CN111471053A - 一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮及其制备方法与应用 - Google Patents

一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111471053A
CN111471053A CN202010472123.0A CN202010472123A CN111471053A CN 111471053 A CN111471053 A CN 111471053A CN 202010472123 A CN202010472123 A CN 202010472123A CN 111471053 A CN111471053 A CN 111471053A
Authority
CN
China
Prior art keywords
chromatography
sinopodone
gradient
carrying
ethanol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010472123.0A
Other languages
English (en)
Inventor
王俊敏
刘延霆
孙彦君
冯卫生
陈辉
陈豪杰
赵晨
韩瑞杰
潘如意
柴站
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Original Assignee
Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM filed Critical Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Priority to CN202010472123.0A priority Critical patent/CN111471053A/zh
Publication of CN111471053A publication Critical patent/CN111471053A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/28—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/40—Separation, e.g. from natural material; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
    • C07D407/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/12—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D493/14—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明涉及异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮及其制备方法与应用，可有效解决从小叶莲中提取异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮，并用于制备抗前列腺癌药物的问题，所述的异戊烯基化黄酮类化合物是从小叶莲中提取的桃儿七酮为桃儿七酮NF（Sinoflavonoid NF Ⅰ）、桃儿七酮NG（Sinoflavonoid NG Ⅱ）、桃儿七酮NH（Sinoflavonoid NH Ⅲ）、桃儿七酮NI（Sinoflavonoid NI Ⅳ），本发明从小叶莲药材中提取分离新型异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮NF―NI(sinoflavonoid NF―NI)对人前列腺癌细胞株PC‑3具有细胞毒活性，具备抗前列腺癌药物的前景，制备方法重现性好，所得化合物纯度高，有利于对其进行进一步的药理和临床研究，开拓了小叶莲药物的药物价值和制备抗前列腺癌药物的新途径。

Description

一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及医药，特别是从小叶莲中提取异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮，并用于制备抗前列腺癌药物的一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮及其制备方法与应用。
背景技术
前列腺癌是男性最常见的泌尿生殖系统恶性肿瘤，发生率在大多数国家呈现递增趋势，不仅是欧美男性中发病率最高的一种恶性肿瘤，也是我国近年来发病率和病死率升高速度最快的恶性肿瘤。50岁以后随着年龄的增长，前列腺癌发病率迅速升高，已经成为严重影响老年男性健康的问题之一。目前还没有明确用于根治前列腺癌的方法，手术和放疗是临床上常用的治疗手段，但都存在一定的局限性，治疗后的存活率不高，并发症较多。目前临床上广泛使用的合成的抗前列腺癌药物普遍存在着毒副作用如脱发、贫血和胃肠不适等现象。因此加强前列腺癌治疗的研究，延长患者的生存期，改善患者的生活质量是药学工作者的当务之急。中草药在抗肿瘤方面的应用历史悠久，从中草药中寻找高效低毒的抗肿瘤活性物质，研制选择性强、毒副作用低的新型抗肿瘤药物是药学科研工作者迫切解决的首要问题。
小叶莲是小檗科桃儿七属植物鬼臼Sinopodophyllum emodi(Wall.)Ying.的干燥成熟果实。鬼臼是一种具有悠久历史的药用植物，古代《神农本草经》中就有记载：杀大毒，疗咳嗽喉疾，风邪烦感，失魄妄见。不入汤。以后的历代本草亦多有记载，主要用于活血散结、祛风除湿、虫蛇咬伤、跌打、心胃痛、风寒咳嗽、月经不调、铁棒锤中毒、风湿筋骨痛及气管炎等症。鬼臼分布比较广泛，我国主要分布在四川、青海、西藏、甘肃、陕西。小叶莲作为传统藏药始载于《月王药诊》，具有悠久的药用历史。化学成分研究表明主要含有木脂素和黄酮类化合物，其中异戊烯基化黄酮是小叶莲中代表性的活性成分，具有重要而广泛的生物活性如抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗骨质疏松、预防老年痴呆、抗糖尿病、心脑血管保护、雌激素样等。但如何从小叶莲提取异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮，并实现在制备抗前列腺癌药物中的应用，迄今为止未见有专利或文献报道。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮及其制备方法与应用，可有效解决从小叶莲中提取异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮，并用于制备抗前列腺癌药物的问题。
本发明一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮，所述的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮为桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NFⅠ)、桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NGⅡ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NHⅢ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NIⅣ)，分子结构式分别为：
Figure BDA0002514627840000021
其制备方法是，小叶莲药材6–9kg为原料，以2–5倍原料重量、体积浓度为75％–95％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90–95℃，每次提取时间为1.5–2h(小时，以下同)，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于2–3.2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2–3.2L，时间为1.5–2h；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用9.1–13L洗脱液，流速为10–15mL/min，每350–500mL体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到组份Fr.1–Fr.16；将组份Fr.2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为20–32mL/h，每5–9mL为一流份、收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–11、流份12–18、流份19–25，得到3个亚组份Fr.2-1、Fr.2-2、Fr.2-3；将亚组份Fr.2-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为70:30的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为19min的色谱峰，回收溶剂，得桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NGⅡ)；将组分Fr.7经开放ODS柱色谱，以体积比(v/v)60:40、70:30、80:20、90:10的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，每一梯度400–600mL，每一流份为40–60mL，流速为1mL/min，共收集40个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比2:3的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–7、流份8–14、流份16–25、流份26–32、流份33–36、流份37–40，得到6个亚组份Fr.7-1、Fr.7-2、Fr.7-3、Fr.7-4、Fr.7-5、Fr.7-6；亚组份Fr.7-5经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为80:20的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，分别收集保留时间为39min、42min、58min的色谱峰，回收溶剂，分别得桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NFⅠ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NHⅢ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NIⅣ)。
本发明方法制得的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮具有抗前列腺癌细胞活性，可有效用于制备治疗抗前列腺癌的药物。
本发明涉及从小叶莲药材中提取分离新型异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮NF―NI(sinoflavonoid NF―NI)及其在制备抗前列腺癌药物中的应用，该异戊烯基化黄酮类化合物对人前列腺癌细胞株PC-3具有细胞毒活性，具备抗前列腺癌药物的前景，且其制备方法重现性好，所得化合物纯度高，有利于对其进行进一步的药理和临床研究，开拓了小叶莲药物的药物价值和制备抗前列腺癌药物的新途径，有显著的经济和社会效益。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中可由以下实施例给出。
实施例1
本发明在具体实施中，一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮的制备方法，小叶莲药材9kg为原料，以18L、体积浓度为95％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为95℃，每次提取时间为1.5h(小时，以下同)，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于3.2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次3.2L，时间为1.5h；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用13L洗脱液，流速为15mL/min，每500mL体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到组份Fr.1–Fr.16；将组份Fr.2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为32mL/h，每6–9mL为一流份、收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–11、流份12–18、流份19–25，得到3个亚组份Fr.2-1、Fr.2-2、Fr.2-3；将亚组份Fr.2-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为70:30的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为19min的色谱峰，回收溶剂，得桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NGⅡ)；将组分Fr.7经开放ODS柱色谱，以体积比(v/v)60:40、70:30、80:20、90:10的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，每一梯度600mL，每一流份为60mL，流速为1mL/min，共收集40个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比2:3的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–7、流份8–14、流份16–25、流份26–32、流份33–36、流份37–40，得到6个亚组份Fr.7-1、Fr.7-2、Fr.7-3、Fr.7-4、Fr.7-5、Fr.7-6；亚组份Fr.7-5经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为80:20的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，分别收集保留时间为39min、42min、58min的色谱峰，回收溶剂，分别得桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NFⅠ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NHⅢ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NIⅣ)。
实施例2
本发明在具体实施中，一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮的制备方法，小叶莲药材6kg为原料，以5倍原料重量、体积比为75％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90℃，每次提取时间为2h(小时，以下同)，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2L，时间为1.5h；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用9.1L洗脱液，流速为10mL/min，每350mL体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到组份Fr.1–Fr.16；将组份Fr.2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为20mL/h，每5mL为一流份、收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–11、流份12–18、流份19–25，得到3个亚组份Fr.2-1、Fr.2-2、Fr.2-3；将亚组份Fr.2-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为70:30的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为19min的色谱峰，回收溶剂，得桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NGⅡ)；将组分Fr.7经开放ODS柱色谱，以体积比(v/v)60:40、70:30、80:20、90:10的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，每一梯度400mL，每一流份为40mL，流速为1mL/min，共收集40个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比2:3的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–7、流份8–14、流份16–25、流份26–32、流份33–36、流份37–40，得到6个亚组份Fr.7-1、Fr.7-2、Fr.7-3、Fr.7-4、Fr.7-5、Fr.7-6；亚组份Fr.7-5经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为80:20的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，分别收集保留时间为39min、42min、58min的色谱峰，回收溶剂，分别得桃儿七酮NF(SinoflavonoidNFⅠ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NHⅢ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NIⅣ)。
实施例3
