CN115078608A - 一种鸡骨草与毛鸡骨草uplc特征图谱鉴别方法 - Google Patents

一种鸡骨草与毛鸡骨草uplc特征图谱鉴别方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115078608A
CN115078608A CN202210726881.XA CN202210726881A CN115078608A CN 115078608 A CN115078608 A CN 115078608A CN 202210726881 A CN202210726881 A CN 202210726881A CN 115078608 A CN115078608 A CN 115078608A
Authority
CN
China
Prior art keywords
abrus
herb
peak
solution
uplc
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202210726881.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN115078608B (zh
Inventor
乔卫林
徐月阳
彭丽华
陈炜璇
史军杰
陈金梅
成金乐
黄愉锋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhongshan Zhongzhi Pharmaceutical Group Co ltd
Original Assignee
Zhongshan Zhongzhi Pharmaceutical Group Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhongshan Zhongzhi Pharmaceutical Group Co ltd filed Critical Zhongshan Zhongzhi Pharmaceutical Group Co ltd
Priority to CN202210726881.XA priority Critical patent/CN115078608B/zh
Publication of CN115078608A publication Critical patent/CN115078608A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115078608B publication Critical patent/CN115078608B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
    • G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Library & Information Science (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法。该UPLC特征图谱鉴别方法包括鸡骨草特征图谱的获得、毛鸡骨草特征图谱的获得及待测物的色谱图及特征峰比对等步骤。本发明提供的鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法得到的UPLC特征图谱峰形好，色谱峰的分离度大于1.5，且具有多个特征峰，通过特征峰可以快速区分鉴别出鸡骨草与毛鸡骨草药材。

Description

一种鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法
技术领域
本发明涉及药物质量控制技术领域，特别涉及一种鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法。
背景技术
鸡骨草为岭南地区常用的民间草药，其味甘、微苦、性凉，具有利湿退黄、清热解毒、舒肝止痛、活血散瘀的功效，可用于胃脘胀痛，胁肋不舒，湿热黄疸，乳痈肿痛等病症，在临床上可用来治疗新生儿ABO血型不合、急、慢性肝炎、肝硬化等，叶捣碎还可敷治乳腺炎、蛇伤、疥疮等。民间也常自采自用，大多用来煲汤，还可用来制作凉茶。最新2020版《中国药典》规定鸡骨草为豆科植物广州相思子(Abrus cantoniensis Hance)的干燥全株。然而目前在市场上流通的大都是毛鸡骨草，在民间常出现混用现象，因此，通过对鸡骨草和毛鸡骨草的化学成分进行分析研究，有利于其区分鉴别。
现行2020版《中国药典》鸡骨草鉴别项下的薄层鉴别以相思子碱作为对照参照鉴定，但鸡骨草与毛鸡骨草均含有，无法区分两者，且目前对鸡骨草与毛鸡骨草的药效物质基础比较研究远远不够，因此，鸡骨草与毛鸡骨草能否替代有待深入研究。另外，鸡骨草与毛鸡骨草外观形态相似，由于鸡骨草与毛鸡骨草干燥后叶片易脱落，更不易分辨，现今市场上流通的大都是无叶片的鸡骨草和毛鸡骨草药材。
曾琦等(曾琦.等,中药鸡骨草和毛鸡骨草的HPLC指纹图谱研究[J].中国民族民间医药,药物研究,22-26页)采用HPLC高效液相色谱法，色谱柱为Inertsil ODS－SPC18(4.6×250mm，5μm)，流动相为水-甲醇(10％～100％)梯度洗脱40min，流速为1.0mL/min，柱温为25℃，检测波长为280nm，得到了中药鸡骨草和毛鸡骨草的HPLC指纹图谱，但该HPLC指纹图谱中各峰的峰形较差，且多数色谱峰的分离度小于1.5，不易区分；且缺少色谱峰的指认，而是通过成分的相对含量是突出还是趋向均一化来判断是鸡骨草还是毛鸡骨草，鉴别要点不清晰。
徐柯心等(徐柯心.等,鸡骨草UPLC指纹图谱研究[J]药物分析杂志Chin J PharmAnal 2018,38(1))建立了鸡骨草UPLC指纹图谱测定方法，对不同产地鸡骨草的质量进行了较全面的评价，该方法建立的鸡骨草UPLC指纹图谱中指认的色谱峰数目众多且多数色谱峰响应值低，不易区分；并且该测定方法并不能区分毛鸡骨草。
因此，开发一种可有效鉴别鸡骨草与毛鸡骨草的UPLC特征图谱鉴定方法，具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的鉴别方法鉴别要点不清晰的缺陷或不足，提供一种鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法。本发明提供的鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法得到的UPLC特征图谱峰形好，色谱峰的分离度大于1.5，且具有多个特征峰，通过特征峰可以快速区分鉴别出鸡骨草与毛鸡骨草药材。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法，包括如下步骤：
S1：将鸡骨草、毛鸡骨草分别与甲醇溶液混合，提取，分别得鸡骨草提取液、毛鸡骨草提取液，并配制为鸡骨草样品溶液、毛鸡骨草样品溶液，备用；将鸡骨草对照品、毛鸡骨草对照品分别配制为鸡骨草对照液、毛鸡骨草对照液，备用；
