CN115247154B - 一株鸭源魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13、其噬菌体组合物及其应用 - Google Patents
一株鸭源魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13、其噬菌体组合物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一株鸭源魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13、其噬菌体组合物及其应用，该噬菌体于2021年04月12日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.22373。该噬菌体对鸭源魏氏梭菌具有广谱强裂解性，该噬菌体及其噬菌体组合物不仅可用于制备预防和治疗鸭魏氏梭菌病的噬菌体药物制剂，还可用于制备鸭饲料添加剂、饮用水添加剂、消毒剂、生物抑菌剂和检测试剂盒，此外，其使用安全、无副作用，为鸭坏死性肠炎的治疗提供一种绿色新型生物制剂。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域领域，尤其涉及一株鸭源魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13、其噬菌体组合物及其应用。
背景技术
魏氏梭菌（C.welchii），梭状芽孢杆菌属，魏氏梭菌种。在自然界分布较广，可见于土壤、污水、饲料、食物、粪便以及人畜肠道等中。在一定条件下，可引起多种严重疾病。一般认为鸭坏死性肠炎是由魏氏梭菌引起的一种急传染病。该病以突然死亡、体质衰弱、食欲降低、不能站立、排黑色间或混有血液的粪便为主要特征，因小肠后端肠道黏膜坏死，故称"烂肠病"。该病全年任何季节都能够发生，其中秋冬季节的发病率相对较高，鸭群在恶劣的气候条件、免疫接种等应激因素的刺激下容易出现发病。本病发生极为频繁，对养鸭业的损害极大。
目前针对魏氏梭菌的防治方法主要是通过饲喂添加有抗生素的饲料或者抗生素的注射治疗。首先，由于魏氏梭菌易产生耐药性，抗生素的使用导致抗药性逐渐增加，坏死性肠炎的发病率和其亚临床感染率随之增加，其次，长期或大量应用抗生素，可使肉产品中残留大量抗生素，使抗生素通过食物链转移到人体内，给人体健康也带来了严重危害。我国全面实施《全国遏制动物源细菌耐药行动计划(2017-2020)》以来，寻找替代抗生素的防治方案迫在眉睫。
噬菌体是一种针对细菌、支原体、衣原体的病毒，具有安全性、专一性等特点。首先，噬菌体的特异性强，只裂解对应的宿主菌，不破坏正常菌群，可广泛应用于动物全身；其次，噬菌体的使用具有无残留的优点，其可被自然排出动物体外；再者，噬菌体不会导致病原菌产生耐药性，对革兰氏阳性、阴性菌和多重耐药菌均有效；噬菌体还具有治疗所需剂量小、研发周期短等优势。
目前噬菌体相关产品受到越来越多的关注，开始应用于各个领域。如本申请人已申请专利（申请号为202010691495.2）中公开了从鸡场分离得到的一株鸡源魏氏梭菌噬菌体PMQ06，该噬菌体对鸡源魏氏梭菌具有优异的裂解性能，其对鸡源魏氏梭菌的裂解谱高达92.31%。但是基于宿主差异，其对鸭源魏氏梭菌的裂解性能不佳，难以应用于鸭源魏氏梭菌的防治中。因此，目前还没有出现可有效防治鸭坏死性肠炎的安全高效的噬菌体产品，现有技术有待进一步改进。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一株对鸭源魏氏梭菌具有广谱强裂解性的魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13，还提供了一种包含该噬菌体的噬菌体组合物，该噬菌体及其噬菌体组合物不仅可用于制备预防和治疗鸭魏氏梭菌病的噬菌体药物制剂，还可用于制备鸭饲料添加剂、饮用水添加剂、消毒剂、生物抑菌剂和检测试剂盒。该噬菌体及其噬菌体组合物对鸭源魏氏梭菌具有优异裂解性能，且使用安全、无副作用，具有很好的应用前景。
第一方面，本发明提供一株魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13，该噬菌体是从鸭场粪便中分离得到的，已于2021年04月12日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.22373。
