CN101322689A - 一种多西他赛长循环脂质体及其冻干粉针的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种适合临床及大生产要求的非聚乙二醇化多西他赛长循环脂质体及其冻干粉针剂的制备工艺，该脂质体由多西他赛、中性磷脂、带电荷磷脂、胆固醇、抗氧化剂、赋形剂、缓冲剂、注射用水组成，制备工艺包括制备多室脂质体、均化脂质体、定容、除菌、分装、冻干等步骤。该脂质体增加了药物的溶解度，解决了多西他赛注射液存在的稳定性问题以及由于复合溶媒引起的毒性问题，提高了药物在体内的循环时间，与聚乙二醇化长循环脂质体相比毒性降低，对肿瘤细胞的抑制作用增强。

Description

一种多西他赛长循环脂质体及其冻干粉针的制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，涉及一种含有难溶性抗癌药多西他赛长循环脂质体、冻干粉针及其制备方法。

背景技术

多西他赛(docetaxel)是由浆果紫杉针叶中提取的前体物，再经半合成的紫杉烷类抗癌药。其抗癌机制是通过刺激导管素的聚合，促进微管双聚体装配成微管，并致使细胞增殖停止在有丝分裂静止期(G2/M)的阶段。FDA批准多西他赛用于治疗乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌和胰腺癌，对头颈部鳞状上皮癌和恶性黑素瘤等原发性癌症和转移癌均有一定作用。由于抗癌机制和确切疗效，使其成为迄今发现最具有应用价值的抗癌药物之一。

虽然多西他赛抗癌谱广，但由于其水溶性差，目前市售的注射剂是以Tween-80增溶，制成的淡橙黄色至橙黄色澄明稠状浓缩液，临用前用专用溶剂-13％的乙醇溶液复溶，再用5％葡萄注射液或0.9％氯化钠注射液稀释，最终浓度不超过0.74mg/mL。由于多西他赛注射液中的Tween-80会引起过敏反应、心血管不良反应和体液潴留等不良反应，需提前给患者口服糖皮质激素类(如地塞米松)，部分病人出现即使使用了抗过敏药也不能缓解体液潴留反应。对已发生过敏反应的病人给予注射肾上腺素对症治疗。临床用药时，多西他赛注射液一旦稀释必须立即使用，并在规定时间内使用完，否则放置数小时即有多西他赛析出，被在线滤器过滤，导致药效降低。

长循环脂质体常采用聚乙二醇对磷脂进行修饰，用经修饰过的磷脂制得的脂质体亲水性和空间位阻增加，可以避免被体内网状内皮系统吞噬，具有更长的体内循环时间，使药物有效的富集于肿瘤部位。多西他赛长循环脂质体除可以解决市售多西他赛注射液制剂中的复合溶媒问题外，同时也能降低多西他赛本身的毒性，如常见的骨髓抑制、神经毒性、低血压等。虽然聚乙二醇化的脂质体能增加脂质体在血液的循环时间，但由于聚乙二醇的存在，出现了新的毒性作用，如含有聚乙二醇化的磷脂的脂质体制剂会引起皮肤毒性，即一般被称为“手足综合症”，它导致了手掌和脚底的疹/溃疡。聚乙二醇化脂质体的另一个缺点是：大分子(聚乙二醇)在脂质体表面上的出现，可能会减弱脂质体与细胞的相互作用，并且妨碍脂质体进入肿瘤组织，从而有可能减少脂质体药物在肿瘤组织中的积累。

Maria Laura Immordino等人报道的多西他赛脂质体含药量仅为0.75mg/mL，稳定性差，4℃放置一天就泄露超过50％(Maria Laura Immordino，Brusa Paola，Arpicco，Silvia et al.Preparation，characterization，cytotoxicity and pharmacokinetics of liposomes containing docetaxel.Journal ofControlled Release 91(2003)：417-429)，其脂质体不适合临床应用。

