CN111662346A - 一种绿色化智能化高纯度淫羊藿苷的制备及其药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种绿色化智能化高纯度淫羊藿苷的制备及其药物组合物，属于天然活性物质的中药制药技术领域。步骤为：取淫羊藿中粉用热水快速提取，趁热甩滤得粗滤液；放置冷却2h，再经智能化错流过滤得到精滤液；所得精滤液过大孔吸附树脂柱，梯度洗涤、洗脱，得目标淫羊藿苷粗品洗脱液，回收醇至干，得淫羊藿苷粗品，重结晶，得高纯度淫羊藿苷。通过智能化在线控制洗涤终点和目标成分的收集区间，避免许多人为因素，保证产品批内均匀，批间重现，规避了因药材质量良莠不齐对产品质量造成较大影响，操作简便快捷，高收率，高纯度，低成本，节能减排，适合于工业化生产。

Description

一种绿色化智能化高纯度淫羊藿苷的制备及其药物组合物

技术领域

本发明属于天然活性物质的提取技术领域，具体涉及一种绿色化智能化制备高纯度淫羊藿苷的制备技术及其药物组合物。

背景技术

淫羊藿(EpimediumBrevicornum Maxim)系小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(Epimedium Linn.)植物的干燥地上部分，为中国传统中药，且被《中国药典》收载，别名：心叶淫羊藿、短角淫羊藿、巫山淫羊藿等。因其具有补肾壮阳、祛风除湿等功效，常用于治疗阳痿遗精、小便淋漓、盘骨痿软、风湿痹痛等。

淫羊藿苷是淫羊藿中的主要活性物质，大量医学研究表显示，淫羊藿苷具有很高的约用价值：具有调节内分泌、免疫、心血管系统、提高造血功能、抗肿瘤、抗衰老、皮炎、调节基因、代谢等，可用于开发治疗肿瘤，老年痴呆，皮肤等方面疾病的医药，具有较好的市场前景。将其水解产生的淫羊藿苷元的作用更为明显。

关于淫羊藿的提取纯化技术的研究较多，但多限于实验室小试研究，提取的溶剂多用乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等低沸点有机溶剂，存在安全风险，提取方法多为长时间热回流提取、提取次数较多，提取时间较长；过滤多为粗滤；分离纯化有大孔吸附树脂、聚酰胺、硅胶等，多为联用，洗涤洗脱，浓缩至干；然后再用有机溶剂萃取、重结晶、双水相体系或多级双水相体系分离等，方式方法多样，但是提取纯度不高，收率较低(纯度为90％左右，少见98.7％，收率为22％～89.6％)。高耗能大排放；药材质量多变，影响产品质量不稳定，生产周期冗长，生产效率低，影响临床的有效性和安全性等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种绿色化智能化淫羊藿苷的制备方法及药物组合物。包括以下步骤：

1)取淫羊藿中粉与水混合搅拌热提取3次，趁热甩滤，合并滤液，得粗滤液；

2)将所述粗滤液放置冷却2h后，用智能化错流过滤，得精滤液；

3)将所述精滤液过大孔吸附树脂柱，依次采用5BV纯化水、5BV20％醇溶液、10BV30％醇溶液和10BV40％醇溶液梯度洗涤，用3BV50％醇溶液洗脱，选择适宜的保留时间段收集目标成分洗脱液，回收醇溶剂，得淫羊藿苷粗品；

4)将所述淫羊藿苷粗品用50％乙醇溶液重结晶，得到淫羊藿苷。

优选的，步骤1)中第一次提取的淫羊藿中粉和水的质量比为1g:6～10mL；第二、三次提取的料-液质量比为1g：4～6mL。

优选的，步骤1)中第一次提取的时间为10～30min，优选为20min；第二、三次提取的时间独立为5～15min，优选为10min。

优选的，步骤1)中，所述水的温度为70～80℃。

优选的，步骤2)中智能化错流过滤的孔径为0.2μm；所述“智能化”是带有自动反冲功能，当过滤堵塞时即自动反冲1-3分钟至解除堵塞后，即自动恢复正常过滤，无需反复拆卸、冲洗、安装，费时费事费力，保证过滤质量。

优选的，步骤3)中所述大孔吸附树脂独立选自D101、D301、FL-2、SP-3和SP-7型大孔吸附树脂中的一种或多种联用，优选为FL-2、SP-3。

优选的，步骤3)中醇溶液包括乙醇水溶液或甲醇水溶液，所述醇水溶液的浓度均为体积百分浓度。

优选的，步骤3)中回收醇溶剂后，在4℃～10℃放置2h使析晶完全，然后抽滤、干燥，即得。

优选的，步骤4)中重结晶用醇溶液浓度均为体积百分浓度。

本发明提供了一种药物组合物，包括所述制备方法得到的淫羊藿苷和药学上可接受的载体；

所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、溶液剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂和注射用冻干粉剂。

本发明提供的绿色化智能化淫羊藿苷的提取方法，与现有技术相比，本发明取得有益效果：

(1)本发明淫羊藿苷制备用热水搅拌超短时间提取，过大孔吸附树脂一次完成纯化，相对于现有制备工艺节能减排达90％以上，减少了大量二氧化碳和酸性气体的排放，实现了工艺的“绿色化”。

(2)本发明采用智能化在线控制工艺的关键步骤：智能化错流过滤、精准控制洗涤终点和洗脱收集目标产品区间等，实现效益最大化，规避药材质量良莠不齐对目标产品的影响，产品质量批内均匀，批间重现，质量稳定可控，实现了工艺的“智能化”。

(3)生产周期显著缩短，收率、纯度显著提高，生产成本明显降低，质优价廉。

附图说明

图1为淫羊藿提取精滤液的HPLC谱图；

图2为溶剂的HPLC谱图。

图3为本发明提供的淫羊藿苷样品的HPLC谱图；

图4为淫羊藿苷对照品HPLC谱图。

具体实施方式

本发明提供了一种绿色化智能化淫羊藿苷的提取方法，包括以下步骤：

1)取淫羊藿中粉与水混合搅拌提取3次，趁热甩滤，合并滤液，得粗滤液；

2)将所述粗滤液放置冷却2h，用智能化错流过滤，得精滤液；

3)将所述精滤液过大孔吸附树脂柱，依次采用5BV水、5BV 20％醇溶液、10BV 30％醇溶液和10BV 40％醇溶液梯度洗涤，用3BV 50％醇溶液洗脱，收集目标成分区间洗脱液，回收醇溶剂，得淫羊藿苷粗品；

4)将所述淫羊藿苷粗品50％乙醇重结晶，得到淫羊藿苷。

在本发明中，所述淫羊藿的来源没有特殊限制，应先取小样检测淫羊藿苷含量符合要求再决定购买为妥。第一次提取的淫羊藿中粉和纯水的料-液比优选为1g:6～10mL，更优选为1g:8mL；第二、三次提取的料-液比独立优选为1g：4～6mL，更优选为1g:5mL。第一次提取的时间优选为10～30min，更优选为20min；第二、三次提取的时间独立优选为5～15min，更优选为10min。所述加热水的水温为70～80℃。3次提取可使淫羊藿中活性成分提取完全。本发明对所述甩滤的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的离心机即可。所述趁热过滤能够提高过滤速度，过滤是为了渣-液分离，也是为精滤做准备。

所述粗滤液放置冷却2h后，使水不溶的杂质充分析出，以便用智能化错流过滤除去，得精滤液。

在本发明中，“智能化”错流过滤用滤器的孔径为0.2μm。所述“智能化”错流过滤是当过滤堵塞时，能自动反冲功1～3min，即可恢复正常过滤状态，无需反复拆卸、反冲、安装、费时费事费力。本发明对所述智能化错流过滤用仪器没有特殊限制，采用本领域所熟知的智能化错流过滤器即可。

本发明将所述精滤液过大孔吸附树脂柱，以0～40％醇溶液梯度洗涤，用50％醇水溶液洗脱，选择适宜的保留时间段收集目标成分洗脱液，回收醇溶剂，得淫羊藿苷粗品。

在本发明中，所述大孔吸附树脂优选选自D101、D301、FL-2、SP-3和SP-7型大孔吸附树脂中的一种或多种联用，优选为FL-2或SP-3。所述大孔吸附树脂柱的直径与柱高的比值为40mm：1100mm。本发明对所述大孔吸附树脂的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的大孔吸附树脂即可。