电镜下观测到：该魏氏梭菌噬菌体的头部长约50-55 nm，头部宽约40-45 nm，尾部长约15 nm，根据病毒分类国际委员会（ICTV）的分类方法，其形态符合短尾噬菌体科的特征，因此，魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13属于短尾噬菌体。
上述魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13包括进行点突变或缺失突变或添加突变的同源性高于98%或99%且杀菌活性相同的突变株。由于噬菌体在复制过程中非常容易发生突变，上述噬菌体的突变体也在本申请请求保护的范围内。噬菌体vB_CpeP_PM13的序列可根据本发明保藏的生物材料通过公知的方法测序得到。对于本领域技术人员来说，根据本发明提供的噬菌体筛选出与其性状极度相似的突变体并不需要付出创造性的劳动。
第二方面，本申请还提供了一种噬菌体组合物，其包含上述噬菌体vB_CpeP_PM13。在实际应用中，为了进一步拓宽噬菌体产品的裂解谱，充分发挥不同噬菌体的裂解谱的差异，进行优势互补，可将上述噬菌体vB_CpeP_PM13和其他噬菌体进行组合使用，如与其他魏氏梭菌噬菌体进行组合使用，扩大杀菌谱，尽可能杀灭环境中的所有魏氏梭菌，用于魏氏梭菌病（如坏死性肠炎）的防治。此外，也可将上述魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13与其他不同种类的噬菌体（抑制引发同类疾病的不同病原菌）配合，用于同一类疾病的防治。
第三方面，本申请还提供了上述魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13或上述噬菌体组合物在制备预防和治疗鸭魏氏梭菌病的药物中的应用。本文中术语“预防”是指包括通过给予所述组合物来抑制或延迟所述疾病的所有行为。本文中术语“治疗”是指包括通过给予所述组合物而使所述疾病好转或有所改善的所有行为。所述鸭魏氏梭菌病包括鸭坏死性肠炎、以及其他魏氏梭菌引发的其他疾病。
噬菌体的应用方法为：将噬菌体vB_CpeP_PM13或其噬菌体组合物或者其加工后的药剂作为治疗药物添加到患病鸭饲料中，或进行灌服，或通过加入饮水中的方式，这样可起到预防及治疗鸭坏死性肠炎，显著提高鸭的存活率的效果，并且该噬菌体的操作简单，应用性强。优选地，上述魏氏梭菌噬菌体可用于制备预防和治疗因魏氏梭菌感染导致的鸭坏死性肠炎的药物。
第四方面，本发明还提供一种噬菌体药物制剂，其活性成分包括前述的魏氏梭菌噬菌体或所述噬菌体组合物。优选地，所述噬菌体药物制剂还包括其他特定病原菌的噬菌体。优选地，所述药物制剂还包括其他具有协同增效的活性成分，如抗生素、微生态制剂、抗菌肽和低聚糖中的一种或几种等。
所述药物制剂形式为口服给药剂型或注射给药剂型。优选地，采用口服给药剂型。上述药物制剂的剂型具体为溶液剂、粉剂、凝胶剂、颗粒剂或冻干剂等。
可选地，所述噬菌体药物制剂中还包含药学上可接受的载体。本文所使用的术语“药学上可接受的载体”指不对生物体造成显著刺激且不消除所给予的活性组分的生物活性和特性的载体或稀释剂。为了将所述药物组合物配制成液体制剂，药学上可接受的载体必须适于无菌和生物相容性。实例包括盐水、无菌水、Ringer’s溶液、缓冲生理盐水、白蛋白输注液、葡萄糖溶液、麦芽糖糊精溶液、甘油、乙醇、各类的培养基等。它们可以单独使用或以其任意组合使用。如果需要，可以加入其它常规添加剂，例如，抗氧化剂、缓冲剂和抑菌剂等。当还与稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂和/或润滑剂组合时，还可以将本发明的组合物制备成注射剂和口服剂型 (例如，水性溶液、悬浮液和乳液、丸剂、胶囊、粒剂)和其他中间剂型，如冻干剂。
第五方面，本申请还提供一种鸭饲料添加剂或鸭饮用水添加剂，其包括如上所述的魏氏梭菌噬菌体或噬菌体组合物。使用方法为：通过将所述鸭饲料添加剂与鸭饲料进行混拌或者将鸭饮用水添加剂加入到鸭饮用水中，对鸭进行饲喂，从而达到预防或治疗魏氏梭菌病效果。优选地，饲料中噬菌体的效价至少为1×108PFU/g。优选地，饮用水中噬菌体的效价至少为108PFU/ml。所述饮用水添加剂或食疗添加剂的形式为液体剂型、粉末剂型或固体剂型，但不仅限于以上三种剂型。