S2：利用UPLC法对鸡骨草样品溶液、鸡骨草对照液进行色谱测定，得到鸡骨草特征图谱；利用UPLC法对毛鸡骨草样品溶液和毛鸡骨草对照液进行色谱测定，得到毛鸡骨草特征图谱；
S3：将待测物与甲醇溶液混合，提取，得提取液，并配制待测液，备用；
S4：利用UPLC法对待测液、鸡骨草对照液、毛鸡骨草对照液进行色谱测定，得到待测液的色谱图、鸡骨草对照液的色谱图、毛鸡骨草对照液的色谱图，根据色谱图中特征峰的差异判断待测物是鸡骨草还是毛鸡骨草；
S1中所述鸡骨草对照品为相思子碱、下箴刺桐碱、异双花母草素、双花母草素；
S1中所述毛鸡骨草对照品为相思子碱、下箴刺桐碱、维采宁-2；
S2和S4的UPLC法中，色谱柱为高强度硅胶色谱柱；流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液；
洗脱梯度为：0-10-34-42-50-56-64-66-68-70-73-80min，乙腈：5％-5％-15％-18％-24％-30％-48％-75％-95％-95％-5％-5％。
中药特征图谱是中药质量控制的常用方法，但如果想利用中药特征图谱实现鸡骨草与毛鸡骨草药材的快速鉴别，需要解决以下几个问题：
(1)鸡骨草与毛鸡骨草中存在差异性成分，并可在图谱中呈现出来，以作为区分的基础；
(2)鸡骨草与毛鸡骨草中存在相同成分，利用提取工艺可以实现鸡骨草与毛鸡骨草中各成分的提取，特别是其相同成分及差异性成分的提取，以获得含有相同和差异成分的待测液，进而进行特征图谱分析。
(3)利用超高效液相色谱法可以成功实现待测液中各提取成分的有效分离，通过多批次样品建立鸡骨草和毛鸡骨草药材的特征图谱，进而通过与特征图谱的特征峰比较分析来区分鸡骨草与毛鸡骨草药材。
经发明人研究发现，利用甲醇溶液作为提取液对鸡骨草与毛鸡骨草进行提取，可以实现鸡骨草与毛鸡骨草中差异化学成分和有效成分的提取，进而得到待测液；然后以特定的色谱柱、流动相和洗脱梯度进行色谱分析，生成特征图谱，鸡骨草药材对照特征图谱共有9个特征峰，指认了其中4个色谱峰，毛鸡骨草药材对照特征图谱共有5个特征峰，指认了其中3个色谱峰，通过特征图谱比较分析发现，鸡骨草药材的化学成分较丰富，主要体现在鸡骨草药材特征图谱以下箴刺桐碱为参照峰在相对保留时间为1.925(峰5)、2.044(峰7)、2.678(峰8)的±5％范围内有色谱峰出现，而毛鸡骨草缺失这3个特征峰，因此可以通过鸡骨草药材特征图谱中峰5、峰7、峰8特征峰是否出现来快速区分鉴别出鸡骨草与毛鸡骨草药材。
研究表明，提取溶剂、色谱柱和色谱条件的选用是影响检测结果的关键。如选用甲醇(即纯甲醇)和乙醇(即纯乙醇)作为提取液，色谱图中呈现各特征峰的峰形差，且响应值低；如选用其它色谱柱(例如CORTECS色谱柱(
Figure BDA0003713546560000031
T3(1.6μm，150mm×2.1mm、
Figure BDA0003713546560000032
C18+(1.6μm，150mm×2.1mm))进行色谱分析，均存在特征峰信息不全或峰分离度差的问题；如选用其它色谱条件(例如其它洗脱梯度和流动相)，色谱图中各特征峰的分离度差，无法更好的区分鉴别。
即本申请通过选用特定的色谱柱，并利用特定的提取溶剂，色谱条件等，实现鸡骨草与毛鸡骨草的快速鉴别，利于鸡骨草的质量控制。
应当说明的是，在得到鸡骨草药材特征图谱和毛鸡骨草药材特征图谱时，可对多批次样品(例如15批次及以上)进行色谱分析，进而得到更为准确的特征峰信息。
优选地，S1中所述鸡骨草和甲醇溶液的质量体积比为1:(15～50)g/mL。
优选地，S1中毛鸡骨草和甲醇溶液的质量体积比为1:(15～50)g/mL。
优选地，S1中所述甲醇溶液的质量分数为30％～80％。
优选地，S1中所述提取方式为超声提取、回流提取或索式提取。各提取方式均可达到较好的提取效果。
优选地，S1中所述提取的温度为20～85℃，提取的时间为30～60min。
优选地，S1中鸡骨草各对照品的浓度为0.02mg/mL；S1中毛鸡骨草各对照品的浓度为0.02mg/mL。
优选地，S1中选用甲醇作为溶剂来配制鸡骨草对照液、毛鸡骨草对照液。
优选地，S2中所述UPLC法选用的检测波长为280nm。
优选地，S2中所述色谱柱为ACQUITY
Figure BDA0003713546560000033
HHS T3。
Figure BDA0003713546560000041
T3(1.6μm，150mm×2.1mm)、
Figure BDA0003713546560000042
C18+(1.6μm，150mm×2.1mm)
优选地，S2中所述UPLC法选用的柱温为35℃。
S4中的色谱条件与S2中的相一致。
优选地，S4中所述待测物和甲醇溶液的质量体积比为1:(15～50)g/mL。
优选地，S4中待测液的色谱图呈现与鸡骨草对照特征图谱相对应的9个特征峰，并且以下箴刺桐碱为参照峰，9个特征峰的相对保留时间如下：峰1：0.709、峰2：1.000、峰3：1.186、峰4：1.308、峰5：1.925、峰6：2.017、峰7：2.044；峰8：2.678、峰9：2.743；其中，各特征峰的相对保留时间在上述值的±5％之内时，所述待测物为鸡骨草；
S4中待测液的色谱图呈现与毛鸡骨草对照特征图谱相对应的5个特征峰，并且以下箴刺桐碱为参照峰，5个特征峰的相对保留时间如下：峰1：0.712、峰2：1.000、峰3：1.722、峰4：1.943、峰5：2.638；其中，各特征峰的相对保留时间在上述值的±5％之内时，所述待测物为毛鸡骨草。
优选地，所述待测物为鸡骨草或毛鸡骨草。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法得到的UPLC特征图谱峰形好，色谱峰的分离度大于1.5，且具有多个特征峰，通过特征峰可以快速区分鉴别出鸡骨草与毛鸡骨草药材。
附图说明
图1为18批次鸡骨草药材色谱图。
图2为对照品与鸡骨草供试品色谱图，其中：S1-鸡骨草样品溶液；S2-相思子碱；S3-下箴刺桐碱；S4-异双花母草素；S5-双花母草素。
图3为鸡骨草对照特征图谱。
图4为18批次毛鸡骨草药材色谱图。
图5为对照品与毛鸡骨草供试品色谱图，其中：S1-毛鸡骨草样品溶液；S2-相思子碱；S3-下箴刺桐碱；S4-维采宁-2。
图6为毛鸡骨草对照特征图谱。
图7为鸡骨草与毛鸡骨草对照特征图谱的对比图。
图8为鸡骨草药材供试品制备提取溶剂考察色谱图，其中：S1-甲醇提取；S2-乙醇提取
图9为鸡骨草药材供试品制备提取方法考察色谱图，其中：S1-超声提取；S2-回流提取；S3-索氏提取。
图10为鸡骨草药材供试品制备提取溶剂浓度考察色谱图，其中：S1-80％甲醇提取；S2-50％甲醇提取；S3-30％甲醇提取；S4-100％甲醇提取。
图11为鸡骨草药材供试品制备超声提取时间考察色谱图，其中：S1-超声30min提取；S2-超声45min提取；S3-超声60min提取。
图12为鸡骨草药材供试品制备料液比考察色谱图，其中：S1-0.5g:15mL；S2-0.5g:25mL；S3-1g:15mL；S4-1g:25mL。
