CN104655748B - 一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用 - Google Patents

一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104655748B
CN104655748B CN201510043238.7A CN201510043238A CN104655748B CN 104655748 B CN104655748 B CN 104655748B CN 201510043238 A CN201510043238 A CN 201510043238A CN 104655748 B CN104655748 B CN 104655748B
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
mobile phase
erigeron breviscapus
print
ammonium acetate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510043238.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104655748A (zh
Inventor
张洪
周敏
刘子兰
武正才
黄春球
谢忠浪
马海燕
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
YUNNAN PLANT PHARMACEUTICAL INDUSTRY Co Ltd
Original Assignee
YUNNAN PLANT PHARMACEUTICAL INDUSTRY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by YUNNAN PLANT PHARMACEUTICAL INDUSTRY Co Ltd filed Critical YUNNAN PLANT PHARMACEUTICAL INDUSTRY Co Ltd
Priority to CN201510043238.7A priority Critical patent/CN104655748B/zh
Publication of CN104655748A publication Critical patent/CN104655748A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104655748B publication Critical patent/CN104655748B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明提供了一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用，采用高效液相色谱(HPLC)建立其指纹图谱，并用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统的相关软件(版本2004)”建立灯盏花颗粒指纹图谱，并对不同批次灯盏花颗粒的指纹图谱相似度进行分析比较。可全面地对灯盏花颗粒质量进行评价，保证产品质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性。

