CN111551658B

CN111551658B - 水体中抗组胺类药物的快速检测分析方法

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Publication number: CN111551658B
Application number: CN202010385171.6A
Authority: CN
Inventors: 张少斌; 姚萃; 周伟; 杨晓; 张俊云
Original assignee: University of Shanghai for Science and Technology
Current assignee: University of Shanghai for Science and Technology
Priority date: 2020-05-09
Filing date: 2020-05-09
Publication date: 2022-12-23
Anticipated expiration: 2040-05-09
Also published as: CN111551658A

Abstract

本发明公开了一种水体中抗组胺类药物的快速检测分析方法，能用于治疗过敏性疾病药物的检测，利用固相萃取小柱结合高效液相色谱—质谱方法，能够高效、快速的同时检测水体中6种抗组胺类药物，包括西咪替丁、苯海拉明、西替利嗪、非索非那定、氯苯那敏、雷尼替丁。该方法包括以下步骤：先将水样过滤，并加入内标物；再使用固相萃取小柱提取、净化样品中的6种他汀类物质；再通过高效液相色谱—质谱仪检测水样中目标物的含量。本发明对水样的处理步骤简单，操作方便，稳定性好，能够快速得到适于液质联用仪检测的样品；样品预处理成本低，利用实验室常见的耗材就能完成，检测速度快，自动化程度高，响应灵敏，适于推广应用。

Description

水体中抗组胺类药物的快速检测分析方法

技术领域

本发明涉及一种用于治疗过敏性疾病药物的检测方法，特别是涉及一种抗组胺类药物的检测分析方法，应用于水体中有机污染物痕量检测技术领域。

背景技术

随着现代医学的进步和发展，每一年在世界范围内由于预防、治疗人类和动物疾病而产生和消耗大量的药物。这些药物会通过多种途径进入自然水体和水域。最常见的方式是制药厂附近的工业污水排放和人类及动物机体代谢而导致的生活污水排放。经过先关文献调研，目前已经检测到污水和环境中存在着一定浓度的药物及其代谢产物，虽然其浓度水平比规定的人类及动物的毒性风险浓度要低几个数量级，但它们对环境的长期影响仍不容忽视。

抗组胺药作为常见的一大类药物，具体作用是拮抗组胺对人体的生物效应，进而避免组胺引起的毛细血管扩张及通透性增加、平滑肌痉挛、分泌活动增强而导致的局部充血、水肿、分泌物增多、支气管和消化道平滑肌收缩等临床症状。抗组胺药由于制作容易，价格便宜，给药方便，且对多种变态反应病有效，所以临床用途广泛。

抗组胺药会通过各种途径不断释放进入水体，由于去除效率差，即使是饮用水处理厂处理后的水中也会有他汀类药物的存在，将对人和生物有不利影响。由于水样成分复杂，含有有机和无机污染物质，这些物质的存在对准确快速的检测干扰较大，对样品的净化富集水平要求较高。目前针对水体样品的预处理方法主要是液液萃取、玻璃棒萃取法，存在耗费较多的提取溶剂，实验所需时间较长，步骤复杂等问题。这成为亟待了解决的技术问题。

发明内容

为了解决现有技术问题，本发明的目的在于克服已有技术存在的不足，提供一种水体中抗组胺类药物的快速检测分析方法，能对环境水体进行预处理，以改善现有处理方法的过程复杂，且成本较高的技术问题。同时，本发明采用抗组胺类药物的高效液相色谱—质谱的检测方法，该检测方法能够同时检测6种他汀类药物物质，包括西咪替丁、苯海拉明、西替利嗪、非索非那定、氯苯那敏、雷尼替丁，检测过程快速、高效、低成本、高度自动化且便于产业化应用。