图13为鸡骨草UPLC特征图谱检测波长3D图
图14为鸡骨草UPLC特征图谱280nm检测波长选择。
图15为鸡骨草UPLC特征图谱流动相种类选择，其中：S1-甲醇-0.2％甲酸水溶液；S2-甲醇-0.1％甲酸水溶液；S3-甲醇-0.1％磷酸水溶液；S4-甲醇-水；S5-乙腈-0.2％甲酸水溶液；S6-乙腈-0.1％甲酸水溶液；S7-乙腈-0.1％磷酸水溶液；S8-乙腈-水。
图16为鸡骨草与毛鸡骨草药材特征图谱不同流动相对比考察色谱图，其中：S1-鸡骨草-乙腈-水；S2-毛鸡骨草-乙腈-水；S3-鸡骨草-甲醇-水；S4-毛鸡骨草-甲醇-水；S5-鸡骨草-甲醇-0.1％甲酸水溶液；S6-毛鸡骨草-甲醇-0.1％甲酸水溶液；S7-鸡骨草-乙腈-0.1％甲酸水溶液；S8-毛鸡骨草-乙腈-0.1％甲酸水溶液。
图17为鸡骨草UPLC特征图谱梯度优化，其中：S1-梯度1；S2-梯度2；S3-梯度3；S4-梯度4；S5-梯度5；S6-梯度6；S7-梯度7；S8-梯度8；S9-梯度9
图18为鸡骨草UPLC特征图谱洗脱流速选择，其中：S1-0.1mL·min-1；S2-0.2mL·min-1；S3-0.3mL·min-1
图19为鸡骨草UPLC特征图谱柱温选择，其中：S1-25℃；S2-30℃；S3-35℃；S4-40℃
图20为鸡骨草UPLC特征图谱进样体积选择，其中：S1-2μL；S2-5μL；S3-7μL；S4-10μL
图21为鸡骨草药材UPLC特征图谱不同色谱柱考察色谱图，其中：S1-ACQUITY
Figure BDA0003713546560000051
HSS T3(1.8μm，150mm×2.1mm)；S2-
Figure BDA0003713546560000052
T3(1.6μm，150mm×2.1mm)；S3-
Figure BDA0003713546560000053
C18+(1.6μm，150mm×2.1mm)
图22为鸡骨草药材UPLC特征图谱不同色谱柱考察色谱图，其中：S1-ACQUITY UPLCHSS T3(100mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱；S2-ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱
图23为鸡骨草药材UPLC特征图谱不同方法比较色谱图,，其中S1-方法1；S2-方法2；S3-方法3。
图24为鸡骨草UPLC特征图谱系统适应性考察色谱图。
图25为鸡骨草UPLC特征图谱专属性考察色谱图，其中：S1-样品溶液；S2-30％甲醇溶液。
图26采购样品编号为J1的鸡骨草药材鉴定结果，其中：S1-鸡骨草药材对照特征图谱；S2-J1供试品溶液。
图27采购样品编号为M1的鸡骨草药材鉴定结果，其中：S1-毛鸡骨草药材对照特征图谱；S2-M1供试品溶液。
具体实施方式
下面结合实施例进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件；所使用的原料、试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
本发明各实施例中的特征图谱参照高效液相色谱法(通则0512)测定。
对照品溶液的制备：精密称取适量Abrine(相思子碱)、Hypaphorine(下箴刺桐碱)、Biflorin(双花母草素)、Isobiflorin(异双花母草素)、Vicenin-2(维采宁-2)对照品，加甲醇溶液各配置成Abrine浓度为20μg·mL-1，Hypaphorine为20μg·mL-1，Isobiflorin为20μg·mL-1，Biflorin为20μg·mL-1，Vicenin-2为20μg·mL-1的单标溶液，即得。
供试品溶液的制备：取鸡骨草药材/毛鸡骨草药材粉末(过3号筛)，精密称定1g，置具塞锥形瓶中，加入30％甲醇15mL，称定重量，超声提取30min(40KHz，560W，20～40℃)，取出，冷却至室温，用30％甲醇补足减失的重量，摇匀，置于50mL的离心管中，离心5min(9000r/min)，取上清液2mL，过0.22μm的微孔滤膜，即得。
测定法：色谱条件与系统适应性试验色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)，流速：0.2mL·min-1，检测波长：280nm，柱温：35℃，以乙腈(A)-0.1％的甲酸水溶液(B)为流动相，梯度洗脱(见下表1)，理论塔板数按下箴刺桐碱峰计算应不低于10000。
表1流动相梯度洗脱程序
Figure BDA0003713546560000061
Figure BDA0003713546560000071
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
材料：本发明实施例所用的仪器设备见下表2。
表2使用的仪器
Figure BDA0003713546560000072
本发明实施例所用试剂为：乙腈、甲醇(色谱纯，德国默克公司)；甲醇、磷酸、甲酸(分析纯，广州化学试剂厂)；超纯水(自制)。
本发明实施例所用对照品为：相思子碱(批号：111808-202003，中国食品药品鉴定研究院)；下箴刺桐碱(批号：030093-202007，纯度：98.0％，上海鸿永生物科技有限公司)；Biflorin(批号：2471608，纯度：99.5％，BIOSYNTH Carbosynth)；Isobiflorin(批号：2476679，纯度：99％，BIOSYNTH Carbosynth)；维采宁-2(批号：PS012054，纯度：98.0％，成都普思生物科技股份有限公司)
鸡骨草样品批次编号为ACH1-ACH18，毛鸡骨草样品批次编号为AMH1-AMH18，由中山市中智药业集团有限公司提供。
实施例1
一种鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱测定方法，包括以下步骤：
S1.对照品溶液的制备：
精密称取Abrine(相思子碱)0.02226g，加甲醇制成0.8904mg·mL-1的对照品母液；精密称取Hypaphorine(下箴刺桐碱)0.02027g，加甲醇配制成0.99323mg·mL-1的对照品母液；精密称取Biflorin(双花母草素)0.02080g，加甲醇配制成1.0348mg·mL-1的对照品母液；精密称取Isobiflorin(异双花母草素)0.01821g，加甲醇配制成0.901395mg·mL-1的对照品母液；精密称取Vicenin-2(维采宁-2)0.01167g，加甲醇配制成1.167mg·mL-1的对照品母液；分别精密吸取各对照品母液适量，配置成Abrine浓度为19.94μg·mL-1，Hypaphorine为20.06μg·mL-1，Isobiflorin为20.01μg·mL-1，Biflorin为20.07μg·mL-1、Vicenin-2为19.84μg·mL-1的单标溶液。
S2.鸡骨草与毛鸡骨草供试品溶液的制备：
取鸡骨草或毛鸡骨草药材粉末(过3号筛)，精密称定1g，置具塞锥形瓶中，加入30％甲醇溶液15mL，称定重量，超声提取30min(40KHz，560W，20～40℃)，取出，冷却至室温，用30％甲醇补足减失的重量，摇匀，置于50mL的离心管中，离心5min(9000r/min)，取上清液2mL，过0.22μm的微孔滤膜，即得。
S3.鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱测定：
采用超高效液相色谱法，在相同的检测条件下分别获得供试品溶液和对照品溶液的色谱图。
所述的检测条件包括：
色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)，以乙腈为流动相A，体积分数为0.1％的甲酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.2mL·min-1，检测波长为280nm，柱温为35℃，进样体积为5μL。
所述梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：
0min，流动相A 5％，流动相B 95％；
10min，流动相A 5％，流动相B 95％；
34min，流动相A 15％，流动相B 85％；
42min，流动相A 18％，流动相B 82％；
50min，流动相A 24％，流动相B 76％；
56min，流动相A 30％，流动相B 70％；
64min，流动相A 48％，流动相B 52％；
66min，流动相A 75％，流动相B 25％；
68min，流动相A 95％，流动相B 5％；
70min，流动相A 95％，流动相B 5％；
73min，流动相A 5％，流动相B 95％；
80min，流动相A 5％，流动相B 95％；
分别取ACH1-ACH18鸡骨草供试品溶液和对照品溶液，按照上述液相条件测定，色谱图如图1-2所示。将各批次鸡骨草色谱图采用国家药典委员会《中药色谱特征图谱相似度评价系统》(2012版)软件进行分析，设置时间窗宽度为0.1，以各图谱的中位数采用多点校正及Mark峰匹配生成对照图谱(见图3)，计算ACH1-ACH18鸡骨草供试品溶液特征峰的相对保留时间，其中2号峰(下箴刺桐碱)高度适中，分离度好，保留时间适中，可作为参照峰。其余8个特征峰(峰1、峰3～9)与参照峰的平均相对保留时间分别为：0.709、1.186、1.308、1.925、2.017、2.044、2.678、2.743，结果详见表3所示。
分别取AMH1-AMH18毛鸡骨草供试品溶液和对照品溶液，按照上述液相条件测定，色谱图如图4-5所示，将各批次毛鸡骨草色谱图采用国家药典委员会《中药色谱特征图谱相似度评价系统》(2012版)软件进行分析，设置时间窗宽度为0.1，以各图谱的中位数采用多点校正及Mark峰匹配生成对照图谱(见图6)，计算AMH1-AMH18毛鸡骨草供试品溶液特征峰的相对保留时间，其中2号峰(下箴刺桐碱)高度适中，分离度好，保留时间适中，可作为参照峰。其余4个特征峰与参照峰的平均相对保留时间分别为：0.712、1.722、1.943、2.638，结果详见表4所示。
将生成的鸡骨草与毛鸡骨草对照图谱采用国家药典委员会《中药色谱特征图谱相似度评价系统》(2012版)软件进行比较分析(见图7)，鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱的鉴别主要体现在鸡骨草药材特征图谱的峰5(以下箴刺桐碱为参照峰平均相对保留时间为1.925的±5％范围内)、峰7(以下箴刺桐碱为参照峰平均相对保留时间为2.044的±5％范围内)、峰8(以下箴刺桐碱为参照峰平均相对保留时间为2.678的±5％范围内)上。
表3 18批次鸡骨草药材特征峰的相对保留时间
Figure BDA0003713546560000091
Figure BDA0003713546560000101
表4 18批次毛鸡骨草药材特征峰的相对保留时间
Figure BDA0003713546560000102
Figure BDA0003713546560000111
实施例2
1提取条件考察
以徐柯心等(徐柯心.等,鸡骨草UPLC指纹图谱研究[J]药物分析杂志Chin JPharm Anal 2018,38(1))发表的鸡骨草UPLC指纹图谱分析方法为基础方法，进行供试品制备方法优化考察。色谱条件：ACQUITY UPLC HSS T3(100mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱；流动相为乙腈(A)-0.1％的甲酸水溶液(B)，梯度洗脱(0～10min，0％～10％A；10～12min，10％～10％A；12～16min，10％～13％A；16～18min，13％～15％A；18～24min，15％～20％A；24～28min，20％～25％A；28～34min，25％～34％A；34～42min，34％～47％A；42～44min，47％～75％A；44～46min，75％～100％A；46～48min，100％～100％A；48～51min，100％～0％A；51～58min，0％～0％A)，流速0.3mL·min-1；柱温35℃；检测波长280nm；供试品进样量5μL。
考察不同提取溶剂(甲醇和乙醇)对鸡骨草药材提取效果的影响。取编号为ACH1的鸡骨草药材粉末(过3号筛)1g，2份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入乙醇50mL、甲醇50mL，称定重量，超声提取45min(40KHz，560W，20～40℃)，取出后放冷，用提取溶剂补重，0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液进行UPLC分析。结果如图8所示：甲醇和乙醇提取的成分峰的峰形均较差，但甲醇提取的主成分峰的响应值比乙醇提取的主成分峰的响应值高，且出峰数量多，所以初选甲醇作为供试品制备的提取溶剂。
考察不同提取方式(超声、回流和索氏提取)对鸡骨草药材提取效果的影响。取编号为ACH1的鸡骨草药材粉末(过3号筛)1g，3份，精密称定，分别采用以下3种方法提取：①超声提取：样品放置具塞锥形瓶中，加入50mL甲醇，称定重量，超声提取45min(40KHz，560W，20～40℃)，取出，冷却至室温，用提取溶剂补足失重，摇匀，0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。②水浴加热回流提取：样品放置具塞锥形瓶中，加入甲醇50mL，称定重量，水浴加热回流45min(85℃)，取出，冷却后补足失重，摇匀，0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。③索氏提取：样品放置索氏提取器中，加入甲醇50mL，水浴加热回流45min(85℃)，取出，冷却，0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。UPLC法分析上述3种不同方法制备的样品。结果如图9所示：3种提取方式所得供试品色谱图出峰数目基本无异，主峰种类一致，主成分峰的响应值也无明显差异。因超声提取操作便捷，故选择超声提取作为提取方式。
