CN111624267A - 一种泽泻中16-氧代泽泻醇a的高效液相检测方法 - Google Patents

一种泽泻中16-氧代泽泻醇a的高效液相检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及中药质量检测方法领域，具体涉及一种泽泻中16‑氧代泽泻醇A的高效液相检测方法。本发明采用高效液相检测方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积浓度为100％的乙腈为流动相A，体积浓度为0.1％的冰醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，对泽泻供应品溶液以及16‑氧代泽泻醇A对照品进行液相色谱分析。本发明检测方法操作简单，分析时间短，灵敏度高，为泽泻中16‑氧代泽泻醇A的质量评价提供了参考依据。此外通过方法学验证，表明本申请提供的方法准确度高、稳定性强、重复性好。

Description

一种泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法
技术领域
本发明涉及中药质量检测方法领域，具体涉及一种泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法。
背景技术
泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientale(Sam.)Juzep.的干燥块茎，冬季茎叶开始枯萎时采挖，洗净、干燥、除去须根和粗皮，呈类球形、椭圆形或卵圆形，长2～7cm，直径2～6cm。泽泻甘、淡，寒；归肾、膀胱经，具有利水渗湿，泄热，化浊降脂的功效，用于小便不利，水肿胀满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛，高脂血症，主产于福建、四川、江西、广西等省，现多为人工栽培。泽泻的化学成分主要以萜类成分为主，萜类成分中又以三萜类成分为主，另外有倍半萜、二萜类成分等。现代药理研究表明，泽泻三萜类成分是其主要成分，是泽泻降脂、降糖、降血压、利尿等多重药理作用的药效物质基础。关于泽泻活性成分的提取分离和含量测定的现代研究非常广泛，为临床用药选择优等品。目前，控制泽泻质量检测多以23-乙酰泽泻醇B作为指标，这样难以体现泽泻的整体质量，而16-氧代泽泻醇A作为三萜类成分中的一员，在临床应用上发挥积极的作用。因此，提供一种泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法可以为泽泻的内在质量控制和等级标准研究有待提升提供新的依据。
发明内容
有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法。
为实现上述目的，本发明采取以下的技术方案：
一种泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法，包括以下步骤：
步骤S1：供试品溶液制备：称取泽泻1g，过5号筛，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇溶解，称定重量，加热回流后，待温度冷却至室温，再次称定重量，用甲醇补足减失的重量，然后过0.45μm微孔滤膜，取滤液即得；
步骤S2：对照品溶液制备：称取16-氧代泽泻醇A对照品10mg，加入甲醇溶解，制成浓度为4.91μg/mL～196.41μg/mL的溶液；
步骤S3：分别将上述的供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，按照以下色谱条件检测：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积浓度为100％的乙腈为流动相A，体积浓度为0.1％的冰醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，按体积百分比计算，所述流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；梯度洗脱的条件为：0～5min，流动相A的比例为40％；5～10min，流动相A的比例从40％变化为48％；10～20min，流动相A的比例为48％；20～23min，流动相A的比例从48％变化为80％；23～28min，流动相A的比例为80％；28～30min，流动相A的比例从80％变化为40％；30～40min，流动相A的比例为40％。
进一步地，在上述泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法中，加热回流的温度为98℃～100℃；时间为20min～60min。
进一步地，在上述泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法中，步骤S1中加入甲醇体积为20mL～30mL。