第六方面，本申请还提供了一种消毒剂，其有效成分包括上述的魏氏梭菌噬菌体以及所述噬菌体组合物。优选地，噬菌体的效价为1×107PFU/ml以上。优选地，所述消毒剂中还包含其他具有消毒杀菌作用的其他活性成分。
第七方面，本申请还提供上述环境消毒剂在鸭场环境消毒中的应用。上述消毒剂的应用方法为：将消毒剂在屠宰场、畜禽产品加工车间及器具、养殖环境中使用，防止环境中魏氏梭菌的污染。例如包括但不限于以液体浸泡、喷洒、与含水性载体联合使用等形式对配水系统、养殖业设施、饲养器具或其他环境表面进行消毒去污，并对饲料进行消毒防腐，可用于代替抗生素或传统消毒产品，而且该噬菌体不会对人体及鸭群造成损害。所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于洗涤剂、消毒剂、去污剂等。
第八方面，本申请还提供一种用于鸭类产品消毒的生物抑菌剂，其包括上述的魏氏梭菌噬菌体和上述噬菌体组合物。还提供了上述生物抑菌剂在鸭产品消毒或保鲜中的应用。生物抑菌剂的使用方法为：对鸭类产品表面进行浸泡或者喷雾消毒，来抑制产品加工或保鲜过程中魏氏梭菌的增殖，可有效延长其保质期。
第九方面，本申请还提供一种检测试剂盒，其包括如上所述的魏氏梭菌噬菌体或噬菌体组合物。本领域技术人员可根据本发明公开内容和本领域常识利用上述魏氏梭菌噬菌体或其噬菌体组合物制备检测试剂盒，用于检测样品中该噬菌体特异侵染的魏氏梭菌、或用于检测和防控由其宿主魏氏梭菌侵染导致的疾病。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明提供了一株针对鸭源魏氏梭菌具有广谱强裂解性的新型魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13、含有该噬菌体的噬菌体组合物以及各种应用，该噬菌体具有广谱杀菌效果，裂解谱宽，可作为活性成分用于制备预防和治疗鸭坏死性肠炎的药物制剂、消毒剂、鸭饲料添加剂、饮用水添加剂以及生物抑菌剂等，可广泛应用于养殖过程、以及产品加工生产过程中各个环节，快速、高效、安全杀灭致病性魏氏梭菌，有效降低发病鸭的死亡率，大幅度地提高鸭的存活率，延长鸭产品的保质期等。
2、上述噬菌体vB_CpeP_PM13是来源于自然界，来源广，容易分离获得，并且便于进行工业化生产。因此，以上述噬菌体为主要成分的药物制剂成本低、无刺激性气味、无环境污染问题，为鸭坏死性肠炎的治疗提供一种绿色新型生物制剂；此外，避免了因使用抗生素造成的抗生素残留以及诱发耐药性魏氏梭菌的问题，同时还响应了国家替抗减抗的方案。
附图说明
图1为噬菌体vB_CpeP_PM13的电镜照片；
图2为噬菌体vB_CpeP_PM13的热稳定性图片；
图3为噬菌体vB_CpeP_PM13 的pH稳定性图片；
图4为噬菌体vB_CpeP_PM13的一步生长曲线图片；
图5为噬菌体预防鸭坏死性肠炎的试验结果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。在本发明中，若非特指，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1噬菌体的分离纯化增殖
1、实验方法：
将山东潍坊鸭场粪便、鸭毛和污水等样品加入胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，充分混匀后于4℃放置过夜，取上清液离心过滤，去除沉淀后，加入魏氏梭菌菌液，于37℃厌氧条件下培养过夜后，将培养液进行离心过滤，取上清液备用。取100μl魏氏梭菌菌液与100μl前述上清液进行混合，使用双层平板法分离噬菌体。若平板上有噬菌斑出现，则挑取单个的较为透亮的噬菌斑于NB肉汤中，37℃，170rpm条件下，浸出30min后再次纯化。按照前述方法将噬菌斑纯化3代，至双层平板上噬菌斑形态大小一致为止。
接着，将分离纯化后得到的噬菌体增殖后进行效价测定。各取100μl宿主菌和噬菌体抠斑浸出液加入到5ml TSB肉汤中，再取100μl宿主菌加入另一个5ml TSB肉汤中，作为对照，同时放入45℃，厌氧盒中培养3~5h，待混合液变清亮，得到噬菌体增殖液。10倍比稀释噬菌体增殖液，双层平板法测效价，每个稀释度分别做3个平行样。
2、实验结果
结果表明，纯化分离增殖得到的魏氏梭菌噬菌体的效价为：2.60×109PFU/ml。
