CN105699581A

CN105699581A - 草木犀药材的uplc指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱

Info

Publication number: CN105699581A
Application number: CN201410706092.5A
Authority: CN
Inventors: 张丹; 冯彩丽; 徐江平
Original assignee: BEIJING STAIDSON NEW DRUG RESEARCH Co Ltd; Staidson Beijing Biopharmaceutical Co Ltd
Current assignee: BEIJING STAIDSON NEW DRUG RESEARCH Co Ltd; Staidson Beijing Biopharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2014-11-28
Filing date: 2014-11-28
Publication date: 2016-06-22
Anticipated expiration: 2034-11-28
Also published as: CN105699581B

Abstract

本发明提供一种草木犀药材的UPLC指纹图谱的构建方法以及通过该方法获得的草木犀药材的标准指纹图谱。根据本发明的草木犀药材的UPLC指纹图谱的构建方法包括制备供试样品溶液的步骤和超高效液相色谱分析步骤。根据本发明的方法简单、色谱分析条件容易实现、精密度高，而且分析结果的稳定性和重现性较好，与现有技术的其它测试分析方法相比，缩短了在线分析时间，节省了材料成本和时间成本。

Description

草木犀药材的UPLC指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，尤其是涉及草木犀药材的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。

背景技术

草木犀又写作草木樨，为豆科草木犀属(MelilotusMiller)，一年生或二年生草本植物。草木犀常见生于沙丘、山坡、草原、海边，分布于我国大部分省区，又名辟汉草、省头草、野苜蓿及铁扫把。目前在我国栽培的多为白花草木犀和黄花草木犀。黄花草木犀由于其自身的生长优势和化学成分适宜，在中国被用作很好的香料原料。草木犀可以以全草入药，民间以叶、花制成软膏，用作外用药，或煎服用于治疗浮肿、腹痛、疟疾等症。

由于草木犀的生长地域差异，所以作为中药材使用的草木犀存在质量控制不稳定、并且难以进行定性和定量分析等问题。中药指纹图谱是指中药样本经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各组分群体的特征图谱，目前已成为国内外公认的鉴别中药品种和评价中药质量的最有效手段之一。目前最新的指纹图谱测试方法之一是超高效液相色谱(UltraPerformanceLiquidChromatography，UPLC)，这是最近几年出现的一种新型液相色谱技术，采用1.7μm的小粒径色谱柱填料，不仅使柱效得以提高，而且在较宽的流速范围内柱效保持恒定，从而有利于通过提高流动相的流速而缩短分析时间，提高分析通量。相对于常规HPLC(高效液相色谱，HighPerformanceLiquidChromatography)而言，UPLC有更好的分离效率、峰容量以及灵敏度。但是，在草木犀药材分析技术领域，还仍未有用UPLC对草木犀药材进行质量控制分析以及报道其指纹图谱。

因此，本发明提供一种首次利用UPLC技术，对草木犀药材指纹图谱进行研究，为草木犀药材质量控制提供了新的技术方法。

发明内容

本发明提供一种草木犀药材的超高效液相色谱指纹图谱的构建方法，以及由此方法得到的草木犀药材标准指纹图谱及其在草木犀药材优化筛选、品质的鉴别和控制中的应用。根据本发明的构建方法解决了草木犀药材的成分分析中不能有效地反映和控制草木犀药材的整体质量的问题，弥补了现有质量控制技术的不足。

根据本发明的一个方面，提供一种草木犀药材的超高效液相色谱指纹图谱的构建方法，包括：

(1)制备草木犀药材的多个供试样品溶液及香豆素对照样品溶液；

(2)将步骤(1)所制备的供试样品溶液及对照样品溶液分别进行超高效液相色谱分析，得到超高效液相色谱图；

(3)以对照样品溶液的超高效液相色谱图作为对照，从步骤(2)所得到的供试样品溶液的超高效液相色谱图中选择共有特征峰构建草木犀的标准指纹图谱，

所述步骤(2)中超高效液相色谱分析的条件为：

采用反相填料色谱柱，用流动相乙腈-0.05～0.2体积％磷酸或醋酸水溶液进行梯度洗脱，紫外检测波长为220～277nm。

在本发明的一个优选实施方式中，所述步骤(1)制备草木犀药材的供试样品溶液及香豆素对照样品溶液的方法包括用30～70体积％的甲醇水溶液处理；优选地，所述甲醇水溶液为50体积％的甲醇水溶液。