为达到上述发明创造目的，本发明采用如下技术方案：

一种水体中抗组胺类药物的快速检测分析方法，包括如下步骤：

a.样品的预处理：

在水体样本中加入内标物西替利嗪-d8和苯海拉明-d3混匀；

b.使用固相萃取柱进行富集净化：

过柱的具体流程为：首先将固相萃取柱用不超过6mL的超纯水或甲醇进行活化，其次将过滤后的200mL水样以2ml/min的速度通过色谱柱，随后用不超过5mL超纯水以1～3mL/min的流速淋洗，然后在0.6bar的气压下干燥至少30min，最后用不超过6ml甲醇洗脱；在40℃的氮气氛围中吹至近干后，用1mL甲醇定容，随后转移到高效液相色谱瓶中用于检测；

c.高效液相色谱—质谱联用仪测定样品中目标物的含量：

建立目标污染物的标准曲线，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标；采用内标法，在高效液相色谱—质谱联用仪上定量检测水样中提取到的目标物的浓度。

作为本发明优选的技术方案，在所述步骤a中，将样品粗滤至少三次，细滤至少三次；每250mL的水体样本中添加内标物的总浓度为20～100ppb。

作为本发明优选的技术方案，在所述步骤b中，在进行氮气吹干的过程为45～60min。

作为本发明优选的技术方案，在所述步骤c中，高效液相色谱—质谱仪的检测条件为：

柱温为35℃，进样体积为3μL，流速为0.3mL/min；

流动相采用甲酸铵-甲酸溶液(A)和甲酸的乙腈溶液(B)，其中甲酸铵-甲酸溶液(A)中的甲酸铵浓度为0.1mol/L，甲酸铵-甲酸溶液(A)的pH为3.5，甲酸的乙腈溶液(B)中甲酸浓度为0.1mol/L；所述甲酸铵为HPLC级；梯度(wt.％A)如下：0min，95％；1min，95％；3min，80％；5min，80％；5.01min，65％；9min，55％；9.01min，0％；11min,0％；11.01min，95％；12min，95％；

干燥气体流量：8L/min，干燥气体温度：300℃，鞘气体温度：350℃，鞘层气体流量：11L/min，雾化器压力：60psi，喷嘴电压(-)：1500V，喷嘴电压(+)：1500V，毛细管电压(-)：4500。

作为本发明优选的技术方案，在所述步骤c中，对水体样本中西咪替丁、苯海拉明、西替利嗪、非索非那定、氯苯那敏、雷尼替丁进行浓度检测。

本发明与现有技术相比较，具有如下显而易见的突出实质性特点和显著优点：

1.本发明建立了滤膜过滤与固相萃取串联的前处理方法，再使用固相萃取小柱串联高效液相色谱质谱方法，在一级质谱和二级质谱的模式下分别进行扫描，具有的稳定性高、重复性好、结果准确的优势；

2.本发明前处理方法简单，操作易行，并且所选用的仪器测量的分辨率好，准确性高，多级扫描后增强该方法的灵敏度和可信度，数据分析与处理的结果呈现简单明了，定性分析综合全面，可以实现全面筛选非目标性的污染物这一功能；

3.本发明方法日内精密度和日间精密度均满足要求，相对标准偏差(RSDs)分别小于9.8％。方法精密度较好，重复性高，结果准确灵敏、可靠，适用范围广。

附图说明

图1是本发明实施例二方法检测的六种抗组胺药的色谱图。

具体实施方式

以下结合具体的实施例子对上述方案做进一步说明，本发明的优选实施例详述如下：

实施例一：

在本实施例中，一种水体中抗组胺类药物的快速检测分析方法，加标回收率实验，采用内标法检测自然水体中抗组胺药的回收率，包括如下步骤：

a.样品的预处理：

将水体样本粗滤三次，细滤三次；设立三组平行样，每组水样取250ml，在每组水样中添加浓度为20ppb的西替利嗪-d8和苯海拉明-d3溶液总计1mL，混合混匀；

b.使用固相萃取柱进行富集净化：

过柱的具体流程为：首先将固相萃取柱用5mL的甲醇进行活化，其次将过滤后的200mL水样以2ml/min的速度通过色谱柱，随后用5mL超纯水以3mL/min的流速淋洗，然后在0.6bar的气压下干燥30min，最后用3ml甲醇洗脱；在40℃的氮气氛围中吹至近干后，用1mL甲醇定容，随后转移到高效液相色谱瓶中用于检测；