实施例2噬菌体的生物学特性的测定
1、噬菌体的形态观察
（1）样品处理方法：取高于1×109PFU/ml的噬菌体样品20μl滴于微孔铜网上，沉淀15min，用滤纸吸去多余的液体。在铜网上滴加15μl的2%的磷钨酸（PTA），染色5min，用滤纸吸去多余的染液，干燥后用透射电镜观察并拍照。
（2）实验结果及分析
如图1所示，电镜下观测到该魏氏梭菌噬菌体的头部长约50-55 nm，头部宽约40-45 nm，尾部长约15 nm，根据病毒分类国际委员会（ICTV）的分类方法，其形态符合短尾噬菌体科的特征，属于短尾噬菌体。
2、噬菌体的热稳定性检测
（1）实验方法：
将2.60×109PFU/ml的魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13于40℃、50℃、60℃的水浴中作用30min、60min，每个温度设两个平行组。采用双层平板法测定每组噬菌体的效价。
（2）实现结果及分析
如图2所示，噬菌体vB_CpeP_PM13在40℃和50℃作用60min后基本保持原活性；60℃作用60min效价下降1个数量级。说明噬菌体vB_CpeP_PM13能够耐受一定的高温。
3、噬菌体的pH稳定性检测
（1）实验方法：
取无菌试管中加入不同pH值（2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13）的NB肉汤4.5ml，各三支，置于37℃的水浴锅中，待温度稳定之后，各加入500µl的2.60×109PFU/ml的魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13增殖液，混匀37℃水浴作用1h、2h、3h。作用结束之后，向混合液中加入适量的HCl或者NaOH使混合液的pH值约为7，双层平板法测定噬菌体的效价。
（2）实验结果及分析：
如图3所示，噬菌体vB_CpeP_PM13在pH5~10范围内效价几乎没变或略有降低，仍然在108PFU/ml以上；而在pH为4和11的条件下处理3h，其效价仅下降1个数量级，可见该噬菌体对pH的适应范围较广。
4、噬菌体的最佳感染复数（MOI）测定
（1）实验方法：
按照常规方法对魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13及其宿主菌进行增殖，测定噬菌体初始效价及宿主菌浓度，并将噬菌体和宿主菌进行适当的稀释。分别按照感染复数为10、1、0.1、0.01、0.001、0.0001的比例各取100μl噬菌体和宿主菌加入到胰蛋白胨大豆肉汤培养基中。37℃厌氧培养至液体变澄清，记录液体变澄清时间。11000rpm离心5min，通过双层平板法测定各噬菌体的效价。
（2）实验结果
魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13的最佳感染复数为0.1，效价为6.40×109PFU/ml。
5、魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13一步生长曲线的测定
（1）实验方法
将感染复数为10的vB_CpeP_PM13增殖液和其新鲜宿主菌增殖液各1mL，充分混匀，37℃孵育5min，12000rpm条件下离心30s，用微量移液器尽量吸去上清，再用5ml TSB肉汤洗涤1次(12000rpm离心30s)，弃上清。用预热的TSB肉汤混悬沉淀(总体积为5ml)并充分混匀，迅速置于37℃厌氧培养，在0时刻和每隔10min取出150μl，10000rpm离心1min，测定效价，做2个平行，结果取平均值，以感染时间为横坐标，感染体系中噬菌体的滴度为纵坐标，绘制一步生长曲线，得到vB_CpeP_PM13噬菌体的潜伏期、爆发期和爆发量。
爆发量＝稳定期噬菌体浓度/初始菌浓度
（2）实验结果及分析：
如图4所示，魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13在感染初期30min内，效价基本没变化，潜伏期约为30min；噬菌体侵染宿主菌30min～40min内，进入爆发期，噬菌体效价急剧增加，并在60min后达到稳定，达到4.11×109PFU/ml，爆发期约为30min，通过计算可得出噬菌体vB_CpeP_PM13爆发量=（4.11×109PFU/ml）/（（3.00×107CFU/ml）=137 PFU/ CFU。可见该噬菌体的潜伏时间短，且爆发速度很快，爆发量大。因此，该噬菌体产品在工业化生产应用时具有产量高，生产周期短的优点。