国内外已有的研究结果表明，目前脂质体生产的关键因素主要有：一是脂质体的粒径和均匀度，特别是经过冻干的脂质体，复溶后的脂质体粒径会有不同程度的增加；二是形成脂质体的脂质和脂质体内所包裹药物的化学降解程度；三是脂质体大规模的工业化生产有一定难度；四是载药量低，不适合临床应用。本发明提供的多西他赛长循环脂质体注射剂的新配方和制备工艺很好地解决脂质体药物的关键因素。

发明内容

因此，本发明的主要目的是提供了稳定性好、包封率高、长循环的、低毒性的非聚乙二醇化的脂质体，该注射剂具有聚乙二醇化脂质体的长循环特征，同时不会导致“手足综合征”；该注射剂不含Tween-80等表面活性剂，具有良好的水溶性，可直接溶于5％葡萄糖后静脉滴注。

本发明的另一个目的在于提供该注射剂的制备工艺。

本发明的技术方案是根据药物的性质，选用特殊比例的磷脂混合物制备多西他赛脂质体，配方通过加入一定配比的中性磷脂、带电荷合成磷脂、胆固醇来达到长循环作用，多西他赛浓度可到1mg/mL-10mg/mL；配方还通过加入抗氧化剂来增加长循环脂质体多西他赛的稳定性。

脂质体主要由天然和/或合成磷脂组成，这些磷脂可分为两大类，即中性磷脂和带电荷磷脂。目前脂质体制备主要选用中性磷脂和胆固醇，考虑到多西他赛为脂溶性药物，制成脂质体时药物主要包裹在脂质双分子层中，胆固醇的加入一方面会降低载药量，另一方面它可以使脂质体双分子膜固化，从而减少自由基的生成，降低了氧化水平，使脂质体体内稳定性显著增强，胆固醇和中性磷脂的比例为0.05∶1-1∶1；配方中加入带电荷的合成磷脂既可增加连续的脂质双分子层间的距离，从而增加对脂溶性药物的包封能力，又可以使脂质体带电荷，增加脂质体胶体粒子之间的排斥，避免了脂质体的絮凝，使脂质体粒径在贮存期间的变化减小到最小程度，带电荷磷脂和中性磷脂的摩尔比例为0.1∶1-0.5∶1。为了进一步降低形成脂质体的磷脂和脂质体中所包裹药物的降解，配方中还加入了抗氧化剂，抗氧化剂与磷脂的摩尔比例为0.1∶5-1∶5。已有研究结果表明，卵磷脂、饱和大豆磷脂和磷脂酰甘油脂等的水解都受pH值的影响，而且水解产物会使脂质体悬液的pH值下降，加速脂质体的进一步水解，这些磷脂均在pH6.5时最稳定，水解速度常数最小，因此本发明在在制得脂质药物混合物后，采用加入含缓冲剂的赋形剂溶液为水化液，进一步增加了多西他赛脂质体的稳定性。

多西他赛为脂溶性药物，药物包裹到脂质体中只能通过“被动载药”来实现，即将药物和磷脂成分溶解在有机溶剂中形成药物脂质溶液，采用减压蒸发法，也可以采用喷雾干燥法来除去有机溶剂，得到脂质混合物，加入含有缓冲剂的赋形剂溶液水化，缓冲剂由0.01M-0.1M的缓冲盐制备。脂质体的粒度及均匀度可通过高压均质机制备，也可通过微射流机来制备，也可通过挤压设备把制备把脂质体混悬液在一定压力下挤过相应孔径的微孔膜来达到。制备方法和制备过程中确切温度随脂质体组分不同而不同。为了增加多西他赛脂质体贮存稳定性，也可将该脂质冻干保存。

本发明的目的可以通过以下措施来实现：

一种非聚乙二醇化多西他赛的长循环脂质体注射剂，其特征在于每1000mL制剂的原辅料配方为：

多西他赛    1g～10g

中性磷脂    6g～600g

带电荷磷脂  0.1g～200g

胆固醇      0.1g～200g

抗氧化剂    0.25mg～240mg

赋形剂      30g～200g

缓冲剂      0.1g～100g

注射用水    加至1000mL

所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，进一步满足多西他赛和中性磷脂的重量比例为1∶6-1∶60，带电荷磷脂和中性磷脂的摩尔比例为0.1∶1-0.5∶1，胆固醇和中性磷脂的摩尔比例为0.05∶1-1∶1，以缓冲剂和赋形剂作为多西他赛脂质体的外部混悬介质，pH为5.0-7.4。

