CN112684084B - 一种向天果的质量检测方法 - Google Patents
一种向天果的质量检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112684084B CN112684084B CN202011516151.4A CN202011516151A CN112684084B CN 112684084 B CN112684084 B CN 112684084B CN 202011516151 A CN202011516151 A CN 202011516151A CN 112684084 B CN112684084 B CN 112684084B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- common
- fruits
- peak
- skunk
- quality
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种向天果的质量检测方法，本发明建立了向天果的HPLC指纹图谱，运用相似度分析和聚类分析对不同批次的向天果HPLC指纹图谱进行了分析，并同时测定了向天果中指标成分的含量。本发明较全面、合理地评价了向天果的质量，为向天果的质量控制研究奠定了基础。
Description
技术领域
本发明属于药物分析及药物质量控制技术领域，具体涉及一种向天果的质量检测方法。
背景技术
向天果(sky fruit)为大叶桃花心木(S.macrophylla)的果实，主要分布在热带及亚热带地区。果实味苦、涩，具有收敛、解热等功效，种子主要可用于治疗高血糖、高血压等疾病。前期研究表明，向天果中富含柠檬苦素类成分，此类化合物不仅结构丰富，还具有抗氧化，抗肿瘤和抗病毒等生物活性。
目前向天果作为保健品在市场上流通，但其并无统一的质量标准，不同来源的向天果之间是否存在成分或品质差异是亟待解决的问题。中药指纹图谱能够体现中药质量控制的系统性和整体性，被认为是中药质量控制的有效手段。因此，本发明建立了向天果的HPLC指纹图谱，同时检测其指标性成分的含量，并结合相似度分析和聚类分析对不同批次的向天果质量进行了全面、有效的评价，为向天果的质量控制做出初步探索。
发明内容
本发明的目的在于提供一种向天果的质量检测方法，该方法为向天果的质量控制提供了较为全面、有效的快速评价方法。
本发明是通过以下技术方案实现：
一种向天果的质量检测方法，包括如下步骤：
(a)对照品溶液的制备：
精密称定3,6-O,O-diacetylswietenolide，swietenolide，wietenine，swietemahonin F，3-O-tigloyl-6-O-acetylswietenolide对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；
(b)供试品溶液的制备：
取向天果粗粉0.5g，精密称定，置于容量瓶中，精密加入10-30mL甲醇超声提取20-40min，冷却后定容，静置，取上清液过微孔滤膜，取续滤液，即得；
(c)色谱条件的确定：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min；检测波长为210nm，进样体积为20μl，梯度洗脱条件为：0-15min，45→48％A；15-35min，48→51％A；35-36min，51→55％A；36-47min，55→100％A；47-54min，100％A；54-55min，100→45％A；
(d)指纹图谱的建立：
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，得到不同批次向天果的色谱图，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004”进行分析，得到共有模式图谱，共确定13个共有峰，并对其中5个共有峰进行指认；
(e)相似度评价：比较不同批次向天果的色谱图的相似度；
(f)聚类分析：运用SPSS23.0软件对不同批次的向天果进行聚类分析，得到不同批次的向天果的聚类结果；
(g)指标成分的含量测定：采用高效液相色谱法对向天果中指标性成分swietenolide和swietwnine的含量进行测定。
作为本发明进一步优选的技术方案，步骤(d)中，所述指认的5个共有峰分别为：1号峰为swietenolide，6号峰为swietenine，8号峰为3,6-O,O-diacetylswietenolide，10号峰为3-O-tigloyl-6-O-acetylswietenolide，11号峰为swietemahonin F。
作为本发明进一步优选的技术方案，步骤(b)供试品溶液的制备为：取向天果粗粉0.5g，精密称定，置于容量瓶中，精密加入20mL甲醇超声提取30min，冷却后定容，静置，取上清液过微孔滤膜，取续滤液，即得。
本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：
本发明提供一种向天果的质量检测方法，建立了向天果的HPLC指纹图谱，运用相似度分析和聚类分析对不同批次的向天果HPLC指纹图谱进行了分析，并同时测定了向天果中两个指标成分的含量。本发明较全面、合理地评价了向天果的质量，为向天果的质量控制研究奠定了基础。
附图说明
图1为30批向天果HPLC指纹图谱共有模式图；
图2为30批向天果的聚类分析结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明具体的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。
1仪器与试剂
Waters高效液相色谱仪(美国Waters公司)，KQ3200DB型数控超声清洗器(江苏昆山超声仪器有限公司)；BP211D型电子天平(德国Sartorius)；色谱纯甲醇、乙腈(SIGMA公司)；磷酸为分析纯；蒸馏水(双蒸水)；对照品3,6-O,O-diacetylswietenolide，swietenolide，wietenine，swietemahonin F，3-O-tigloyl-6-O-acetylswietenolide(自制，纯度>95％)；
向天果样品(批号为S1～S30)由安徽中医药大学药学院方成武教授鉴定为楝科植物大叶桃花心木(S.macrophylla)的果实，产地及采购时间见表1。
表1 30批向天果样品产地及采购时间
2、方法与结果
2.1色谱方法考察
2.1.1检测波长的考察
柠檬苦素类化合物的紫外吸收大部分为末端吸收，对向天果甲醇提取液190-400nm进行全波长扫描，最大吸收集中在210nm左右，因此以210nm为测定波长。
2.1.2洗脱溶剂的考察
考察了甲醇-0.1％磷酸水溶液，甲醇-水，乙腈-0.1％磷酸水溶液，乙腈-水4种流动相的洗脱能力，比较分析相同时间出峰数目、分离度、峰面积和基线情况。甲醇-水、甲醇-0.1％磷酸水溶液作为流动相洗脱时，基线不平，洗脱时间较长，且分离度不够；乙腈-水、乙腈-0.1％磷酸水溶液作为流动相洗脱时，基线平稳，洗脱时间较短，且峰分离度良好。故综合比较选用乙腈-水作为分析流动相。
2.1.3洗脱程序的考察：
当洗脱条件(0-60min，10-100％A)，前30min出峰数目少，后30min峰数目多，且分离度不够；优化洗脱条件(0-30min，40-60％A；30-40min，60-70％A；40-45min，70-100％A；45-50min，100％A，50-51min，100-40％A)，较之前相比，前30min出峰分布均匀，但40-45min峰分离度不够，可进一步优化；最终确定洗脱条件(0-15min，45→48％A；15-35min，48→51％A；35-36min，51→55％A；36-47min，55→100％A；47-54min，100％A；54-55min，100→45％A)。
2.1.4色谱分析条件
色谱柱：KR100-5C18(250×4.6mm)，柱温：30℃；流动相：乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱；梯度洗脱条件为：0-15min，45→48％A；15-35min，48→51％A；35-36min，51→55％A；36-47min，55→100％A；47-54min，100％A；54-55min，100→45％A；流速为1mL/min；检测波长：210nm；进样量：20μL。
2.2对照品溶液的制备
分别精密称取5种柠檬苦素类化合物适量，加入适量甲醇溶解，定容，摇匀，配制成一定浓度的对照品溶液备用。
2.3提取方法考察
2.3.1提取溶剂种类的考察
精密称定S1样品0.5g，置于具塞锥形瓶中，分别加20mL甲醇、乙醇、水，超声提取30min，比较分析出峰数目、分离度、峰面积和基线情况，选择甲醇作为提取溶剂。
2.3.2提取溶剂体积的考察
精密称定S1样品0.5g，置于具塞锥形瓶中，分别加10mL、20mL、30mL甲醇，超声提取30min，比较分析出峰数目、分离度、峰面积和基线情况，选择30mL作为提取溶剂体积。
2.3.3提取时间的考察
精密称定S1样品0.5g，置于具塞锥形瓶中，加入20mL甲醇，分别超声提取20min、30min、40min，比较分析出峰数目、分离度、峰面积和基线情况，选择30min作为提取时间。
2.3.4供试品溶液的制备
精密称定各批次向天果粗粉0.5g，置于具塞锥形瓶中，加20mL甲醇超声提取30min，冷却后补重，静置，取上清液过微孔滤膜(0.22μm)，备用。
2.4方法学考察
2.4.1精密度试验
取供试品溶液(S1)，按上述色谱条件连续进样6次，所得色谱图输入至“中药色谱指纹图谱相似度评级系统2004”中进行相似度分析，结果显示相似度均在0.98以上，符合指纹图谱要求。
2.4.2稳定性试验
取同一供试品溶液(S1)，分别放置0、4、8、12、16、24后进样，所得色谱图进行相似度分析，结果显示色谱图相似度均在0.94以上，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.4.3重复性试验