实施例3噬菌体的裂解率的测定
1、实验方法：
选取44株不同地区来源的鸭源魏氏梭菌作为噬菌体vB_CpeP_PM13的裂解实验对象，采用双层平板法测定本申请提供的噬菌体vB_CpeP_PM13的裂解谱，上述44株菌株分别是在2020~2021年内在山东、江苏、重庆等地鸭场患有坏死性肠炎病鸭肠道中分离鉴定出来的致病菌。同时，以已公开的专利（申请号为202010691495.2）中的噬菌体PMQ06作为对比，同时测定其对上述44株菌株的裂解活性。
2、实验结果及分析：
从表1的结果可知，噬菌体vB_CpeP_PM13能裂解其中的40株，裂解率达90.91%，这说明该噬菌体对鸭源魏氏梭菌具有很好的裂解能力。
作为对比，噬菌体PMQ06（申请号为202010691495.2的专利中已公开）仅裂解44株鸭源魏氏梭菌中的17株，裂解率为38.64%，由此可知，PMQ06虽然对鸡源魏氏梭菌裂解率较高，对鸭源魏氏梭菌的裂解率远不如vB_CpeP_PM13，这说明这两种噬菌体的裂解谱存在明显差异，可能是由于噬菌体裂解特异性导致。
表1噬菌体vB_CpeP_PM13裂解谱
注：+：裂解，软琼脂平板法有透亮噬菌斑；-：未裂解。
实施例4噬菌体的安全性试验
1、实验方法：
选择20只体重为20~22g的健康SPF小鼠，雌雄各半，分成1个实验组和1个对照组，每组10只雌雄数量各半。对实验组的小鼠腹腔注射200μl的纯化的魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13（109PFU/ml，对照组的小鼠腹腔注射相同量的生理盐水（200μl）；按照上述方式对两组小鼠连续注射3d，接着对各组的小鼠的行为表现连续观察7d，并剖检观察小鼠脏器的变化。
2、实验结果及分析：
实验组和对照组的小鼠行为无异常，无死亡现象；剖检发现实现组小鼠的肝脏、肺脏、心脏、脾脏、肾脏等脏器正常，与对照组无明显差别，这说明本发明提供的魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13使用安全、无毒副作用。
实施例5 噬菌体预防鸭坏死性肠炎试验
1、实验方法：
选择临沂某鸭场进行实验，该鸭场的多个鸭舍曾多次发生过由于魏氏梭菌引起的坏死性肠炎现象。4000羽鸭分成4组，每组1000羽，分为2个试验组和2个对照组。在试验开始的前3d内，试验组1和试验组2 饮水添加1×108PFU/ml的魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_PM13，添加量为1000羽/10ml，之后每周给鸭舍的饮用水添加1~2次噬菌体制剂，添加量按照上面同样的比例；对照组不做处理。观察30d，记录这期间发生坏死性肠炎的鸭子羽数和死亡羽数。
2、实验结果及分析
如下表2和图5所示，30d内，2个对照组的鸭发生坏死性肠炎的数量分别为161羽和198羽，死亡数分别137羽和174羽；试验组1和试验组2发生腹泻的数量分别为91羽和88羽，死亡数分别为69羽和67羽；相对于对照组，实验组的平均死亡率降低了近50%，而平均腹泻率降低了近50%。
上述结果表明，使用魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_ PM13能够显著降低鸭的坏死性肠炎病发数和死亡数。
表2 噬菌体组合物对鸭坏死性肠炎的预防结果
| 分组 | 参试总数（羽） | 腹泻数(羽) | 死亡数(羽) |
| 试验组1 | 1000 | 91 | 69 |
| 试验组2 | 1000 | 88 | 67 |
| 对照组1 | 1000 | 161 | 137 |
| 对照组2 | 1000 | 198 | 174 |
实施例6噬菌体治疗鸭坏死性肠炎试验
1、实验方法：
河南商丘20万樱桃谷种鸭场，35日龄发生坏死性肠炎问题，红粪、水便情况严重，使用1×109PFU/ml的魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_ PM13用量为10000羽/100ml，饮水连用3d，每次用前稍微控水，以保证2~3h内饮完，记录发生坏死性肠炎的鸭子羽数和死亡羽数。
2、实验结果及分析
使用前，每日病死鸭2150羽：使用1d后，病死鸭明显下降，为1365羽；使用2d后，每日病死鸭236羽；使用3d后，每日病死鸭5羽，鸭群红粪、水便情况减少，通过持续观察，红粪等情况并未重新出现。
结果表明，使用魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_ PM13能够显著降低鸭病死率。
实施例7 噬菌体对鸭养殖场环境消毒试验
1、实验方法：
按照实施例1中的方法增殖魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_ PM13。
山东临沂10万白羽肉鸭场，曾发生过坏死性肠炎问题，将其均分为两组，实验组和对照组。对于实验组的5万羽鸭舍，使用1×107PFU/ml魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_ PM13环境喷洒消毒，每周1d；另外对对照组的5万羽鸭舍不做处理，观察记录6个月内发生坏死性肠炎的鸭病死亡羽数。
2、实验结果及分析：
进行噬菌体消毒处理的实验组鸭舍中，6个月期间未发生因坏死性肠炎引起的鸭的死亡；而对照组鸭舍在6个月期间出现因坏死性肠炎引起的鸭死亡239羽。由此可见，魏氏梭菌噬菌体vB_CpeP_ PM13的环境消毒效果好，能对鸭坏死性肠炎具有很好的防治效果。
实施例8 噬菌体对非宿主性细菌的裂解试验
1、实验方法
选取10株大肠杆菌、10株沙门氏菌、10株变形杆菌这些不同的非宿主性细菌，按照前述裂解谱的测定方法进行噬菌体的裂解实验。
2、实验结果及分析
结果表明，噬菌体vB_CpeP_ PM13均无法识别上述10株大肠杆菌、10株沙门氏菌、10株变形杆菌这些非宿主性细菌，这说明供试噬菌体具有极强的宿主特异性，且对微生物群落无损伤作用。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (12)
1.一株鸭源魏氏梭菌噬菌体 vB_CpeP_PM13，其特征在于，其保藏编号为 CGMCC NO.22373。
2.一种噬菌体组合物，其特征在于，包括如权利要求 1 所述的魏氏梭菌噬菌体 vB_CpeP_PM13。
3.如权利要求1所述的魏氏梭菌噬菌体或如权利要求 2 所述的噬菌体组合物在制备预防和治疗鸭魏氏梭菌病的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述魏氏梭菌病为鸭坏死性肠炎。
5.一种噬菌体药物制剂，其有效成分包括如权利要求 1 所述的魏氏梭菌噬菌体或如权利要求 2 所述的噬菌体组合物。
6.根据权利要求 4 所述的噬菌体药物制剂，其特征在于，所述噬菌体药物制剂中还包含药学上可接受的载体，其制剂形式为口服给药剂型或注射给药剂型。
7.一种鸭饲料添加剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的魏氏梭菌噬菌体或如权利要求 2 所述的噬菌体组合物。
8.一种鸭饮用水添加剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的魏氏梭菌噬菌体或如权利要求 2 所述的噬菌体组合物。
9.一种消毒剂，其特征在于，有效成分包括如权利要求 1 所述的魏氏梭菌噬菌体或如权利要求 2 所述的噬菌体组合物。
10.根据权利要求9所述的消毒剂，其特征在于，每种噬菌体的使用浓度为 1×108 PFU/ml 以上。
11.如权利要求9 所述的消毒剂在鸭场环境消毒中的应用，其特征在于，所述消毒剂可通过喷雾、浸泡对养殖环境、饲养器具进行魏氏梭菌的消毒，所述养殖环境包括地面、墙壁、粪便和垫料。
12.一种用于鸭类产品消毒的生物抑菌剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的魏氏梭菌噬菌体或如权利要求 2 所述的噬菌体组合物。
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| 鸭源魏氏梭菌病的诊断与治疗;马芹等;山东畜牧兽医;第42卷(第5期);第29-30页，参见摘要 * |
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