进一步地，在上述泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法中，步骤S3中流动相A和流动相B的流速为0.7mL/min～0.9mL/min。
进一步地，在上述泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法中，步骤S3中色谱检测的波长为250nm。
进一步地，在上述泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法中，步骤S3中供试品溶液注入高效液相色谱仪的进样量为20uL。
进一步地，在上述泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法中，步骤S3中检测过程中色谱柱的柱温为28℃～32℃。
进一步地，在上述泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法中，泽泻为泽泻药材、泽泻饮品或泽泻汤。
本发明的有益效果为：
本发明提供了一种泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法，可以高效测量不同产地不同泽泻原料中16-氧代泽泻醇A的含量，通过控制提取试剂种类、体积、提取方式以及高效液相的流动相和检测参数，为泽泻中16-氧代泽泻醇A的质量评价提供了参考依据。本发明检测方法操作简单，分析时间短，灵敏度高。此外通过方法学验证，表明本申请提供的方法准确度高、稳定性强、重复性好。
附图说明
图1是泽泻汤、泽泻药材、泽泻饮片、白术药材以及白术饮片的HPLC特征图谱；
图2是16-氧代泽泻醇A对照品HPLC图谱；
图3是泽泻汤与16-氧代泽泻醇A对照品的重叠HPLC图谱；
图4是LC-MS解析详细图；
图5是LC-MS解析简略图；
图6是按照实施例1实验方法检测泽泻供试品溶液、16-氧代泽泻醇A对照溶液和空白溶剂的HPLC对比图；
图7是按照实施例2实验方法全波长扫描下的HPLC图；
图8是16-氧代泽泻醇A的标准曲线图；
图9是不同流速下检测泽泻的HPLC对比图；
图10是不同柱温下检测泽泻的HPLC对比图；
图11是不同色谱柱检测泽泻的HPLC对比图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案作进一步清楚、完整地描述。需要说明的是，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例采用的试剂：
乙腈为色谱纯(批号：19015175)，品牌TEDIA；
冰醋酸为分析纯(批号：20180603-2)，广州化学试剂厂；
水为纯净水(批号：20190401D)，广东省广州市屈臣氏；
16-氧代泽泻醇A对照品(批号：DM18010539纯度：98.6％)，购于广州隽沐生物科技有限公司。
本发明实施例使用的仪器：
高效液相色谱仪，型号Thermo Ultmate 3000DAD，赛默飞世尔科技有限公司；
高效液相色谱仪，型号Agilent 1100series VWD，安捷伦；
液质，型号SHIMADZU UFLC-IT-TOF，岛津；
色谱柱：phenomena,luna 5μm C18 100A,(4.6×250mm,S/N：H18-145455)；
电子分析天平，型号：TLE104/02，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；
电子分析天平，型号：TLE303E/02，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；
超声波清洗器，型号：KQ-600DA，昆山市超声仪器有限公司。
在本发明的描述中，需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
一、泽泻中16-氧代泽泻醇A的定性分析
(1)制备供试品溶液：
(a)泽泻汤：称取泽泻70g、白术28g，置于1L砂锅中，加水400mL，明火加热，武火煮沸，文火煎煮至约200ml，过滤，即得。
(b)泽泻药材：称取泽泻药材70g，置于1L砂锅中，加水400ml，明火加热，武火煮沸，文火煎煮至约200ml，过滤，即得。
(c)泽泻饮片：称取泽泻饮片70g，置于1L砂锅中，加水400ml，明火加热，武火煮沸，文火煎煮至约200ml，过滤，即得。
(d)白术药材：称取白术药材28g，置于1L砂锅中，加水400ml，明火加热，武火煮沸，文火煎煮至约200ml，过滤，即得。
(e)白术饮片：称取白术饮片28g，置于1L砂锅中，加水400ml，明火加热，武火煮沸，文火煎煮至约200ml，过滤，即得。
(2)制备对照品溶液：取16-氧代泽泻醇A适量，加入甲醇溶解，制成每1mL含16-氧代泽泻醇A10μg的溶液，即得。
将上述供试品溶液和对照品溶液分别按照泽泻汤特征图谱的色谱条件进行检测：