所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其中中性磷脂可以是蛋黄卵磷脂(EPC)、氢化蛋黄卵磷脂(HEPC)、大豆卵磷脂(SPC)、氢化大豆卵磷脂(HSPC)、鞘磷脂(SM)、磷脂酰乙醇胺(PE)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)，磷脂酰胆碱的含量在80％～99％之间。

所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其中带电荷磷脂可以是二月桂酰磷脂酰甘油(DLPG)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二油酰磷脂酰甘油(DPPG)、二月桂酰磷脂酸(DLPA)、二肉豆蔻酰磷脂酸(DMPA)、二硬脂酰磷脂酸(DSPA)、二油酸磷脂酰丝氨酸(DOPS)、硬脂酰胺(SA)。

所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其中抗氧化剂可以是a-生育酚和a-生育酸琥珀酸酯，抗氧化剂和磷脂的摩尔比为0.1∶5-1∶5。

所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其中赋形剂可以是麦芽糖、甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖和海藻糖中的一种或多种保护性糖。

所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其中缓冲剂可以是磷酸盐、丁二酸盐、柠檬酸盐、甘氨酸钠、乳糖酸钠、甘氨酸、丁二酸、柠檬酸、乳糖酸、组氨酸中的一种或多种，浓度为0.01M-0.1M，pH调节至pH5.0-7.4。

所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其剂型可以是注射液、冻干粉针。

所述的多西他赛长循环脂质体制备方法，包含下列步骤：

(1)制备多室脂质体脂质体：根据配方选用中性磷脂、带电荷磷脂和抗氧化剂溶于氯仿或氯仿-甲醇混合溶剂并混合均匀；用减压蒸发法或者喷雾干燥将溶剂除去，形成脂质混合物；配制0.01M-0.1M的缓冲剂，加入赋形剂溶解，用该溶液水化脂质混合物，水化温度在40℃-70℃之间，必要时用搅拌或高速分散来使脂质水化完全，得多室脂质体。

(2)均化脂质体：水化完全后用高压均质机匀化脂质体至所需的粒径和均匀度，也可通过挤压设备把多层脂质体在一定压力下通过相应孔径的微孔膜来达到，脂质体的平均粒径控制在50-300nm。

(3)定容、除菌、分装、保存：用注射用水定容，将多西他赛脂质体胶体溶液用0.22μm微孔膜过滤除菌，分装即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或冻干保存至使用。

本发明的优点：

本发明的多西他赛长循环脂质体的平均粒径在50nm-300nm之间，药物包封率＞95％。同时配方中加入带电荷的合成磷脂和抗氧化剂，使得多西他赛长循环脂质体的载药量和稳定性大大提高；非聚乙二醇化的磷脂来达到长循环作用，可以避免由于聚乙二醇引起的“手足综合征”；另外，由于多西他赛长循环脂质体的生产过程中的除溶剂过程可由减压蒸发或喷雾干燥来完成，减少粒径步骤可由高效的高压均质机来完成，使得该制剂的工业化生产成为可能。该制剂可通过冻干制成冻干剂型来保存，冻干前后粒径未见明显变化，能以任意比例与5％葡萄糖输液稀释给药而不产生沉淀和降解产物，从而最大限度地减少临床用药的不安全因素。

本发明的多西他赛长循环脂质体冻干粉针在2℃-8℃下的一年稳定性实验结果表明，脂质体的各项检测指标均符合质量标准，显示出了多西他赛长循环脂质体制剂优越的贮存稳定性。

本发明的多西他赛长循环脂质体和市售的多西他赛注射液给大鼠尾静脉同等剂量注射给药后，能显著延长多西他赛在血浆中的驻留时间，T_1/2a是市售注射液的4.83倍。

本发明的长循环脂质体的体外抑瘤作用较聚乙二醇化长循环脂质体强，对人非小细胞肺癌细胞A549的抑制作用是聚乙二醇化长循环脂质体的6倍，对人胰腺癌细胞BXPC-3的抑制作用是39.6倍，同时非聚乙二醇化长循环脂质体的体外抑瘤作用均较注射液强，对人非小细胞肺癌细胞A549的抑制作用是注射液的23.8倍，对人胰腺癌细胞BXPC-3的抑制作用是11.6倍。

附图说明

图1、多西他赛长循环脂质体冻干粉针复溶后的透射电镜(TEM)照片

图2、多西他赛长循环脂质体冻干前粒径分布和累计百分率图

累计结果

平均粒径＝68.2nm PdI＝0.235

80％分布＜128nm

90％分布＜156nm

99％分布＜226nm

图3、多西他赛长循环脂质体冻干粉针复溶后的粒径分布和累计百分率图

累计结果

平均粒径＝96.2nm PdI＝0.190

80％分布＜161nm

90％分布＜195nm

99％分布＜283nm

图4、多西他赛长循环脂质体和多西他赛注射液的大鼠体内血药经时曲线

具体实施方式

下面实施例用于进一步说明本发明，但不是对本发明保护范围的限制。

实施例1

制剂处方(100mL容量)

多西他赛                  100mg

大豆磷脂(SPC)             1.5g

二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)  150mg

胆固醇                    600mg

a-生育酚                  17mg

蔗糖                      约10g

柠檬酸钠                  约294mg

柠檬酸                    适量

注射用水                  定容至所需容量

制剂工艺如下：

根据配方选用大豆磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇和a-生育酚溶于氯仿溶液并混合均匀；用喷雾干燥法将氯仿减压除去，形成脂质混合物；配制0.01M柠檬酸钠溶液，将蔗糖溶解在柠檬酸钠溶液作为水化液，水化温度一般在55℃±5℃之间，得多室脂质体混悬液；水化完全后用高压均质机均质至平均粒径为100±10nm，用注射用水定容并调节至多西他赛的浓度为1.0mg/mL，将多西他赛脂质体胶体溶液用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，分装即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或者冻干保存至使用。

实施例2

制剂处方(100mL容量)

多西他赛                    200mg

蛋黄卵磷脂(EPC)             4g

二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)  1g

胆固醇                      1g

a-生育酸琥珀酸酯            90mg

乳糖                        约10g

丁二酸钠                    约800mg

丁二酸                      适量

注射用水                    定容至所需容量

制剂工艺如下：

根据配方选用蛋黄卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、胆固醇和a-生育酸琥珀酸酯溶于氯仿-甲醇(2∶1)溶液并混合均匀；用减压蒸发法将有机溶剂减压除去，形成脂质混合物；配制0.03M丁二酸钠液，将乳糖溶解在丁二酸钠溶液作为水化液，水化温度一般在65℃±5℃，得多室脂质体混悬液；水化完全后用高压均质机均质至平均粒径为120±10nm，用注射用水定容并调节至多西他赛的浓度为2.0mg/mL，将多西他赛脂质体胶体溶液用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，分装即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或者冻干保存至使用。

实施例3

制剂处方(100mL容量)

多西他赛                  400mg

二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)  12g

二硬脂酰磷脂酰甘油(DMPG)  2.4g

胆固醇      6g

a-生育酚    100mg

海藻糖      约20mg

磷酸盐      约1.5g

注射用水    定容至所需容量

制剂工艺如下：

根据配方选用二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇和a-生育酚溶于氯仿-甲醇(2∶1)并混合均匀；用喷雾干燥法将溶剂除去，形成脂质混合物；配制0.05M磷酸盐缓冲液，将海藻糖溶解在磷酸盐溶液中作为水化液，水化温度一般在45℃±5℃，得多室脂质体混悬液；水化完全后用高压均质机均质至平均粒径为80±10nm，用注射用水定容并调节至多西他赛的浓度为4.0mg/mL，将多西他赛脂质体胶体溶液用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，分装即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或者冻干保存至使用。

实施例4

制剂处方(100mL容量)

多西他赛                1000mg

蛋黄磷脂(EPC)           40g

二油酰磷脂酰甘油(DPPG)  8g

胆固醇                  10g

a-生育酚                240mg

蔗糖                    约20g

甘氨酸钠                约100mg

甘氨酸                  适量

注射用水                定容至所需容量

制剂工艺如下：

根据配方选用蛋黄磷脂、二油酰磷脂酰甘油、胆固醇和a-生育酚溶于氯仿-甲醇(2∶1)溶液并混合均匀；用减压干燥法将溶剂除去，形成脂质薄膜；配制0.1M甘氨酸钠溶液，将蔗糖溶解在甘氨酸溶液中作为水化液，水化温度一般在60℃±5℃，得多室脂质体混悬液；水化完全后用高压均质机均质至平均粒径为110±10nm，用注射用水定容并调节至多西他赛的浓度为10.0mg/mL，将多西他赛脂质体胶体溶液用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，分装即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或者冻干保存至使用。

实施例5多西他赛长循环脂质体冻干粉针的稳定性实验结果

按实施例1制备方法制备多西他赛长循环脂质体冻干粉针，在2℃-8℃下进行长期稳定性考察，分别于0、1、2、3、6、9、12个月取样，检查冻干脂质体的外观、冻干脂质体复溶后的粒径分布、pH、包封率、有关物质、含量等指标。检测结果显示，在上述条件下放置，脂质体的各项检测指标均符合质量标准。结果见表1。

表1多西他赛长循环脂质体冻干粉针长期试验结果

实施例6大鼠药动学实验

多西他赛长循环脂质体按实施例3制备，浓度为4.0mg/mL。多西他赛注射液，江苏恒瑞制药有限公司，规格：20mg/0.5mL。临用前用5％的葡萄糖配制成1mg/mL。选取SD大鼠12只，随机分成两组，一组大鼠尾静脉推注脂质体，另一组推注注射液，以10mg·kg^-1的剂量给药。给药后0，1，3，5，10，20min，40min及1，2，4，6，8，12 h眼眶静脉取血0.5mL，血样经预处理后，进行HPLC法测定。在本发明中，多西他赛注射液8h时血液中已检测不到药物，而多西他赛长循环脂质体在12h时仍能检测到，明显延长药物在血浆中的驻留时间，降低药物在血浆中的清除速率，T_1/2a是注射液的4.83倍，生物利用度提高3倍。

表2多西他赛长循环脂质体和多西他赛注射液体内药动学参数

实施例7体外抑瘤效果比较

多西他赛非聚乙二醇化长循环脂质体按实施例2制备，多西他赛脂聚乙二醇化长循环脂质体为自制，多西他赛注射液，江苏恒瑞制药有限公司，规格：20mg/0.5mL。

取人非小细胞肺癌细胞(A549)、人胰腺癌细胞(BXPC-3)分别用含12％小牛血清的RPMI 1640培养基，于37℃，5％CO₂的培养箱中培养。

取处于指数生长期，状态良好的细胞，直接离心，用含10％小牛血清的RPMI1640培养液配成细胞悬液，计数，并将细胞密度调整稀释至2.22×10⁴/mL。取细胞悬液接种于96孔板上，180μL/孔(含肿瘤细胞4×10³/孔)。将培养板转入恒温CO₂培养箱中，在37℃，5％CO₂及饱和湿度条件下培养24小时。

多西他赛非聚乙二醇化长循环脂质体、多西他赛脂聚乙二醇化长循环脂质体及多西他赛注射液分别用配制成含多西他赛1mg/mL，然后依次稀释，终浓度依次为1×10^-4M，4×10^-5M，2×10^-5M，1×10^-5M，4×0^-6M，2×10^-6M，10^-6M，4×10^-7M，10^-7M，10^-8M，加入受试细胞株，20μL/孔，培养48小时，每组设3个平行孔，并重复3次。

48小时后，将溴化四氮唑蓝(MTT)加入96孔板中，20μL/孔，置于培养箱中继续孵育4小时，然后加入20％SDS溶液，50μL/孔，置于培养箱中继续孵育24小时。用酶联免疫检测仪设定波长为570nm，参考波长为630nm，测定96孔板每孔吸光值，记录结果并计算细胞抑制率，以判断受试药物的抗肿瘤活性。细胞抑制率的计算如下：

从IC₅₀可以看出，非聚乙二醇化长循环脂质体对肿瘤细胞的抑制作用较聚乙二醇化长循环脂质体更强，对A549肿瘤细胞的抑制作用是聚乙二醇化长循环脂质体的6倍，对BXPC-3肿瘤细胞的抑制作用是39.6倍，同时非聚乙二醇化长循环脂质体的体外抑瘤作用均较注射液强，对人非小细胞肺癌细胞A549的抑制作用是注射液的23.8倍，对人胰腺癌细胞BXPC-3的抑制作用是11.6倍。

表3对人肿瘤细胞的体外抗肿瘤活性(IC₅₀)比较，单位μM

Claims (10)

1.一种多西他赛的长循环脂质体注射剂，其特征在于每1000mL制剂的原辅料配方为：

多西他赛      1g～10g

中性磷脂      6g～600g

带电荷磷脂    0.1g～200g

胆固醇        0.1g～200g

抗氧化剂      0.25mg～240mg

赋形剂        30g～200g

缓冲剂        0.1g～100g

注射用水      定容至1000mL。

2.权利要求1所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其特征在于进一步满足多西他赛和中性磷脂的重量比例为1∶6-1∶60，带电荷磷脂和中性磷脂的摩尔比例为0.1∶1-0.5∶1，胆固醇和中性磷脂的摩尔比例为0.05∶1-1∶1，以缓冲剂和赋形剂作为多西他赛脂质体的外部混悬介质，pH为5.0-7.4。

3.权利要求1所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其特征在于中性磷脂选自蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱，磷脂酰胆碱的含量在80％～99％之间。

4.权利要求1所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其特征在于带电荷磷脂选自二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二油酸磷脂酰丝氨酸、硬脂酰胺。

5.权利要求1所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其特征在于抗氧化剂是a-生育酚和a-生育酸琥珀酸酯，抗氧化剂和磷脂的摩尔比为0.1∶5-1∶5。

6.根据权利要求1所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其特征在于赋形剂为麦芽糖、甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖和海藻糖中的一种或多种保护性糖。

7.根据权利要求1所述的多西他赛长循环脂质体注射剂，其特征在于缓冲剂是磷酸盐、丁二酸盐、柠檬酸盐、甘氨酸钠、乳糖酸钠、甘氨酸、丁二酸、柠檬酸、乳糖酸、组氨酸中的一种或多种，浓度为0.01M-0.1M，pH调节至pH5.0-7.4。

8.根据权利要求1所述的多西他赛的长循环脂质体注射剂，其特征在于其剂型是注射液、冻干粉针。

9.权利要求1所述的多西他赛长循环脂质体注射剂的制备方法，其特征在于包含下列步骤：

(1)制备多室脂质体脂质体：根据配方选用中性磷脂、带电荷磷脂、胆固醇和抗氧化剂溶于氯仿或氯仿-甲醇混合溶剂；用减压蒸发法或者喷雾干燥将溶剂除去，形成脂质混合物；配制0.01M-0.1M的缓冲剂，加入赋形剂溶解，用该溶液水化脂质混合物，水化温度在40℃-70℃之间，必要时用搅拌或高速分散来使脂质水化完全，得多室脂质体。

(2)均化脂质体：水化完全后用高压均质机匀化脂质体至所需的粒径和均匀度，也可通过挤压设备把多层脂质体在一定压力下通过相应孔径的微孔膜来达到，脂质体的平均粒径控制在50-300nm。

(3)定容、除菌、分装、保存：用注射用水定容，将多西他赛脂质体胶体溶液用0.22μm微孔膜过滤除菌，分装，即得成品，成品可在2℃-8℃下保存或冻干保存至使用。

10.根据权利要求1所述的多西他赛脂质体注射剂，其特征在于该脂质体复溶后平均粒径在50nm-500nm之间，药物包封率＞95％。

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