c.高效液相色谱—质谱联用仪测定样品中目标物的含量：

高效液相色谱—质谱仪的检测条件为：

柱温为35℃，进样体积为3μL，流速为0.3mL/min；

实验测试分析：

在本实施例中，采用加标回收率计算。加标回收率的计算公式为：RE％＝(C₂V₂-C₁V₁)/C₀V₀其中：RE：加标回收率，％；C₀：混合标准液的浓度，ng/mL；V₀：混合标准液的体积，mL；C₁：空白样品的检测浓度，ng/mL；V₁：空白样品定容时的体积，mL；C₂：加入混合标准液的样品的检测浓度ng/mL；V₂:加入混合标准液的样品定容时的体积，mL。

本实施例实测结果为58.56μg/L，加标回收率为79.62％，相对标准偏差(n＝3)为4.98。由此可见，本方法检测准确性较好。

通过加标回收率实验可以对检验结果进行校正，排除人为操作误差，降低基质干扰效应。本发明采用的固相小柱萃取方法，可有效分离待测组分与样品基质，克服基质效应，实验结果重现性好，回收率高，检测结果准确。

实施例二：

本实施例与实施例一基本相同，特别之处在于：

本实施例进行实际样品中抗组胺药浓度的测定，随机收集环境中水样5份，使用实施例一的步骤a的方法进行预处理，再使用实施例一的步骤b的固相萃取方法进行净化与富集，之后采用实施例一的步骤c的高效液相色谱—质谱的方法对样品中目标物的实际浓度进行分析检测。具体检测过程如下：

a.样品的预处理：

b.使用固相萃取柱进行富集净化：

c.高效液相色谱—质谱联用仪测定样品中目标物的含量：

高效液相色谱—质谱仪的检测条件为：

柱温为35℃，进样体积为3μL，流速为0.3mL/min；

实验测试分析：

本实施例检测得到5份水样中的抗组胺药类药物浓度如下表1所示。实验结果说明本实施例方法可以应用于环境水样中抗组胺药类药物的测定。

表1.水体样本中6种抗组胺药类药物的浓度检测结果

本实施例步骤b中固相萃取小柱是Waters公司Oasis HLB型小柱。本实施例步骤c中高效液相色谱—质谱仪型号为SCIEX QTRAP 5500型液相色谱仪，色谱柱为Kinetex120EC-C18反相柱(3×100mm，2.7μm，phenomenex)。本实施例利用固相萃取小柱结合高效液相色谱—质谱技术，能够高效、快速的同时检测水体中6种抗组胺类药物，包括西咪替丁、苯海拉明、西替利嗪、非索非那定、氯苯那敏、雷尼替丁等。图1为本实施例方法检测的六种抗组胺药的色谱图。由图1可知，采用本方法获得的抗组胺药的色谱图峰形优美，且分离效果较好，各类药物信号强度很高，均在10e5以上。表1为本实施例采用的固相小柱萃取方法的效果，本方法对五份水样中的六种抗组胺药进行回收率测试，其回收率均在80％以上，显示较高的回收率，表明该方法可有效分离待测组分与样品基质，保可证检测结果准确。

