CN108872435A - 一种泽泻药材中16种三萜类成分的uplc-ms/ms检测方法 - Google Patents

一种泽泻药材中16种三萜类成分的uplc-ms/ms检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108872435A
CN108872435A CN201810768486.1A CN201810768486A CN108872435A CN 108872435 A CN108872435 A CN 108872435A CN 201810768486 A CN201810768486 A CN 201810768486A CN 108872435 A CN108872435 A CN 108872435A
Authority
CN
China
Prior art keywords
alisol
rhizoma alismatis
mobile phase
kinds
uplc
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810768486.1A
Other languages
English (en)
Inventor
褚克丹
邰艳妮
林羽
林青青
徐伟
林珠灿
许文
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujian University of Traditional Chinese Medicine
Original Assignee
Fujian University of Traditional Chinese Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujian University of Traditional Chinese Medicine filed Critical Fujian University of Traditional Chinese Medicine
Priority to CN201810768486.1A priority Critical patent/CN108872435A/zh
Publication of CN108872435A publication Critical patent/CN108872435A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC‑MS/MS检测方法，包括以下步骤：取样品滤液，按样品滤液：内标溶液体积比为1:1的比例加入内标溶液后得到供试品溶液；将上述操作得到的供试品溶液注入快速液相色谱串联质谱仪按如下条件进行检测后，用于泽泻药材中16种三萜类成分的定性和/或定量分析：流动相条件：以体积浓度为100％的乙腈作为流动相A，以体积浓度为0.1％的甲酸水溶液作为流动相B，在进行梯度洗脱。本发明检测方法操作简单，分析时间仅10min，分离速度快，超高灵敏度，为泽泻药材的利用和质量评价提供了可靠的实验依据。

Description

一种泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法
技术领域
本发明涉及中药材质量检测方法领域，具体涉及一种泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法。
背景技术
泽泻是我国栽培历史悠久的传统常用中药材，是水生或沼生草本泽泻科植物泽泻(Alisma orientale(Sam.)Juzep)的干燥块茎，冬春季茎叶开始枯萎时采挖，洗净，干燥，除去须根及粗皮。中医理论认为泽泻具有利水渗湿，泄热通淋，现代药理研究表明泽泻具有降脂、降糖、降血压、利尿、抗肿瘤、抗炎、抗脂肪肝等作用。
查阅现有技术中的文献发现，泽泻三萜类成分是泽泻的重要中药质量标志物(Q-marker)，对泽泻的质量控制研究文献报道均主要采用HPLC法，许文等于2015年5月在《药物分析杂志》上发表了一篇名称为《泽泻提取物三萜类成分含量测定研究》，该文献中公开了一种紫外一可见分光光度法可以用于检测泽泻提取物中总三萜含量，高效液相色谱法可用于检测泽泻提取物中12个泽泻三萜类成分含量的方法，该方法的分析时间需要长达60min。赵万里等2015年在《中国实验方剂学杂志》公开了一种一测多评法同时分析泽泻药材中4个主要成分的方法，2016年公开了HPLC同时测定泽泻11个三萜类成分含量和UFLC同时测定泽泻药材中6个三萜成分的方法。目前，针对泽泻在三萜类的多成分鉴定或提取物的多成分检测较多，且多采用HPLC法进行检测分析时间过长(从30min到80min不等)，且泽泻三萜类多为末端吸收，在紫外208nm下检测干扰较大，基线存有漂移；而采用ELSD检测灵敏度不够，难以检识低含量的三萜类化合物。
随着现代分析技术的发展，超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)由于其分离速度快，超高灵敏度，测定专属性强而被广泛运用于中药及复方的分析中，但没有将UPLC-MS/MS应用于检测泽泻药材中16种三萜类成分的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种泽泻药材中16种三萜类成分的超高效色谱-串联质谱(High Performance Liquid Chromatography-mass pectrometry/massspectrometry，UPLC-MS/MS)检测方法，该方法能够快速、准确的实现泽泻药材中16种三萜类成分的检测。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，包括以下步骤：
S1、取待测泽泻样品，然后加入体积浓度为100％的乙腈制成每1ml中含有8mg的待测泽泻样品的提取液，过滤得到样品滤液，于样品滤液中加入内标溶液得到供试品溶液，所述样品滤液与内标溶液的体积比为1:1；
S2、将步骤S1所得的供试品溶液注入快速液相色谱串联质谱仪，按以下色谱条件进行检测：
以体积浓度为100％的乙腈作为流动相A，以体积浓度为0.1％的甲酸水溶液作为流动相B，进行梯度洗脱，按体积百分比计算，所述流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；
所述梯度洗脱的条件为：于0～1.0min，流动相A的比例从30％变化为55％，于1.0～5.0min，流动相A的比例从55％变化为75％，于5.0～7.0min，流动相A的比例从75％变化为90％，于7.0～8.5min，等度洗脱，流动相A的比例为90％，于8.5～8.6min，流动相A的比例从90％变化为30％，于8.6～10min，等度洗脱，流动相A的比例为30％；
质谱条件设定为：离子源为电喷雾离子源，正离子扫描模式。
本发明的有益效果在于：现有检测泽泻药材中泽泻三萜类成分方法有HPLC法，ELSD检测法，HPLC法进行检测分析时间过长(从30min到80min不等)，且泽泻三萜类多为末端吸收，在紫外208nm下检测干扰较大，基线存有漂移；而采用ELSD检测灵敏度不够，难以检识泽泻低含量的三萜类化合物。本发明通过UPLC-MS/MS法，对待测泽泻样品进行前处理，控制梯度洗脱的条件同时可以快速实现定性鉴定或定量检测泽泻药材中16种三萜类成分，为泽泻药材的开发利用和质量评价提供了可靠的实验数据。本发明检测方法操作简单，快速分析时间仅10min，分离速度快，超高灵敏度，弥补了目前针对泽泻药材中16种三萜类成分的空白，值得推广应用。
附图说明
图1为本发明检测的16种三萜类成分的化学结构式示意图；
图2为本发明实施例1测得的内标甘草次酸与三萜类成分的离子流色谱图；
图3为本发明实施例1测得的泽泻醇A的子离子图；
图4为本发明实施例1测得的23-乙酰泽泻醇B的子离子图；
图5为本发明实施例1测得的泽泻醇F的子离子图；
图6为本发明实施例1测得的泽泻醇L的子离子图；
图7为本发明实施例1测得的泽泻醇C的子离子图；
图8为本发明实施例1测得的泽泻醇G的子离子图；
图9为本发明实施例1提取方法筛选的结果图；
图10为本发明实施例1提取溶剂筛选的结果图；
图11为本发明实施例1提取时间筛选的结果图；
图12为为本发明实施例1料液比筛选的结果图；
标号说明：
1、16-氧代泽泻醇A；2、16-氧代-24-乙酰泽泻醇A；3、泽泻醇C；
4、泽泻醇F；5、23-乙酰泽泻醇C；6、11-去氧泽泻醇C；7、泽泻醇L；8、24-乙酰泽泻醇F；9、泽泻醇A；10、24-乙酰泽泻醇A；11、23-乙酰泽泻醇L；12、泽泻醇G；13、泽泻醇B；14、23-乙酰泽泻醇B；15、11-去氧泽泻醇B；16、11-去氧-23-乙酰泽泻醇B。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
本发明最关键的构思在于:本发明通过流动相、梯度洗脱的组合作用，能够快速实现泽泻药材中16种三萜类成分的同时检测，检测方法操作简单，超高灵敏度，分析时间仅10min，为泽泻药材的开发利用和质量评价提供了可靠的实验数据。
请参照图1～图12所示，一种泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，包括以下步骤：
S1、取待测泽泻样品，然后加入体积浓度为100％的乙腈制成每1ml中含有8mg的待测泽泻样品的提取液，过滤得到样品滤液，于样品滤液中加入内标溶液得到供试品溶液，所述样品滤液与内标溶液的体积比为1:1；
S2、将步骤S1所得的供试品溶液注入快速液相色谱串联质谱仪，按以下色谱条件进行检测：
以体积浓度为100％的乙腈作为流动相A，以体积浓度为0.1％的甲酸水溶液作为流动相B，进行梯度洗脱，按体积百分比计算，所述流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；
所述梯度洗脱的条件为：于0～1.0min，流动相A的比例从30％变化为55％，于1.0～5.0min，流动相A的比例从55％变化为75％，于5.0～7.0min，流动相A的比例从75％变化为90％，于7.0～8.5min，等度洗脱，流动相A的比例为90％，于8.5～8.6min，流动相A的比例从90％变化为30％，于8.6～10min，等度洗脱，流动相A的比例为30％；
质谱条件设定为：离子源为电喷雾离子源，正离子扫描模式。
毛细管电压：3.50kV；脱溶剂氮气流速：800L/h；脱溶剂温度：500℃；锥孔N2气流：50L/h；离子源温度：150℃；二级锥孔萃取电压：3.00V；停留时间：5ms；氩气作为碰撞气体；氮气为载气。
本发明的有益效果在于：现有检测泽泻药材中泽泻三萜类成分方法有HPLC法，ELSD检测法，HPLC法进行检测分析时间过长(从30min到80min不等)，且泽泻三萜类多为末端吸收，在紫外208nm下检测干扰较大，基线存有漂移；而采用ELSD检测灵敏度不够，难以检识泽泻低含量的三萜类化合物。本发明通过UPLC-MS/MS法，对待测泽泻样品进行前处理，控制梯度洗脱的条件同时可以快速实现定性鉴定或定量检测泽泻药材中16种三萜类成分，为泽泻药材的开发利用和质量评价提供了可靠的实验数据。本发明检测方法操作简单，快速分析时间仅10min，分离速度快，超高灵敏度，弥补了目前针对泽泻药材中16种三萜类成分的空白，值得推广应用。
进一步的，所述步骤S1具体为：取待测泽泻样品0.20g，精密称定，置于25mL容量瓶中，然后加入体积浓度为100％的乙腈20mL，进行超声提取15～45min，用体积浓度为100％的乙腈定容至25mL，摇匀得提取液，所述提取液于10 000r/min的条件下离心10min，在过滤得样品滤液，于样品滤液中加入内标溶液得到供试品溶液，所述样品滤液与内标溶液的体积比为1:1。
进一步的，所述超声提取的功率为250W，频率为50kHz，提取时间为30min。
进一步的，所述内标溶液是甘草次酸与乙腈的混合溶液，所述内标溶液的浓度为400ng/mL。
内标溶液的配制过程如下：精密稳取甘草次酸对照品，加入乙腈定容，制得浓度为200μg/mL的内标母液，取一定体积的内标母液于容量瓶中，用流动相稀释定容成浓度为400ng/mL的内标溶液。
进一步的，所述步骤S2的检测过程中采用规格为2.1mm×100mm，1.6μm的色谱柱。
步骤S2的检测过程中采用Waters CORTECS C18色谱柱进行检测。
进一步的，所述步骤S2的检测过程中色谱柱的柱温为30～45℃。
MS/MS为串联三重四级杆质谱。
进一步的，所述步骤S2的检测过程中流动相A和流动相B的流速为0.25～0.4mL/min。
进一步的，所述步骤S2的检测过程中进样量为1～5μL。
进一步的，还包括步骤S3：制备混合对照品溶液并对混合对照品溶液进行测定。
进一步的，所述步骤S3具体为：
精密称取16-氧代泽泻醇A1、16-氧代-24-乙酰泽泻醇A2、泽泻醇C3、泽泻醇F4、23-乙酰泽泻醇C5、11-去氧泽泻醇C6、泽泻醇L7、24-乙酰泽泻醇F8、泽泻醇A9、24-乙酰泽泻醇A10、23-乙酰泽泻醇L11、泽泻醇G12、泽泻醇B13、23-乙酰泽泻醇B14、11-去氧泽泻醇B15和11-去氧-23-乙酰泽泻醇B16的对照品，共同置于同一容量瓶中，用体积浓度为50％的乙腈溶解，制得含有16-氧代泽泻醇A 54.42g/mL、16-氧代-24-乙酰泽泻醇A 38.81g/mL、泽泻醇C 53.15g/mL、泽泻醇F 50.80g/mL、23-乙酰泽泻醇C 49.02g/mL、11-去氧泽泻醇C 30.62g/mL、泽泻醇L 50.43g/mL、24-乙酰泽泻醇F 38.25g/mL、泽泻醇A 46.06g/mL、24-乙酰泽泻醇A 16.81g/mL、23-乙酰泽泻醇L 52.05g/mL、泽泻醇G 48.04g/mL、泽泻醇B 50.05g/mL、23-乙酰泽泻醇B 51.10g/mL、11-去氧泽泻醇B 12.91g/mL和11-去氧-23-乙酰泽泻醇B41.43g/mL的混合对照品溶液，在对混合对照品溶液进行测定。
在检测过程中，选取如表1所示的离子对进行分析：
表1离子对检测分析表
优选地，选取16-氧代泽泻醇A的m/z为415.3的子离子、16-氧代-24-乙酰泽泻醇A的m/z为415.3的子离子、泽泻醇C的m/z为415.3的子离子、泽泻醇F的m/z为339.3的子离子、23-乙酰泽泻醇C的m/z为451.3的子离子、11-去氧泽泻醇C的m/z为399.3的子离子、泽泻醇L的m/z为397.3的子离子、24-乙酰泽泻醇F的m/z为339.3的子离子、泽泻醇A的m/z为383.3的子离子、24-乙酰泽泻醇A的m/z为365.3的子离子、23-乙酰泽泻醇L的m/z为451.3的子离子、泽泻醇G的m/z为437.3的子离子、泽泻醇B的m/z为437.3的子离子、23-乙酰泽泻醇B的m/z为437.3的子离子、11-去氧泽泻醇B的m/z为367.2的子离子和11-去氧-23-乙酰泽泻醇B的m/z为439.3的子离子作为定量离子。
实施例1
一、一种泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，具体操作过程及实验条件如下：
1、仪器：ACQUITY UPLC I-Class超高效液相色谱仪(美国Waters公司)；Xevo TQS三重四级杆质谱(美国Waters公司)；CPA225D型十万分之一分析天平(德国Sartorius公司)；KQ-500DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；DFY-500型中药粉碎机(温岭市林大机械有限公司)。
