CN114034798A - 一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法 - Google Patents

一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，包括以下步骤：取干燥的赤水金钗石斛花用70%甲醇提取，过滤，收集续滤液得到供试品溶液；取黄酮对照品，精密称定，加70%甲醇制成对照品溶液；将供试品溶液进行高效液相色谱分析，得到HPLC指纹图谱，根据与对照品的相对保留时间确定共有峰；利用标准品对照，计算待测成分的含量。本发明提供了一种可以同时检测赤水金钗石斛花中3个化学成分的指纹图谱方法，并可以对各成分的含量进行定量检测，提供了一种客观评价药品的质量水平方法；且该方法精密度、稳定性和重现性良好，可同时满足赤水金钗石斛花指纹图谱测定要求。

Description

一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法
技术领域
本发明涉及中药的质量检测方法领域，尤其涉及一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法。
背景技术
金钗石斛为兰科石斛属石斛（Dendrobium nobile Lindl.）的新鲜或干燥茎，是2020版中国药典石斛收载的3个主要品种之一，同时也是卫生部公布的药食两用的药材。《神农本草经》有记载“金钗石斛主治伤中，除痹，下气，补五脏虚劳赢瘦，强阴。久服厚肠胃。轻身延年。”认为其有益胃生津、滋阴清热等功效。
金钗石斛在我国主要分布于贵州、四川、云南、广西、海南和台湾等地，以贵州赤水所产为最佳，为“道地药材”。中国药材种植资源普查结果显示，目前国内只有贵州赤水符合金钗石斛的野外种植条件。贵州赤水是我国最早发展金钗石斛产业的主要城市，是金钗石斛药材及相关保健品的主要生产基地，并已通过国家GAP种植基地认证。赤水金钗石斛资源丰富，品质优良，但相关产品科技含量仍需提高，具有结合现代科技创新技术，深入开发的潜力。
目前，金钗石斛的主要应用部位是茎，而花的开发应用不够，大量资源被闲置浪费，阻碍了金钗石斛产业发展。赤水金钗石斛花现多被用作茶饮，且已被列为贵州食品地方标准，DBS52/049-2021、DBS52/050-2021。其标准包括了性状、感官要求、污染物限量及水分、灰色等理化检测，同时规定其所含石斛碱含量不得低于0.4%。然而目前对金钗石斛花所含具体化学成分的研究较少，质量控制方法目前也仅有一篇指纹图谱的专利，其仅指认出D-无水葡萄糖这一种成分，特征性不强，尚不全面，有深入研究的必要。本发明将建立赤水金钗石斛花高效液相色谱（HPLC）的指纹图谱，并探索其化学成分，以期为赤水金钗石斛花质量控制方法的建立提供科学依据。
发明内容
本发明的目的在于提供一种赤水金钗石斛花指纹图谱的构建及其含量测定方法。该方法稳定可靠、重现性好、精密度高，弥补了现有质量控制方法的短缺，对赤水金钗石斛花质量检测和评价具有指导意义。
本发明所采取的技术方案为：
一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及含量测定方法，包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：准确称取干燥的金钗石斛花0.5g于锥形瓶中，加入35mL70%甲醇，称重，摇匀，超声60 min（45 kHz，90%），冷却至室温后再称重，用70%甲醇补足损失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，得到样品溶液。进样前过0.22μm微孔滤膜；
（2）对照品溶液的制备：包括单一对照品溶液和混合对照品溶液的制备，取黄酮对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成对照品溶液；
（3）将供试品溶液进行高效液相色谱分析，得到HPLC指纹图谱，根据与对照品的相对保留时间确定特征峰；
进一步的，步骤（2）中所述单一对照品溶液的制备：单一对照品溶液的配制：分别准确称取适量甘草苷、山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷、异槲皮苷于3个5mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，超声振荡、摇匀，得到浓度分别为0.209 mg/mL、0.105mg/mL、0.241mg/mL单一对照品贮备液，进样前过0.22μm微孔滤膜。
进一步的，步骤（2）中所述混合对照品溶液：分别准确称取甘草苷、山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷、异槲皮苷0.21mg、0.66mg、0.20mg于5mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，超声振荡、摇匀，即得混合对照品贮备液，进样前过0.22 μm微孔滤膜。
进一步的，步骤（3）中所述高效液相色谱分析的条件为：色谱柱为AgilentEclipse Plus C18，4.6 mm×150 mm，5 μm；流动相为0.06%醋酸-水（A），乙腈（B）；流动相流速为1.0 mL/min；柱温为30℃；进样量：2μL；检测波长为280nm；所述的流动相为0.06%醋酸-水（A），乙腈（B）。