综上所述，本发明上述实施例用于治疗过敏性疾病药物的检测方法，利用固相萃取小柱结合高效液相色谱—质谱技术，能够高效、快速的同时检测水体中6种抗组胺类药物，包括西咪替丁、苯海拉明、西替利嗪、非索非那定、氯苯那敏、雷尼替丁。该方法包括以下步骤：(1)将水样过滤，并加入内标物；(2)使用固相萃取小柱提取、净化样品中的6种他汀类物质；(3)通过高效液相色谱—质谱仪检测水样中目标物的含量。本发明对水样的处理步骤简单，操作方便，稳定性好，能够快速得到适于液质联用仪检测的样品；样品预处理成本低，利用实验室常见的耗材就能完成，能在各类前处理实验室完成。此方法能够同时对6种抗组胺类药物进行快速高效地检测，检测速度快，自动化程度高，响应灵敏，回收率能达到70.62-110.37％之间，便于产业化应用，是一种简便、快捷、准确的定性定量检测方法，适于推广应用。

上面对本发明实施例结合附图进行了说明，但本发明不限于上述实施例，还可以根据本发明的发明创造的目的做出多种变化，凡依据本发明技术方案的精神实质和原理下做的改变、修饰、替代、组合或简化，均应为等效的置换方式，只要符合本发明的发明目的，只要不背离本发明水体中抗组胺类药物的快速检测分析方法的技术原理和发明构思，都属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种水体中抗组胺类药物的快速检测分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

a.样品的预处理：

在水体样本中加入内标物西替利嗪-d8和苯海拉明-d3混匀；

b.使用固相萃取柱进行富集净化：

过柱的具体流程为：首先将固相萃取柱用不超过6mL的超纯水或甲醇进行活化，其次将过滤后的200mL水样以2ml/min的速度通过色谱柱，随后用不超过5mL超纯水以1～3mL/min的流速淋洗，然后在0.6bar的气压下干燥至少30min，最后用不超过6ml甲醇洗脱；在40℃的氮气氛围中吹至近干后，用1mL甲醇定容，随后转移到高效液相色谱瓶中用于检测；固相萃取小柱是Waters公司Oasis HLB型小柱；色谱柱为Kinetex 120EC-C18反相柱，3×100mm，2.7μm，phenomenex；

高效液相色谱—质谱仪的检测条件为：

流动相A采用甲酸铵-甲酸溶液，流动相B采用甲酸的乙腈溶液，其中甲酸铵-甲酸溶液中的甲酸铵浓度为0.1mol/L，甲酸铵-甲酸溶液的pH为3.5，甲酸的乙腈溶液中甲酸浓度为0.1mol/L；所述甲酸铵为HPLC级；梯度如下：

0min，95wt.％的A；1min，95wt.％的A；3min，80wt.％的A；5min，80wt.％的A；5.01min，65wt.％的A；9min，55wt.％的A；9.01min，0wt.％的A；11min,0wt.％的A；11.01min，95wt.％的A；12min，95wt.％的A；

干燥气体流量：8L/min，干燥气体温度：300℃，鞘气体温度：350℃，鞘层气体流量：11L/min，雾化器压力：60psi，负离子模式下的喷嘴电压：1500V，正离子模式下的喷嘴电压：1500V，负离子模式下的毛细管电压：4500V；

c.高效液相色谱—质谱联用仪测定样品中目标物的含量：

建立目标污染物的标准曲线，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标；采用内标法，在高效液相色谱—质谱联用仪上定量检测水样中提取到的目标物的浓度；对水样中西咪替丁、苯海拉明、西替利嗪、非索非那定、氯苯那敏、雷尼替丁进行浓度检测。

2.根据权利要求1所述水体中抗组胺类药物的快速检测分析方法，其特征在于：在所述步骤a中，将样品粗滤至少三次，细滤至少三次；每250mL的水体样本中添加内标物的总浓度为20～100ppb。

3.根据权利要求1所述水体中抗组胺类药物的快速检测分析方法，其特征在于：在所述步骤b中，在进行氮气吹干的过程为45～60min。

4.根据权利要求1所述水体中抗组胺类药物的快速检测分析方法，其特征在于：在所述步骤c中，高效液相色谱—质谱仪的检测条件还包括：

柱温为35℃，进样体积为3μL，流速为0.3mL/min。