2、试剂：乙腈为色谱纯(德国Merck公司)，Milli-Q超纯水仪(美国Millipore公司)，其余试剂均为分析纯；对照品16-氧代泽泻醇A、16-氧代-24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇C、11-去氧泽泻醇C、泽泻醇L、23-乙酰泽泻醇L、11-去氧泽泻醇B、11-去氧23-乙酰泽泻醇，购自上海源叶生物科技有限公司，泽泻醇F、23-乙酰泽泻醇C、24-乙酰泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、泽泻醇B、均购自成都曼思特生物科技有限公司；23-乙酰泽泻醇B(批号111846-201504)购自中国食品药品检定研究院，以上对照品经面积归一法测定，纯度均大于98％，内标甘草次酸购自成都曼思特生物科技有限公司；24批泽泻药材分别收购于泽泻主产地福建、江西和四川，经药用植物学教研室范世明高级实验师和生药教研室林青青鉴定为泽泻科植物泽泻Alisma orientale(Sam.)Juzep.的干燥块茎，样本存放于福建中医药大学标准化项目研究样品室。
2方法与结果
2.1对照品溶液的制备
精密称取16-氧代泽泻醇A、16-氧代-24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇C、泽泻醇F、23-乙酰泽泻醇C、11-去氧泽泻醇C、泽泻醇L、24-乙酰泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇L、泽泻醇G、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、11-去氧泽泻醇B和11-去氧-23-乙酰泽泻醇B的对照品，共同置于同一容量瓶中，用乙腈溶解，用50％乙腈溶解并稀释至刻度，分别制得54.42、38.81、53.15、50.80、49.02、30.62、50.43、38.25、46.06、16.81、52.05、48.04、50.05、51.10、12.91、41.43μg/mL的混合对照品溶液，供UPLC-MS/MS定性或者定量比较用。
2.2内标溶液的制备
精密稳取甘草次酸对照品，加入乙腈定容，制得浓度为200μg/mL的内标母液，取一定体积的内标母液于容量瓶中，用流动相稀释定容成浓度为400ng/mL的内标溶液。
2.3供试品溶液的制备
取待测泽泻样品0.20g，精密称定，置25mL量瓶中，精密加入纯乙腈20mL，密塞，超声处理(功率250W，频率50kHz)30min，放冷，用纯乙腈定容至25mL，摇匀，提取液于10000r·min–1离心10min，0.22μm滤膜滤过，取样品滤液，按样品滤液：内标溶液体积比为1：1的比例加入内标溶液，混匀制得供试品溶液，供UPLC-MS/MS定性或者定量分析用。
2.4测试条件
将上述对照品溶液和供试品溶液按下述条件进行测定：
2.4.1色谱条件：
色谱柱：Waters CORTECS C18 2.1mm×100mm，1.6μm色谱柱；
流动相：流动相A：乙腈溶液，流动相B为含0.1％甲酸水溶液；
梯度洗脱条件为：0～1.0min，30％A→55％A；1.0～5.0min，55％A→75％A；5.0～7.0min，75％A→90％A；7.0～8.5min，90％A→90％A；8.5～8.6min，90％A→30％A；8.6～10min，30％A→30％A；流速0.25mL/min
2.2质谱条件
离子源：电喷雾离子源；
检测方式：正离子模式；
经过优选碰撞能量和锥孔电压，获得优选的质谱条件如表2所示。
表2为优选的离子对筛选条件表
2.5泽泻药材中主要化学成分的鉴定
本发明方法要测定的16种三萜类成分的化学结构示意图如图1所示。将泽泻药材样品按上述测试条件后，测得的UPLC-MS/MS离子流色谱图结果如图2所示，提取的16种三萜类成分和内标甘草次酸的部分质谱图如图3～图8所示，其中图3为泽泻醇A的子离子图，图4为23-乙酰泽泻醇B的子离子图，图5为泽泻醇F的子离子图，图6为泽泻醇L的子离子图，图7为泽泻醇C的子离子图，图8为泽泻醇G的子离子图。
各化合物的鉴定方法：23-乙酰泽泻醇L和11-去氧-23-乙酰泽泻醇B最佳灵敏度母离子是[M+H]+，子离子均是母离子峰失去乙酸基团(60)的[M+H-HAc]+峰；23-乙酰泽泻醇C最佳灵敏度子离子是母离子是[M+H]+连续失去乙酸基团和一分子水的[M+H-HAc-H2O]+峰；泽泻醇C、11-去氧泽泻醇C和泽泻醇L最佳定量子离子均为母离子[M+H]+峰通过氢重排解离C4H8O产生定量子离子[M+H-C4H8O]+峰；16-氧代泽泻醇A最佳定量子离子是其母离子[M+H]+峰失去C4H10O2产生的m/z 415.3[M+H-C4H10O2]+；泽泻醇A、泽泻醇F、23-乙酰泽泻醇B、16-氧代-24-乙酰泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇F、泽泻醇G和泽泻醇B与前面化合物不同，母离子均为[M+H-H2O]+，泽泻醇A最佳定量子离子为母离子失去C4H10O2的子离子峰m/z 383.3[M+H-H2O-C4H10O2]+，泽泻醇F最佳子离子是失去C4H10O2得到m/z 381.3[M+H-H2O-C4H10O2]+进一步裂解失去C2H2O产生的m/z 339.3[M+H-H2O-C4H10O2-C2H2O]+，23-乙酰泽泻醇B二级最佳子离子是母离子m/z 497.3[M+H-H2O]+裂解失去乙酸基产生最佳子离子[M+H-H2O-HAc]+，16-氧代-24-乙酰泽泻醇A二级最佳定量子离子的裂解方式为m/z 415.3[M+H-C6H12O3]+，24-乙酰泽泻醇F是母离子裂解失去C6H12O3和C2H2O产生的m/z 339.3[M+H-H2O-C6H12O3-C2H2O]+；泽泻醇G和泽泻醇B二级最佳定量子离子均为m/z 437.3[M+H-2H2O]+；24-乙酰泽泻醇A最佳定量母离子是[M+H-2H2O]+，其连续失去C6H12O3和一分子H2O产生最佳定量子离子峰[M+H-C6H12O3-3H2O]+。11-去氧泽泻醇B一级产生[M+H-C4H8O]+峰，裂解失去一分子H2O产生最佳定量子离子[M+H-C4H8O-H2O]+峰，鉴定结果如表3所示，表3为本发明实施例1测定的16种成分质谱测定信息表。