考察不同浓度甲醇溶液(30％、50％、80％)及甲醇(即纯甲醇))对鸡骨草药材提取效果的影响。取编号为ACH1的鸡骨草药材粉末(过3号筛)1g，4份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入50mL的30％甲醇、50％甲醇、80％甲醇和甲醇，称定重量，超声提取45min(40KHz，560W，20～40℃)，取出后放冷，用提取溶剂补足失重，摇匀，0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得，进行UPLC分析。结果如图10所示：4种不同浓度甲醇提取的供试品色谱图的出峰数目基本无异，主峰种类一致，甲醇提取的各成分峰的峰形差，无法进行辨别区分，80％甲醇提取的各成分峰的峰形较差，30％甲醇和50％甲醇提取的各成分峰的峰形较好(拖尾因子在0.85-1.15之间)，可以进行辨别区分，且主成分峰的响应值以30％甲醇提取略高。最终选取30％甲醇作为供试品制备的提取溶剂。
考察不同超声提取时间(30min、45min、60min)对鸡骨草药材提取效果的影响。取编号为ACH1的鸡骨草药材粉末(过3号筛)1g，3份，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50mL30％甲醇，称定重量。其中1号超声提取30min(40KHz，560W，20～40℃)，2号超声提取45min(40KHz，560W，20～40℃)，3号超声提取60min(40KHz，560W，20～40℃)，取出，冷却至室温，用30％甲醇补足减失重量，摇匀，0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得，进行UPLC分析。结果如图11所示：超声提取时间对提取效果的影响不明显，但随着时间的延长，提取效率有小幅度提高(主成分峰的峰面积略有提高)，最终选择主成分提取相对充分的30min作为供试品溶液制备的提取时间。
考察不同提取料液比(0.5g:15mL、0.5g:25mL、1g:15mL、1g:25mL)对鸡骨草药材提取效果的影响。取编号为ACH1的鸡骨草药材粉末(过3号筛)，4份(2份0.5g；2份1g)，精密称定，置具塞锥形瓶中。其中1号加入30％甲醇15mL，2号加入30％甲醇25mL，3号加入30％甲醇15mL，4号加入30％甲醇25mL，称定重量，超声提取30min(40KHz，560W，20～40℃)，取出，冷却至室温，用30％甲醇补足减失重量，摇匀，置50mL的离心管中，离心5min(9000r/min)，0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得，进行UPLC分析。结果如图12所示：4组料液比的提取效果无明显差异，主峰种类一致。其中料液比1g:15mL所得样品谱图主成分峰的响应值高，另从节约物料、提取溶剂及保护环境的角度出发，最终选择1g:15mL的料液比。
因此，选择最终提取条件为取鸡骨草或毛鸡骨草药材粉末(过3号筛)精密称定1g，置具塞锥形瓶中，加入30％甲醇15mL(40KHz，560W，20～40℃)，称定重量，超声提取30min，取出，冷却至室温，用30％甲醇补足减失的重量，摇匀，置于50mL的离心管中，离心5min(9000r/min)，取上清液2mL，过0.22μm的微孔滤膜，即得。
2色谱条件优化
2.1检测波长选择
根据文献报道，鸡骨草特征图谱分析常用的波长有254nm、270nm、280nm、330nm。按实施例1中制备方法制备鸡骨草供试品溶液，色谱条件为仪器采用Waters Acquity UPLCH-Class超高效液相色谱仪，色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3(100mm×2.1mm，1.8μm)，以乙腈(A)-0.1％的甲酸水溶液(B)为流动相，梯度洗脱(0～10min，0％～10％A；10～12min，10％～10％A；12～16min，10％～13％A；16～18min，13％～15％A；18～24min，15％～20％A；24～28min，20％～25％A；28～34min，25％～34％A；34～42min，34％～47％A；42～44min，47％～75％A；44～46min，75％～100％A；46～48min，100％～100％A；48～51min，100％～0％A；51～58mi，0％～0％A)，流速为0.3mL·min-1，柱温为35℃；供试品进样量5μL。对供试品溶液进行全波长扫描，选择标准为该波长下分析信号峰信息量多，基线平稳，各峰响应值大。通过调用3D谱图(见图13)分析发现，在280nm处，鸡骨草药材中色谱峰信息量大，且响应值较高，最终选择280nm作为鸡骨草特征图谱的分析波长(见图14)。
2.2流动相种类选择
以样品谱图的出峰数目多、各峰之间的分离度高、基线平稳及出峰总时间短为选择标准，比较不同流动相系统对成分分离效果的影响，流动相系统如下：
(1)甲醇(A)-水(B)；(2)乙腈(A)-水(B)；(3)甲醇(A)-0.1％磷酸水溶液(B)；(4)甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)；(5)乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)；(6)乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)；(7)甲醇(A)-0.2％甲酸水溶液(B)；(8)乙腈(A)-0.2％甲酸水溶液(B)。
按实施例1中制备方法制备鸡骨草供试品溶液，前期经过实验考察，选用色谱条件为：ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱；流动相为以上8种；梯度洗脱(0～10min，0％～10％A；10～12min，10％～10％A；12～16min，10％～13％A；16～18min，13％～15％A；18～24min，15％～20％A；24～28min，20％～25％A；28～34min，25％～34％A；34～42min，34％～47％A；42～44min，47％～75％A；44～46min，75％～100％A；46～48min，100％～100％A；48～51min，100％～0％A；51～58min，0％～0％A)，流速为0.2mL·min-1；柱温为35℃；检测波长为280nm；样品进样量为5μL。
结果如图15，8组流动相的成分分离效果有明显差异，其中，乙腈-0.1％甲酸水溶液所得样品谱图出峰数目多、主成分峰的响应值较高，各峰之间分离度较好且总出峰时间较短。
按实施例1中制备方法制备毛鸡骨草供试品溶液从上述8中流动相中选取四种流动相：(1)甲醇(A)-水(B)；(2)乙腈(A)-水(B)；(3)甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)；(4)乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)对毛鸡骨草供试品溶液进行色谱分析，并与鸡骨草供试品溶液的色谱图进行对比，其余色谱条件为：ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱；梯度洗脱(0～10min，0％～10％A；10～12min，10％～10％A；12～16min，10％～13％A；16～18min，13％～15％A；18～24min，15％～20％A；24～28min，20％～25％A；28～34min，25％～34％A；34～42min，34％～47％A；42～44min，47％～75％A；44～46min，75％～100％A；46～48min，100％～100％A；48～51min，100％～0％A；51～58min，0％～0％A)，流速为0.2mL·min-1；柱温为35℃；检测波长为280nm；样品进样量为5μL。
图16为鸡骨草和毛鸡骨草的色谱峰对比图。可知，4组流动相对成分分离效果有明显差异，其中，乙腈-0.1％甲酸水溶液所得样品谱图出峰数目多、主成分峰的响应值较高，各峰之间分离度较好且总出峰时间较短，最终选择乙腈-0.1％甲酸水溶液做流动相，且就鸡骨草和毛鸡骨草图谱对比来看，鸡骨草和毛鸡骨草化学成分较相似，在部分区间段有差别，因此选用鸡骨草药材为研究对象来进行分析方法的进一步优化。
2.3洗脱梯度、柱温、流速及进样体积考察
以样品谱图出峰时间适中、基线平稳、各主要色谱峰分离度好为依据，比较表5的洗脱梯度对成分分离效果的影响，其它色谱条件为：ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱；流速0.2mL·min-1；柱温35℃；检测波长280nm；供试品进样量5μL；以乙腈为流动相A，0.1％甲酸水溶液为流动相B，按表5所示不同梯度洗脱，记录色谱图。
比较0.1mL·min-1、0.2mL·min-1、0.3mL·min-1的流速对成分分离效果的影响，其它色谱条件为：ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱；流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液；按梯度9条件洗脱；柱温35℃；检测波长280nm；供试品进样量5μL，记录色谱图。
比较25℃、30℃、35℃、40℃的柱温对成分分离效果的影响，其它色谱条件为：ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱；流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液，按梯度9条件洗脱；检测波长280nm；流速为0.2mL·min-1；供试品进样量5μL，记录色谱图。
比较进样体积为2μL、5μL、7μL、10μL对成分分离效果的影响，其它色谱条件为：ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱；流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液；按梯度9条件洗脱；流速为0.2mL·min-1；柱温35℃；检测波长280nm，记录色谱图。
结果如图17-20所示。
表5洗脱梯度
Figure BDA0003713546560000151
结果显示，如图17，各梯度的出峰数目基本一致，梯度9的基线平稳，峰分布均匀，且主成分峰基本能分开，故最终选择梯度9，之后再通过调整流速来进一步优化。当流速为0.2mL·min-1时(如图18)，供试品的谱图出峰时间适中，峰分离度较高、分布均匀，选择为最终流速。如图19，柱温为25～40℃时，各主要色谱峰的分离度有差异，柱温为35℃各峰之间的分离度高均大于1.5，选择为最终柱温。如图20，进样体积为2-10μL时，4组进样体积色谱图出峰数目无明显差异，进样体积为2μL时，各色谱峰的响应值低，进样体积为5μL、7μL、10μL时响应值均较高且分离度好，最终选择进样体积为5μL。
2.2色谱柱考察
(1)色谱柱种类的考察
取编号为ACH1的鸡骨草药材，按实施例1中的方法制备成供试品溶液，分别采用ACQUITY
Figure BDA0003713546560000161
HSS T3(1.8μm，150mm×2.1mm)、
Figure BDA0003713546560000162
T3(1.6μm，150mm×2.1mm)、
Figure BDA0003713546560000163
C18+(1.6μm，150mm×2.1mm)三根不同型号的色谱柱，按实施例1中的色谱条件进行分析，记录色谱图。采用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)对所得3份图谱进行数据分析。结果如图21所示：不同的色谱柱分析所得谱图差异很大，仅色谱柱ACQUITY
Figure BDA0003713546560000164
HHS T3分析所得谱图的峰信息较全，峰分离度好，其它色谱柱分析样品均存在峰信息不全或峰分离度差的问题。因此，分析样品时固定选用色谱柱ACQUITY
Figure BDA0003713546560000165
HHS T3(1.8μm，150mm×2.1mm)，以减小色谱柱差异造成的样品质量评价误差。
(2)色谱柱长度的考察
在色谱柱种类考察的基础上，对色谱柱的长度进行考察。色谱柱选用ACQUITYUPLC HSS T3(100mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱和ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱)，其余条件与实施例1中的一致。
测试结果如图22。从图22可知，在150mm长的柱子下，峰与峰之间的分离度比100mm下检测的效果好。
(3)不同方法条件下的谱图对比
选用同一批次鸡骨草样品，按实施例1中的方法制备成供试品溶液，方法1：以ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)为色谱柱、按实施例1中的色谱条件进行分析，记录色谱图(如图23中S1)。方法2：以ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)为色谱柱，检测波长为280nm，其他色谱条件参照徐柯心等(徐柯心.等,鸡骨草UPLC指纹图谱研究[J]药物分析杂志Chin J Pharm Anal 2018,38(1))公开的色谱分析方法进行分析，记录色谱图(如图23中S2)。方法3：以ACQUITY UPLC HSS T3(100mm×2.1mm，1.8μm)为色谱柱，检测波长为280nm，其他色谱条件参照徐柯心等(徐柯心.等,鸡骨草UPLC指纹图谱研究[J]药物分析杂志Chin J Pharm Anal 2018,38(1))公开的色谱分析方法进行分析，记录色谱图(如图23中S3)。结果如图23。从图23可知，本实施例选用的方法1呈现的色谱图峰与峰之间分离度高，具有辨识性，有利于鸡骨草与毛鸡骨草药材的鉴定。
3方法学验证
3.1系统适应性考察
取鸡骨草样品适量，按实施例1中的样品制备方法制备供试品溶液及对照品溶液，并按实施例1中的色谱条件进行检测，结果见图24，Hypaphorine的理论塔板数大于10000，各峰分离度均大于1.5。
3.2专属性考察
取鸡骨草供试品溶液和30％的甲醇溶液按实施例1中的色谱条件进行检测，结果如图25所示，在30％甲醇溶液图中各峰的相应保留时间处无色谱峰干扰，符合特征图谱技术要求，表明建立的方法专属性好。
3.3精密度考察
取鸡骨草药材适量，按实施例1中的样品制备方法制备供试品溶液，连续进样6次，并按实施例1中色谱条件进行测定，特征峰的相对保留时间及峰面积的RSD值均小于3％(见表6-7)，考察结果表明仪器的精密度符合要求。
表6精密度考察-特征峰相对保留时间
Figure BDA0003713546560000171
表7精密度考察-特征峰峰面积
Figure BDA0003713546560000172
Figure BDA0003713546560000181
3.4重复性考察
取鸡骨草药材适量，按实施例1中的样品制备方法制备供试品溶液，平行制备6份，并按实施例1中的样品制备方法和色谱条件制备供试品溶液并进行测定，特征峰的的相对保留时间及峰面积的RSD值均小于3％(见表8-9)，考察结果表明该方法的重复性符合要求。
表8重复性考察-特征峰相对保留时间
Figure BDA0003713546560000182
表9重复性考察-特征峰峰面积
Figure BDA0003713546560000183
3.5稳定性考察
取鸡骨草药材适量，按实施例1中的样品制备方法制备供试品溶液，并按实施例1中项下色谱条件，分别于0，2，4，8，12，24h进行测定，特征峰的相对保留时间及峰面积的RSD值均小于5％(见表10-11)，说明供试品溶液在24h内稳定。
表10稳定性考察-特征峰相对保留时间
Figure BDA0003713546560000191
表11稳定性考察-特征峰峰面积
Figure BDA0003713546560000192
实施例3
取采购的鸡骨草(见表12)样品适量，按实施例1中的样品制备方法制备供试品溶液及对照品溶液，并按实施例1中的UPLC色谱条件进行检测，结果如图26-27所示，J1供试品溶液呈现与鸡骨草对照特征图谱相对应的9个特征峰，且在相对保留时间为1.925、2.044、2.678的±5％范围处有鉴别色谱峰出现，表明所采购的鸡骨草药材为药典规定品种广州相思子。而M1供试品溶液呈现与毛鸡骨草对照特征图谱相对应的5个特征峰，且在相对保留时间为1.925、2.044、2.678的±5％范围处无色谱峰出现，表明所采购的鸡骨草为毛相思子。
表12采购的鸡骨草药材
Figure BDA0003713546560000201
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：将鸡骨草、毛鸡骨草分别与甲醇溶液混合，提取，分别得鸡骨草提取液、毛鸡骨草提取液，并配制为鸡骨草样品溶液、毛鸡骨草样品溶液，备用；将鸡骨草对照品、毛鸡骨草对照品分别配制为鸡骨草对照液、毛鸡骨草对照液，备用；
S2：利用UPLC法对鸡骨草样品溶液、鸡骨草对照液进行色谱测定，得到鸡骨草特征图谱；利用UPLC法对毛鸡骨草样品溶液和毛鸡骨草对照液进行色谱测定，得到毛鸡骨草特征图谱；
S3：将待测物与甲醇溶液混合，提取，得提取液，并配制待测液，备用；
S4：利用UPLC法对待测液、鸡骨草对照液、毛鸡骨草对照液进行色谱测定，得到待测液的色谱图、鸡骨草对照液的色谱图、毛鸡骨草对照液的色谱图，根据色谱图中特征峰的差异判断待测物是鸡骨草还是毛鸡骨草；
S1中所述鸡骨草对照品为相思子碱、下箴刺桐碱、异双花母草素、双花母草素；
S1中所述毛鸡骨草对照品为相思子碱、下箴刺桐碱、维采宁-2；
S2和S4的UPLC法中，色谱柱为高强度硅胶色谱柱；流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液；
洗脱梯度为：0-10-34-42-50-56-64-66-68-70-73-80min，乙腈：5％-5％-15％-18％-24％-30％-48％-75％-95％-95％-5％-5％。
2.根据权利要求1所述鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法，其特征在于，S1中所述鸡骨草和甲醇溶液的质量体积比为1:(15～50)g/mL；S1中毛鸡骨草和甲醇溶液的质量体积比为1:(15～50)g/mL。
3.根据权利要求1所述鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法，其特征在于，S1中所述甲醇溶液的质量分数为30％～80％。
4.根据权利要求1所述鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法，其特征在于，S1中所述提取方式为超声提取、回流提取或索式提取。
5.根据权利要求1所述鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法，其特征在于，S1中所述提取的温度为20～85℃，提取的时间为30～60min。
6.根据权利要求1所述鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法，其特征在于，S2、S4中所述UPLC特征图谱选用的进样体积为5～10μL。
7.根据权利要求1所述鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法，其特征在于，S2、S4中所述UPLC选用的检测波长为280nm。
8.根据权利要求1所述鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法，其特征在于，S2、S4中所述UPLC选用的色谱柱的柱温为35℃。
9.根据权利要求1所述鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法，其特征在于，S4中所述待测物和甲醇溶液的质量体积比为1:(15～50)g/mL。