在本发明中，所述洗脱时优选采用3BV 50％醇溶液洗脱，流速一般为1-2BV/h。本发明所述回收醇溶剂没有特殊限制，一般用负压回收方法。所述醇溶液优选的包括乙醇溶液或甲醇溶液，更优选为乙醇溶液。智能化在线控制洗涤终点和目标成分的收集区间，避免许多人为因素，保证产品批内均匀，批间重现，规避了因药材质量良莠不齐对产品质量造成很大影响，以免影响临床用药的安全性和有效性。

得到淫羊藿苷粗品后，本发明将所述淫羊藿苷粗品重结晶溶剂，优选为50％醇溶液，包括乙醇溶液或甲醇溶液，更优选为乙醇溶液。

在本发明中，采用本发明所述纯化方法得到的淫羊藿苷的纯度为99.15％，收率为67.83％。

本发明提供了一种药物组合物，包括所述提取方法得到的淫羊藿苷和药学上可接受的载体；所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、溶液剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂和注射用冻干粉剂及其他新剂型。

在本发明中，所述淫羊藿苷占所述药物组合物的总质量的0.1～99％。本发明对所述药物组合物的各剂型的制备方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的制备方法即可。所述药物组合物包括但不限制用于治疗治疗阳痿遗精、小便淋漓、肿瘤、老年痴呆、盘骨痿软、风湿痹痛、皮肤病等疾病。

下面结合实施例对本发明提供的一种绿色化智能化淫羊藿苷的制备方法及药物组合物进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1淫羊藿苷的制备

1)提取：取1kg淫羊藿中粉，加热纯化水8kg，搅拌提取20min，趁热甩滤，得滤液1，滤渣1加热纯化水6kg，搅拌提取10min，趁热甩滤，得滤液2，滤渣2加热纯化水6kg，搅拌提取10min，趁热甩滤，得滤液3，滤渣3可供制沼气和/或绿肥，合并甩滤液1、2、3得粗滤液。

2)精滤：将粗滤液放置室温冷却2h后，经智能化错流过滤，得精滤液。

3)纯化：取上述精滤液，过SP-3大孔吸附树脂柱，依次用5BV纯化水、5BV 20％乙醇溶液、10BV 30％乙醇溶液、10BV40％乙醇溶液梯度洗涤；用3BV 50％乙醇溶液洗脱，收集目标成分洗脱液(含淫羊藿苷≥95％，归一化)，回收洗脱液中的乙醇至尽，见有固体析出，在4-10℃放置2h，使结晶完全，过滤，压紧抽干，干燥，得淫羊藿苷粗品2.08g(收率69.8％，纯度95.81％)。

4)重结晶：用50％乙醇重结晶，得到淫羊藿苷纯品2.01g，收率为96.63％，纯度为99.15％。

实施例2淫羊藿苷的制备

1)提取：取10kg淫羊藿中粉，加热纯化水80kg，搅拌提取20min，趁热甩滤，得滤液1，滤渣1加90℃纯化水60kg，搅拌提取10min，趁热甩滤，得滤液2，滤渣2加加90℃纯化水60kg，搅拌提取10min，趁热甩滤，得滤液3，滤渣3可供制沼气和/或绿肥，合并甩滤液1、2、3，得粗滤液

2)精滤：将总粗滤液放置2h，冷至室温，经智能化错流过滤，得精滤液。精滤液的HPLC谱图如图1所示。

3)分离纯化：取上述精滤液，过SP-3大孔树脂柱，依次用5BV纯化水、5BV20％乙醇、10BV 30％乙醇、10BV40％乙醇梯度洗涤，3BV 50％乙醇洗脱，收集目标成分区间洗脱液(含淫羊藿苷≥95％，归一化)，回收洗脱液中的乙醇至尽，见有固体析出，在4-10℃放置2h，使结晶完全，过滤，压紧，抽干，干燥，得淫羊藿苷粗品20.9g(收率70.2％，纯度95.74％)。

4)重结晶：用50％乙醇重结晶，得到淫羊藿苷纯品20.2g，收率为96.62％，纯度为99.11％。淫羊藿苷纯品的HPLC谱图如图3所示，淫羊藿苷对照品的HPLC谱图如图4所示。

实施例3淫羊藿苷片的制备

素片处方：

包衣液处方：

胃溶包衣粉 20g

纯化水 200ml

共制 200ml包衣增重3～5％。

工艺过程：

预处理：分别取淫羊藿苷、微晶纤维素、羧甲淀粉钠过80目筛。

制软材：将淫羊藿苷、微晶纤维素、羧甲淀粉钠按等量递增的原则，将原辅料混合均匀，加入纯化水，反复搓揉制成软材。

制粒与干燥：将软材过20目筛制粒，得湿颗粒，置真空干燥箱中，于40℃以下减压干燥，经18目整粒，即得。

测含量：取颗粒测定淫羊藿苷的含量，计算应压片重。

压片：按计算应压片重压片，即得素片。

包衣：取胃溶包衣液包薄膜衣，增重3.23％。

全检：取样按临床研究用质量标准全检，各检测指标应均符合规定。

实施例4淫羊藿苷微丸的制备

丸心处方：

包衣液处方：

胃溶包衣粉 20g

纯化水 200ml

共制 200ml包衣增重3～4％。

工艺过程：

预处理：分别取淫羊藿苷、微晶纤维素、羧甲淀粉钠过80目筛。

制软材：将淫羊藿苷、微晶纤维素、羧甲淀粉钠按等量递增的原则，将原辅料混合均匀，加入纯化水，反复搓揉制成软材。

挤压与滚圆：将软材通过挤压机挤压成条，再经切割滚圆机切割滚圆，即成湿微丸。

干燥：将湿微丸置真空干燥箱中于40℃以下真空干燥，即得微丸。

包衣：取微丸包胃溶薄膜衣，增重2.89％。

装胶囊分装包装取适量微丸装入适合的胶囊中，分装、包装贴、标签，入库。

全检:取样按临床研究用质量标准全检，各检测指标应均符合规定。

实施例5

注射用淫羊藿苷的制备

处方：

工艺过程：

配制：取淫羊藿苷和PVPK12置研钵中，边加50℃新鲜制备的注射用水边搅拌，直至溶解，加新鲜制备的注射用水至1800ml，慢慢加入甘露醇搅拌使溶解，再加新鲜制备的注射用水至2000ml，加0.2g针用活性炭搅拌10min，脱碳，再经错流过滤，得精滤液。

分装与干燥：用0.1μm微孔膜滤过，分装于10ml西林瓶中，每瓶2ml，冷冻干燥36h。

全检：印字、分装、包装、全检、入库。

以上所述仅是本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种绿色化智能化高纯度淫羊藿苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取淫羊藿中粉与水混合搅拌热提取3次，趁热甩滤，合并滤液，得粗滤液；

2)将所述粗滤液放置冷却2h，用智能化错流过滤，得精滤液；

3)将所述精滤液过大孔吸附树脂柱，依次采用5BV水、5BV 20％醇溶液、10BV 30％醇溶液和10BV 40％醇溶液梯度洗涤，用3BV 50％醇溶液洗脱，收集目标成分区间洗脱液，回收醇溶剂，得淫羊藿苷粗品；

4)将所述淫羊藿苷粗品用50％乙醇重结晶，得到淫羊藿苷。

2.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤1)中第一次提取的淫羊藿中粉与水的料-液质量比为1g:6～10mL；第二、三次提取的料-液质量比为1g：4～6mL。

3.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤1)中第一次提取的时间独立为10～30min；第二、三次提取的时间独立为5～15min。

4.根据权利要求1～3任意一项所述提取方法，其特征在于，步骤1)中，所述水的温度为70～80℃。

5.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤2)中错流过滤的孔径为0.2μm；所述“智能化”错流过滤是带有自动反冲功能的错流过滤。

6.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤3)中所述大孔吸附树脂独立选自D101、D301、FL-2、SP-3和SP-7型大孔吸附树脂中的一种或多种联用。

7.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤3)中醇水溶液中的醇包括乙醇水溶液或甲醇水溶液，所述醇水溶液的浓度均为体积百分浓度。

8.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤3)中回收醇溶剂后还包括将剩余的洗脱液在4℃～10℃放置2h使结晶完全，然后抽滤、压紧抽干。

9.根据权利要求1、2、3和5～8任意一项所述方法，其特征在于，步骤4)中重结晶用50％乙醇为体积百分浓度。

10.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1～9任意一项所述提取方法得到的淫羊藿苷和药学上可接受的载体；

所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、溶液剂、颗粒剂、软胶囊剂、微丸剂和注射用冻干粉剂。

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