表3本发明实施例1测定的5种成分质谱测定信息表
注：“*”为优选的定量离子
从图2中可以看出，通过本发明方法可同时实现泽泻药材16种三萜类成分的准确鉴定。在该条件下，色谱分析时间极大的缩短，从原来的15-60min缩短为10min，溶剂损耗也从常规的15-60mL缩小为2.5mL。
二、为不同检测条件下的实验分析：
1、色谱条件的筛选
(1)色谱柱的筛选
比较了不同色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18(2.1mm×100mm,1.7μm)、Waters HSST3C18(2.1mm×100mm,1.8μm)、Waters CORTECS C18(2.1mm×100mm,1.6μm)。其他色谱条件如下：
流动相：乙腈(A)-0.1％甲酸(B)梯度洗脱，0～1.0min，30％A→55％A；1.0～5.0min，55％A→75％A；5.0～7.0min，75％A→90％A；7.0～8.5min，90％A→90％A；8.5～8.6min，90％A→30％A；8.6～10min，30％A→30％A。
结果表明，Waters CORTECS C18(2.1mm×100mm，1.6μm)峰容量多，分离度较好，优选Waters CORTECS C18(2.1mm×100mm，1.6μm)色谱柱。
(2)流动相的筛选
比较了4种流动相系统：乙腈-0.1％甲酸水，乙腈-水，甲醇-0.1％甲酸水，甲醇-水。相对应的梯度洗脱程序如下：
0～1.0min，30％A→55％A；1.0～5.0min，55％A→75％A；5.0～7.0min，75％A→90％A；7.0～8.5min，90％A→90％A；8.5～8.6min，90％A→30％A；8.6～10min，30％A→30％A。
0～1.0min，30％A→30％A；1.0～5.0min，30％A→55％A；5.0～7.0min，55％A→75％A；7.0～8.5min，75％A→90％A；8.5～8.6min，90％A→30％A；8.6～10min，30％A→30％A。
0～1.5min，30％A→30％A；1.5～5.0min，30％A→50％A；5.0～7.0min，50％A→70％A；7.0～8.5min，70％A→90％A；8.5～8.6min，90％A→30％A；8.6～10min，30％A→30％A。
0～1.5min，30％A→30％A；1.5～5.0min，30％A→50％A；5.0～7.0min，50％A→70％A；7.0～8.5min，70％A→90％A；8.5～8.6min，90％A→30％A；8.6～10min，30％A→30％A。
结果表明，使用乙腈-0.1％甲酸峰容量最佳，色谱分离度较好，优于其他体系。
2、供试品制备方法的筛选
(1)提取方法的筛选
考察了超声、回流、索氏、温浸提取四种提取方法对16种三萜类成分的影响，结果表明超声和回流提取效果较佳，由于超声提取制备样品方便，因此选择超声提取。测定的响应值，即色谱峰的峰面积，响应值越大，指标成分的含量越高，结果如下表2和图9所示。
表2不同提取方法16种指标成分的响应值测定结果表
(2)提取溶剂的筛选
考察不同提取溶剂(40％，60％，80％，100％乙腈)对泽泻药材提取率的影响，表100％乙腈最佳。测定的响应值结果如下表3和图10所示。
表3不同提取溶剂16种指标成分的响应值测定结果表
(3)超声提取时间的筛选
考察不同超声提取时间(15，30，45，60min)，结果表明30、45min最佳，综合来看，优选30min。测定的响应值结果如下表4和图11所示。
表4不同超声提取时间16种指标成分的响应值测定结果表
(4)提取料液比的筛选
考察了不同提取料液比(1:15，1:25，1:50)，结果表明1:25，1:50较佳，因此选择1:25作为提取料液比。测定的响应值结果如下表5和图12所示。
表5不同提取料液比16种指标成分的响应值测定结果表
综上所述，本发明提供的现有检测泽泻药材中泽泻三萜类成分方法有HPLC法，ELSD检测法，HPLC法进行检测分析时间过长(从30min到80min不等)，且泽泻三萜类多为末端吸收，在紫外208nm下检测干扰较大，基线存有漂移；而采用ELSD检测灵敏度不够，难以检识泽泻低含量的三萜类化合物。本发明通过UPLC-MS/MS法，对待测泽泻样品进行前处理，控制梯度洗脱的条件同时可以快速实现定性鉴定或定量检测泽泻药材中16种三萜类成分，为泽泻药材的开发利用和质量评价提供了可靠的实验数据。本发明检测方法操作简单，快速分析时间仅10min，分离速度快，超高灵敏度，弥补了目前针对泽泻药材中16种三萜类成分的空白，值得推广应用。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取待测泽泻样品，然后加入体积浓度为100％的乙腈制成每1ml中含有8mg的待测泽泻样品的提取液，过滤得到样品滤液，于样品滤液中加入内标溶液得到供试品溶液，所述样品滤液与内标溶液的体积比为1:1；
S2、将步骤S1所得的供试品溶液注入快速液相色谱串联质谱仪，按以下色谱条件进行检测：
以体积浓度为100％的乙腈作为流动相A，以体积浓度为0.1％的甲酸水溶液作为流动相B，进行梯度洗脱，按体积百分比计算，所述流动相A的比例与流动相B的比例的总和为100％；
所述梯度洗脱的条件为：于0～1.0min，流动相A的比例从30％变化为55％，于1.0～5.0min，流动相A的比例从55％变化为75％，于5.0～7.0min，流动相A的比例从75％变化为90％，于7.0～8.5min，等度洗脱，流动相A的比例为90％，于8.5～8.6min，流动相A的比例从90％变化为30％，于8.6～10min，等度洗脱，流动相A的比例为30％；
质谱条件设定为：离子源为电喷雾离子源，正离子扫描模式。
2.根据权利要求1所述的泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述步骤S1具体为：取待测泽泻样品0.20g，精密称定，置于25mL容量瓶中，然后加入体积浓度为100％的乙腈20mL，进行超声提取15～45min，用体积浓度为100％的乙腈定容至25mL，摇匀得提取液，所述提取液于10 000r/min的条件下离心10min，在过滤得样品滤液，于样品滤液中加入内标溶液得到供试品溶液，所述样品滤液与内标溶液的体积比为1:1。
3.根据权利要求2所述的泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述超声提取的功率为250W，频率为50kHz，提取时间为30min。
4.根据权利要求1或2所述的泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述内标溶液是甘草次酸与乙腈的混合溶液，所述内标溶液的浓度为400ng/mL。
5.根据权利要求1所述的泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述步骤S2的检测过程中采用规格为2.1mm×100mm，1.6μm的色谱柱。
6.根据权利要求1所述的泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述步骤S2的检测过程中色谱柱的柱温为30～45℃。
7.根据权利要求1所述的泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述步骤S2的检测过程中流动相A和流动相B的流速为0.25～0.4mL/min。
8.根据权利要求1所述的泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述步骤S2的检测过程中进样量为1～5μL。
9.根据权利要求1所述的泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，还包括步骤S3：制备混合对照品溶液并对混合对照品溶液进行测定。
10.根据权利要求9所述的泽泻药材中16种三萜类成分的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述步骤S3具体为：
精密称取16-氧代泽泻醇A、16-氧代-24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇C、泽泻醇F、23-乙酰泽泻醇C、11-去氧泽泻醇C、泽泻醇L、24-乙酰泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇L、泽泻醇G、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、11-去氧泽泻醇B和11-去氧-23-乙酰泽泻醇B的对照品，共同置于同一容量瓶中，用体积浓度为50％的乙腈溶解，制得含有16-氧代泽泻醇A54.42g/mL、16-氧代-24-乙酰泽泻醇A 38.81g/mL、泽泻醇C 53.15g/mL、泽泻醇F 50.80g/mL、23-乙酰泽泻醇C 49.02g/mL、11-去氧泽泻醇C 30.62g/mL、泽泻醇L 50.43g/mL、24-乙酰泽泻醇F 38.25g/mL、泽泻醇A 46.06g/mL、24-乙酰泽泻醇A 16.81g/mL、23-乙酰泽泻醇L52.05g/mL、泽泻醇G 48.04g/mL、泽泻醇B 50.05g/mL、23-乙酰泽泻醇B 51.10g/mL、11-去氧泽泻醇B 12.91g/mL和11-去氧-23-乙酰泽泻醇B 41.43g/mL的混合对照品溶液，在对混合对照品溶液进行测定。
CN201810768486.1A 2018-07-13 2018-07-13 一种泽泻药材中16种三萜类成分的uplc-ms/ms检测方法 Pending CN108872435A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810768486.1A CN108872435A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 一种泽泻药材中16种三萜类成分的uplc-ms/ms检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810768486.1A CN108872435A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 一种泽泻药材中16种三萜类成分的uplc-ms/ms检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108872435A true CN108872435A (zh) 2018-11-23

Family

ID=64301592

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810768486.1A Pending CN108872435A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 一种泽泻药材中16种三萜类成分的uplc-ms/ms检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108872435A (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109884238A (zh) * 2019-01-30 2019-06-14 广西壮族自治区食品药品检验所 一种启脾丸的鉴别方法
CN109932443A (zh) * 2019-03-19 2019-06-25 福建中医药大学 一种用于不同等级泽泻的一测多评法及其应用
CN111624267A (zh) * 2020-04-30 2020-09-04 广东经典名方科技有限公司 一种泽泻中16-氧代泽泻醇a的高效液相检测方法
CN111638300A (zh) * 2020-04-26 2020-09-08 广东经典名方科技有限公司 一种泽泻中16-氧代泽泻醇a的薄层鉴别方法
CN112213409A (zh) * 2020-05-19 2021-01-12 青海普兰特药业有限公司 一种泽泻汤uplc特征图谱的检测方法及该特征图谱的应用
CN113105522A (zh) * 2021-04-06 2021-07-13 神威药业集团有限公司 一种泽泻三萜类化合物及其制备方法、结构表征方法和应用
CN113960213A (zh) * 2021-11-09 2022-01-21 上海海虹实业(集团)巢湖今辰药业有限公司 基于泽泻汤的泽泻成份的选定方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102818861A (zh) * 2012-05-10 2012-12-12 丽珠医药集团股份有限公司 一种清毒安肾胶囊的质量控制方法及应用
CN107727772A (zh) * 2017-11-21 2018-02-23 匡海学 利用电喷雾质子化裂解‑质谱多反应检测模式对中药中三萜皂苷进行定性和定量的方法
CN107831261A (zh) * 2017-12-13 2018-03-23 广东心宝药业科技有限公司 泽泻丹皮白芍制剂的质量检测方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102818861A (zh) * 2012-05-10 2012-12-12 丽珠医药集团股份有限公司 一种清毒安肾胶囊的质量控制方法及应用
CN107727772A (zh) * 2017-11-21 2018-02-23 匡海学 利用电喷雾质子化裂解‑质谱多反应检测模式对中药中三萜皂苷进行定性和定量的方法
CN107831261A (zh) * 2017-12-13 2018-03-23 广东心宝药业科技有限公司 泽泻丹皮白芍制剂的质量检测方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WANLI ZHAO 等: "Qualitative and Quantitative Analysis of Major Triterpenoids in Alismatis Rhizoma by High Performance Liquid Chromatography/Diode-Array Detector/Quadrupole-Time-of-Flight Mass Spectrometry and Ultra-Performance Liquid Chromatography/Triple Quadrupole Mass", 《MOLECULES》 *
XU, W 等: "Pharmacokinetics and tissue distribution of five major triterpenoids after oral administration of Rhizoma Alismatis extract to rats using ultra high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 *
池雨锋 等: "HPLC-MS同时测定泽泻中两种泽泻醇的含量", 《山东科学》 *
邓岳 等: "HPLC-TOF-MS分析泽泻提取物中三萜类化合物", 《化学分析计量》 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109884238A (zh) * 2019-01-30 2019-06-14 广西壮族自治区食品药品检验所 一种启脾丸的鉴别方法
CN109884238B (zh) * 2019-01-30 2021-05-28 广西壮族自治区食品药品检验所 一种启脾丸的鉴别方法
CN109932443A (zh) * 2019-03-19 2019-06-25 福建中医药大学 一种用于不同等级泽泻的一测多评法及其应用
CN109932443B (zh) * 2019-03-19 2022-02-25 福建中医药大学 一种用于不同等级泽泻的一测多评法及其应用
CN111638300A (zh) * 2020-04-26 2020-09-08 广东经典名方科技有限公司 一种泽泻中16-氧代泽泻醇a的薄层鉴别方法
CN111624267A (zh) * 2020-04-30 2020-09-04 广东经典名方科技有限公司 一种泽泻中16-氧代泽泻醇a的高效液相检测方法
CN112213409A (zh) * 2020-05-19 2021-01-12 青海普兰特药业有限公司 一种泽泻汤uplc特征图谱的检测方法及该特征图谱的应用
CN113105522A (zh) * 2021-04-06 2021-07-13 神威药业集团有限公司 一种泽泻三萜类化合物及其制备方法、结构表征方法和应用
CN113960213A (zh) * 2021-11-09 2022-01-21 上海海虹实业(集团)巢湖今辰药业有限公司 基于泽泻汤的泽泻成份的选定方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108872435A (zh) 一种泽泻药材中16种三萜类成分的uplc-ms/ms检测方法
CN105424850B (zh) 一种石斛药材的检测方法
CN103235050B (zh) 一种三七总皂苷注射剂的液相色谱检测方法
CN102520079B (zh) 一种利用uplc快速测定烟叶中茄尼醇含量的方法
CN104991009A (zh) 用于测定中药及保健品中非法添加物质的方法
CN106198832B (zh) 一种强力枇杷露的生产质量控制方法
CN108037231A (zh) 一种同时测定化妆品中8种乙二醇醚类化合物的方法
CN110231412A (zh) 绞股蓝中皂苷含量的检测方法
CN105044223B (zh) 一种参芎葡萄糖注射液的化学成分鉴定及活性成分筛选方法
CN109444290A (zh) 车前草药材uplc特征图谱的构建方法和检测方法
CN108152399A (zh) 一种柏子仁药材uplc特征图谱的构建及其检测方法
CN106770839B (zh) 一种山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法
CN107315058A (zh) 一种检测银杏叶提取液中总银杏酸的方法
Liu et al. Development and validation of liquid chromatography–tandem mass spectrometry method for simultaneous determination of six steroidal saponins in rat plasma and its application to a pharmacokinetics study
CN101791366A (zh) 一种对不同产地穿龙薯蓣及同属药材进行质量检测的方法
CN104931594B (zh) 一种五味子中5-羟甲基糠醛的含量检测方法
CN107807190A (zh) 一种测定雪胆中3种活性成分的hplc方法
CN106770829A (zh) 一种测定金银花大鼠血清代谢产物的方法
CN106290645A (zh) 一种拉萨大黄指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱
CN107607665A (zh) 一种苗药山豆根及其中药制剂质量控制方法
CN105259262B (zh) 一种快速发现天然产物中低含量活性成分的新方法
CN104215614A (zh) 一种高效液相色谱-二极管阵列/荧光检测器串联检测芦荟苷a、b和芦荟大黄素的方法
CN104007220A (zh) 一种同时检测血浆中复方丹蒌片主要成分的方法
CN109425671A (zh) 一种人参皂苷Rg1，Re，Rb1的双内标高效液相色谱检测方法
CN102253157A (zh) 检测白酒中罗汉果浸泡液成分的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20181123

RJ01 Rejection of invention patent application after publication