泽泻汤色谱条件：以乙腈为流动相A，0.1％冰醋酸为流动相B，流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；梯度洗脱条件：0～5min，流动相A的比例为0；5～30min，流动相A的比例为0％～16％；30～53min，流动相A的比例为16％～80％；53～63min，流动相A的比例为80％；流速0.8mL/min，柱温30℃，进样量20uL，检测波长260nm。
HPLC图谱如图1所示。图1中S1为泽泻汤指纹图谱；S2为泽泻药材特征图谱；S3为泽泻饮片特征图谱；S4为白术药材特征图谱；S5为白术饮片特征图谱。图2是16-氧代泽泻醇A对照品HPLC图谱；图3是泽泻汤与16-氧代泽泻醇A对照品的HPLC重叠图谱；
将上述供试品溶液和对照品溶液按照上述的色谱条件进行液质(SHIMADZU UFLC-IT-TOF)分析，如图4～5所示。
经HPLC图谱比对：泽泻汤中保留时间为48.590min的物质来源于泽泻。
LCMS分析比对：泽泻汤中保留时间为48.590min的峰与16-氧代泽泻醇A对照品的相对分子质量相近，且最佳定量子离子一样都是m/z 415.3，可确定泽泻中保留时间为48.590min的峰是16-氧代泽泻醇A。
表1为本发明实施例1测定的16-氧代泽泻醇A的定性分析表
表1 16-氧代泽泻醇A定性分析
Figure BDA0002476500070000051
二、检测方法分析
实施例1
根据泽泻指纹图谱的出峰情况，在已经确定好的泽泻指纹图谱方法进行调整，在保证16-氧代泽泻醇A分离度和纯度较高情况下，将16-氧代泽泻醇A出峰时间缩短。按照如下步骤进行检测：
称取泽泻药材1g，过5号筛，置于具塞锥形瓶中，加入20mL甲醇溶解，称定重量，加热回流，加热回流温度为98℃～100℃，时间为30min，温度冷却至室温后，再次称定重量，甲醇补足减失的重量，然后过0.45μm微孔滤膜，取滤液后作为供试品溶液；称取16-氧代泽泻醇A对照品，加入甲醇溶解，制成浓度为10μg/mL的溶液，作为对照品溶液；分别将上述的供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，按照以下色谱条件检测：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积浓度为100％的乙腈为流动相A，体积浓度为0.1％的冰醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，按体积百分比计算，所述流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；梯度洗脱的条件为：0～5min，流动相A的比例为40％；5～10min，流动相A的比例从40％变化为48％；10～20min，流动相A的比例为48％；20～23min，流动相A的比例从48％变化为80％；23～28min，流动相A的比例为80％；28～30min，流动相A的比例从80％变化为40％；30～40min，流动相A的比例为40％。流速0.8mL/min，柱温30℃，进样量20uL，检测波长250nm。图6为实施例1方法所得的HPLC图。
图6中S1为空白样、S2为16-氧代泽泻醇A对照品溶液、S3为泽泻药材供应品溶液。根据图6可知，实施例1的检测条件将泽泻药材中16-氧代泽泻醇A出峰时间缩短至12min，附近无杂峰干扰，分离度、纯度均符合要求，空白溶剂无干扰。
实施例2
称取16-氧代泽泻醇A对照品，加入甲醇溶解，制成浓度为10μg/mL的溶液，作为对照品溶液；将对照品溶液注入高效液相色谱仪，按照以下色谱条件检测：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积浓度为100％的乙腈为流动相A，体积浓度为0.1％的冰醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，按体积百分比计算，所述流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；梯度洗脱的条件为：0～5min，流动相A的比例为40％；5～10min，流动相A的比例从40％变化为48％；10～20min，流动相A的比例为48％；20～23min，流动相A的比例从48％变化为80％；23～28min，流动相A的比例为80％；28～30min，流动相A的比例从80％变化为40％；30～40min，流动相A的比例为40％。流速0.8mL/min，柱温30℃，进样量20uL，在200～400nm紫外波长下进行全扫面。
图7是实施例2实验条件下的HPLC图，由图7可知，16-氧代泽泻醇A在249.37nm处有最大吸收，且此时峰纯度大于990。
实施例3
称取4份泽泻药材，每份均1g，过5号筛，置于具塞锥形瓶中，分别加入20mL体积分数为100％、70％、50％的甲醇和纯净水溶解，称定重量，加热回流，加热回流温度为98℃～100℃，时间为30min，温度冷却至室温后，再次称定重量，用相应的溶剂补足减失的重量，然后过0.45μm微孔滤膜，取滤液后作为供试品溶液；分别将上述的供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照以下色谱条件检测：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积浓度为100％的乙腈为流动相A，体积浓度为0.1％的冰醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，按体积百分比计算，所述流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；梯度洗脱的条件为：0～5min，流动相A的比例为40％；5～10min，流动相A的比例从40％变化为48％；10～20min，流动相A的比例为48％；20～23min，流动相A的比例从48％变化为80％；23～28min，流动相A的比例为80％；28～30min，流动相A的比例从80％变化为40％；30～40min，流动相A的比例为40％。流速0.8mL/min，柱温30℃，进样量20uL，检测波长为250nm。检测结果如表2所示。
表2不同提取溶剂的检测结果
Figure BDA0002476500070000081
由表2可知，纯净水提取的效果最差，甲醇、70％甲醇、50％甲醇提取的效果相当。
实施例4
称取3份泽泻药材，每份均1g，过5号筛，置于具塞锥形瓶中，分别加入20mL甲醇溶解，称定重量，分别通过超声20min(功率500W，频率40Hz)、加热回流，加热回流温度为98℃～100℃，时间为20min和震荡20min处理；待温度冷却至室温后，再次称定重量，用甲醇补足减失的重量，然后过0.45μm微孔滤膜，分别取滤液后作为供试品溶液；分别将上述的供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照以下色谱条件检测：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积浓度为100％的乙腈为流动相A，体积浓度为0.1％的冰醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，按体积百分比计算，所述流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；梯度洗脱的条件为：0～5min，流动相A的比例为40％；5～10min，流动相A的比例从40％变化为48％；10～20min，流动相A的比例为48％；20～23min，流动相A的比例从48％变化为80％；23～28min，流动相A的比例为80％；28～30min，流动相A的比例从80％变化为40％；30～40min，流动相A的比例为40％。流速0.8mL/min，柱温30℃，进样量20uL，检测波长为250nm。检测结果如表3所示。
表3不同提取方式检测结果
Figure BDA0002476500070000091
由表3可知，加热回流提取的方式具有最好的效果。
实施例5
称取4份泽泻药材，每份均1g，过5号筛，置于具塞锥形瓶中，分别加入20mL甲醇溶解，称定重量，加热回流温度为98℃～100℃，时间分别为20min、30min、45min和60min；待温度冷却至室温后，再次称定重量，用甲醇补足减失的重量，然后过0.45μm微孔滤膜，分别取滤液后作为供试品溶液；分别将上述的供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照以下色谱条件检测：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积浓度为100％的乙腈为流动相A，体积浓度为0.1％的冰醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，按体积百分比计算，所述流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；梯度洗脱的条件为：0～5min，流动相A的比例为40％；5～10min，流动相A的比例从40％变化为48％；10～20min，流动相A的比例为48％；20～23min，流动相A的比例从48％变化为80％；23～28min，流动相A的比例为80％；28～30min，流动相A的比例从80％变化为40％；30～40min，流动相A的比例为40％。流速0.8mL/min，柱温30℃，进样量20uL，检测波长为250nm。检测结果如表4所示。
表4不同提取时间的检测结果
Figure BDA0002476500070000092
由表4可知，加热回流30min略优于加热回流20min，且回流30、45、60min差异较小，综合时间及效果考虑，选择加热回流时间为30min。
实施例6
称取3份泽泻药材，每份均1g，过5号筛，置于具塞锥形瓶中，分别加入20mL、25mL和30mL甲醇溶解，称定重量，加热回流温度为98℃～100℃，时间为30min；待温度冷却至室温后，再次称定重量，用甲醇补足减失的重量，然后过0.45μm微孔滤膜，分别取滤液后作为供试品溶液；分别将上述的供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照以下色谱条件检测：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积浓度为100％的乙腈为流动相A，体积浓度为0.1％的冰醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，按体积百分比计算，所述流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；梯度洗脱的条件为：0～5min，流动相A的比例为40％；5～10min，流动相A的比例从40％变化为48％；10～20min，流动相A的比例为48％；20～23min，流动相A的比例从48％变化为80％；23～28min，流动相A的比例为80％；28～30min，流动相A的比例从80％变化为40％；30～40min，流动相A的比例为40％。流速0.8mL/min，柱温30℃，进样量20uL，检测波长为250nm。检测结果如表5所示。
表5不同甲醇的体积检测结果
Figure BDA0002476500070000101
由表5可知，溶剂体积20mL、25mL、30mL含量差异不大，因16-氧代泽泻醇A含量较低，溶剂体积越大，即稀释倍数越大，峰面积越小，信噪比越低，为使信噪比满足要求，故选择溶剂体积为20mL。
三、方法学验证
(一)专属性
根据实施例1和图6可知，分别对供试品溶液、空白溶剂、16-氧代泽泻醇A对照品溶液进行检测，图6中S1为空白溶剂；S2为16-氧代泽泻醇A对照品溶液；S3为供试品溶液。这说明本申请提供的检测方法空白无干扰，专属性强。
(二)重复性
按照实施例1的检测方法，对供试品溶液进行6次进样检测，检测结果如表6所示。由表6可知，6次进样，含量的测定无明显差别，峰面积的RSD值小于3％，表明方法重复性良好。
表6重复性结果(n＝6)
Figure BDA0002476500070000111
(三)精密度
(1)不同的实验人员A和B使用不同仪器，在不同的检测时间分别按照实施例1的检测方法，对同一份泽泻药材进行检测2次，检测结果如表7a～c所示。
表7a不同实验人员检测结果
Figure BDA0002476500070000112
表7b实验人员A不同日期检测结果
Figure BDA0002476500070000113
表7c实验人员A使用不同仪器检测结果
Figure BDA0002476500070000121
表7a～c可知，不同人员、不同日期检测、不同高效液相色谱仪检测本品，测定含量无明显差别，测定含量的RSD均小于3％，表明本方法的精密度良好。
(四)线性关系
称取16-氧代泽泻醇A对照品(批号：纯度98.6％)9.96mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得196.41ug/mL的对照品储备液，将196.41μg/mL的对照品储备液分别稀释至98.21μg/mL、49.10μg/mL、9.82μg/mL以及4.91μg/mL，分别吸取上述不同浓度的溶液各20μL，注入液相色谱仪测定，以进样量为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。结果见表8和图8。
表8 16-氧代泽泻醇A线性关系
Figure BDA0002476500070000122
根据表8和图8可知，线性回归方程：Y＝1359.4X-26.84，线性系数r＝1，结果表明在进样量0.0982μg～3.9282μg、浓度4.91～196.41ug/mL范围内线性关系良好。
(五)准确度
采用加样回收法，将上述196.41μg/mL的对照品储备液加甲醇稀释至12.276μg/mL。称取9份泽泻药材0.5g(批号：YC191123)，过5号筛，置具塞锥形瓶中，分别加入12.276μg/mL的对照品溶液5mL、10mL、15mL各3份，再分别加入甲醇15ml、10ml、5ml，称重，加热回流30min，取出，放冷后再次称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取滤液20μL注入液相色谱仪，进样测定，计算回收率，加样回收率＝(测得量-样品含量)/对照加入量，结果见表9。泽泻(批号：YC191123)中16-氧代泽泻醇A含量0.245mg/g。
表9 16-氧代泽泻醇A准确度试验结果
Figure BDA0002476500070000131
由表9可知，9份样品回收率在94.6％～101.7％之间，平均值为97.58％，RSD小于3％，表明该方法准确度高。
(六)耐用性
分别将实施例1的检测方法中检测流速设置为0.7mL/min、0.8mL/min、0.9mL/min进行检测，其余方法相同。得到图9的HPLC对比图；
分别将实施例1的检测方法中柱温设置为、28℃、30℃和32℃进行检测，其余方法相同。得到图10的HPLC对比图；
分别将实施例1的检测方法中色柱设置为phenomenex C18、Diamonsil C18和Thermo C18，其余方法相同。得到图11的HPLC对比图。
耐用性检测数据如表10所示
表10耐用性试验结果
Figure BDA0002476500070000141
图9中，S1为流速0.9mL/min、S2为流速0.8mL/min、S3为流速0.7mL/min；图10中S1为柱温32℃、S2为柱温30℃、S3为柱温28℃；图11中S1为Thermo C18色谱柱、S2为DiamonsilC18色谱柱、S3为phenomenex C18色谱柱。根据图9～11以及表10可知，本方法在不同流速、不同柱温、不同色谱柱条件下测定结果基本一致，表明本方法对不同流速、不同柱温、不同色谱柱耐用性良好。
(七)稳定性
按照实施例1的实验方法，对供试品溶液分别在放置0、3、6、9、15、24h后再测定，测试结果如表11所示
表11稳定性结果
Figure BDA0002476500070000142
由表11可知，本方法在样品放置24h再测量，测量结果无明显差别，稳定性较好。
四、不同产地泽泻药材与饮片中16-氧代泽泻醇A含量测定
按照实施例1的实验方法对15批泽泻药材及15批自制泽泻饮片进行测定16-氧代泽泻醇A含量，结果如表12、13所示。
表12泽泻药材16-氧代泽泻醇A含量测定结果
Figure BDA0002476500070000151
表13泽泻饮片16-氧代泽泻醇A含量测定结果
Figure BDA0002476500070000161
15批泽泻药材16-氧代泽泻醇A含量在0.020％～0.035％之间，15批泽泻饮片16-氧代泽泻醇A含量在0.015％～0.024％之间，由表12和表13可知，不同产地的泽泻药材中16-氧代泽泻醇A含量差异不大；不同产地泽泻药材炮制成饮片后16-氧代泽泻醇A的含量都略有降低，16-氧代泽泻醇A的含量关系为：四川彭州＞福建南平＞四川德阳。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (8)

1.一种泽泻中16-氧代泽泻醇A的高效液相检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1：供试品溶液制备：称取泽泻1g，过5号筛，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇溶解，称定重量，加热回流后，待温度冷却至室温，再次称定重量，用甲醇补足减失的重量，然后过0.45μm微孔滤膜，取滤液即得；
步骤S2：对照品溶液制备：称取16-氧代泽泻醇A对照品，加入甲醇溶解，制成浓度为4.91μg/mL～196.41μg/mL的溶液；
步骤S3：分别将上述的供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，按照以下色谱条件检测：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积浓度为100％的乙腈为流动相A，体积浓度为0.1％的冰醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，按体积百分比计算，所述流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；所述梯度洗脱的条件为：0～5min，流动相A的比例为40％；5～10min，流动相A的比例从40％变化为48％；10～20min，流动相A的比例为48％；20～23min，流动相A的比例从48％变化为80％；23～28min，流动相A的比例为80％；28～30min，流动相A的比例从80％变化为40％；30～40min，流动相A的比例为40％。
2.根据权利要求1所述的高效液相检测方法，其特征在于，所述加热回流的温度为98℃～100℃；时间为20min～60min。
3.根据权利要求1所述的高效液相检测方法，其特征在于，步骤S1中加入甲醇体积为20mL～30mL。
4.根据权利要求1所述的高效液相检测方法，其特征在于，步骤S3中流动相A和流动相B的流速为0.7mL/min～0.9mL/min。
5.根据权利要求1所述的高效液相检测方法，其特征在于，步骤S3中色谱检测的波长为250nm。
6.根据权利要求1所述的高效液相检测方法，其特征在于，步骤S3中供试品溶液注入高效液相色谱仪的进样量为20uL。
7.根据权利要求1所述的高效液相检测方法，其特征在于，步骤S3中检测过程中色谱柱的柱温为28℃～32℃。
8.根据权利要求1所述的高效液相检测方法，其特征在于，所述泽泻为泽泻药材、泽泻饮品或泽泻汤。
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