进一步的，步骤（3）中所述的梯度洗脱步骤包括：按照体积分数计，0~4 min，95%A→87.5A；4~14 min，87.5%A→83%A；14~21 min，83%A→73%A；21~25 min，73%A→0%A。
所述高效液相色谱分析的条件包括：
实验中考察了Agilent Eclipse Plus C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm)、ThermoAcclaimTM 120 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）和Agilent Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6mm，5 μm）三个色谱柱与254、280、360 nm三种检测波长，结果表明，Agilent Eclipse PlusC18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）柱效更好，且在280 nm时样品溶液具有较好的峰形；
赤水金钗石斛花中化学成分种类较多，极性差异较大，因此考虑使用梯度洗脱。由于类似组方的成分分析报道较少，在流动相梯度摸索过程中考察醋酸水（A）-甲醇（B）、醋酸水（A）-乙腈（B）、磷酸水（A）-甲醇（B）、磷酸水（A）-乙腈（B）；结果表明，采用0.06%醋酸水（A）-乙腈（B）流动相体系时，出峰时间最合适，特征峰能达到分离度要求，色谱图基线较平稳，峰对称性好。
因此，采用梯度洗脱，步骤包括：按照体积分数计，0~4min，95%A→87.5%A；4~14min，87.5%A→83%A；14~21min，83%A→73%A；21~25 min，73%A→0%A；
本发明优选的技术方案，所述高效液相色谱分析流动相为：按体积分数计，0.06%醋酸水（A）-乙腈（B）。所述梯度洗脱步骤包括：按体积分数计，0~4 min，95%A→87.5%A；4~14min，87.5%A→83%A；14~21min，83%A→73%A；21~25min，73% A→0%A。
流速1.0 mL/min；柱温30℃；
进一步的，步骤（3）中所述的根据与对照品的相对保留时间确定特征峰，精密度考察：取S1金钗石斛花样品溶液，在同样的的色谱条件下连续进样6次，考察色谱峰相似度的一致性，记录13个主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并分别计算它们间的 RSD值。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，进行相似度的评价。
进一步的，步骤（3）中所述的根据与对照品的相对保留时间确定特征峰，重复性考察：取6份S1干燥金钗石斛花，按相同的方法制成供试品溶液，在同样的色谱条件下连续进样6次，计算各个主要色谱峰保留时间RSD值，考察色谱峰相似度的一致性，记录13个主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并分别计算它们间的 RSD 值。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，进行相似度的评价。
进一步的，步骤（3）中所述的根据与对照品的相对保留时间确定特征峰，稳定性考察：取S1干燥金钗石斛花提取液分别在0、4、8、12、16、20、24小时不同时间点进行检测，同样的色谱条件下连续进样7次，考察色谱峰相似度的一致性，记录13个主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并分别计算它们间的 RSD 值。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，进行相似度的评价。
进一步的，步骤（3）中所述将供试品溶液进行高效液相色谱分析，指纹图谱测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱峰，得到赤水金钗石斛花的HPLC指纹图谱，根据色谱图中各色谱峰与对照品的相对保留时间，确定共有峰，并选取了其中13个共有峰作为特征指纹峰，建立了赤水金钗石斛花的对照指纹图谱，和多批赤水金钗石斛花样品的指纹图谱。
本发明以甘草苷、山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷和异槲皮苷为参照物确定了赤水金钗石斛花的HPLC指纹图谱。
本发明通过对36批供试品溶液的HPLC分析，根据各色谱峰的保留时间，确定了13个峰为特征指纹峰；并指认出3个特征峰对应的化合物，其中峰11为甘草苷，保留时间为14.683 min；峰12为山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷，保留时间为15.646 min；峰13为异槲皮苷，保留时间为16.156 min。
（4）根据标准品，计算待测成分的含量。
可见，本发明基于赤水金钗石斛花的主要化学成分理化性质，结合对色谱柱、检测波长、洗脱条件等多因素的综合考虑，其有效解决了各药效成分分离度问题；提供了一种客观评价药品的质量水平方法。且该方法精密度、稳定性和重现性良好，可满足赤水金钗石斛花指纹图谱测定要求。
附图说明
图1为赤水金钗石斛花的对照指纹图谱。
图2为36批赤水金钗石斛花的指纹图谱。
图3A为空白溶剂（70%甲醇）色谱图；图3B为甘草苷峰；图3C为山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷峰；图3D为异槲皮苷峰；图3E为混合对照品色谱图；图3F为赤水金钗石斛花样品色谱图，其中峰11为甘草苷，峰12为山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷，峰13为异槲皮苷。
具体实施方式
下面结合本发明的具体实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明收集了36批赤水金钗石斛花（信息见表1）。
表1赤水金钗石斛花样品信息
编号 来源 批号 处理方式
S1 信天凯旋基地 200505 冻干
S2 信天官渡基地 200504 冻干
S3 信天长沙基地 200502 烘干
S4 信天鸭岭基地 200501 烘干
S5 仙草赤水复兴镇转石奇观石斛园 20200530 烘干
S6 永斛源赤水市长期镇石笋基地 20200505 冻干
S7 贵州赤水国礼长期基地 200505 冻干
S8 贵州赤水国礼长期基地 200505 烘干
S9 贵州赤水国礼长期基地 200504 烘干
S10 贵州赤水国礼官渡基地 200502 烘干
S11 贵州赤水国礼官渡基地 200503 烘干
S12 贵州赤水国礼官渡基地 200503 冻干
S13 贵州赤水国礼官渡基地 200501 烘干
S14 贵州赤水国礼长期基地 200504 冻干
S15 贵州赤水国礼官渡基地 200502 冻干
S16 贵州赤水国礼官渡基地 200501 冻干
S17 贵州省赤水市长期镇 20200601 烘干
S18 贵州省赤水市长期镇 20200602 烘干
S19 贵州省赤水市长沙镇 20200601 烘干
S20 贵州省赤水市官渡镇 20200601 烘干
S21 贵州省赤水市石堡乡 20200601 烘干
S22 贵州省赤水市官渡镇 20200602 烘干
S23 贵州省赤水市长期镇 20200603 烘干
S24 贵州省赤水市长期镇 20200604 烘干
S25 贵州省赤水市长期镇 20200605 烘干
S26 贵州省赤水市官渡镇 20200602 烘干
S27 贵州省赤水市旺隆镇 20200601 烘干
S28 贵州省赤水市旺隆镇 20200602 烘干
S29 贵州省赤水市旺隆镇 20200603 烘干
S30 贵州省赤水市旺隆镇 20200604 烘干
S31 贵州省赤水市旺隆镇 20200605 烘干
S32 贵州省赤水市旺隆镇 20200606 烘干
S33 贵州省赤水市旺隆镇 20200607 烘干
S34 贵州省赤水市旺隆镇 20200608 烘干
S35 贵州省赤水市旺隆镇 20200609 烘干
S36 贵州省赤水市旺隆镇 20200610 烘干
实施例1：赤水金钗石斛花指纹图谱检测方法
1、供试品和对照品溶液的制备
供试品溶液的制备：准确称取干燥的金钗石斛花0.5 g于锥形瓶中，加入35 mL70%甲醇，称重，摇匀，超声60 min（45 kHz，90%），冷却至室温后再称重，用70%甲醇补足损失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，得到样品溶液。进样前过0.22 μm微孔滤膜。
单一对照品溶液的制备：单一对照品溶液的配制：分别准确称取适量甘草苷、山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷、异槲皮苷于3个5 mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，超声振荡、摇匀，得到浓度分别为0.209 mg/mL、0.105 mg/mL、0.241 mg/mL单一对照品贮备液，进样前过0.22 μm微孔滤膜。
混合对照品溶液：分别准确称取甘草苷、山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷、异槲皮苷0.21 mg、0.66 mg、0.20 mg于5 mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，超声振荡、摇匀，即得混合对照品贮备液，进样前过0.22 μm微孔滤膜。
2、色谱条件：色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18，4.6 mm×150 mm，5 μm；流动相为：按体积比计：0.06%醋酸-水（A），乙腈（B）。所述梯度洗脱步骤包括：0~4 min，95%A→87.5A；4~14 min，87.5% A→83%A；14~21 min，83% A→73%A；21~25 min，73% A→0%A；
流动相流速为1.0 mL/min；柱温为30℃；检测波长为：280 nm；进样量：2 μL。
3、指纹图谱方法学考察：
精密度考察：取S1金钗石斛花样品溶液，在同样的的色谱条件下连续进样6次，考察色谱峰相似度的一致性，记录13个主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并分别计算它们间的 RSD 值。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，进行相似度的评价。结果表明：6次测定的13个共有峰的相对保留时间的RSD均小于0.26%，各色谱峰相对主要峰面积的RSD%<3.5%，相似度均达到1.000，仪器精密度良好。
重复性考察：取6份S1干燥金钗石斛花，按相同的方法制成供试品溶液，在同样的色谱条件下连续进样6次，计算各个主要色谱峰保留时间RSD值，考察色谱峰相似度的一致性，记录13个主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并分别计算它们间的 RSD 值。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，进行相似度的评价。结果表明：6次测定的13个共有峰的相对保留时间的RSD均小于0.26%，各色谱峰相对峰面积的RSD%<3.9%，相似度均大于0.999，方法重复性良好。
稳定性考察：取S1干燥金钗石斛花提取液分别在0、4、8、12、16、20、24小时不同时间点进行检测，同样的色谱条件下连续进样7次，考察色谱峰相似度的一致性，记录13个主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并分别计算它们间的 RSD 值。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，进行相似度的评价。结果表明：13个共有峰的相对保留时间的RSD均小于0.44%，各色谱峰相对峰面积的RSD%<4.6%，相似度均大于0.999，样品在24 h内稳定性较好。
4、指纹图谱测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱峰，得到赤水金钗石斛花的HPLC指纹图谱，根据色谱图中各色谱峰与对照品的相对保留时间，确定共有峰，并选取了其中13个共有峰作为特征指纹峰，建立了赤水金钗石斛花的对照指纹图谱（图1），和36批赤水金钗石斛花样品的指纹图谱（图2），其指纹图谱的相似度比对结果见表2。
表2 36批赤水金钗石斛花样品指纹图谱相似度比对结果
样品编号 对照图谱 样品编号 对照图谱 样品编号 对照图谱
S1 0.976 S13 0.991 S25 0.989
S2 0.981 S14 0.865 S26 0.987
S3 0.959 S15 0.962 S27 0.990
S4 0.979 S16 0.907 S28 0.978
S5 0.974 S17 0.974 S29 0.988
S6 0.978 S18 0.989 S30 0.993
S7 0.862 S19 0.975 S31 0.990
S8 0.991 S20 0.985 S32 0.976
S9 0.987 S21 0.969 S33 0.988
S10 0.988 S22 0.990 S34 0.987
S11 0.993 S23 0.989 S35 0.986
S12 0.828 S24 0.973 S36 0.991
经过一系列对照品比对，发现赤水金钗石斛花中含有黄酮类化合物，对主要色谱峰进行鉴别，确定了3个共有峰对应的化合物，其中峰11为甘草苷，保留时间为14.683 min；峰12为山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷，保留时间为15.646 min；峰13为异槲皮苷，保留时间为16.156 min。
对上述成分进行含量计算，其中峰11甘草苷的含量为1.167 mg/g，峰12山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷的含量为4.218mg/g，峰13异槲皮苷的含量为1.385mg/g。
上述步骤中，所用仪器设备、试剂如下：
仪器：高效液相色谱仪（Agilent Technologies 1260 Infinity）；KQ-300VDE型双频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；沃特浦超纯水设备（四川沃特尔水处理设备有限公司）；SpectraMax Plus 384酶标仪（美谷分子仪器有限公司）；十万分之一电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；电子天平（上海菁海仪器有限公司）；恒温水浴槽（杭州佑宁仪器有限公司）。
试剂：甲醇（色谱纯，阿拉丁试剂），乙腈（色谱纯，阿拉丁试剂），甲醇（分析纯，成都金山化学试剂有限公司），乙醇（分析纯，重庆万盛川东化工有限公司），乙酸（分析纯，成都金山化学试剂有限公司）；甘草苷（质量分数＞98%，批号AF8111195）、山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷（质量分数＞98%，批号AF20050831），均购自成都埃法生物科技有限公司；异槲皮苷（质量分数＞98%，批号Y-076-180517）购自成都瑞芬思生物科技有限公司；实验用水均为哇哈哈纯净水。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (10)

1.一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：准确称取干燥的金钗石斛花0.5g于锥形瓶中，加入35 mL70%甲醇，称重，摇匀，超声60 min（45 kHz，90%），冷却至室温后再称重，用70%甲醇补足损失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，得到样品溶液；进样前过0.22μm微孔滤膜；
（2）对照品溶液的制备：包括单一对照品溶液和混合对照品溶液的制备，取黄酮对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成对照品溶液；
（3）将供试品溶液进行高效液相色谱分析，得到HPLC指纹图谱，根据与对照品的相对保留时间确定特征峰；
（4）根据标准品，计算待测成分的含量。
2.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于，步骤（2）中所述单一对照品溶液的制备：单一对照品溶液的配制：分别准确称取适量甘草苷、山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷、异槲皮苷于3个5mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，超声振荡、摇匀，得到浓度分别为0.209 mg/mL、0.105mg/mL、0.241mg/mL单一对照品贮备液，进样前过0.22μm微孔滤膜。
3.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于，步骤（2）中所述混合对照品溶液：分别准确称取甘草苷、山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷、异槲皮苷0.21mg、0.66mg、0.20mg于5mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，超声振荡、摇匀，即得混合对照品贮备液，进样前过0.22 μm微孔滤膜。
4.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于，步骤（3）中所述高效液相色谱分析的条件为：色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18，4.6 mm×150 mm，5 μm；流动相为0.06%醋酸-水（A），乙腈（B）；流动相流速为1.0 mL/min；柱温为30℃；进样量：2μL；检测波长为280nm；所述的流动相为0.06%醋酸-水（A），乙腈（B）。
5.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中所述的梯度洗脱步骤包括：按照体积分数计，0~4 min，95%A→87.5A；4~14 min，87.5%A→83%A；14~21 min，83%A→73%A；21~25 min，73%A→0%A。
6.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中所述的根据与对照品的相对保留时间确定特征峰，精密度考察：取S1金钗石斛花样品溶液，在同样的的色谱条件下连续进样6次，考察色谱峰相似度的一致性，记录13个主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并分别计算它们间的 RSD 值；利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，进行相似度的评价。
7.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中所述的根据与对照品的相对保留时间确定特征峰，重复性考察：取6份S1干燥金钗石斛花，按相同的方法制成供试品溶液，在同样的色谱条件下连续进样6次，计算各个主要色谱峰保留时间RSD值，考察色谱峰相似度的一致性，记录13个主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并分别计算它们间的 RSD 值；利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，进行相似度的评价。
8.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中所述的根据与对照品的相对保留时间确定特征峰，稳定性考察：取S1干燥金钗石斛花提取液分别在0、4、8、12、16、20、24小时不同时间点进行检测，同样的色谱条件下连续进样7次，考察色谱峰相似度的一致性，记录13个主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并分别计算它们间的 RSD 值；利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，进行相似度的评价。
9.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中所述将供试品溶液进行高效液相色谱分析，指纹图谱测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱峰，得到赤水金钗石斛花的HPLC指纹图谱，根据色谱图中各色谱峰与对照品的相对保留时间，确定共有峰，并选取了其中13个共有峰作为特征指纹峰，建立了赤水金钗石斛花的对照指纹图谱，和多批赤水金钗石斛花样品的指纹图谱。
10.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中所述特征峰为3个，其中峰11为甘草苷，保留时间为14.683 min；峰12为山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷，保留时间为15.646 min；峰13为异槲皮苷，保留时间为16.156min。
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