CN111690620A

CN111690620A - 一株魏氏梭菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用

Info

Publication number: CN111690620A
Application number: CN202010691495.2A
Authority: CN
Inventors: 潘强; 任慧英; 孙虎芝; 刘广芹; 葛超
Original assignee: Qingdao No Antibiotics Biotechnology Co ltd
Current assignee: Qingdao No Antibiotics Biotechnology Co ltd
Priority date: 2020-07-17
Filing date: 2020-07-17
Publication date: 2020-09-22
Anticipated expiration: 2040-07-17
Also published as: CN111690620B

Abstract

本发明公开了一株魏氏梭菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用，该噬菌体为魏氏梭菌噬菌体PMQ06，于2020年5月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.19977。所述噬菌体具有高效杀菌活性，裂解谱宽，温度稳定性高，可作为活性成分用于制备预防和治疗鸡魏氏梭菌病的药物、环境消毒剂、饲料添加剂以及抑菌剂等，可广泛应用于养殖过程、以及产品加工生产过程中各个环节，快速、高效、安全杀灭致病性魏氏梭菌乃至耐药性魏氏梭菌，有效降低发病鸡的死亡率，还具有安全、无残留、无副作用的优点。

Description

一株魏氏梭菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株魏氏梭菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用。

背景技术

魏氏梭菌(C.welchii)，属于芽孢杆菌科，梭状芽孢杆菌属，魏氏梭菌种。在自然界分布较广，可见于土壤、污水、饲料、食物、粪便以及人畜肠道等中。在一定条件下，可引起多种严重疾病。在人和动物活体组织内或在含血清的培养基内生长时形成荚膜，无鞭毛，不能运动。该菌能产生多种致病作用的外毒素，对人畜危害较大。

鸡坏死性肠炎主要是由A型魏氏梭菌感染引起，少数由C型魏氏梭菌感染引起作为魏氏梭菌感染的常见病，该病以发病快，采食量突然下降，精神沉郁，翅下垂，腹泻，增重率下降，精神萎顿，嗜睡，羽毛蓬乱，食欲减退，腹泻，甚至排带血粪便等为主要特征，给养禽业带来了巨大的经济损失。

传统的预防产气荚膜梭菌感染导致的鸡坏死性肠炎的方法是向动物的饲料和饮水中加入抗生素。但是随着近年来兽药残留问题逐渐受到人们的关注，养禽业中对抗生素的使用限制越来越严格；并且，在我国为保证食品安全以及避免鸡蛋中药物残留，产蛋鸡群禁止使用抗生素，导致了由于没有有效治疗方法，鸡坏死性肠炎的发病率程现上升趋势，给国内外的养禽业带来了重大的经济损失。目前，虽然出现中药调理的方法防坏死性肠炎，但是中药存在治疗周期长、疗效不理想、用药成本高等缺点。

目前还没有安全有效的药剂对魏氏梭菌导致的鸡坏死性肠炎进行防治，现有技术有待进一步改进。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一株安全高效的魏氏梭菌噬菌体PMQ06及其应用；该噬菌体不仅可用于制备预防和治疗魏氏梭菌病的药物，还可用于制备禽类饲料添加剂、以及环境消毒剂等。该噬菌体PMQ06还可与其他噬菌体复配形成更宽裂解谱的噬菌体组合物。该噬菌体使用安全、无副作用，用以解决因魏氏梭菌造成的感染、以及与水体中魏氏梭菌大量增殖引起的水体问题，避免了因使用抗生素造成的抗生素残留、以及诱发耐药性魏氏梭菌的问题。

本发明的技术方案具体如下：

第一方面，本发明提供了一株魏氏梭菌噬菌体PMQ06，该噬菌体自山东省养鸡场的患鸡坏死性肠炎病鸡中分离得到的，已于2020年5月15日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.19977。

电镜下观测到：噬菌体PMQ06的头部呈多面体结构，头部直径约46nm，具有6个短尾丝，属于短尾噬菌体科。

第二方面，本申请还提供了上述魏氏梭菌噬菌体在制备预防和治疗因魏氏梭菌感染导致疾病的药物中的应用。本文中术语“预防”是指包括通过给予所述噬菌体来抑制或延迟所述疾病的所有行为。本文中术语“治疗”是指包括通过给予所述噬菌体而使所述疾病好转或有所改善的所有行为。