Description

一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用
技术领域
本发明属于中药质量控制技术领域，尤其涉及一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用。
背景技术
灯盏花为菊科植物短葶飞蓬[ErigeronBreviscapul(Vent.)Hand-Mass.]的干燥全草，又名灯盏细辛，是云南道地的民族药材，占全国的95％。全草具有散寒解表；祛风除湿；活络止痛；消积的功效，临床上多用于治疗脑血栓、脑栓塞、中风等脑血管意外所致的瘫痪症、心绞痛等。灯盏花主要成分为灯盏花乙素,此外还含有黄酮、吡喃酮、倍半萜、咖啡酸酯、酚酸类化合物等多种化学成分。
灯盏花颗粒现行标准以总黄酮和灯盏花乙素的含量作为评价质量的指标。然而，灯盏花总黄酮紫外分光光度法检测精度差，不能反映成分的比例和灯盏花乙素的含量并不能反映灯盏花颗粒的整体质量。近年来，兴起的指纹图谱质量控制技术通过全面反映中药所含内在化学成分的种类与数量，能有效的反映中药质量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用，旨在全面地对灯盏花颗粒质量进行评价，保证产品质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性。
本发明是这样实现的，一种灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，具体包括如下步骤：
(1)对照品溶液的制备：精密称取灯盏花乙素、灯盏花甲素、野黄芩素对照品，以甲醇、乙醇或碱水为溶剂配成对照品溶液；
(2)样品溶液的制备：精密称取灯盏花颗粒，精密加入甲醇水溶液，超声振荡，滤过，作为样品溶液；
(3)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-醋酸铵水溶液组成梯度洗脱溶液。
(4)测定：精密吸取步骤(1)中的对照品溶液和步骤(2)中的样品溶液分别注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。
优选的，步骤(2)具体包括：取灯盏花颗粒适量研细，精密称取700mg，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入75％的甲醇溶液25ml，超声振荡40min,放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的滤膜过滤，作为样品溶液。
优选的，步骤(3)中，所述流动相为乙腈-0.1％～2％醋酸铵溶液用磷酸调PH＝2～7组成的梯度洗脱液。
优选的，步骤(3)中，所述色谱条件柱柱温为10～50℃。
优选的，步骤(3)中，所述色谱条件紫外检测波长为210～380nm。
优选的，步骤(3)中，所述梯度洗脱包括以下具体步骤：
0分钟时，流动相A为13％的乙腈溶液、流动相D为87％的0.1％的醋酸铵溶液；
15分钟时，流动相A为15％的乙腈溶液、流动相D为85％的0.1％的醋酸铵溶液；
23分钟时，流动相A为17％的乙腈溶液、流动相D为83％的0.1％的醋酸铵溶液；
24分钟时，流动相A为17％的乙腈溶液、流动相D为83％的0.1％的醋酸铵溶液；
48分钟时，流动相A为18％的乙腈溶液、流动相D为82％的0.1％的醋酸铵溶液；
50分钟时，流动相A为20％的乙腈溶液、流动相D为80％的0.1％的醋酸铵溶液；
65分钟时，流动相A为20％的乙腈溶液、流动相D为80％的0.1％的醋酸铵溶液。
本发明进一步公开了由上述灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法得到的灯盏花颗粒指纹图谱。
本发明进一步公开了上述灯盏花颗粒指纹图谱在灯盏花颗粒质量控制方面的应用。
本发明克服现有技术的不足，提供一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用，采用高效液相色谱(HPLC)建立其指纹图谱，并用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统的相关软件(版本2004)”建立灯盏花颗粒指纹图谱，并对不同批次灯盏花颗粒的指纹图谱相似度进行分析比较。可全面地对灯盏花颗粒质量进行评价，保证产品质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性。
附图说明
图1是本发明实施例二中灯盏花乙素对照品色谱峰图；
图2是本发明实施例二中灯盏花甲素对照品色谱图；
图3是本发明实施例二中野黄芩素对照品色谱峰图；
图4是本发明实施例二中灯盏花颗粒指纹图谱；
图5是本发明实施例四中8批灯盏花颗粒指纹图谱。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图以及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例一、灯盏花颗粒指纹图谱方法的建立
灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，具体包括如下步骤：
(1)对照品溶液的制备
精密称取灯盏花乙素、灯盏花甲素、野黄芩素对照品，以甲醇、水为溶剂配成对照溶液；
(2)样品溶液的制备
取灯盏花颗粒适量，研细，精密称取700mg，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入75％的甲醇溶液25ml，超声振荡40min,放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的滤膜过滤，作为样品溶液。
(3)色谱条件
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-醋酸铵溶液组成梯度洗脱溶液，紫外检测波长为335nm，时间60min；其中，所述流动相为乙腈-0.1％醋酸铵溶液用磷酸调PH＝3组成的梯度洗脱液，柱温：30℃。梯度洗脱包括以下具体步骤：
0分钟时，流动相A为13％的乙腈溶液、流动相D为87％的0.1％的醋酸铵溶液；
15分钟时，流动相A为15％的乙腈溶液、流动相D为85％的0.1％的醋酸铵溶液；
23分钟时，流动相A为17％的乙腈溶液、流动相D为83％的0.1％的醋酸铵溶液；
24分钟时，流动相A为17％的乙腈溶液、流动相D为83％的0.1％的醋酸铵溶液；
48分钟时，流动相A为18％的乙腈溶液、流动相D为82％的0.1％的醋酸铵溶液；
50分钟时，流动相A为20％的乙腈溶液、流动相D为80％的0.1％的醋酸铵溶液；
65分钟时，流动相A为20％的乙腈溶液、流动相D为80％的0.1％的醋酸铵溶液。
(4)测定
精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。
实施例二、灯盏花颗粒共有峰的确定
取对照品灯盏花乙素、灯盏花甲素、野黄芩素按实施例一条件进行图谱测定，取灯盏花颗粒按实施例一条件做灯盏花颗粒作图谱测定，在灯盏花颗粒的指纹图谱中确定12个峰作为特征峰组成(见图4)。通过对照品图谱测定，根据对照品保留时间，确定了灯盏花颗粒中5号峰为灯盏花乙素(图1)，10号峰为灯盏花甲素(图2)，12号峰为野黄芩素(图3)。选取分离度好，峰形较为稳定的灯盏花乙素5号峰为参照峰。
实施例三、灯盏花药颗粒精密度测定
取4批灯盏花颗粒供试品溶液，按实施例一色谱条件连续进样6次，每次5μl，记录所得到的色谱指纹图谱，灯盏花颗粒共有色谱峰峰面积见表1。考察共有峰的相对保留时间，以灯盏花乙素色谱峰为参照，计算大于总峰面积10％的共有峰的相对峰面积RSD值，计算结果见表1、表2。
表1 灯盏花颗粒精密度试验各峰峰面积表
表2 灯盏花颗粒精密度试验RSD值表
结果表明，各批灯盏花颗粒共有峰相对峰面积RSD<3％，表明该方法精密度良好。
实施例四、8批灯盏花颗粒进行指纹图谱相似度测定
取8批灯盏花颗粒按实施例一条件进行检测，得到8批样品的HPLC图谱。通过8批HPLC图谱的比较，进行相似度评价并计算相似度，将8批灯盏花颗粒的色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统的相关软件(版本2004)”，选5号峰(灯盏花乙素)作为参照，采用中位数法自动匹配自动生成对照谱图5，得灯盏花颗粒相似度。计算结果如下表1所示：
表1 8批灯盏花颗粒相似度表
进行分析可发现，8批灯盏花颗粒样品和标准指纹图谱的相似度高于90％，表明8批灯盏花颗粒样品相似性良好。
相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：本发明建立灯盏花颗粒指纹图谱，并对不同批次灯盏花颗粒的指纹图谱相似度进行分析比较。可全面地对灯盏花颗粒质量进行评价，保证产品质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，具体包括如下步骤：
(1)对照品溶液的制备：精密称取灯盏花乙素、灯盏花甲素、野黄芩素对照品，以甲醇、乙醇或碱水为溶剂配成对照品溶液；
(2)样品溶液的制备：精密称取灯盏花颗粒，精密加入甲醇水溶液，超声振荡，滤过，作为样品溶液；
(3)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-醋酸铵水溶液组成梯度洗脱溶液，所述梯度洗脱包括以下具体步骤：
0分钟时，流动相A为13％的乙腈溶液、流动相D为87％的0.1％的醋酸铵溶液；
15分钟时，流动相A为15％的乙腈溶液、流动相D为85％的0.1％的醋酸铵溶液；
23分钟时，流动相A为17％的乙腈溶液、流动相D为83％的0.1％的醋酸铵溶液；
24分钟时，流动相A为17％的乙腈溶液、流动相D为83％的0.1％的醋酸铵溶液；
48分钟时，流动相A为18％的乙腈溶液、流动相D为82％的0.1％的醋酸铵溶液；
50分钟时，流动相A为20％的乙腈溶液、流动相D为80％的0.1％的醋酸铵溶液；
65分钟时，流动相A为20％的乙腈溶液、流动相D为80％的0.1％的醋酸铵溶液；
(4)测定：精密吸取步骤(1)中的对照品溶液和步骤(2)中的样品溶液分别注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。
2.如权利要求1所述的灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(2)具体包括：取灯盏花颗粒适量研细，精密称取700mg，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入75％的甲醇溶液25ml，超声振荡40min，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的滤膜过滤，作为样品溶液。
3.如权利要求1所述的灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述色谱条件柱温为10-50℃。
4.如权利要求1所述的灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述色谱条件紫外检测波长为210-380nm。
5.如权利要求4所述的灯盏花颗粒指纹图谱在灯盏花颗粒质量控制方面的应用。
CN201510043238.7A 2015-01-28 2015-01-28 一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用 Active CN104655748B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510043238.7A CN104655748B (zh) 2015-01-28 2015-01-28 一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510043238.7A CN104655748B (zh) 2015-01-28 2015-01-28 一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104655748A CN104655748A (zh) 2015-05-27
CN104655748B true CN104655748B (zh) 2017-09-19

Family

ID=53247126

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510043238.7A Active CN104655748B (zh) 2015-01-28 2015-01-28 一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104655748B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104914206B (zh) * 2015-06-24 2017-05-31 昆药集团股份有限公司 一种灯盏花乙素原料及其制剂的检测方法
CN107782835B (zh) * 2017-12-08 2019-10-29 云南农业大学 一种高效液相检测灯盏花成分的方法
CN115372510B (zh) * 2022-08-16 2024-03-15 云南植物药业有限公司 一种竹红菌指纹图谱及其建立方法与应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU395768A1 (ru) * 1971-04-19 1973-08-28 Л. А. Салей, Д. П. Попа , А. И. Рейнбольд Ордена Трудового Красного Знамени институт химии Молдавской ССР Способ качественпого определения скутеллареина или его метильных производных в смеси флавоноидов
CN102038728A (zh) * 2009-10-26 2011-05-04 贵阳医学院 灯盏细辛药材的质量控制方法
CN102650626A (zh) * 2011-10-17 2012-08-29 云南施普瑞生物工程有限公司 灯盏细辛酚原料药和制剂标准指纹图谱、建立方法及应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU395768A1 (ru) * 1971-04-19 1973-08-28 Л. А. Салей, Д. П. Попа , А. И. Рейнбольд Ордена Трудового Красного Знамени институт химии Молдавской ССР Способ качественпого определения скутеллареина или его метильных производных в смеси флавоноидов
CN102038728A (zh) * 2009-10-26 2011-05-04 贵阳医学院 灯盏细辛药材的质量控制方法
CN102650626A (zh) * 2011-10-17 2012-08-29 云南施普瑞生物工程有限公司 灯盏细辛酚原料药和制剂标准指纹图谱、建立方法及应用

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bo-Yan Li 等.Quality evaluation of &#64257 *
Chun-Zhao Liu 等.Plant regeneration of Erigeron breviscapus (vant.) Hand. Mazz.and its chromatographic &#64257 *
ngerprint analysis for quality control.《Plant Cell Rep》.2008,第27卷(第1期),第39-45页. *
ngerprints of herbal medicine with chromatographic data.《Analytica Chimica Acta》.2004,第514卷(第1期),第69-77页. *
不同产地灯盏花成分指纹图谱研究;江冬英 等;《亚太传统医药》;20130831;第9卷(第8期);第54-56页 *
灯盏花提取物HPLC指纹图谱研究;孙云峰 等;《辽宁中医药大学学报》;20110131;第13卷(第1期);第188-189页 *
灯盏花素分散片及灯盏花素原料的HPLC指纹图谱研究;王黎明 等;《中国实验方剂学杂志》;20120531;第18卷(第10期);第78-80页的2和3 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104655748A (zh) 2015-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102138985B (zh) 一种白芍制剂的质量检测方法
CN102091118B (zh) 大花红景天药材的检测方法
CN104237440B (zh) 独一味的hplc检测方法及指纹图谱检测技术
CN110031570A (zh) 抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法
CN109490437B (zh) 白芍的指纹图谱检测方法
CN108426963B (zh) 一种醋香附hplc指纹图谱的构建方法
CN111487344B (zh) 益母草颗粒指纹图谱的检测方法
CN104655748B (zh) 一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用
CN101966223A (zh) 一种复方扶芳藤制剂的指纹图谱检测方法
CN110927311B (zh) 一种罗布麻叶药材uplc特征图谱的构建方法及其黄酮类成分含量测定方法
CN107064322A (zh) 同时测定地榆或地榆类制剂中没食子酸和地榆皂苷i含量的hplc波长切换法
CN101028460B (zh) 一种中药制剂金嗓清音丸的质量检测方法
CN102441057B (zh) 一种养血清脑颗粒的hplc指纹图谱检测方法
CN103454374B (zh) 骨康药物的检测方法
CN103575821A (zh) 一种糖敏灵制剂中14种化学成分的检测方法
CN108490083A (zh) 苏黄止咳胶囊的质量检测方法
CN102707006B (zh) 穿破石配方颗粒的质量检测方法
CN109709222B (zh) 一种感冒灵和复方感冒灵的成分检测方法
CN103344738A (zh) 九味镇心颗粒的检测方法
CN103969356B (zh) 一种丹参药材的指纹图谱的鉴别方法
CN103969353B (zh) 一种大黄丹参提取物的指纹图谱的鉴别方法
CN104849384A (zh) 建立健肝乐制剂指纹图谱的方法及其应用
CN110118841B (zh) 一种肝胆双清口服液的hplc特征图谱的构建方法
CN103616344A (zh) 一种藏药材塞北紫堇的检测方法
CN110274976B (zh) 一种紫花杜鹃药材hplc指纹图谱构建方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant