膀胱癌。
8.根据权利要求4至6中任一项所述的应用,其中,所述脂质体悬浮液通过膀胱内递送。
CN201780002340.XA 2016-01-07 2017-01-09 用于治疗膀胱癌的制剂 Active CN108136217B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110437727.6A CN113181118A (zh) 2016-01-07 2017-01-09 用于治疗膀胱癌的制剂

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662275936P 2016-01-07 2016-01-07
US201662275941P 2016-01-07 2016-01-07
US62/275,941 2016-01-07
US62/275,936 2016-01-07
US201662421137P 2016-11-11 2016-11-11
US62/421,137 2016-11-11
PCT/US2017/012720 WO2017120586A1 (en) 2016-01-07 2017-01-09 Formulations for treating bladder cancer

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110437727.6A Division CN113181118A (zh) 2016-01-07 2017-01-09 用于治疗膀胱癌的制剂

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108136217A CN108136217A (zh) 2018-06-08
CN108136217B true CN108136217B (zh) 2021-04-30

Family

ID=59274569

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110437727.6A Pending CN113181118A (zh) 2016-01-07 2017-01-09 用于治疗膀胱癌的制剂
CN201780002340.XA Active CN108136217B (zh) 2016-01-07 2017-01-09 用于治疗膀胱癌的制剂

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110437727.6A Pending CN113181118A (zh) 2016-01-07 2017-01-09 用于治疗膀胱癌的制剂

Country Status (23)

Country Link
US (2) US11229602B2 (zh)
EP (1) EP3400072B1 (zh)
JP (3) JP6697541B2 (zh)
KR (1) KR20180103039A (zh)
CN (2) CN113181118A (zh)
AU (1) AU2017205337B2 (zh)
BR (1) BR112018013896A2 (zh)
CA (1) CA3009809A1 (zh)
CL (1) CL2018001838A1 (zh)
CO (1) CO2018007674A2 (zh)
CR (1) CR20180388A (zh)
DK (1) DK3400072T3 (zh)
EA (1) EA038653B1 (zh)
ES (1) ES2863659T3 (zh)
HK (1) HK1255212A1 (zh)
IL (1) IL260346B2 (zh)
MX (2) MX2018008267A (zh)
MY (1) MY198105A (zh)
PE (1) PE20181445A1 (zh)
PH (1) PH12018501451A1 (zh)
SG (1) SG11201805594PA (zh)
WO (1) WO2017120586A1 (zh)
ZA (1) ZA201804968B (zh)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018047074A1 (en) * 2016-09-07 2018-03-15 Cadila Healthcare Limited Sterile injectable compositions comprising drug micelles
EP3538074B1 (en) 2016-11-11 2023-07-26 Western University Of Health Sciences Methods of treating upper tract urothelial carcinomas
WO2018169960A1 (en) * 2017-03-17 2018-09-20 The Johns Hopkins University Nanoparticle formulations for enhanced drug delivery to the bladder
US20200170993A1 (en) * 2017-07-19 2020-06-04 Tesorx Pharma, Llc Liposomal paclitaxel formulation for treating bladder cancer
WO2019213648A1 (en) * 2018-05-04 2019-11-07 Lipac Oncology Llc Balloon catheter
EA202191228A1 (ru) * 2018-11-02 2021-09-24 ТЕЗОРКС ФАРМА, ЭлЭлСи Липосомальная внутрибрюшинная химиотерапия с повышенной степенью эффективности
GB201900389D0 (en) 2019-01-11 2019-02-27 Queens Univ Of Belfast Solvent and water-free lipid-based nanoparticles and their methods of manufacture
CN113189315B (zh) * 2021-04-13 2024-01-23 山东省医疗器械产品质量检验中心 评价抗菌导尿管抗菌活性的体外动态模型及其使用方法

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996039121A1 (en) * 1995-06-06 1996-12-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Submicron liposome suspensions obtained from preliposome lyophilizates
US20030138481A1 (en) * 2000-02-04 2003-07-24 Brahim Zadi Liposomes
WO2005072776A2 (en) * 2004-01-30 2005-08-11 Instytut Farmaceutyczny Liposomal formulations of the antineoplastic agents
US20060193904A1 (en) * 2001-10-03 2006-08-31 Paul Tardi Liposome loading with metal ions
CN1925853A (zh) * 2004-07-28 2007-03-07 陈献 琥珀酸α-生育酚酯及其类似物和盐的稳定注射组合物
CN101087588A (zh) * 2004-11-30 2007-12-12 健康科学西部大学 包被的药物递送制剂
WO2008127358A2 (en) * 2006-10-10 2008-10-23 Jina Pharmaceuticals, Inc. Aqueous systems for the preparation of lipid-based pharmaceutical compounds; compositions, methods, and uses thereof
CN101322689A (zh) * 2007-06-11 2008-12-17 江苏先声药物研究有限公司 一种多西他赛长循环脂质体及其冻干粉针的制备方法
CN103570766A (zh) * 2012-08-09 2014-02-12 武汉华耀生物医药有限公司 一种新型铂类脂质体制剂及其制备方法
CN103768018A (zh) * 2012-10-17 2014-05-07 南京绿叶思科药业有限公司 一种卡巴他赛脂质体注射剂及其制备方法
CN104780914A (zh) * 2012-05-09 2015-07-15 健康科学西部大学 前体脂质体睾酮制剂
CN105209017A (zh) * 2013-03-13 2015-12-30 马林克罗特有限公司 用于癌症疗法的脂质体顺铂组合物
CN110167533A (zh) * 2016-11-11 2019-08-23 健康科学西部大学 治疗上尿路尿路上皮癌的方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1330938C (en) 1985-10-18 1994-07-26 Abdul R. Khokhar Hydrophobic cis-platinum complexes efficiently incorporated into liposomes
US5415869A (en) * 1993-11-12 1995-05-16 The Research Foundation Of State University Of New York Taxol formulation
MXPA05008284A (es) 2003-02-03 2006-03-21 Neopharm Inc Taxano y otros farmacos antineoplasicos encapsulados, liposomicos, estables, susceptibles de esterilizacion por filtracion.
WO2005039534A1 (en) * 2003-10-01 2005-05-06 Children's Hospital & Research Center At Oakland Lipophilic drug delivery vehicle and methods of use thereof
WO2007115134A2 (en) 2006-03-29 2007-10-11 Wayne State University Liposomal nanoparticles and other formulations of fenretinide for use in therapy and drug delivery
WO2010009186A1 (en) * 2008-07-15 2010-01-21 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Liposome formulation having hydrophilic and hydrophobic pharmaceutical compounds co-encapsulated therein
US8956600B2 (en) * 2009-08-10 2015-02-17 Taiwan Liposome Co. Ltd. Ophthalmic drug delivery system containing phospholipid and cholesterol
WO2012094020A1 (en) * 2010-01-07 2012-07-12 Innopharma, Inc. Methods and compositions for delivery of taxanes in stable oil-in-water emulsions
WO2014160392A1 (en) * 2013-03-13 2014-10-02 Mallinckrodt Llc Modified docetaxel liposome formulations

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996039121A1 (en) * 1995-06-06 1996-12-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Submicron liposome suspensions obtained from preliposome lyophilizates
US20030138481A1 (en) * 2000-02-04 2003-07-24 Brahim Zadi Liposomes
US20060193904A1 (en) * 2001-10-03 2006-08-31 Paul Tardi Liposome loading with metal ions
WO2005072776A2 (en) * 2004-01-30 2005-08-11 Instytut Farmaceutyczny Liposomal formulations of the antineoplastic agents
CN1925853A (zh) * 2004-07-28 2007-03-07 陈献 琥珀酸α-生育酚酯及其类似物和盐的稳定注射组合物
CN101087588A (zh) * 2004-11-30 2007-12-12 健康科学西部大学 包被的药物递送制剂
WO2008127358A2 (en) * 2006-10-10 2008-10-23 Jina Pharmaceuticals, Inc. Aqueous systems for the preparation of lipid-based pharmaceutical compounds; compositions, methods, and uses thereof
CN101322689A (zh) * 2007-06-11 2008-12-17 江苏先声药物研究有限公司 一种多西他赛长循环脂质体及其冻干粉针的制备方法
CN104780914A (zh) * 2012-05-09 2015-07-15 健康科学西部大学 前体脂质体睾酮制剂
CN103570766A (zh) * 2012-08-09 2014-02-12 武汉华耀生物医药有限公司 一种新型铂类脂质体制剂及其制备方法
CN103768018A (zh) * 2012-10-17 2014-05-07 南京绿叶思科药业有限公司 一种卡巴他赛脂质体注射剂及其制备方法
CN105209017A (zh) * 2013-03-13 2015-12-30 马林克罗特有限公司 用于癌症疗法的脂质体顺铂组合物
CN110167533A (zh) * 2016-11-11 2019-08-23 健康科学西部大学 治疗上尿路尿路上皮癌的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Paclitaxel and cisplatin as intravesical agents against non-muscle-invasive bladder cancer;Boris A. et al;《BJU INTERNATIONAL》;20080630;第101卷(第11期);第1347-1355页 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20210267896A1 (en) 2021-09-02
EA038653B1 (ru) 2021-09-29
DK3400072T3 (da) 2021-03-22
EP3400072A4 (en) 2020-01-08
IL260346B1 (en) 2023-04-01
ZA201804968B (en) 2022-10-26
CA3009809A1 (en) 2017-07-13
SG11201805594PA (en) 2018-07-30
IL260346B2 (en) 2023-08-01
AU2017205337B2 (en) 2022-09-08
WO2017120586A1 (en) 2017-07-13
EA201891575A1 (ru) 2019-01-31
JP6697541B2 (ja) 2020-05-20
CN113181118A (zh) 2021-07-30
MX2020013858A (es) 2021-03-25
CO2018007674A2 (es) 2018-08-10
CL2018001838A1 (es) 2018-08-17
EP3400072A1 (en) 2018-11-14
AU2017205337A1 (en) 2018-07-19
US20190015334A1 (en) 2019-01-17
PE20181445A1 (es) 2018-09-12
MX2018008267A (es) 2018-09-28
HK1255212A1 (zh) 2019-08-09
US11229602B2 (en) 2022-01-25
CN108136217A (zh) 2018-06-08
JP2018528933A (ja) 2018-10-04
IL260346A (en) 2018-08-30
PH12018501451A1 (en) 2019-03-11
JP2022168210A (ja) 2022-11-04
MY198105A (en) 2023-08-02
ES2863659T3 (es) 2021-10-11
KR20180103039A (ko) 2018-09-18
JP2020002181A (ja) 2020-01-09
BR112018013896A2 (pt) 2018-12-18
CR20180388A (es) 2018-09-11
EP3400072B1 (en) 2020-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108136217B (zh) 用于治疗膀胱癌的制剂
US7901707B2 (en) Biodegradable biocompatible implant and method of manufacturing same
US9814734B2 (en) Bufalin liposome, preparation method therefor and application thereof
JP2021178839A (ja) 局所進行性または転移性である肝内もしくは肝外胆管または胆嚢のカルシノーマに罹患する患者を治療する方法
JP2022508807A (ja) 腫瘍内注射製剤
EP3538074B1 (en) Methods of treating upper tract urothelial carcinomas
TWI787189B (zh) 用於治療膀胱癌之配方
CN114929213A (zh) 碱性化疗药瘤内注射剂组合物
CN110200920B (zh) 一种还原敏感药物组合物及其制备和应用
CN110302159B (zh) 一种还原敏感脂质药物组合物及其制备方法和应用
US12102693B1 (en) Pharmaceutical composition with nanoparticle-based drug delivery combined with non-invasive radiographic monitoring model
TW202434243A (zh) 含有內含拓普替康或其鹽之脂質體組成物及dna損傷修復抑制劑之組合醫藥
JP2022517352A (ja) マイトマイシンcのリポソーム化プロドラッグを含むリポソーム組成物および製造法
OA19233A (en) Methods of treating upper tract urothelial carcinomas
JP2004346023A (ja) 前立腺癌の局所治療剤

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1255212

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant