CN108478521A - 一种载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针及其制备方法 - Google Patents

一种载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针及制备方法，通过反向微乳液法，通过制备溶解度更高的顺铂前体，制备脂质体纳米颗粒，用多种脂质体包裹顺铂，实现靶向定位癌细胞，并直接作用于癌细胞，并将纳米颗粒载于可溶性微针，直接贴在暴露在表皮的肿瘤，以提高化疗药疗效，减少副作用。此法制备的脂质体纳米颗粒，提高了顺铂的溶解度，可应用于各种难溶于水的药物中，为制作可溶性微针提供方便。脂质体纳米颗粒可以提高化疗药对肿瘤细胞的药物毒性，并一定程度减少副作用。将化疗药包进微针，可实现局部无痛注射，并且显著提高抗癌效果，减少副作用。

Description

一种载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针及其制备方法
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，尤其是涉及一种载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针。
背景技术
微针是由硅、金属、聚合物制成的长度为25～2000μm、针尖呈锥形的三维阵列。微针是生物医药领域里的一种新型的微创给药工具，可以透过皮肤表皮和真皮层而增强皮肤给药物效果。微针以其高效、安全、无痛感等优势在经皮给药领域中得到了广泛的应用。但对于肿瘤治疗领域中，微针的应用还是空白。
发明内容
本专利通过用纤维素与化疗药物，制备可溶性微针，微针可直接作用在肿瘤部位，以提高化疗药药物毒性，提高化疗疗效，同时减少系统性副作用。脂质体顺铂纳米颗粒相对于顺铂，靶向作用于癌细胞，有更强药物毒性，可以延长作用时间，降低化疗药物副作用。将化疗药物载入微针，可对一些肿瘤实现无痛局部给药。
为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针的制备方法，包括如下步骤：
步骤A，纳米颗粒的制备：将顺铂溶于水中，加入当量的硝酸银，加热搅拌后离心，去除氯化银颗粒，得到的液体即为顺铂前体；将顺铂前体与1,2-dioleoyl-sn-glycerol-3-phospate(DOPA)溶于由环己烷和 CO-520组成的油相A中，并将氯化钾溶于环己烷、TritonTMX-100和正己醇的油相B中，混合搅拌油相A和油相B组成的溶液，高速离心获得纳米颗粒，将纳米颗粒溶于氯仿后，加入适量的脂质体，蒸干后，得到脂质体顺铂纳米颗粒，将脂质体顺铂纳米颗粒溶于水中；
步骤B，使用聚二甲基硅氧烷(PDMS)通过铸模的方法制备微针的模具，以羧甲基纤维素钠(SCMC)溶液作为制备可溶性微针的材料，通过离心铸造法将脂质体顺铂纳米颗粒定位于模具的微针状部位，装满羧甲基纤维素钠溶液的聚二甲基硅氧烷(PDMS)模具进行干燥处理，得到干燥的载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针贴片。
优选的，所述步骤A中的脂质体如：1,2-dioleoyl-3-trimethy-lammonium-propane(DOTAP)、1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000](ammonium salt)(DSPE-PEG-AA)或胆固醇。
优选的，所述干燥的载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针贴片为可剥离型。
优选的，所述步骤B中，干燥处理的温度为40℃，干燥时间为2小时。
还保护一种通过上述的制备方法制得的可溶解微针。
还保护一种上述的可溶解微针在肿瘤治疗中的应用。
相对于现有技术，本发明所述的载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针及其制备方法具有以下优势：
1.此法制备的脂质体纳米颗粒，提高了顺铂的溶解度，可应用于各种难溶于水的药物中，为制作可溶性微针提供方便。
2.脂质体纳米颗粒可以提高化疗药对肿瘤细胞的药物毒性，并一定程度减少副作用。
3.将化疗药包进微针，可实现局部无痛注射，并且显著提高抗癌效果，减少副作用。
附图说明
图1为脂质体顺铂纳米颗粒的透射电镜图(标尺：100nm)；
图2为脂质体顺铂纳米颗粒的粒径分布图；
图3为本发明的可溶解微针阵列的扫描电镜图及单个可溶解微针的放大图；
图4为脂质体顺铂纳米颗粒对三种癌细胞的50％抑制浓度对比图；
图5为细胞凋亡实验中对照组、顺铂组与纳米颗粒组的细胞凋亡程度对比示意图；
图6为鼠移植瘤模型实验中六个实验组的肿瘤大小的图片(a.Control,b.CDDP,c.LPC NPs,D.CDDP Locally,E.CDDP MN,F.LPC NPs MN)。
具体实施方式
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下面结合实施例及附图来详细说明本发明。
一种载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针的制备方法，包括如下步骤：
步骤A，纳米颗粒的制备：将顺铂溶于水中，加入当量的硝酸银，加热搅拌后离心，去除氯化银颗粒，得到的液体即为顺铂前体；将顺铂前体与1,2-dioleoyl-sn-glycerol-3-phospate(DOPA)溶于由环己烷和 CO-520组成的油相A中，并将氯化钾溶于环己烷、TritonTMX-100和正己醇的油相B中，混合搅拌油相A和油相B组成的溶液，高速离心获得纳米颗粒，将纳米颗粒溶于氯仿后，加入适量的脂质体，如：1,2-dioleoyl-3-trimethy-lammonium-propane(DOTAP)、1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000](ammonium salt)(DSPE-PEG-AA)或胆固醇。蒸干后，得到脂质体顺铂纳米颗粒，将脂质体顺铂纳米颗粒溶于水中。如图1所示，为脂质顺铂纳米颗粒的透射电镜图。如图2所示，为脂质体顺铂纳米颗粒的粒径分布，可见球体直径分布均质，多介于30nm-120nm，平均粒径为63.6nm。
步骤B，使用聚二甲基硅氧烷(PDMS)通过铸模的方法制备微针的模具，以羧甲基纤维素钠(SCMC)溶液作为制备可溶性微针的材料，通过离心铸造法将脂质体顺铂纳米颗粒定位于模具的微针状部位，装满羧甲基纤维素钠溶液的PDMS模具在40℃环境下干燥2小时，得到干燥的载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针贴片。干燥的微针贴片为可剥离型。如图3所示，为微针的扫描电镜图。
还保护一种通过上述的制备方法制得的可溶解微针。
还保护一种上述的可溶解微针在肿瘤治疗中的应用。
试验例一
细胞毒性实验：
步骤1，在96孔板中每孔接种5000个人舌癌或咽癌细胞。本试验采用CAL27、SCC-15和FaDu三种细胞。
步骤2，经过24小时的贴壁后，吸弃上清液，加入均匀悬浮有不同浓度的顺铂(CDDP)和脂质体顺铂纳米颗粒(LPC NPs)的细胞培养液。
步骤3，于37℃细胞培养箱内孵育24小时后以CCK-8法[2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐]测试细胞活性。
步骤4，计算出达到50％抑制效果时抑制剂的浓度IC50(其中IC50越低，表示药物毒性越高)，结果如图4所示。
实验结果表明，纳米颗粒的药物毒性明显高于顺铂本身。
试验例二
细胞凋亡实验：
步骤1，将细胞接种在6孔板中；
步骤2，经过24小时贴壁后，加入一定浓度的顺铂和脂质体顺铂纳米颗粒处理细胞4小时，用无药物处理的细胞作为对照组；
步骤3，用Annexin V-碘化丙啶对细胞染色，并在流式细胞仪分析细胞凋亡程度，如图5所示。
实验结果表明，脂质体顺铂纳米颗粒引起的细胞凋亡明显高于顺铂。
试验例三
鼠移植瘤模型实验：
步骤1，将100万个FaDu(人咽部鳞状细胞癌细胞系)注射入老鼠背部皮下，一周长出一个明显的肿瘤。
步骤2，将老鼠随机分为六个组(每组5只老鼠)，分别为对照组(静脉注射生理盐水，Control)，顺铂组(静脉注射顺铂,CDDP)，纳米颗粒组(静脉注射纳米颗粒,LPC NPs)，局部组(普通针头局部注射顺铂,CDDP-locally)，顺铂微针组(包载顺铂的微针注射，CDDP-MN)，纳米颗粒微针组(包载纳米颗粒的微针注射，LPC NPs-MN)。每三天进行一次药物注射，共3次，最后一次注射完三天后处死老鼠，并收集肿瘤。每次记录肿瘤的大小和老鼠体重。6个实验组的肿瘤图片如图6所示。
实验结果表明，纳米颗粒微针组的肿瘤尺寸最小，说明该组对肿瘤细胞的药物毒性最高。
以上三个试验例中所述的纳米颗粒均为脂质体顺铂纳米颗粒。
可溶性微针具有无痛，快速溶解的特点，可以包覆化疗药物(如顺铂，脂质体顺铂纳米颗粒等)，用于治疗暴露在表面的肿瘤，例如头颈部鳞状细胞癌，黑色素瘤等。
本专利通过反向微乳液法，通过制备溶解度更高的顺铂前体，制备脂质体纳米颗粒，用多种脂质体包裹顺铂，实现靶向定位癌细胞，并直接作用于癌细胞，并将纳米颗粒载于可溶性微针，直接贴在暴露在表皮的肿瘤，以提高化疗药疗效，减少副作用。
以所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤A，纳米颗粒的制备：将顺铂溶于水中，加入当量的硝酸银，加热搅拌后离心，去除氯化银颗粒，得到的液体即为顺铂前体；将顺铂前体与1,2-dioleoyl-sn-glycerol-3-phospate溶于由环己烷和 CO-520组成的油相A中，并将氯化钾溶于环己烷、TritonTMX-100和正己醇的油相B中，混合搅拌油相A和油相B组成的溶液，高速离心获得纳米颗粒，将纳米颗粒溶于氯仿后，加入适量的脂质体，蒸干后，得到脂质体顺铂纳米颗粒，将脂质体顺铂纳米颗粒溶于水中；
步骤B，使用聚二甲基硅氧烷通过铸模的方法制备微针的模具，以羧甲基纤维素钠溶液作为制备可溶性微针的材料，通过离心铸造法将脂质体顺铂纳米颗粒定位于模具的微针状部位，装满羧甲基纤维素钠溶液的聚二甲基硅氧烷模具进行干燥处理，得到干燥的载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针贴片。
2.根据权利要求1所述的载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针的制备方法，其特征在于：所述步骤A中的脂质体如：1,2-dioleoyl-3-trimethy-lammonium-propane、1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000](ammonium salt)或胆固醇。
3.根据权利要求1所述的载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针的制备方法，其特征在于：所述干燥的载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针贴片为可剥离型。
4.根据权利要求1所述的载有脂质体顺铂纳米颗粒的可溶解微针的制备方法，其特征在于：所述步骤B中，干燥处理的温度为40℃，干燥时间为2小时。
5.一种通过权利要求1-4任一项所述的制备方法制得的可溶解微针。
6.一种权利要求5所述的可溶解微针在肿瘤治疗中的应用。
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