在本发明的另一优选实施方式中，本发明中所使用的反相填料色谱柱为WatersAcquityUPLC^TMBEHC18，该色谱柱尺寸为50mm×2.1mm，填料颗粒度为1.7μm。

在本发明的另一优选实施方式中，梯度洗脱程序为：0min→1.5min→3.5～4.0min→5.0min，乙腈5～10体积％→13～22体积％→13～22体积％→5～10体积％；优选地，梯度洗脱程序为乙腈5体积％→13～15体积％→13～15体积％→5体积％；更优选地，梯度洗脱程序为0min→1.5min→4.0min→5.0min，乙腈5体积％→13体积％→13体积％→5体积％。

在本发明的另一优选实施方式中，流动相的流速为0.3～0.7mL/min，柱温在25～40℃范围内；优选地，流速为0.6～0.7mL/min，柱温为30℃。

在本发明的另一优选实施方式中，步骤(2)中超高效液相色谱分析的条件为：所述流动相为乙腈-0.1体积％磷酸水溶液，流速为0.6mL/min，波长为277nm，柱温为30℃。

根据本发明的另一个方面，提供一种草木犀药材标准指纹图谱，其通过本发明的上述草木犀药材的超高效液相色谱指纹图谱的构建方法获得的。

优选地，本发明的草木犀药材的标准指纹图谱为超高效液相色谱UPLC的指纹图谱，并且包含14个共有特征峰，以12号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：0.062(±5％)、0.080(±5％)、0.102(±5％)、0.345(±5％)、0.445(±5％)、0.669(±5％)、0.686(±5％)、0.713(±5％)、0.801(±5％)、0.866(±5％)、0.912(±5％)、1.000(±5％)、1.036(±5％)和1.101(±5％)。

其中，上述14个共有特征峰中，峰10为草木犀酸；峰12为香豆素；峰14为邻香豆酸。

优选地，本发明的草木犀药材的标准指纹图谱为超高效液相色谱UPLC的指纹图谱，在紫外检测波长220nm时得到的供试样品溶液的超高效液相色谱图中选择共有特征峰构建了UPLC标准指纹图谱，包括16个共有特征峰，以14号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：峰1：0.062(±5％)、峰2：0.080(±5％)、峰3：0.093(±5％)、峰4：0.383(±5％)、峰5：0.445(±5％)、峰6：0.607(±5％)、峰7：0.669(±5％)、峰8：0.686(±5％)、峰9：0.713(±5％)、峰10：0.747(±5％)、峰11：0.801(±5％)、峰12：0.866(±5％)、峰13：0.912(±5％)、峰14：1.000(±5％)、峰15：1.036(±5％)和峰16：1.101(±5％)。

其中，上述16个共有特征峰中，峰12为草木犀酸、峰14为香豆素、峰16为邻香豆酸。

优选地，本发明的草木犀药材的标准指纹图谱为超高效液相色谱UPLC的指纹图谱，在紫外检测波长275nm时得到的供试样品溶液的超高效液相色谱图中选择了共有特征峰构建了UPLC标准指纹图谱，包括15个共有特征峰，以13号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：峰1：0.062(±5％)、峰2：0.080(±5％)、峰3：0.337(±5％)、峰4：0.446(±5％)、峰5：0.475(±5％)、峰6：0.617(±5％)、峰7：0.679(±5％)、峰8：0.700(±5％)、峰9：0.723(±5％)、峰10：0.772(±5％)、峰11：0.813(±5％)、峰12：0.865(±5％)、峰13：1.000(±5％)、峰14：1.030(±5％)、峰15：1.087(±5％)。

其中，上述15个共有特征峰中，峰12为草木犀酸、峰13为香豆素、峰15为邻香豆酸。

根据本发明的再一个方面，提供上述草木犀药材的标准指纹图谱在草木犀药材以及含草木犀药材的制剂的检测中的应用。

根据本发明的再一个方面，提供一种检测草木犀药材的方法，其中，所述方法包括将待测草木犀药材的指纹图谱与本发明上述草木犀药材的标准指纹图谱相比较。

根据本发明的草木犀药材的超高效液相色谱指纹图谱的构建方法或者获得的标准指纹图谱与现有技术相比具有下述显著的优点：

(1)本发明首次利用UPLC技术，对草木犀药材进行指纹图谱研究，为草木犀药材质量控制提供了新的分析方法。

(2)将草木犀药材作为整体对待，通过比较其共有峰，可以找出不同药材之间的细微差异，适用于草木犀药材真伪、产地和品质的鉴别和控制。

(3)本发明供试样品制作简单，色谱条件容易实现，精密度高，而且其稳定性和重现性较好，本发明采用的检测波长出峰较多，反映的信息完全。

(4)与传统HPLC方法相比较，在不影响整体效果的前提下，大大缩短了在线分析时间，节省了材料成本和时间成本。

附图说明

图1是根据本发明实施例1获得的草木犀药材的标准UPLC指纹图谱。

图2是根据本发明实施例1构建的10批次草木犀药材的UPLC指纹图谱(S1-S10)与标准UPLC指纹图谱(R)的对比图。

图3是香豆素对照样品的UPLC指纹图谱

图4是根据本发明实施例2获得的草木犀药材的标准UPLC指纹图谱。

图5是根据本发明实施例2构建的10批次草木犀药材的UPLC指纹图谱(S1-S10)与标准UPLC指纹图谱(R)的对比图。

图6是根据本发明实施例3获得的草木犀药材的标准UPLC指纹图谱。

图7是根据本发明实施例3构建的10批次草木犀药材的UPLC指纹图谱(S1-S10)与标准UPLC指纹图谱(R)的对比图。

具体实施方式

下面，结合实施例和比较例对本发明的具体实施方式进一步进行说明，以便更清楚地描述本发明的优点和特点。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1

1.仪器和药品

使用WatersACQUITYUPLCH-Class超高效液相色谱仪。草木犀药材共10批，均购于安徽孟氏医药有限公司，香豆素对照品(EP标准)，购于ChromaDax有限公司(ChromaDax，Inc.)，其他试剂为色谱纯或分析纯级试剂。

2.供试样品溶液的制备

精密称取药材粉末2.0000g，置于具塞容器中，加入70体积％的甲醇水溶液90mL浸泡，超声震荡30分钟，放冷，过滤，收集药渣，再按前述方法重复提取一次，合并两次提取的滤液至250ml量瓶中，用甲醇-水(体积比1:1)溶液定容至刻度，用0.22μm滤膜过滤，滤液作为供试样品溶液。

3.对照样品溶液的制备

精密称取香豆素对照品约0.015g，置100mL量瓶中，加甲醇-水(体积比1:1)溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL至10mL量瓶中，加甲醇-水(体积比1:1)溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

4.超高效液相色谱分析

色谱分析填料为WatersAcquityUPLC^TMBEHC18(柱长为50mm，内径为2.1mm，填料粒径为1.7μm)，流动相为乙腈-0.05体积％磷酸水溶液；梯度洗脱，洗脱程序为：0min→1.5min→4.0min→5.0min，乙腈5体积％→13体积％→13体积％→5体积％；流速0.6ml/min；检测波长220nm；柱温30℃。在此条件下精密量取对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，得到草木犀药材的指纹图谱。

5.分析图谱

按照本发明提供的方法，对10批草木犀药材建立了UPLC标准指纹图谱(见图2)，确定了16个共有特征峰，以14号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：峰1：0.062(±5％)、峰2：0.080(±5％)、峰3：0.093(±5％)、峰4：0.383(±5％)、峰5：0.445(±5％)、峰6：0.607(±5％)、峰7：0.669(±5％)、峰8：0.686(±5％)、峰9：0.713(±5％)、峰10：0.747(±5％)、峰11：0.801(±5％)、峰12：0.866(±5％)、峰13：0.912(±5％)、峰14：1.000(±5％)、峰15：1.036(±5％)和峰16：1.101(±5％)，这些共有特征峰构成了草木犀药材的指纹特征，可作为草木犀药材的标准指纹图谱，具体参见图1。各共有峰的相对保留时间和相对峰面积计算结果如下表。

表1各共有峰相对保留时间(220nm)

表2.各共有峰相对峰面积(220nm)

表3.全草10批药材的相似度(220nm)

此外，对本实施例1的草木犀药材超高效液相色谱指纹图谱的构建方法的精密度、重现性以及所提取的供试样品溶液的稳定性进行检测，得到精密度、重现性以及稳定性都良好。

实施例2

1.使用的仪器和药品

使用WatersACQUITYUPLCH-Class超高效液相色谱仪。草木犀药材共10批次，均购于安徽孟氏医药有限公司，香豆素对照品(EP标准)，购于ChromaDax有限公司(ChromaDax，Inc.)，其他试剂均为色谱纯或分析纯级试剂。

2.供试样品溶液的制备

精密称取草木犀药材粉末2.0000g，置于具塞容器中，加入50％的甲醇水溶液90mL浸泡，超声震荡30分钟，放冷，过滤，然后收集药渣，再按前述方法重复提取一次，合并两次提取的滤液至250mL量瓶中，用甲醇-水(体积比1:1)溶液定容至刻度，用0.22μm滤膜过滤，滤液作为供试样品溶液。

3.对照品溶液的制备

精密称取香豆素对照样品约0.0150g，置于100mL量瓶中，加甲醇-水(体积比1:1)溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL至10mL量瓶中，加甲醇-水(体积比1:1)溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.22μm滤膜过滤，滤液作为对照样品溶液。

4.超高效液相色谱分析

色谱分析填料为WatersAcquityUPLCTMBEHC18(柱长为50mm，内径为2.1mm，填料粒径为1.7μm)，流动相为乙腈-0.1体积％磷酸水溶液；梯度洗脱，洗脱程序为：0min→1.5min→4.0min→5.0min，乙腈5体积％→13体积％→13体积％→5体积％；流速为0.6mL/min；检测波长277nm；柱温30℃。在此条件下精密量取对照品样溶液和各供试样品溶液各2μl，分别注入液相色谱仪，得到对照样品(香豆素)和供试样品(草木犀药材)的指纹图谱，具体如图3和图5所示。

5.分析图谱

按照本发明提供的方法，对10批草木犀药材测定了UPLC指纹图谱(见图5)，确定了14个共有特征峰，以12号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：峰1：0.062(±5％)、峰2：0.080(±5％)、峰3：0.102(±5％)、峰4：0.345(±5％)、峰5：0.445(±5％)、峰6：0.669(±5％)、峰7：0.686(±5％)、峰8：0.713(±5％)、峰9：0.801(±5％)、峰10：0.866(±5％)、峰11：0.912(±5％)、峰12：1.000(±5％)、峰13：1.036(±5％)和峰14：1.101(±5％)，这些共有特征峰构成了草木犀药材的指纹特征，可作为草木犀药材的标准指纹图谱，具体参见图4。各共有峰的相对保留时间和相对峰面积计算结果如表4和表5所示。对10批草木犀药材及对照品的指纹图谱的相似度进行分析，结果示于表6。

表4.各共有峰的相对保留时间

表5.各共有峰的相对峰面积

表6.10批草木犀药材及对照品的指纹图谱的相似度

6.对本发明的草木犀药材超高效液相色谱指纹图谱的构建方法的精密度、重现性以及所提取的供试品溶液的稳定性进行检测

(1)精密度试验

按照上述方法制备一份供试样品溶液，连续进样6次，以12号峰为参照峰，计算出1～14号共有指纹峰的保留时间的RSD值均小于3％，同时用相似度评价软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明仪器稳定，精密度良好。

表7.精密度试验结果

(2)重现性试验

取同一批药材，分别精密称取6份，照上述方法制备供试品溶液，分别进样，计算出1～14号共有指纹峰的保留时间的RSD值均小于3％，同时用相似度评价软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明方法重现性良好。

表8.重现性试验结果

(3)稳定性试验

取重现性试验中同一份供试品溶液，分别在0、2、4、8、12小时进样，计算出1～14号共有指纹峰的相对保留时间的RSD值均小于3％，同时用相似度评价软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明供试品溶液在12小时内稳定。

表9.稳定性试验结果

实施例3

1.仪器和药品

2.供试样品溶液的制备

精密称取药材粉末2.0000g，置于具塞容器中，加入30体积％的甲醇水溶液90mL浸泡，超声震荡30分钟，放冷，过滤，收集药渣，再按前述方法重复提取一次，合并两次提取的滤液至250ml量瓶中，用甲醇-水(体积比1:1)溶液定容至刻度，用0.22μm滤膜过滤，滤液作为供试样品溶液。

3.对照样品溶液的制备

同实施例2对照样品溶液的制备方法。

4.超高效液相色谱分析

色谱分析填料为WatersAcquityUPLC^TMBEHC18(柱长为50mm，内径为2.1mm，填料粒径为1.7μm)，流动相为乙腈-0.2体积％醋酸水溶液；梯度洗脱，洗脱程序为：0min→1.5min→3.5min→5.0min，乙腈5体积％→15体积％→15体积％→5体积％；流速0.7ml/min；检测波长275nm；柱温30℃。在此条件下精密量取对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，得到草木犀药材的指纹图谱。

5.分析图谱

按照本发明提供的方法，对10批草木犀药材建立了UPLC标准指纹图谱(见图5)，确定了15个共有特征峰，以13号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：峰1：0.062(±5％)、峰2：0.080(±5％)、峰3：0.337(±5％)、峰4：0.446(±5％)、峰5：0.475(±5％)、峰6：0.617(±5％)、峰7：0.679(±5％)、峰8：0.700(±5％)、峰9：0.723(±5％)、峰10：0.772(±5％)、峰11：0.813(±5％)、峰12：0.865(±5％)、峰13：1.000(±5％)、峰14：1.030(±5％)、峰15：1.087(±5％)，这些共有特征峰构成了草木犀药材的指纹特征，可作为草木犀药材的标准指纹图谱，具体参见图6。各共有峰的相对保留时间和相对峰面积计算结果如下表。

表10.各共有峰相对保留时间(275nm)

表11.各共有峰相对峰面积(275nm)

表12.全草10批药材的相似度(275nm)

此外，对本实施例3的草木犀药材超高效液相色谱指纹图谱的构建方法的精密度、重现性以及所提取的供试样品溶液的稳定性进行检测，得到精密度、重现性以及稳定性都良好。

以上所述实施例表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变动和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种草木犀药材的超高效液相色谱指纹图谱的构建方法，包括：

(2)将步骤(1)所制备的供试样品溶液及对照样品溶液分别进行超高效液相色谱分析，得到超高效液相色谱图；以及

所述步骤(2)中超高效液相色谱分析的条件为：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中制备草木犀药材的供试样品溶液及香豆素对照样品溶液的方法包括用30～70体积％的甲醇水溶液处理。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述反相填料色谱柱为WatersAcquityUPLC^TMBEHC18，其中色谱柱尺寸为50mm×2.1mm，填料颗粒度为1.7μm。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：0min→1.5min→3.5～4.0min→5.0min，乙腈5～10体积％→13～22体积％→13～22体积％→5～10体积％；优选地，所述梯度洗脱程序乙腈5体积％→13～15体积％→13～15体积％→5体积％。

5.根据权利要求1～3中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：0min→1.5min→4.0min→5.0min，乙腈5体积％→13体积％→13体积％→5体积％。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中超高效液相色谱分析的条件还包括：所述流动相的流速为0.3～0.7mL/min，柱温在25～40℃范围内；优选地，所述流动性的流速为0.6～0.7mL/min。

7.根据权利要求1～6任一项所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中超高效液相色谱分析的条件为：所述流动相为乙腈-0.1体积％磷酸水溶液，流速为0.6mL/min，波长为277nm，柱温为30℃。

8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，从步骤(2)在紫外检测波长277nm时得到的供试样品溶液的超高效液相色谱图中选择共有特征峰构建了UPLC标准指纹图谱，包含14个共有特征峰，以12号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：峰1：0.062(±5％)、峰2：0.080(±5％)、峰3：0.102(±5％)、峰4：0.345(±5％)、峰5：0.445(±5％)、峰6：0.669(±5％)、峰7：0.686(±5％)、峰8：0.713(±5％)、峰9：0.801(±5％)、峰10：0.866(±5％)、峰11：0.912(±5％)、峰12：1.000(±5％)、峰13：1.036(±5％)和峰14：1.101(±5％)。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述14个共有特征峰中，峰10为草木犀酸；峰12为香豆素；峰14为邻香豆酸。

10.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，从步骤(2)在紫外检测波长220nm时得到的供试样品溶液的超高效液相色谱图中选择共有特征峰构建了UPLC标准指纹图谱，包括16个共有特征峰，以14号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：峰1：0.062(±5％)、峰2：0.080(±5％)、峰3：0.093(±5％)、峰4：0.383(±5％)、峰5：0.445(±5％)、峰6：0.607(±5％)、峰7：0.669(±5％)、峰8：0.686(±5％)、峰9：0.713(±5％)、峰10：0.747(±5％)、峰11：0.801(±5％)、峰12：0.866(±5％)、峰13：0.912(±5％)、峰14：1.000(±5％)、峰15：1.036(±5％)和峰16：1.101(±5％)。

11.根据权利要求10所述的构建方法，其特征在于，16个共有特征峰中，峰12为草木犀酸、峰14为香豆素、峰16为邻香豆酸。

12.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，从步骤(2)在紫外检测波长275nm时得到的供试样品溶液的超高效液相色谱图中选择了共有特征峰构建了UPLC标准指纹图谱，包括15个共有特征峰，以13号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：峰1：0.062(±5％)、峰2：0.080(±5％)、峰3：0.337(±5％)、峰4：0.446(±5％)、峰5：0.475(±5％)、峰6：0.617(±5％)、峰7：0.679(±5％)、峰8：0.700(±5％)、峰9：0.723(±5％)、峰10：0.772(±5％)、峰11：0.813(±5％)、峰12：0.865(±5％)、峰13：1.000(±5％)、峰14：1.030(±5％)、峰15：1.087(±5％)。

13.根据权利要求12所述的构建方法，其特征在于，所述15个共有特征峰中，峰12为草木犀酸、峰13为香豆素、峰15为邻香豆酸。

14.根据权利要求1～13中任一项所述的构建方法，其特征在于，制备草木犀药材的供试样品溶液的方法包括：精密称取草木犀药材粉末，甲醇水溶液浸泡，并且超声震荡提取，收集药渣重复上述步骤一次，过滤备用；制备香豆素对照样品溶液的方法包括：精密称取香豆素对照样品，甲醇水溶液溶解后，定容过滤备用。

15.一种草木犀药材的标准指纹图谱，其通过权利要求1～14中任一项所述的草木犀药材的超高效液相色谱指纹图谱的构建方法获得。

16.一种草木犀药材的标准指纹图谱，其为超高效液相色谱UPLC的指纹图谱，并且包含14个共有特征峰，以12号峰香豆素为参照峰，其相对保留时间分别为：0.062(±5％)、0.080(±5％)、0.102(±5％)、0.345(±5％)、0.445(±5％)、0.669(±5％)、0.686(±5％)、0.713(±5％)、0.801(±5％)、0.866(±5％)、0.912(±5％)、1.000(±5％)、1.036(±5％)和1.101(±5％)。

17.根据权利要求15或16所述的草木犀药材的标准指纹图谱在草木犀药材以及含草木犀药材的制剂的检测中的应用。

18.根据权利要求16所述的应用，其特征在于，所述应用包括应用于草木犀药材优化筛选、品质的鉴别和控制。

19.一种检测草木犀药材的方法，其特征在于，所述方法包括将待测草木犀药材的指纹图谱与权利要求15或16所述的草木犀药材的标准指纹图谱相比较。