上述魏氏梭菌感染的疾病包括由魏氏梭菌感染引发的各种疾病。应用方法为：将噬菌体PMQ06或其噬菌体组合物或者其加工后的药剂作为治疗药物添加到患有鸡坏死性肠炎的畜禽饲料中，或对畜禽体表喷雾，或给畜禽灌服，或给畜禽肌肉注射，或通过加入饮水中的方式，其中优选地，以饮水方式给药，可起到预防及治疗鸡坏死性肠炎，提高鸡的存活率的目的，且操作简单，应用性强。

优选地，上述魏氏梭菌噬菌体可用于制备预防和治疗因魏氏梭菌感染导致的鸡坏死性肠炎的药物。用法为：该药物可通过饮水或混合饲料的方式对鸡进行喂食，可以预防魏氏梭菌引起的坏死性肠炎疾病。经过实验验证，在感染魏氏梭菌的7日龄鸡中，使用1×10⁸PFU/mL的噬菌体组合物，连用3天。在14天内可以有效降低患病雏鸡的80％左右的死亡率。

第三方面，本发明还提供一种噬菌体组合物，包括如上所述的魏氏梭菌噬菌体PMQ06。这种噬菌体组合物可通过魏氏梭菌噬菌体PMQ06与其他魏氏梭菌噬菌体进行复配，用于制备防治水产品魏氏梭菌病的各类产品。

优选地，上述噬菌体组合物还包括噬菌体PMQ06的突变体中的一种或多种；所述突变体与对应的噬菌体的同源性不小于90％，且保持基本相同的抑菌活性。由于噬菌体在复制过程中非常容易发生突变，因而优选地，上述噬菌体的突变体也在本申请请求保护的范围内。通过现有技术中公知的计算机程序可以适当地进行同源性的测定，PMQ06的突变体与该噬菌体的天然序列同源性至少达到90％；更优选的，突变体有92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％与各自对应的噬菌体的天然序列相同。其中，PMQ06的序列可根据本发明保藏的生物材料通过公知的方法测序得到。上述噬菌体的突变体可为点突变、缺失突变或添加突变，相对于最初的噬菌体序列，有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多碱基可发生变化。对于本领域技术人员来说，根据本发明提供的噬菌体筛选出与其性状相似的突变体并不需要付出创造性的劳动。

第四方面，本发明还提供一种噬菌体药物制剂，其有效成分主要为上述的魏氏梭菌噬菌体或上述噬菌体组合物。优选地，所述噬菌体药物制剂还包括其他特定病原菌的噬菌体。

可选地，上述噬菌体药物制剂的剂型为口服给药剂型、注射给药剂型，优选地，采用口服给药剂型。上述药物制剂的剂型具体为粉剂、水剂、冻干剂、凝胶剂、丸剂或片剂。

可选地，所述噬菌体药物制剂中还包含药学上可接受的载体。本文所使用的术语“药学上可接受的载体”指不对生物体造成显著刺激且不消除所给予的活性组分的生物活性和特性的载体或稀释剂。为了将所述药物组合物配制成液体制剂，药学上可接受的载体必须适于无菌和生物相容性。实例包括盐水、无菌水、Ringer’s溶液、缓冲生理盐水、白蛋白输注液、葡萄糖溶液、麦芽糖糊精溶液、甘油和乙醇。它们可以单独使用或以其任意组合使用。如果需要，可以加入其它常规添加剂，例如，抗氧化剂、缓冲剂和抑菌剂等。当还与稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂和/或润滑剂组合时，还可以将本发明的组合物制备成注射剂(例如，水性溶液、悬浮液和乳液)，或者丸剂、胶囊、粒剂或片剂。

第五方面，本申请还提供一种饲料添加剂，其包括如上所述的魏氏梭菌噬菌体或噬菌体组合物，通过与禽类、畜类饲料进行混拌后饲喂使用，从而达到预防或治疗魏氏梭菌病的效果。优选地，饲料中每种噬菌体的效价至少为1×10⁸PFU/g。

第六方面，本申请还提供一种环境消毒剂，其有效成分主要为所述的魏氏梭菌噬菌体或噬菌体组合物；优选地，噬菌体的效价为1×10⁷PFU/ml以上。上述环境消毒剂还包含其他用于环境中病毒、细菌抑制或消灭的活性成分或其他助剂，如能延长噬菌体持效期的助剂。

上述环境消毒剂的应用方法为：将环境消毒剂在屠宰场、畜禽产品加工车间及器具、养殖环境中使用，防止环境中魏氏梭菌的污染。例如包括但不限于以液体浸泡、喷洒、与含水性载体联合使用等形式对配水系统、养殖业设施或其他环境表面进行消毒去污，可有效控制目标细菌的生长及活性。所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于洗涤剂、消毒剂、去污剂等。

第七方面，本发明还提供一种检测试剂盒，其包括如上所述的魏氏梭菌噬菌体或噬菌体组合物。本领域技术人员可根据本发明公开内容和本领域常识利用上述魏氏梭菌噬菌体或其噬菌体组合物制备检测试剂盒，用于检测其特异侵染的魏氏梭菌、或用于防控由其宿主魏氏梭菌侵染导致的疾病。

第八方面，本发明还提供用于禽类产品消毒的生物抑菌剂，其有效成分主要为上述魏氏梭菌噬菌体或噬菌体组合物。生物抑菌剂的使用方法为：对水产品的生鲜产品表面进行浸泡或者喷雾消毒，来抑制产品加工或保鲜过程中魏氏梭菌的增殖。优选地，所述禽类产品为鸡产品。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明提供了一株新的魏氏梭菌噬菌体PMQ06及药物制剂，以及各种应用，该噬菌体具有广谱杀菌效果，裂解谱宽，可作为活性成分用于制备预防和治疗鸡魏氏梭菌病的药物、环境消毒剂、饲料添加剂以及抑菌剂等，可广泛应用于养殖过程、以及产品加工生产过程中各个环节，快速、高效、安全杀灭致病性魏氏梭菌乃至耐药性魏氏梭菌，有效降低发病鸡的死亡率，大幅度地提高鸡的存活率。

2、实验证明，上述魏氏梭菌噬菌体PMQ06作为有效成分，制备预防及治疗鸡坏死性肠炎药物的的药物制剂，不仅显著提高患有坏死性肠炎的发病鸡的存活率，并且该噬菌体PMQ06具有高温度稳定性及高酸碱稳定性的优点，可适用于各种较为严苛的工作环境；该噬菌体的潜伏期短，爆发快，应用时起效快，应用性强。

3、上述噬菌体PMQ06从自然界中获得，数量庞大，来源广，容易分离获得，属于天然生物。因此，以裂解性魏氏梭菌噬菌体为主要成分的药物制剂成本低、无刺激性气味、无环境污染问题，为鸡坏死性肠炎的治疗提供一种绿色新型生物制剂。

附图说明

图1为魏氏梭菌噬菌体PMQ06的电镜图片；

图2为魏氏梭菌噬菌体PMQ06的噬菌斑图片；

图3为魏氏梭菌噬菌体PMQ06的pH稳定性实验结果；

图4为魏氏梭菌噬菌体PMQ06的热稳定性实验结果；

图5为魏氏梭菌噬菌体PMQ06的一步生长曲线；

图6为实施例10中对鸡肠道内魏氏梭菌的清除作用效果图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。在本发明中，若非特指，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

实验材料：本发明中的粪液污水、鸡肠道及肝脏等样品采自山东省多个养鸡场。

实施例1噬菌体的分离和纯化

1、致病菌的分离与鉴定

从山东某鸡场，收集患有坏死性肠炎的病鸡进行解剖，从鸡肠道内分离致病菌。将致病菌分别在1％葡萄糖-5％绵羊血培养基进行厌氧培养，对得到的致病菌进行镜检形态鉴定，并通过相应的PCR进行分子鉴定。

结果：在1％葡萄糖-5％绵羊血培养基上分离到灰白色的大菌落，菌落边缘有双层溶血环，经魏氏梭菌特异性引物PCR鉴定为A型魏氏梭菌。

2、魏氏梭菌噬菌体的分离

取50mL鸡场的粪液污水或5g鸡肠道及肝脏，加入500μL上述分离的A型魏氏梭菌(即致病菌)，再加入TSB培养基至200mL，37℃浸泡孵育过夜。次日，取出5-8mL的液体，11000rpm离心10min，上清液经0.22μm的无菌微孔滤膜滤过，得到噬菌体原液。利用双层平板法分离噬菌体，将噬菌体原液通过倍比稀释，取稀释液各取120μL与120μL致病菌增殖液混合均匀，37℃孵育5min后，置于约60℃保温的上层琼脂(TSA，琼脂浓度为0.7％)，混匀后迅速倾倒下层琼脂(TSA，琼脂浓度为1.5％)平皿上，摇匀平置至培养基凝固，置于37℃倒置进行厌氧培养3～6h后，获得形成噬菌斑的双层平板。将获得的魏氏梭菌噬菌体命名为PMQ06。

3、魏氏梭菌噬菌体PMQ06的纯化和增殖

从形成噬菌斑的上述双层培养基挑取单个噬菌斑，并将其置于1mL的TSB肉汤中，在37℃，170rpm的条件下震荡1h，得到噬菌体浸出液。取噬菌体浸出液200μL与200μL相应的上述致病菌增殖液混合均匀，于37℃条件下孵育5min。采用软琼脂平板法进行操作，并将平板置于37℃倒置厌氧培养5～12h后，再次获得形成噬菌斑的双层平板。在形成噬菌斑的双层培养基上用灭菌镊子挑取单个噬菌斑置于1mL的TSB肉汤中，170rpm震荡30min得到噬菌体浸出液。重复以上步骤3次，得到纯化后的噬菌体浸出液，取200μL纯化后的噬菌体与200μL致病菌增殖液于5mL液体TSB培养基中，37℃，170rpm厌氧振荡培养，直至液体变清亮，将清亮液体11000rpm离心10min，取上清，使用0.22μm的无菌微孔滤膜滤过，得到噬菌体增殖液。

如图2所示，魏氏梭菌噬菌体PMQ06在双层琼脂培养基平板上可以形成透亮空斑，噬菌斑周围无晕环，边缘清晰规则，直径约1mm。

实施例2魏氏梭菌噬菌体PMQ06的形态学特性

将上述分离的噬菌体PMQ06悬液滴于覆有聚乙烯甲醛膜的铜网上，以2％磷钨酸染色5～10min，干燥后利用日立HT7700型透射电子显微镜观察。

如图1所示，电镜下观察到：噬菌体PMQ06的头部呈多面体结构，头部直径约46nm，具有6个短尾丝。根据病毒分类国际委员会(ICTV)的定义，噬菌体PMQ06的形态符合短尾噬菌体科的特征，属于短尾噬菌体科。

实施例3魏氏梭菌噬菌体PMQ06的效价测定

将增殖好的噬菌体原液做10倍比稀释，取10^-6、10^-7、10^-8，3个稀释度。分别取上述3个稀释度噬菌体120μL和宿主菌悬液120μL混合加入到无菌EP管中，充分混匀。37℃孵育5min后，采用软琼脂平板法后倒置37℃恒温箱厌氧培养5～6h，观察结果。每个稀释梯度做2个平行，计数时以噬菌斑为30～300之间的稀释度为准，取每个稀释度2个平行的平均值，计算噬菌体的效价。

噬菌体效价(pfu/mL)＝平均噬菌斑数×稀释倍数×10。

结果显示：PMQ06的噬菌体效价为3.40×10⁹PFU/mL。

实施例4魏氏梭菌噬菌体PMQ06的pH稳定性

取无菌试管中加入不同pH值(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13)的TSB肉汤4.5mL，各三支，然后将试管置于37℃的水浴锅中，待温度稳定之后，各加入500μL的PMQ06噬菌体增殖液，混匀37℃水浴作用1h、2h、3h。作用结束之后，立即向各混合液中加入适量的1mol/L的HCl或者NaOH，使混合液的pH值约为7，进行10倍比稀释，取合适稀释梯度测定效价，每个pH值试管设定2个重复。最后，以pH值为横坐标，噬菌体效价的对数值为纵坐标，绘制PMQ06噬菌体pH值稳定性曲线。

如图3的测试结果显示，PMQ06在pH4-11比较稳定，在pH 12的条件下作用2h，效价开始下降，pH 13时效价降低5个数量级或失活。该结果说明：噬菌体PMQ06的酸碱耐受能力强。

实施例5魏氏梭菌噬菌体PMQ06的热稳定性

取100μL PMQ06增殖液分装于无菌EP管中，分别于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃水浴中作用10min，30min，50min，70min，90min，120min。设2个重复。待作用结束后取样，并立即将样品置于冰浴中冷却，进行10倍比稀释，取合适稀释梯度测定效价。以温度为横坐标，以噬菌体效价的对数值为纵坐标，绘制PMQ06噬菌体的热稳定性曲线。

如图4的测试结果所示：噬菌体PMQ06在10min-120min，40～70℃的温度范围内的效价较稳定，在80℃作用120min，其效价降低5个数量级，但依然保持一定活性。该结果说明，噬菌体PMQ06具有优异的热稳定性，可应用于较高温度的工作环境。

实施例6魏氏梭菌噬菌体PMQ06一步生长曲线的测定

实验方法：将感染复数为10的PMQ06增殖液和魏氏梭菌新鲜增殖液各1mL，充分混匀(此时开始计时)，37℃孵育5min，12000rpm条件下离心30s，用微量移液器尽量吸去上清，再用5mL TSB肉汤洗涤1次(12000rpm离心30s)，弃上清。用预热的TSB肉汤混悬沉淀(总体积为5mL)并充分混匀，迅速置于37℃摇床中170rpm振荡培养，在0时刻和每隔10min取出150μL，10000rpm离心1min，测定效价，做2个平行，结果取平均值，以感染时间为横坐标，感染体系中噬菌体的滴度为纵坐标，绘制一步生长曲线，得到PMQ06噬菌体的潜伏期、爆发期和爆发量。

爆发量＝稳定期噬菌体浓度/初始菌浓度

测试结果：如图5所示，噬菌体PMQ06在感染初期0～40min内，效价基本保持在10⁶PFU/mL，潜伏期约为40min；而在40～50min内，进入爆发期，噬菌体效价急剧增加，并在60min后达到稳定，达到10⁹PFU/mL，爆发期约为20min，通过计算可得出噬菌体PMQ06爆发量分别为75。可见该噬菌体的潜伏时间短，且爆发速度快。

实施例7噬菌体的裂解率的检测实验

选取实验室保存的魏氏梭菌39株作为PMQ06的裂解实验对象，采用双层平板法检测噬菌体PMQ06的裂解谱。这些菌株是2019～2020年内在山东、广西、河南、安徽、江苏鸡场中患有坏死性肠炎的病鸡的肠道内分离鉴定出来的致病菌。

表1魏氏梭菌噬菌体对致病菌的裂解能力

注：+：裂解,软琼脂平板法有透亮噬菌斑；-：未裂解。

如上表1的结果可得，针对临床分离的39株魏氏梭菌，噬菌体PMQ06能够裂解其中的36株魏氏梭菌，裂解率高达92.31％，这说明此噬菌体的裂解率较高，具有较宽的裂解谱。

实施例8噬菌体的安全性试验

实验方法：噬菌体制剂的成分：魏氏梭菌噬菌体PMQ06，LB肉汤培养基；噬菌体效价＞5×10⁹PFU/mL。

将60只14日龄SPF鸡分为试验组1(15只)、试验组2(15只)和对照组1(15只)、对照组2(15只)。对试验组1的每只鸡进行口服1ml噬菌体制剂的处理，对试验组2的每只鸡进行肌肉注射1ml噬菌体制剂的处理；对对照组1的鸡进行口服等量的无菌生理盐水的处理，对对照组2的鸡进行注射等量的无菌生理盐水的处理。饲养14天观察每组鸡的临床体征，并解剖鸡以便观察肠道病变。

结果显示，在组合物处理14天后，各组鸡均无死亡，且并未观察到鸡群腹泻，增重率下降，精神萎顿，嗜睡，羽毛蓬乱，食欲减退，腹泻，甚至排带血粪便等异常现象。解剖试验组鸡内脏和肠道无病变。上述结果表明噬菌体组合物安全、无毒副作用。

实施例9噬菌体PMQ06对鸡肠道内魏氏梭菌的清除作用

实验方法：将20只7日龄SPF鸡，随机分为2组，每组10只，分别为对照组和试验组。所有鸡自由饮水采食，在0h口服攻毒含1×10⁷cfu/ml的魏氏梭菌。攻毒后立即给药，给试验组的鸡灌服1mL噬菌体悬浮液(噬菌体效价约1×10⁸pfu/mL)，给对照组的鸡灌服1mL生理盐水。攻毒后12h、24h、48h，从每组中随机取5只鸡用CO₂窒息法处死，解剖后取出盲肠内容物，用生理盐水对其进行10倍比稀释，再取100μL稀释液涂于1％葡萄糖-5％绵羊血培养基平板上，厌氧培养12～24h后挑选双层溶血的灰白色菌落计数。

实验结果：如图6所示，试验组的鸡肠道中魏氏梭菌的浓度远低于对照组。试验组在给药12h和24h后，盲肠中魏氏梭菌浓度显著低于对照组(P<0.05)，分别降低了2个数量级和5个数量级；在给药48h时，试验组盲肠中魏氏梭菌浓度的浓度基本为零。该结果说明噬菌体PMQ06对鸡肠道内魏氏梭菌的清除效果显著。

实施例10噬菌体对魏氏梭菌的坏死性肠炎的治疗作用试验

实验方法：选取7日龄SPF鸡45只，平均分成治疗组、攻毒组和阴性对照组。治疗组和攻毒组的鸡分别口服5×10⁷cfu的魏氏梭菌菌液，阴性对照组不做任何处理。攻毒后观察治疗组和攻毒组，约80％的鸡出现精神萎靡、翅下垂、腹泻、嗜睡、羽毛蓬乱和排带血粪便等症状后，对治疗组给予1×10⁸PFU的噬菌体灌服治疗，攻毒组给予等量无菌生理盐水，连续给药5天，共观察14天。观察并记录每组鸡的死亡量及肠道内病变情况。

表2噬菌体对坏死性肠炎的治疗结果

注：“+”数量越多表示肠道胀气、出血越严重。

从表2的实验结果得到：与攻毒组相比，噬菌体治疗组的鸡死亡率降低了约67％，相对保护率达76.92％，且肠道内病变程度降低，噬菌体治疗显示了较好的效果。

本发明的噬菌体及其组合物对鸡坏死性肠炎中的致病菌具有高效的特异性杀灭作用，并且具有优异的耐酸碱性、耐热性，实验证明此噬菌体对鸡坏死性肠炎具有显著的治疗和预防作用。此外，本噬菌体可作为环境消毒剂消除屠宰场、畜禽产品加工车间及器具、养殖环境中的魏氏梭菌。另外，本发明所用的噬菌体对鸡无毒副作用，具有安全、高效的优点。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一株魏氏梭菌噬菌体，其特征在于，被命名为PMQ06，其保藏编号为CGMCC No.19977。

2.如权利要求1所述的魏氏梭菌噬菌体在制备预防和治疗魏氏梭菌病的药物中的应用；优选地，所述魏氏梭菌病为鸡坏死性肠炎。

3.一种噬菌体组合物，其特征在于，包括如权利要求1所述的魏氏梭菌噬菌体PMQ06。

4.一种噬菌体药物制剂，其有效成分包括如权利要求1-3中任一项所述的魏氏梭菌噬菌体或噬菌体组合物；优选的，所述噬菌体药物制剂还包括其他特定病原菌的噬菌体。

5.根据权利要求4所述的噬菌体药物制剂，所述噬菌体药物制剂中还包含药学上可接受的载体，其剂型为粉剂、水剂、冻干剂、凝胶剂、丸剂或片剂。

6.一种饲料添加剂，其特征在于，包括如权利要求1-3中任一项所述的魏氏梭菌噬菌体或噬菌体组合物；优选地，饲料中每种噬菌体的浓度至少为1×10⁸PFU/g。

7.一种环境消毒剂，其特征在于，有效成分包括权利要求1-3中任一项所述的魏氏梭菌噬菌体或噬菌体组合物；其中还包含其他用于环境中病毒、细菌抑制或消灭的活性成分；优选地，噬菌体的使用浓度为1×10⁷PFU/ml以上。

8.如权利要求7的环境消毒剂的应用，其特征在于，所述消毒剂可通过喷雾、浸泡的方式对养殖环境、饲养器具和饲料进行魏氏梭菌的消毒，所述养殖环境包括棚舍、料槽、地面、墙壁、粪便和垫料。

9.一种检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-3中任一项所述的魏氏梭菌噬菌体或噬菌体组合物。

10.一种用于禽类产品消毒的生物抑菌剂，其特征在于，包括如权利要求1～3中任一项所述的魏氏梭菌噬菌体或噬菌体组合物；生物抑菌剂的使用方法为：对禽类产品表面进行浸泡或者喷雾消毒，来抑制产品加工或保鲜过程中魏氏梭菌的增殖。