取S3样品，按上述方法制备供试品溶液6份，依次进样，所得色谱图进行相似度分析，结果显示相似度均在0.93以上，说明该方法具有良好的重复性。
2.5向天果指纹图谱的建立与分析
2.5.1特征指纹图谱测定
取30批供试品溶液进样分析，对所得色谱图进行分析，得到共有模式图谱(图1)，共确定13个共有峰，并指认了其中5个共有峰，其中1号峰为swietenolide，6号峰为swietenine，8号峰为3,6-O,O-diacetylswietenolide，10号峰为3-O-tigloyl-6-O-acetylswietenolide，11号峰为swietemahonin F。
2.5.2特征指纹图谱的结果分析
经分析计算，30批样品的共有模式中，所有共有峰保留时间RSD值均小于1％；13个共有峰的峰面积RSD值在11.7％～37.0％之间，表明不同批次向天果中化学成分相差不大，但所含含量差异性较大，不同来源的向天果样品之间存在品质差异性，结果见表2，表3。
表2向天果共有峰的保留时间(min)
表3向天果共有峰的峰面积
2.5.2聚类分析
将上述分析数据输入到“SPSS 23”系统中，进行聚类分析，结果如图2。结果表明，30批向天果在阈值为10的情况下被聚为6类，其中有22批样品被聚为一类，说明国内市场上大部分的向天果来自于相似产地；但根据商家标明的产地来源相同的样品并未完全被聚为一类，说明商家标明的信息并不可靠；在阈值为5的情况下，样品被聚为11类，其中6批样品被单独归为一类，表明不同产地来源的向天果之间具有显著的差异性。
2.6指标性成分含量测定
2.6.1线性关系考察
吸取对照品溶液，逐次进样1、3、5、10、15、20μL，按“2.1.4”色谱条件测定，记录峰面积。以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，swietenolide的标准曲线为Y＝1104.1X-6.1436(R＝1，n＝6)，线性范围在0.488μg～9.79μg；swietwnine的标准曲线为Y＝1456.5X-21.864(R＝0.9999，n＝6)，线性范围在0.334μg～6.68μg。
2.6.2精密度试验
取供试品溶液(S1)，重复6次进样，记录峰面积。结果显示swietenolide峰面积的RSD为0.87％(n＝6)；swietwnine峰面积的RSD为1.23％(n＝6)，表明该方法精密度良好。
2.6.3稳定性试验
取同一供试品溶液(S1)，放置0、4、8、12、16、24h后依次进样，记录峰面积。结果显示swietenolide峰面积的RSD为1.97％(n＝6)；swietwnine的RSD为1.19％(n＝6)，表明供试品溶液中成分在室温下24h内具有良好的稳定性。
2.6.4重复性试验
取S3批次样品0.5g，平行制备6份供试品溶液进行测定。结果显示swietenolide峰面积的RSD为1.37％(n＝6)；swietwnine的RSD为0.93％(n＝6)，表明本法重复性良好。
2.6.5加样回收率试验
分别精密称定6份已知含量的样品适量，每份加入适量且相同的对照品溶液，平行制备所需供试品溶液进样，记录峰面积，计算回收率，结果见表4。
表4加样回收率试验结果(n＝6)
2.4.7样品含量测定
取上述30批次供试品溶液进行含量测定，结果见表5。
表5样品含量测定结果(mg/g)
| 批号 | swietenolide(mg/g) | swietwnine(mg/g) |
| S1 | 14.66 | 12.33 |
| S2 | 13.65 | 11.42 |
| S3 | 12.56 | 11.54 |
| S4 | 21.42 | 15.83 |
| S5 | 12.00 | 8.98 |
| S6 | 14.011 | 10.03 |
| S7 | 14.03 | 14.60 |
| S8 | 11.56 | 10.29 |
| S9 | 9.69 | 7.63 |
| S10 | 13.11 | 9.05 |
| S11 | 11.61 | 10.23 |
| S12 | 10.56 | 8.30 |
| S13 | 14.10 | 12.18 |
| S14 | 14.70 | 11.86 |
| S15 | 13.62 | 10.38 |
| S16 | 19.51 | 12.38 |
| S17 | 16.49 | 12.87 |
| S18 | 14.13 | 11.36 |
| S19 | 18.95 | 11.23 |
| S20 | 12.55 | 8.95 |
| S21 | 13.75 | 11.34 |
| S22 | 12.23 | 10.44 |
| S23 | 13.89 | 7.24 |
| S24 | 14.06 | 8.85 |
| S25 | 14.71 | 9.11 |
| S26 | 14.10 | 8.44 |
| S27 | 15.00 | 10.88 |
| S28 | 16.50 | 12.50 |
| S29 | 16.90 | 12.66 |
| S30 | 14.34 | 9.18 |
| 平均值 | 14.28 | 10.74 |
3讨论
综上，本发明对30批向天果样品建立特征指纹图谱，并确立了13个共有峰，指认出其中5个共有峰为柠檬苦素类化合物，表明柠檬苦素类成分为向天果的主要化学成分。比较共有峰保留时间和峰面积的的RSD值，显示不同来源的向天果样品的化学成分具有一致性，但含量存在一定的差异性。通过聚类分析和含量测定进一步分析，发现目前我国市场上流通的向天果存在产地信息不明，不同产地的向天果成分含量差异较大等问题。
本发明通过建立指纹图谱，运用相似度分析和聚类分析对不同批次的向天果HPLC指纹图谱进行了分析，并同时测定了向天果中两个指标成分的含量，较为全面、合理的评价了向天果药材的质量，为制定向天果的质量标准提供参考依据。
Claims (3)
1.一种向天果的质量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
（a）对照品溶液的制备：
精密称定3,6-O,O-diacetylswietenolide，swietenolide，swietenine，swietemahonin F，3-O-tigloyl-6-O-acetylswietenolide对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；
（b）供试品溶液的制备：
取向天果粗粉0.5 g，精密称定，置于容量瓶中，精密加入10-30 mL甲醇超声提取20-40min，冷却后定容，静置，取上清液过微孔滤膜，取续滤液，即得；
（c）色谱条件的确定：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B进行梯度洗脱，流速为1.0 ml/min；检测波长为210nm，进样体积为20μl，梯度洗脱条件为：0-15 min，45→48 % A；15-35 min，48→51 % A；35-36 min，51→55 % A；36-47 min，55→100 % A；47-54min，100 % A；54-55 min，100→45 % A；
（d）指纹图谱的建立：
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，得到不同批次向天果的色谱图，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004”进行分析，得到共有模式图谱，共确定13个共有峰，并对其中5个共有峰进行指认；
（e）相似度评价：比较不同批次向天果的色谱图的相似度；
（f）聚类分析：运用SPSS23.0软件对不同批次的向天果进行聚类分析，得到不同批次的向天果的聚类结果；
（g）指标成分的含量测定：采用高效液相色谱法对向天果中指标性成分swietenolide和swietwnine的含量进行测定。
2.根据权利要求1所述的一种向天果的质量检测方法，其特征在于，步骤（d）中，所述指认的5个共有峰分别为：1号峰为swietenolide，6号峰为swietenine，8号峰为3,6-O,O-diacetylswietenolide，10号峰为3-O-tigloyl-6-O-acetylswietenolide，11号峰为swietemahonin F。
3.根据权利要求1所述的一种向天果的质量检测方法，其特征在于，步骤（b）供试品溶液的制备为：取向天果粗粉0.5 g，精密称定，置于容量瓶中，精密加入20 mL甲醇超声提取30 min，冷却后定容，静置，取上清液过微孔滤膜，取续滤液，即得。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011516151.4A CN112684084B (zh) | 2020-12-21 | 2020-12-21 | 一种向天果的质量检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011516151.4A CN112684084B (zh) | 2020-12-21 | 2020-12-21 | 一种向天果的质量检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112684084A CN112684084A (zh) | 2021-04-20 |
| CN112684084B true CN112684084B (zh) | 2022-08-09 |
Family
ID=75449612
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011516151.4A Active CN112684084B (zh) | 2020-12-21 | 2020-12-21 | 一种向天果的质量检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112684084B (zh) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105699564A (zh) * | 2014-11-28 | 2016-06-22 | 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 | 草木犀药材指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱 |
| CN107941940B (zh) * | 2017-11-21 | 2020-04-24 | 成都普思生物科技股份有限公司 | 一种山萮菜药材的hplc-dad指纹图谱质量测定方法 |
| CN111499681B (zh) * | 2020-03-05 | 2021-04-27 | 广州市莱檬生物科技有限公司 | 一种柠檬苦素的提取方法 |
-
2020
- 2020-12-21 CN CN202011516151.4A patent/CN112684084B/zh active Active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Physicochemical Characterization and Antimicrobial Activity of Swietenia macrophylla King Seed Oil;Mohammed B. Suliman等;《International Conference on Natural Products》;20140331;全文 * |
| Swietenine: A potential oral hypoglycemic from Swietenia macrophylla seed;Saikat Dewanjee等;《Fitoterapia》;20190223;全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112684084A (zh) | 2021-04-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107356691B (zh) | 建曲指纹图谱的检测方法 | |
| CN107356684B (zh) | 决明子指纹图谱的检测方法 | |
| CN110850019B (zh) | 明葛舒清饮指纹图谱的检测方法 | |
| CN111487344B (zh) | 益母草颗粒指纹图谱的检测方法 | |
| CN105842353A (zh) | 银翘清热片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
| CN106442789A (zh) | 复方血脂宁提取物指纹图谱的建立及其活性成分定量分析方法 | |
| CN110133158B (zh) | 一种酒蒸黄连的hplc指纹图谱检测方法 | |
| CN105675744A (zh) | 青钱柳的指纹图谱检测方法 | |
| CN111948330B (zh) | 仁术健胃颗粒指纹图谱的检测方法 | |
| CN110806457B (zh) | 四君甘露饮指纹图谱的检测方法 | |
| CN111220719B (zh) | 一种人参药材质量的指纹图谱评价方法 | |
| CN112684084B (zh) | 一种向天果的质量检测方法 | |
| CN111624267A (zh) | 一种泽泻中16-氧代泽泻醇a的高效液相检测方法 | |
| CN111487351B (zh) | 活血止痛胶囊指纹图谱的检测方法 | |
| CN113189248B (zh) | 银花泌炎灵片的hplc指纹图谱构建和检测方法 | |
| CN110672751B (zh) | 鲜鱼腥草药材的uplc特征图谱建立方法和检测方法 | |
| CN105699581A (zh) | 草木犀药材的uplc指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱 | |
| CN114034798A (zh) | 一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法 | |
| CN107941940B (zh) | 一种山萮菜药材的hplc-dad指纹图谱质量测定方法 | |
| CN110308213B (zh) | 滋肾育胎丸指纹图谱构建方法及其在质量检测中的应用 | |
| CN112240914A (zh) | 不同外观表型金线莲中黄酮成分的检测方法 | |
| CN109001307B (zh) | 三金制剂的hplc特征图谱及其构建方法 | |
| CN114894922B (zh) | 一种绞股蓝水提物的检测及其质量控制方法 | |
| CN113219095B (zh) | 腹可安片剂指纹图谱的构建方法及其指纹图谱 | |
| CN114252521B (zh) | 中药半边莲指纹图谱的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |