CN111747965B

CN111747965B - 一种数字化绿色化智能化制备高纯度补骨脂成分群或单体的方法及其药物组合物

Info

Publication number: CN111747965B
Application number: CN202010648283.6A
Authority: CN
Inventors: 邢宸; 吴祖栋; 邢为藩
Original assignee: Nanjing Aili Ke Pharmaceutical Co ltd; Nanjing Chenxiang Medical Research Co ltd
Current assignee: Nanjing Aili Ke Pharmaceutical Co ltd; Nanjing Chenxiang Medical Research Co ltd
Priority date: 2020-07-07
Filing date: 2020-07-07
Publication date: 2022-04-19
Anticipated expiration: 2040-07-07
Also published as: CN111747965A

Abstract

本发明提供了一种数字化绿色化智能化制备高纯度补骨脂成分群或单体的方法及其药物组合物，属于中药制药技术领域。所述方法包括以下步骤：取补骨脂粉末用醇溶液进行热提取3次，趁热甩滤；合并粗滤液，智能化错流过滤后的精滤液过大孔吸附树脂柱，依次用纯化水、15％、25％、30％和40％的醇溶液洗涤，以50％醇溶液洗脱，回收醇，得补骨脂成分群，或过C‑18烷基键合硅胶柱，以50％甲醇溶液洗涤洗脱，分别按目标要求选择RT时间段收集补骨脂素洗脱液和异补骨脂素洗脱液，回收溶剂至干，得补骨脂素和异补骨脂素。所述方法采用智能化在线控制，工艺简捷，节能减排，高纯度低成本，产品批内均匀，批间重复，质量稳定可控。

Description

一种数字化绿色化智能化制备高纯度补骨脂成分群或单体的方法及其药物组合物

技术领域

本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种数字化绿色化智能化制备高纯度补骨脂成分群、补骨脂素和异补骨脂素的方法及药物组合物与临床应用。

背景技术

中药补骨脂为(Psoralea coryli folia L.)干燥成熟果实，为豆科植物，别名为和兰苋、胡韭子。补骨脂中主要活性成分补骨脂素(psoralen)和异补骨脂素(isopsoralen)等香豆素类成分。补骨脂素具有抗肿瘤、提高免疫，抗氧化等作用，用于治疗高脂血症，白血病、抗抑郁、抗病毒、抑菌，抗白癫风等作用。异补骨脂素可促细胞增殖，调节机体的内分泌，缓解更年期综合症。

补骨脂素和异补骨脂素为同分异构体，两者理化性质极其相似，给分离纯化带来较大困难，在相关专利中，提取和萃取的容剂多用有一定的毒性的有机溶剂，提取方法多为长时间回流提取、微波提取，ASE萃取，超临界CO₂流体提取等，提取次数多，提取时间长；过滤多为粗滤；分离纯化方法有大孔树脂、液相、高速逆流色谱，超临界流体等，存在制备量小，操作繁琐，难大量分离纯化；或是可大量分离，但分离溶剂的选择难度，分离过程中亦存较大损耗等，方式方法多样，多有美中不足：高耗能大排放是中药制药的一大问题；药材质量多变影响产品质量不稳定，没有数字化标准，影响临床的有效性和安全性；生产周期冗长，生产效率低；使用有机溶剂较多，存在安全风险等。因此，研究安全高效的补骨脂成分群、补骨脂素和异补骨脂素的提取分离纯化工艺十分必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种数字化绿色化智能化制备高纯度补骨脂成分群、补骨脂素和异补骨脂素的方法及其药物组合物。

本发明提供了一种数字化绿色化智能化制备高纯度补骨脂成分群、补骨脂素和异补骨脂素的方法，包括以下步骤：

1)将补骨脂粉末用热50％的醇溶液搅拌提取3次，每次趁热离心甩滤，合并得粗滤液；

2)将所述粗滤液放置冷却2h，进行智能化错流过滤，得精滤液；

3)将所述精滤液过大孔吸附树脂柱，依次用3BV纯化水、5BV15％醇溶液、5BV25％醇溶液、10BV30％醇溶液和10BV40％醇溶液洗涤，用6BV50％醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收醇至尽，得补骨脂成分群溶液；

4)将所述补骨脂成分群溶液过C-18烷基键合硅胶柱，以50％甲醇溶液洗涤-洗脱，分别选择RT时间段收集补骨脂素和异补骨脂素洗脱液，并分别回收溶剂至干，即得补骨脂素和异素补骨脂素。

优选的，步骤1)或步骤3)中醇溶液包括甲醇溶液或乙醇溶液，浓度均为体积百分浓度。

优选的，步骤1)中提取的温度70～80℃。

优选的，步骤1)中第一次提取的补骨脂粉末为中粉，此中粉与醇溶液的质量比为1:4～6；提取时间为10～30min；

第二次和第三次提取的料-液质量比独立为1:3～5；提取的时间独立为5～15min。

优选的，步骤2)中智能化错流过滤的孔径为0.2μm；所述智能化错流过滤包括自动反冲功能，当过滤堵塞时会自动反冲1～3min。

优选的，步骤3)中所述大孔吸附树脂选自D101、D301、FL-2、SP-3或SP-7型大孔吸附树脂。

优选的，步骤4)中所述洗脱的流速为1～2BV/h。

本发明提供了一种药物组合物，活性成分包括所述方法提取得到的补骨脂成分群、补骨脂素和/或异补骨脂素，还包括药学上可接受的载体。优选的，所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、溶液剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂或注射用冻干粉剂。

本发明还提供了所述药物组合物在制备预防或治疗白血病、皮肤病、抑郁症或内分泌失调的药物中的应用。

本发明提供的数字化绿色化智能化制备高纯度补骨脂成分群、补骨脂素和异补骨脂素的方法，首先将补骨脂粉末加热醇溶液搅拌提取3次，每次趁热离心甩滤，合并得粗滤液，回收溶剂后，放置冷却2h,再用智能化错流过滤，得精滤液，过大孔吸附树脂柱，依次用纯化水、10％、20％、30％和40％醇溶液洗涤，以50％乙醇溶液洗脱，回收有机溶剂至尽，得补骨脂成分群溶液，经负压喷雾干燥即得补骨脂成分群；也可以取补骨脂成分群溶液过C-18烷基键合硅胶柱，以50％甲醇水溶液洗涤或洗脱，分别选择适宜的RT时间段收集补骨脂素和异补骨脂素洗脱液，并分别回收溶剂至干，得补骨脂素，纯度为100％(归一化)，收率71％；得异补骨脂素，纯度为98.94％(归一化)，收率73％。

与现有文献技术相比，本发明有益贡献在于：

(1)本品除提取加热时间很短温度低以外，其他关键步骤均不加热：相对于文献制备工艺节省90％以上的能源，减少了大量二氧化碳和酸性气体的排放，同时还使生产周期显著缩短，生产成本明显降低，实现了“绿色化”。

(2)本发明提供的提取液，先用纯化水和低浓度醇洗涤大孔树脂柱将目标成分与铅、砷、汞、镉、铜、钾离子和色素、树脂、蛋白质、农残等杂质分离除去，再用稍高浓度的醇洗脱大孔树脂柱，得到高纯度的补骨脂成分群(主成分为补骨脂素和异补骨脂素)，因为补骨脂素和异补骨脂素两者理化性质太相似，故用制备柱将二者分离开来，最终获得高纯度、高产率补骨脂素和异补骨脂素，采用智能化在线控制错流过滤、洗涤和洗脱的生产全过程，规避了许多人为因素的影响，实现了“智能化”。

(3)本发明所述方法采用智能化在线控制生产，精确控制洗涤终点和洗脱收集目标产品区间，不仅实现成分群产品数字化和效益最大化，更重要的是规避药材质量良莠不一对目标产品质量的影响，产品质量批内均匀，批间重复，稳定可控。

附图说明

图1为补骨脂药材中粉提取精滤液的HPLC图；

图2为溶剂峰的HPLC图；

图3为补骨脂成分群的HPLC图；

图4为补骨脂素样品的HPLC图；

图5为补骨脂素对照品HPLC图；

图6为异补骨脂素样品的HPLC图；

图7为异补骨脂素对照品的HPLC图。

具体实施方式

1)将补骨脂中粉，加热50％的醇溶液搅拌提取3次，趁热离心甩滤，合并得粗滤液；

2)将所述粗滤液放置冷却2h后，再智能化错流过滤，得精滤液；

4)将所述补骨脂成分群水溶液过C-18烷基键合硅胶柱，以50％甲醇溶液洗脱，分别选择保留时间段，收集补骨脂素洗脱液和异补骨脂素洗脱液，并分别回收溶剂至干，即得补骨脂素和异素补骨脂素。

在本发明中，所述补骨脂粉末优选为补骨脂中粉。本发明对所述补骨脂的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的补骨脂即可。在本发明实施例中，所述补骨脂应先取小样检测补骨脂素和异素补骨脂素的含量符合要求后，再购买，其来源不限。

在本发明中，醇溶液中醇优选包括甲醇或乙醇，更优选为乙醇，醇浓度均为体积百分浓度；热提取的温度优选为70～80℃。第一次提取的补骨脂中粉与醇溶液的质量比(料-液比)优选为1:4-6，更优选为1:5；提取时间优选为10-30min，更优选为20min。第二次和第三次提取的料-液质量比独立为1:3-5，更优选为1:4。提取的时间独立优选为5-15min，更优选为10min。本发明采用短时间热搅拌提取的方式，在满足尽可能提取更多有效物质的基础上降低能源消耗，节能减排达90％。所述趁热离心甩滤的操作是为了较快的料-液分离，别无特殊限制；所述离心甩滤的转速均为正常离心机转速。

在本发明中，所述粗滤液，应放置冷却2h，使水不溶的杂质析出完全，在后续过滤时除去；所述粗滤液进行智能化错流过滤，是带有自动反冲功能的错流过滤器，当过滤堵塞时会自动反冲1-3min，即恢复正常过滤，得精滤液，无需反复拆卸、冲洗、安装，费时费事费力，保证过滤质量，有利于后续纯化,所述错流过滤器没有特殊限制。

得到精滤液后，本发明将所述精滤液过大孔吸附树脂柱，依次用3BV纯化水、5BV15％醇溶液、5BV 25％醇溶液、10BV 30％醇溶液和10BV 40％醇溶液洗涤，用6BV 50％醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收醇至尽，得补骨脂成分群溶液。

在本发明中，所述大孔吸附树脂柱优选选自D101、D301、FL-2、SP-3或SP-7型大孔吸附树脂，更优选为FL-2或SP-3型大孔吸附树脂。本发明对所述大孔吸附树脂柱的种类没有特殊限制，采用本领域所熟知的上述大孔吸附树脂柱类型即可。收集的洗脱液中补骨脂素和异补骨脂素洗脱液总纯度≤90％。所述洗脱时，50％醇溶液的流速一般优选为1-2BV，得到所述补骨脂成分群水溶液后，本发明将所述补骨脂成分群水溶液过C-18烷基键合硅胶柱，以50％甲醇溶液洗涤洗脱，各参数应符合HPLC系统适用性要求，分别收集补骨脂素、异补骨脂素洗脱液的保留时间段因仪器和色谱柱的不同而各异，需要根据实时情况确定收集补骨脂素和异补骨脂素的保留时间段，再分别回收溶剂至干，即得补骨脂素和异素补骨脂素。

在本发明中，所述50％甲醇溶液洗脱的流速优选为8ml/min。

本发明使用智能化在线控制错流过滤、洗涤终点和目标产品的收集区间，减少人为因素的影响，保证产品批内均匀，批间重现，规避了药材质量的良莠不一对产品质量的影响，保证临床用药的有效性和安全性。实现了工艺的绿色化和智能化。

本发明所述方法制备得到的补骨脂成分群、补骨脂素和异补骨脂素，经过测定，补骨脂成分群收率约为75％，纯度约为90％；补骨脂素和异补骨脂素收率约为70％，纯度为≥99.0％。本发明提供的方法提取纯化效率高，生产周期短，节能减排，产品质量稳定可控。

本发明提供了一种药物组合物，活性成分包括但不限于上述方案提取分离的补骨脂成分群和/或补骨脂素和/或异补骨脂素，还包括药学上可接受的载体。其中所述活性成分占所述药物组合物总质量的0.1-99％。本发明对所述辅料的种类和含量没有特殊限制，采用本领域所熟知的载体即可，包括但不限于填充剂、崩解剂、缓释剂、矫味剂、着色剂、润滑剂、助溶剂、促吸收剂、粘合剂等一种或多种能相容的固体、液体溶剂等。

本发明提供的所述药物组合物在制备预防或治疗包括但不限于白血病、皮肤病、抑郁症或内分泌失调的药物中的应用，所述药物的剂型包括但不限于片剂、胶囊剂、溶液剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂或注射用冻干粉剂。本发明对所述药物的剂型的制备方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的药物各剂型的制备方法即可。

下面结合实施例对本发明提供的一种数字化绿色化智能化制备高纯度补骨脂成分群、补骨脂素和异补骨脂素的方法及药物组合物及其临床应用，进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1补骨脂成分群、补骨脂素、异补骨脂素的制备

提取:取10kg补骨脂中粉，加80℃50％乙醇溶液50kg，搅拌提取20min，趁热甩滤，得滤液1，滤渣1加80℃50％乙醇溶液40kg，热提取10min，趁热甩滤，得滤液2，滤渣2加80℃50％乙醇溶液40kg，热提取10min，趁热甩滤，得滤液3，滤渣3可供制备沼气和/或绿肥，合并滤液1、2和3，得粗滤液。将粗滤液放置2h，冷至室温，再经智能化错流过滤，得精滤液。将得到精滤液进行HPLC检测，得到图谱见图1。将50％甲醇溶液的HPLC图谱见图2。

纯化:取上述精滤液，过SP-3大孔树脂柱(径:高＝10cm:110cm)，依次用3BV纯化水、5BV15％乙醇溶液、5BV 25％乙醇水溶液、10BV30％乙醇溶液、10BV40％乙醇溶液洗涤，6BV50％乙醇洗脱。收集补骨脂成分群(含补骨脂素和异补骨脂素，总纯度≤90％)洗脱液，回收乙醇至尽，得补骨脂成分群溶液。补骨脂成分群溶液的HPLC图谱见图3。

异构体分离：补骨脂成分群溶液过C-18烷基键合硅胶柱，以50％甲醇溶液为流动相洗涤/洗脱，流速8ml/min，分别按目标纯度收集补骨脂素和异补骨脂素洗脱液，分别回收溶剂，再浓缩至干。将补骨脂素和异素补骨脂素分别进行HPLC检测，同时HPLC检测补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，得到补骨脂素HPLC图谱见图4，补骨脂素对照品HPLC图谱见图5。异素补骨脂素HPLC图谱见图6，异补骨脂素对照品HPLC图谱见图7。经HPLC图谱比对，本发明获得的补骨脂素和异补骨脂素分别与其对照品的RT近似，说明产品为补骨脂素和异补骨脂素。得补骨脂素19.3g，纯度99.15％，收率81.1％。异素补骨脂素23.5g，纯度100％，收率89％。

实施例2补骨脂成分群、补骨脂素、异补骨脂素的制备

提取:取10kg补骨脂中粉，加80℃50％甲醇水溶液50kg，搅拌提取20min，趁热甩滤，得滤液1，滤渣1加80℃50％甲醇水溶液50kg，加热回流提取10min，趁热甩滤，得滤液2，滤渣2加80℃50％甲醇水溶液50kg，加热回流提取10min，趁热甩滤，得滤液3，滤渣3可供制备沼气和/或绿肥，合并滤液1、滤液2和滤液3，得粗滤液。将粗滤液放置2h，冷至室温，再经智能化错流过滤，得精滤液。

纯化:取上述精滤液，过FL-2大孔树脂柱(径:高＝10cm:100cm)，依次用3BV纯化水、5BV15％甲醇水溶液、5BV 25％甲醇水溶液、10BV30％甲醇水溶液、10BV40％甲醇水溶液洗涤，6BV50％甲醇洗脱。收集补骨脂成分群(含补骨脂素和异补骨脂素，总纯度≤90％)洗脱液，回收乙醇至尽，得补骨脂成分群水溶液；蒸干即得补骨脂成分群。

异构体分离：补骨脂成分群水溶液过C-18烷基键合硅胶柱，以50％甲醇溶液为流动相洗涤/洗脱，流速8ml/min，分别按目标纯度收集补骨脂素和异补骨脂素洗脱液，分别回收溶剂，再浓缩至干，得补骨脂素18.9g，纯度99.11％，收率80.3％。异素补骨脂素23.1g，纯度99.21％，收率89.4％。

实施例3补骨脂素片剂的制备

丸心处方：

包衣液处方：

工艺过程：

预处理：取补骨脂素、微晶纤维素、羧甲淀粉钠过80目筛。

制软材：将补骨脂素、微晶纤维素、羧甲淀粉钠按等量递增的原则，将原辅料混合均匀，加入纯化水，反复搓揉制成软材。

制粒与干燥：将软材通过20目筛制粒，将湿粒至真空干燥箱中于40℃以下减压干燥，过18目筛整粒，即得干颗粒。

测颗粒含量：按临床研究用质量标准(草案)测定颗粒含量，计算应压片重

压片与包衣：按计算片重压片，取片包胃溶薄膜衣，增重2.65％。

全检：取样按临床研究用质量标准全检，各检测指标应均符合规定。

注：补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂成分群三者的处方一致，操作过程相同，下同。

实施例4补骨脂素微丸的制备

丸心处方：

包衣液处方：

工艺过程：

预处理分别取补骨脂素、异补骨脂素，补骨脂素和异补骨脂素混合物、微晶纤维素、羧甲淀粉钠过80目筛。

制软材：将补骨脂素、异补骨脂素，补骨脂素和异补骨脂素混合物、微晶纤维素、羧甲淀粉钠按等量递增的原则，将原辅料混合均匀，加入纯化水，反复搓揉制成软材。

挤压与滚圆：将软材通过挤压机挤压成条，再经过切割滚圆机切割滚圆，即成湿微丸。

干燥：将湿微丸置真空干燥箱中于40℃以下减压干燥，去除细粉，即得微丸。

包衣：取微丸包胃溶薄膜衣，增重2.49％。

全检：取样按临床研究用质量标准(草案)全检，各检测指标应均符合规定。

实施例5注射用补骨脂素的制备

处方：

工艺过程：

配制：取异补骨脂素和PVPK12置研钵中，边加50℃新鲜制备的注射用水研磨搅拌，直至溶解，加新鲜制备的注射用水至1800ml，慢慢加入甘露醇搅拌使溶解，再加新鲜制备的注射用水至2000ml，加0.5g针用活性炭搅拌10min，脱碳，再用错流过滤精滤，得精滤液。

精滤液分装与干燥：取精滤液，过0.1μm微孔膜过滤，分装于10ml西林瓶中，每瓶2ml，冷冻干燥36h。

全检：全检、印字、分装、包装、入库。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种数字化绿色化智能化制备高纯度补骨脂单体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将补骨脂粉末用热体积百分浓度为50%的甲醇水溶液搅拌提取3次，每次趁热离心甩滤，合并得粗滤液；

3)将所述精滤液过大孔吸附树脂柱，依次用3BV纯化水、5BV15%醇溶液、5BV25%醇溶液、10BV30%醇溶液和10BV40%醇溶液洗涤，用6BV50%醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收醇至尽，得补骨脂成分群溶液；

4)将所述补骨脂成分群溶液过C-18烷基键合硅胶柱，以50%甲醇溶液洗涤-洗脱，分别选择保留时间段收集补骨脂素和异补骨脂素洗脱液，并分别回收溶剂至干，即得补骨脂素和异补骨脂素；

步骤1)中第一次提取的补骨脂粉末为中粉，此中粉与甲醇溶液的质量比为1:5；提取时间为20min；

第二次和第三次提取的料-液质量比独立为1:5；提取的时间独立为10min。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1)中提取的温度70~80℃。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2)中智能化错流过滤的孔径为0.2μm；所述智能化错流过滤包括自动反冲功能，当过滤堵塞时会自动反冲1~3min。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤3)中所述大孔吸附树脂选自D101、D301、FL-2、SP-3或SP-7型大孔吸附树脂。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4)中所述洗脱的流速为1~2BV/h。