10.根据权利要求1所述鸡骨草与毛鸡骨草UPLC特征图谱鉴别方法，其特征在于，S4中待测液的色谱图呈现与鸡骨草对照特征图谱相对应的9个特征峰，并且以下箴刺桐碱为参照峰，9个特征峰的相对保留时间如下：峰1：0.709、峰2：1、峰3：1.186、峰4：1.308、峰5：1.925、峰6：2.017、峰7：2.044；峰8：2.678、峰9：2.743；其中，各特征峰的相对保留时间在上述值的±5％之内时，所述待测物为鸡骨草；S4中待测液的色谱图呈现与毛鸡骨草对照特征图谱相对应的5个特征峰，并且以下箴刺桐碱为参照峰，5个特征峰的相对保留时间如下：峰1：0.712、峰2：1、峰3：1.722、峰4：1.943、峰5：2.638；其中，各特征峰的相对保留时间在上述值的±5％之内时，所述待测物为毛鸡骨草。
CN202210726881.XA 2022-06-24 2022-06-24 一种鸡骨草与毛鸡骨草uplc特征图谱鉴别方法 Active CN115078608B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210726881.XA CN115078608B (zh) 2022-06-24 2022-06-24 一种鸡骨草与毛鸡骨草uplc特征图谱鉴别方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210726881.XA CN115078608B (zh) 2022-06-24 2022-06-24 一种鸡骨草与毛鸡骨草uplc特征图谱鉴别方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115078608A true CN115078608A (zh) 2022-09-20
CN115078608B CN115078608B (zh) 2023-07-04

Family

ID=83255855

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210726881.XA Active CN115078608B (zh) 2022-06-24 2022-06-24 一种鸡骨草与毛鸡骨草uplc特征图谱鉴别方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115078608B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115586270A (zh) * 2022-09-28 2023-01-10 广西壮族自治区药用植物园 基于中药质量标记物的鸡骨草胶囊多种活性成分同时检测的色谱/质谱指纹图谱及其方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110927291A (zh) * 2019-12-20 2020-03-27 成都普思生物科技股份有限公司 一种鸡骨草提取物特征图谱的检测方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110927291A (zh) * 2019-12-20 2020-03-27 成都普思生物科技股份有限公司 一种鸡骨草提取物特征图谱的检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIJIAO MEN等: "An effective UPLC method for the quantification and fingerprint analysis of amides in a South China native medicinal herb, abri herba", 《JOURNAL OF FOOD COMPOSITION AND ANALYSIS》, vol. 96, pages 1 - 9 *
徐柯心等: "鸡骨草UPLC 指纹图谱研究", 《药物分析杂志》, vol. 38, no. 1, pages 168 - 174 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115586270A (zh) * 2022-09-28 2023-01-10 广西壮族自治区药用植物园 基于中药质量标记物的鸡骨草胶囊多种活性成分同时检测的色谱/质谱指纹图谱及其方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN115078608B (zh) 2023-07-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN115078608A (zh) 一种鸡骨草与毛鸡骨草uplc特征图谱鉴别方法
CN113777183B (zh) 女贞子药材及其炮制品的特征图谱构建方法、多指标成分含量检测方法
CN113376273B (zh) 一种清心莲子饮hplc特征图谱的检测方法及该特征图谱的应用
CN110133158B (zh) 一种酒蒸黄连的hplc指纹图谱检测方法
CN115372534B (zh) 一种艾叶及其制剂特征图谱的构建方法、特征图谱和应用
CN108663440A (zh) 裸花紫珠药材uplc指纹图谱构建方法及标准指纹图谱
CN113759056B (zh) 一种半边莲及其制剂的特征图谱及其构建方法
CN115541756A (zh) 车前科中药药材或制剂的指纹图谱的构建方法、检测方法和鉴别方法
CN112946132B (zh) 月季花药材指纹图谱及其构建方法和月季花药材的质量检测方法
CN115267008A (zh) 一种竹沥半夏的特征图谱和对照图谱的构建方法及半夏不同炮制品的区分方法
CN109061024B (zh) 小儿扶脾颗粒的标准指纹图谱的构建方法及其应用
CN109596763B (zh) 一种杜仲与盐杜仲的特征图谱的构建方法及鉴别方法
CN108593794B (zh) 一种多指标成分uplc检测红花中有效成分含量方法
CN113341007A (zh) 一种基于hplc特征图谱的枣仁安神胶囊全药味多成分含量测定方法
CN112858526A (zh) 一种鹅不食草指纹图谱及其构建方法
CN114235974B (zh) 检测牛舌草或其提取物中芦丁、异槲皮苷和迷迭香酸含量的方法
CN114894922B (zh) 一种绞股蓝水提物的检测及其质量控制方法
CN115372516B (zh) 一种鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法
CN114252521B (zh) 中药半边莲指纹图谱的检测方法
CN115856158B (zh) 一种草果水溶性特征成分在养胃汤中的定性和定量方法
CN114720602B (zh) 石见穿药材或其标准汤剂的特征图谱构建方法和检测方法
CN115389652B (zh) 一种芦根药材指纹图谱的建立方法
CN113341025B (zh) 气血和胶囊的质量检测方法
CN115469033A (zh) 达原饮基准样品超高效液相色谱特征图谱的检测方法
CN118090985A (zh) 一种柿蒂样品uplc特征图谱的构建方法及检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant