CN103570766A

CN103570766A - 一种新型铂类脂质体制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN103570766A
Application number: CN201210281809.7A
Authority: CN
Inventors: 周小菊; 赵孝斌; 罗伯特·李
Original assignee: WUHAN LONGEVOVS MEDICINES Ltd
Current assignee: WUHAN HUAYAO BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO., LTD.
Priority date: 2012-08-09
Filing date: 2012-08-09
Publication date: 2014-02-12
Anticipated expiration: 2032-08-09
Also published as: CN103570766B

Abstract

本发明涉及一种新型铂类化合物、包含该化合物的脂质体制剂、其制备方法及其在肿瘤治疗中的应用。本发明的铂类脂质体主要成分包括活性铂类化合物、磷脂、胆固醇及脂肪酸等，并可经冷冻干燥制备为冻干粉针剂，其粒径小，载药量高，稳定性好。该铂类脂质体能提高顺铂生物利用度，延长药物在体内的滞留时间，并可使顺铂浓集于癌变器官，不仅可以减少用药剂量，增强疗效，而且可以降低药物的毒副作用，适用于多种肿瘤疾病的治疗。

Description

一种新型铂类脂质体制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及新型铂类脂质体制备方法及其制剂。

背景技术

顺铂（Cisplatin，DDP）为重金属铂的络合物，在中心原子铂的四周有2个氯原子，和2个氨分子，具有双官能团烷化剂的性质，其化学结构如下所示：

在人体内，氯可被水解下来，形成活泼的带正电的水化分子，然后与核酸和蛋白质反应，引起DNA链间或链内交联，或形成DNA与蛋白质的交联，从而抑制DNA复制和转录，导致DNA断裂和误码，抑制细胞有丝分裂，且作用较强而持久。顺铂抗癌谱较广，为细胞周期非特异性药物，静注后迅速分布到各脏器组织，在肝、肾、肠和睾丸等组织结合较多，很少进入脑脊液。顺铂于1mg/L浓度时，即可明显抑制多种人体及动物肿瘤株的生长，临床常用剂量，血清中即可达可到此浓度。顺铂口服给药无效，因此，临床上采用静脉注射给药。

顺铂是临床上最常用的药物之一，对于人体睾丸癌、恶性淋巴瘤、头颈部肿瘤、卵巢癌、肺癌及膀胱癌等有较好的疗效，对食管癌、乳腺癌等亦有一定疗效。由于顺铂是一种细胞毒性药物，它在杀伤肿瘤细胞同时对人体正常细胞也造成很大伤害，毒性反应主要包括肾毒性、消化道毒性、骨髓抑制、神经毒性和耳毒性等，反应严重时导致中断治疗。

为了降低顺铂的毒副作用，各国药学研究者努力研制铂类化合物，在过去的10年里，对铂类药物研发已转向于药物靶向输送方面的研究。将铂类药物制成靶向制剂，提高药物在靶部位的浓度，降低血液及其他组织中药物的浓度，不仅可提高疗效，还可降低其全身毒副作用。脂质体具有类细胞结构，毒性低，无免疫原性，并具有被动靶向性，特别适合于作为抗癌化疗药物的靶向给药。将顺铂开发为脂质体制剂，具有广阔的应用前景，近几十年来一直是医药工作者关注的焦点。自20世纪80年代初，国外已进行了其脂质体研究，动物实验证实，顺铂脂质体制剂能够提高抗肿瘤作用，并显著降低其毒副作用，并且有1期临床试验表明，顺铂脂质体可提高疗效，降低毒性作用【张覃林.抗肿瘤药物的药理与临床应用[M]，长沙：湖南医科大学出版社，1999：287.】。但目前研发的铂类药物脂质体均不是很理想，主要存在包封率低，药物易泄露，以及部分顺铂包裹在脂质体内失活等问题【Meric,Rixe,Khayat.Metastatic malignant melanoma.DrugsToday(Barc),2003,39(S-C):17.】。因此，提高顺铂脂质体的稳定性及包封率成为实现顺铂脂质体应用于临床的关键。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种新型的铂类化合物，其具有如式（I）所示的结构：

其中R1或R2基团可相同或不同，独立选自如下的基团：

CH₃(CH₂)_mCH₂—、CH₃(CH₂)_nCH=CHCH₂CH=CH(CH₂)_p—、CH₃(CH₂)_xCH=CH(CH₂)_y—、CH₃(CH₂)_aCH=CHCH=CHCH=CH(CH₂)_b—、

其中，m为5-20的整数；n，p，x，y，a，b分别独立为3-10的整数；

优选的，R1或R2基团可相同或不同，可独立选自如下的基团：

-CH₂(CH₂)₉CH₃、-CH₂(CH₂)₁₅CH₃、-CH₂(CH₂)₁₃CH₃、-(CH₂)₇CH＝CH(CH₂)₇CH₃、-(CH₂)₇CH＝CHCH₂CH＝CH(CH₂)₄CH₃、-(CH₂)₇CH＝CHCH＝CHCH＝CH(CH₂)₃CH₃、

上述各结构式中的波浪线意指此处为基团连接处。

更优选的，本发明提供了具有如下结构式的化合物：

本发明的另一目的是提供一种制备式（1）所示化合物的制备方法，其包括如下的步骤：

（1）、取适量的硝酸银或硫酸银和顺铂进行反应，除去氯化银沉淀后，得到二氨二水合铂配合物的溶液；

（2）、将溶于适量有机溶剂的脂肪酸与步骤（1）得到二氨二水合铂配合物溶液反应，旋转蒸发除去溶剂，即得式（1）所示的新型铂类化合物。

步骤（1）中，硝酸银或硫酸银和顺铂按0.1~5：1摩尔比的量进行反应，优选的比例为0.5~3：1摩尔比，最优选的比例为1~2：1摩尔比的量进行反应，以尽量去除顺铂中的氯离子。

其中，优选的反应条件为在40~80℃水浴下持续搅拌，直至反应完全。更优选的反应条件为50~70℃，最优选为60℃。反应完全后，离心或过滤除去氯化银沉淀，即得到二氨二水合铂配合物的溶液。该溶液可放于4℃冰箱中保存备用。

步骤（2）中，所述的脂肪酸可选自饱和脂肪酸或非饱和脂肪酸，例如硬脂酸、月桂酸、棕榈酸、油酸、亚油酸或亚麻油酸等，上述各脂肪酸的2-位氨基取代物，同时还包括其它长链羧酸如维生素E琥珀酸酯，胆甾醇琥珀酸酯以及二油酰基磷脂酰丝氨酸钠盐等；可以是其中的一种，或至少包括两种的混合物等。

可用于溶解脂肪酸的有机溶剂可选自甲醇、乙醇、氯仿、丙酮、乙醚及乙酸乙酯中的一种或其混合物，优选乙醇或氯仿。

本发明的另一目的是提供一种含有式（I）所述新型铂类化合物的脂质体药物组合物，所述脂质体药物组合物包含2~10%的式（I）所示的铂类化合物，5~80%的磷脂，0~50%的胆固醇，0~30%的脂肪酸和0~20%的聚乙二醇衍生物。

优选的，所述脂质体药物组合物包含2~10%的式（I）所示的铂类化合物，5-85%的磷脂，5~50%的胆固醇，5~30%的脂肪酸和5~20%的聚乙二醇衍生物。

更优选的，所述脂质体药物组合物包含2~10%的式（I）所示的铂类化合物，50-70%的磷脂，5~10%的胆固醇，10~20%的脂肪酸和10~20%的聚乙二醇衍生物。

上述制剂中，各组分的百分比均为质量百分比，其含义为各组分的质量和所述组合物的总质量之比。

根据本发明所述的药物组合物，其中，所述的磷脂可选自天然磷脂或合成磷脂。天然磷脂可选自蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、磷脂酰丝氨酸及磷脂酰肌醇等；合成磷脂可选自二癸酰基卵磷脂、二月桂酰基卵磷脂、二肉豆蔻酰基卵磷脂、二棕榈酰基卵磷脂、二硬脂酰基卵磷脂、二油酰基卵磷脂、二芥酰基卵磷脂或二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸等；也可以是选自上述各磷脂的其中至少两种的混合物。

其中，所述的脂肪酸可选自饱和脂肪酸或非饱和脂肪酸，例如硬脂酸、月桂酸、棕榈酸、油酸、亚油酸或亚麻油酸等，上述各脂肪酸的2-位氨基取代物，同时还包括其它长链羧酸如维生素E琥珀酸酯，胆甾醇琥珀酸酯以及二油酰基磷脂酰丝氨酸钠盐等；可以是其中的一种，或至少包括两种的混合物等。

其中，所述的聚乙二醇（PEG）衍生物是PEG-类脂衍生物如磷脂酰乙醇胺的聚乙二醇衍生物（PEG-PE）、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的聚乙二醇衍生物（PEG-DSPE）等，其结构式如下：

优选的，上述的组合物中还可进一步包含5-85%冻干支架剂（质量百分比），所述的冻干支架剂可为甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、右旋糖苷、甘氨酸、泊洛沙姆等中的一种或几种，优选蔗糖。

更优选的，上述的组合物中包含5-78%冻干支架剂（质量百分比），更优选包括5-23%冻干支架剂（质量百分比）。

本发明提供的新型铂类化合物脂质体药物组合物粒径范围在50~200nm之间，Zeta电位在-20至-60mv之间，铂类脂质体的载药量在5~40%之间。与现有文献及专利已报道的脂质体不同，该铂类脂质体具有载药量高、稳定性好及抗癌活性强等特点。

因此，本发明还提供了一种铂类脂质体药物组合物的制备方法，该方法包括如下步骤：

（1）、取适量的硝酸银或硫酸银和顺铂或奥沙利铂进行反应，除去沉淀后，得到铂的配合物溶液；

（2）、通过薄膜分散-挤压法、薄膜分散-超声法或溶剂分散法制备空白脂肪酸-脂质体溶液；

（3）、取适量二氨二水合铂配合物溶液加入至空白脂肪酸-脂质体中，搅拌，避光充分反应；

（4）、将上述溶液通过透析、柱层析或离心分离，除去游离的顺铂，即得新型铂类脂质体溶液；

优选的，可将新型铂类脂质体溶液经冷冻干燥得到冻干粉针剂，所述冻干粉针剂即为上述的新型铂类化合物的脂质体药物组合物，包含2~10%的式（I）所示的铂类化合物，5~80%的磷脂，0~50%的胆固醇，0~30%的脂肪酸和0~20%的PEG材料。

更优选地，为便于贮存和运输，可在步骤（4）得到的铂类脂质体溶液中加入适量的支架剂，经冷冻干燥得到冻干粉针剂，其中支架剂占最终得到的冻干粉针剂质量百分比的5-85%，所述的冻干支架剂可为甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、右旋糖苷、甘氨酸、泊洛沙姆等中的一种或几种，优选蔗糖。

步骤（1）中，硝酸银和顺铂或奥沙利铂按0.1~5：1摩尔比的量进行反应，优选的比例为0.5~3：1摩尔比，最优选的比例为1~2：1摩尔比的量进行反应，以尽量去除顺铂中的氯离子。

其中，优选的反应条件为在40~80℃水浴下持续搅拌，直至反应完全。更优选的反应条件为50~70℃，最优选为60℃。反应完全后，离心或过滤除去氯化银沉淀，即得到二氨二水合铂配合物的溶液。该溶液可放与4℃冰箱中保存备用。

上述方法中，步骤（2）中的薄膜分散-挤压法制备空白脂肪酸-脂质体溶液的过程为：取按质量比为5~80份的磷脂，0~50份的胆固醇，0~30份的脂肪酸置于圆底烧瓶中，加入适量有机溶剂溶解，减压旋转蒸发，除去有机溶媒，在容器壁上形成薄膜，注入pH 8.0~9.0水溶液，使得膜材水化1~2h，过脂质体挤压器，得空白脂肪酸-脂质体溶液；

上述方法中，步骤（2）中的薄膜分散-超声法制备空白脂肪酸-脂质体溶液的过程为：取按质量比为5~80份的磷脂，0~50份的胆固醇，0~30份的脂肪酸置于圆底烧瓶中，加入适量有机溶剂，减压旋转蒸发，除去有机溶媒，在容器壁上形成薄膜，注入pH8.0~9.0水溶液，使得膜材水化1~2h，超声，得空白脂肪酸-脂质体溶液。

上述方法中，步骤（2）中的溶剂分散法制备空白脂肪酸-脂质体溶液的过程为：取按质量比为5~80份的磷脂，0~50份的胆固醇，0~30份的脂肪酸溶于有机溶剂，加至40~80℃的水溶液中，持续搅拌30分钟至1个小时，转移至减压旋转蒸发仪中进一步挥发有机溶剂，得到空白脂肪酸-脂质体溶液。

上述各方法中，根据需要可以在步骤（2）中加入按质量比为0~20份的聚乙二醇衍生物。

上述方法中，步骤（3）优选反应时间为5-24小时，优选为8-16小时。

上述方法中，步骤(4)为将步骤（3）得到的反应溶液置于截留分子量1000-10000的透析袋中透析，或过琼脂糖凝胶柱（如CL-4B凝胶柱），或者将上述溶液于0~4℃、5000~10000转离心5~10分钟，将沉淀溶于蒸馏水，除去游离的药物及其它成分，即得新型铂类脂质体溶液；

本发明通过薄膜分散-挤压法、薄膜分散-超声法或溶剂分散法制备空白脂肪酸-脂质体溶液，使得脂肪酸疏水端插入脂质双分子层中，而亲水性的羧基端伸向脂质体表面。将该空白脂肪酸-脂质体溶液和活化的二氨二水合铂配合物溶液反应，使得铂配合物上的两个硝酸根被脂肪酸上羧酸根置换，从而使铂结合在脂质体表面。该方法所涉及的化学反应及所制备的铂类脂质体结构示意图分别见图1和图2。

进一步的，如前所述，可通过加入支架剂，冷冻干燥得到方便储存和运输的铂类脂质体冻干粉针剂。根据上述方法制得的脂质体粒径可控，可根据需求制备出不同粒径大小并且粒径均一的脂质体，粒径范围在50~200nm之间，Zeta电位在-20至-60mv之间，铂类脂质体的载药量在5~20%之间。该方法与现有文献及专利已报道的脂质体不同，该铂类脂质体具有载药量高、稳定性好及抗癌活性强等特点。

本发明还提供了式（I）的化合物在制备治疗肿瘤疾病药物中的用途。本发明获得的铂类脂质体制剂可用于治疗多种实体瘤，如肺癌、肝癌、结直肠癌、卵巢癌、骨肉瘤、神经母细胞瘤、头颈部、宫颈、食管及泌尿系肿瘤等，本发明制备的铂类脂质体制剂可经注射途径给药，如静脉、肌肉或皮下注射给药。人体治疗给药剂量范围按人体表面积计为10~250mg/m²,优选可为50~100mg/m²。经实验验证该铂类脂质体能提高顺铂生物利用度，延长药物在体内的滞留时间，并可使顺铂浓集于癌变器官，不仅可以减少用药剂量，增强疗效，而且可以降低药物的毒副作用，适用于多种肿瘤疾病的治疗。

附图说明

图1：为铂类脂质体制备过程中发生的化学反应式，其中R基团来自饱和脂肪酸或非饱和脂肪酸及各种脂肪酸的2-位氨基取代物，同时还包括其它长链羧酸如维生素E琥珀酸酯，胆甾醇琥珀酸酯以及二油酰基磷脂酰丝氨酸钠盐等；可以是其中的一种，或至少包括两种的混合物等。

图2：为铂类脂质体结构示意图。

图3：为制备得到的铂类脂质体粒径分布图，其分布范围为50~200nm。

图4：为荷非小细胞癌A549裸鼠腹腔注射6mg/kg的CDDP和L-Pt后的生存曲线，其中■为生理盐水对照组；●为游离顺铂CDDP；▲为铂类脂质体L-Pt。

具体实施方式

实施例1

1）称取硝酸银5.56g溶于30ml蒸馏水置于50ml锥形瓶中，60℃水浴，搅拌下加入2.5g顺铂，继续搅拌直至反应完全。判断是否反应完全的方法为：取少量反应液离心，加入少量硝酸银，如果溶液不变浑浊，说明反应已完全，否则，说明氯离子未反应完全，应继续反应直至没有沉淀产生。将反应完全的反应液于4000转/分离心5分钟，洗涤沉淀，上清合并定容至50ml；

2）称取油酸2.34g溶于50ml甲醇，在搅拌状态下逐滴滴入上述含铂溶液中，避光反应过夜，反应液于2000rpm离心10分钟，沉淀水洗两次，将所得沉淀置于真空干燥箱中干燥，即得新型铂类化合物，其结构如下所示：

实施例2

1）称取硫酸银5.16g溶于30ml蒸馏水置于50ml锥形瓶中，60℃水浴，搅拌下加入2.5g顺铂，继续搅拌直至反应完全。判断是否反应完全的方法为：取少量反应液离心，加入少量硝酸银，如果溶液不变浑浊，说明反应已完全，否则，说明氯离子未反应完全，应继续反应直至没有沉淀产生。将反应完全的反应液于4000转/分离心5分钟，洗涤沉淀，上清合并定容至50ml；

2）称取油酸钠5.07g加入上述溶液中，在室温搅拌下反应30分钟，加入50ml丙酮萃取，在丙酮萃取液中加入无水硫酸镁除水，过滤，将滤液减压蒸发，进一步真空干燥，得到固体粉末即为新型铂类化合物。

3）用元素分析测定仪测得C-51.0%，N-3.20%，H-8.93%，由元素含量推算该铂类化合物分子量为C₃₄H₇₀N₂O₄Pt，其结构式见实例1。

实施例3.

二豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）475mg，二肉豆蔻磷脂酰甘油(DMPG)200mg,上述合成的新型铂类化合物50mg,溶于10ml氯仿,置于旋转蒸发仪上35℃减压回收有机溶剂，在瓶壁形成一层膜，进一步置于减压干燥器中完全除去有机溶剂。加入蒸馏水水化30min，反复冻融3次，所得脂质体溶液置于离心机中5000转离心5分钟，将沉淀溶于20ml10%(g/ml)蔗糖，即得铂类脂质体溶液，进一步冻干即可得铂类脂质体的冻干粉剂。

实施例4

1）称取硝酸银2.78g溶于30ml蒸馏水置于50ml锥形瓶中，60℃水浴，搅拌下加入2.5g顺铂，继续搅拌直至反应完全。判断是否反应完全的方法为：取少量反应液离心，加入少量硝酸银，如果溶液不变浑浊，说明反应已完全，否则，说明氯离子未反应完全，应继续反应直至没有沉淀产生。将反应完全的反应液于4000转/分离心5分钟，洗涤沉淀，上清合并定容至50ml；

2）称取卵磷脂425mg，胆固醇97mg，油酸57mg置于50ml圆底烧瓶中，溶于10ml氯仿，置于旋转蒸发仪上35℃减压回收有机溶剂，在瓶壁形成一层膜，进一步置于减压干燥器中完全除去有机溶剂。注入10mlpH8的蒸馏水中水化1h,反复冻融3次，置于脂质体挤压器中过100nm的微孔滤膜，即得空白脂质体；

3）吸取6.25ml活化的顺铂溶液加入至空白脂质体溶液中，搅拌下避光室温反应过夜，然后将溶液置于透析袋中（截留分子量3000），用蒸馏水透析一天，以除去顺铂脂质体溶液中游离的药物及其它小分子物质，即得铂类脂质体。

4)顺铂脂质体溶液中加入1g的蔗糖，置于真空冷冻干燥机将样品冻干，即得铂类脂质体冻干粉，测得脂质体粒径见图3，粒径分布范围为50-200nm之间。

实施例5

2）称取大豆磷脂425mg，胆固醇97mg，油酸57mg置于50ml圆底烧瓶中，溶于10ml乙醇，用注射剂将有机溶剂注入60℃20ml蒸馏水中，持续搅拌30分钟，转入减压旋转蒸发仪中50℃继续挥发有机溶剂，至有机溶剂挥发完全，超声30分钟，过0.1μm微孔滤膜，即得空白脂质体，调节脂质体溶液pH值至8.0；

3）吸取6.25ml活化的顺铂溶液加入至空白脂质体溶液中，搅拌下避光室温反应过夜，然后将溶液置于透析袋中（截留分子量3000），用蒸馏水透析一天，以除去铂类脂质体溶液中游离的药物及其它小分子物质，即得铂类脂质体。

4)铂类脂质体溶液中加入1g的蔗糖，置于真空冷冻干燥机将样品冻干，即得铂类脂质体冻干粉。

实施例6

2）称取91.2mg蛋黄卵磷脂，46.4mg胆固醇，38mg 2-氨基十六烷酸溶于10ml氯仿，置于旋转蒸发仪上35℃减压回收有机溶剂，在瓶壁形成一层膜，进一步置于减压干燥器中完全除去有机溶剂。注入10ml pH8的蒸馏水中水化1h,置于探头超声仪中超声10分钟，以减小空白脂质体粒径；

3）将活化的顺铂溶液加入至空白脂质体溶液中，搅拌下避光室温反应过夜，然后将溶液置于透析袋中（截留分子量3000），用蒸馏水透析一天，以除去铂类脂质体溶液中游离的药物及其它小分子物质，即得铂类脂质体。

实施例7

1）顺铂的活化同实例1。

2）称取二油酰基磷脂酰丝氨酸钠100mg,蛋黄卵磷脂100mg,PEG-DSPE10mg溶于10ml乙醇,置于旋转蒸发仪上35℃减压回收有机溶剂，在瓶壁形成一层膜，进一步置于减压干燥器中完全除去有机溶剂。加入活化顺铂水溶液水化30min(铂类化合物与脂质用量约为1:10的摩尔比),反复冻融3次，所得脂质体溶液置于离心机中5000转离心5分钟，将沉淀溶于10ml10%蔗糖，即得铂类脂质体溶液，进一步冻干即可得铂类脂质体的冻干粉剂。

实施例8

1）顺铂的活化同实例1；

2）空白脂质体的制备：称取蛋黄卵磷脂200mg,胆甾醇琥珀酸酯100mg,PEG-DSPE10mg溶于10ml乙醇，置于旋转蒸发仪上35℃减压回收有机溶剂，在瓶壁形成一层膜，进一步置于减压干燥器中完全除去有机溶剂。加入pH8的10ml10%的蔗糖溶液水化1h,探针超声5min，加入活化顺铂溶液（顺铂与胆甾醇琥珀酸酯的用量为2:1的摩尔比），避光反应24小时；

3）其它步骤同实例4。

实施例9

1）顺铂的活化同实例1；

2）空白脂质体的制备：称取氢化大豆磷脂300mg,胆甾醇琥珀酸酯60mg,油酸57mg,PEG-PE 100mg溶于10ml乙醇，置于旋转蒸发仪上35℃减压回收有机溶剂，在瓶壁形成一层膜，进一步置于减压干燥器中完全除去有机溶剂。加入pH8的10ml10%的蔗糖溶液水化1h,探针超声5min，加入活化顺铂溶液（顺铂与胆甾醇琥珀酸酯的用量为2:1的摩尔比），避光反应24小时；

3）其它步骤同实例4。

实施例10

用Zeta电位粒度测定仪检测所制备顺铂脂质体的粒径及Zeta电位，用电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES）测定脂质体中的铂元素含量，计算脂质体的载药量。结果表明所制备的铂类脂质体粒径在50-200nm之间，Zeta电位在-30至-60mv之间，铂类脂质体的载药量在5-20%之间。

实施例11

取对数增长的人非小细胞肺癌细胞A549和F98鼠胶质瘤细胞，以5×10³种植于96孔板，选用游离药物顺铂、实例4所制备的顺铂脂质体,将顺铂和顺铂脂质体按1:4的倍数稀释成一系列浓度，加入种植了肝癌细胞的96孔板，各种条件平行做3孔，于37℃、5%CO₂饱和湿度的培养箱中培养48h,加入pH7.4的磷酸缓冲液洗3次，每孔加入20μL5mg.mL^-1的MTT溶液，继续培养4h，吸去培养液，每孔加入二甲亚砜200μL，振荡充分溶解，置于酶标仪上570nm波长下测定每孔的吸光度，以浓度对数值对细胞存活率作图，计算各样品对A549细胞的IC₅₀值分别为游离药物顺铂0.42±0.06μM、铂类脂质体1.33±0.05μM；各样品对F98鼠胶质瘤细胞IC₅₀值分别为游离药物顺铂0.35±0.1μM、顺铂脂质体2.61±0.18μM，结果显示铂类脂质体对两种癌细胞均有较好的抑制作用。

实施例12

取SD大鼠12只，体重200-250g,随机分成2组，每组6只，雌雄各半，进样前禁食12小时。以顺铂注射液为参比制剂，实例4所制备的含铂脂质体为受试制剂，尾静脉注射，剂量为6mg·kg^-1，分别于0.25、0.5、1、2、4、8、12、24和36小时眼眶取血置于肝素化离心管中，4000r/min离心10min,取血浆105℃油浴蒸干试管内液体，加入0.5ml浓硫酸，孵化2h后,加入0.2-0.5ml双氧水至溶液变澄清，将所有样品定容至3ml，用电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES）测定铂元素含量。经药动学WinNonlin软件数据处理，得药动学参数见表1。

表1大鼠静脉注射顺铂制剂的非房室药动学参数（n=6）

实施例13

SPF级BALB/c nu/nu裸鼠，共30只，SPF级，均为雄性，6～8周龄，体重18-22g。取对数增长的人肺癌细胞A549,将单细胞浓度调至1×10⁷个/mL，将细胞接种于右背侧近腋部皮下，每只接种0.2mL细胞悬液，用游标卡尺测量肿瘤长径(L)和短径(W)并计算肿瘤体积(V)，V=L×W²/2。待肿瘤长至100-200mm³，将荷瘤小鼠随机分成3组（生理盐水组、游离药物顺铂组(CDDP)和实例4所制备的含铂脂质体组(L-Pt)，以6mg/kg的剂量腹腔注射各样品，每4天注射一次，连续给药4次，观察各组小鼠的生存质量情况，每2天称取体重一次并测量肿瘤大小，计算肿瘤体积，称量瘤重，计算抑瘤率(IR)，描绘肿瘤生存曲线。实验结果显示,用药组(CDDP和L-Pt)的肿瘤生长均比对照组缓慢,L-Pt组与CDDP组比较,不仅能使荷瘤鼠肿瘤生长缓慢,还可延长荷瘤鼠的生存时间。L-Pt组与CDDP组与对照组相比，无论是荷瘤鼠的平均生存期还是半数生存期与对照组比较均有显著性差异（P<0.001,时序检验）。生存曲线及其相关参数分别见图4和表2。

表2荷非小细胞癌A549裸鼠腹腔注射6mg/kg的CDDP和L-Pt后的生存时间

Claims

1.一种新型铂类化合物，其具有如式（I）所示的结构：

其中R1或R2基团可相同或不同，独立选自如下的基团：

其中，m为5-20的整数；n，p，x，y，a，b分别独立为3-10的整数。

2.根据权利要求1所述的铂类化合物，其特征在于：结构式（I）中所述的R1或R2基团相同或不同，独立选自如下的基团：

3.权利要求1所述铂类化合物的制备方法，其包括如下步骤：

4.一种含有权利要求1所述新型铂类化合物的脂质体药物组合物，所述脂质体药物组合物包含2~10%的式（I）所示的铂类化合物，5~80%的磷脂，0~50%的胆固醇，0~30%的脂肪酸和0~20%的聚乙二醇衍生物。

5.根据权利要求4所述的脂质体药物组合物，其特征在于：所述的脂质体药物组合物中还可进一步包含5-85%冻干支架剂（质量百分比），所述的冻干支架剂可为甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、右旋糖苷、甘氨酸、泊洛沙姆等中的一种或几种。

6.一种铂类脂质体药物组合物的制备方法，该方法包括如下步骤：

（1）、取适量的硝酸银或硫酸银和顺铂进行反应，除去沉淀后，得到铂的配合物溶液；

（4）、将上述溶液通过透析、柱层析或离心分离，除去游离的顺铂，即得含有权利要求1所述铂类化合物的铂类脂质体溶液。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述方法步骤（2）中的薄膜分散-挤压法制备空白脂肪酸-脂质体溶液的过程为：取按质量比为5~80份的磷脂，0~50份的胆固醇，0~30份的脂肪酸置于圆底烧瓶中，加入适量有机溶剂溶解，减压旋转蒸发，除去有机溶媒，在容器壁上形成薄膜，注入pH8.0~9.0水溶液，使得膜材水化1~2h，过脂质体挤压器，得空白脂肪酸-脂质体溶液。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述方法步骤（2）中的薄膜分散-超声法制备空白脂肪酸-脂质体溶液的过程为：取按质量比为5~80份的磷脂，0~50份的胆固醇，0~30份的脂肪酸置于圆底烧瓶中，加入适量有机溶剂，减压旋转蒸发，除去有机溶媒，在容器壁上形成薄膜，注入pH8.0~9.0水溶液，使得膜材水化1~2h，超声，得空白脂肪酸-脂质体溶液。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述方法步骤（2）中的溶剂分散法制备空白脂肪酸-脂质体溶液的过程为：取按质量比为5~80份的磷脂，0~50份的胆固醇，0~30份的脂肪酸溶于有机溶剂，加至40~80℃的水溶液中，持续搅拌30分钟至1个小时，转移至减压旋转蒸发仪中进一步挥发有机溶剂，得到空白脂肪酸-脂质体溶液。

10.权利要求1所述的铂类化合物在制备治疗肿瘤疾病药物中的用途。