本发明在具体实施中，一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮的制备方法，小叶莲药材8kg为原料，以24L、体积浓度为85％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为92℃，每次提取时间为1.8h，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于2.8L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2.8L，时间为1.8h；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用11.7L洗脱液，流速为13mL/min，每450mL体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到组份Fr.1–Fr.16；将组份Fr.2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为28mL/h，每8mL为一流份、收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–11、流份12–18、流份19–25，得到3个亚组份Fr.2-1、Fr.2-2、Fr.2-3；将亚组份Fr.2-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为70:30的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为19min的色谱峰，回收溶剂，得桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NGⅡ)；将组分Fr.7经开放ODS柱色谱，以体积比(v/v)60:40、70:30、80:20、90:10的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，每一梯度400–600mL，每一流份为40–60mL，流速为1mL/min，共收集40个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比2:3的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–7、流份8–14、流份16–25、流份26–32、流份33–36、流份37–40，得到6个亚组份Fr.7-1、Fr.7-2、Fr.7-3、Fr.7-4、Fr.7-5、Fr.7-6；亚组份Fr.7-5经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为80:20的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，分别收集保留时间为39min、42min、58min的色谱峰，回收溶剂，分别得桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NFⅠ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NHⅢ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NIⅣ)。
实施例4
本发明在具体实施中，一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮的制备方法，小叶莲药材7kg为原料，以21L、体积浓度为75％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90℃，每次提取时间为2h，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于2.4L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2.4L，时间为2h；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用10.4L洗脱液，流速为12mL/min，每400mL体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到组份Fr.1–Fr.16；将组份Fr.2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为24mL/h，每7mL为一流份、收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–11、流份12–18、流份19–25，得到3个亚组份Fr.2-1、Fr.2-2、Fr.2-3；将亚组份Fr.2-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为70:30的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为19min的色谱峰，回收溶剂，得桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NGⅡ)；将组分Fr.7经开放ODS柱色谱，以体积比(v/v)60:40、70:30、80:20、90:10的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，每一梯度400–600mL，每一流份为40–60mL，流速为1mL/min，共收集40个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比2:3的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–7、流份8–14、流份16–25、流份26–32、流份33–36、流份37–40，得到6个亚组份Fr.7-1、Fr.7-2、Fr.7-3、Fr.7-4、Fr.7-5、Fr.7-6；亚组份Fr.7-5经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为80:20的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，分别收集保留时间为39min、42min、58min的色谱峰，回收溶剂，分别得桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NFⅠ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NHⅢ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NIⅣ)。
本发明方法稳定可靠，易操作，所得产物经UV、IR、核磁共振光谱(1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC)及高分辨率质谱(HR-ESI-MS)等光谱学技术鉴定为对PC-3细胞具有细胞毒活性的新型异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮NF―NI(sinoflavonoid NF―NI)，有关资料如下：
一、化合物的结构鉴定
化合物I，黄色粉末，盐酸-镁粉反应呈阳性，提示可能为黄酮类化合物。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 383.1131[M–H]–(calcd for C21H19O7,383.1131)，确定分子式为C21H20O7。IR(KBr,cm-1)显示该化合物具有游离羟基(3420cm-1)，缔合羰基(1649cm-1)，苯环(1601cm-1)。UV(λmax)显示该化合物具有黄酮醇骨架(267，354nm)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)显示两组芳香质子偶合系统信号δ6.42(1H,s)，7.53(1H,d,J＝2.2Hz)、6.89(1H,d,J＝8.5Hz)、7.42(1H,d,J＝8.5,2.2Hz)分别归属于黄酮母核的A环和B环，提示结构中分别存在一个五取代和1,3,4-三取代苯环结构单元。由2个亚甲基质子信号δ2.61(2H,t,J＝6.8Hz)、1.81(2H,t,J＝6.8Hz)，两个季碳上的甲基质子信号δ1.31(6H,s)，提示结构中存在2,2-二甲基二氢吡喃环。1个与烯碳相连的甲氧基氢信号δ3.76(3H,s)。δ13.05(1H,s)为与羰基缔合的5位酚羟基质子信号。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)显示含有21个碳原子，除了1组2,2-二甲基二氢吡喃环δ15.7、30.9、76.2、26.3(×2)，一个甲氧基δ59.6之外，还给出12个芳香碳信号，1个羰基碳信号δ178.0，两个连氧烯碳信号δ155.3、137.5，以上碳谱数据进一步表明化合物Ⅱ为异戊烯基化黄酮醇衍生物。由亚甲基质子信号δ2.61(2H,t,J＝6.8Hz,H-1″)与δ158.1(C-5)、104.3(C-6)、160.4(C-7)的远程相关，表明2,2-二甲基二氢吡喃环与黄酮母核的C-6和C-7位骈和。甲氧基氢信号δ3.76(3H,s)与137.5(C-3)的HMBC远程相关，表明甲氧基与C-3相连。将化合物I的1H NMR、13C NMR信号通过HSQC、HMBC谱进行归属(见Table 1)：
Table 1.NMR(500MHz,DMSO-d6)assignments for I.
Figure BDA0002514627840000081
因此化合物Ⅰ的结构为：
6,7-(2,2-dimethyldihydropyrano)-5,3′,4′-trihydroxy-3-methoxyflavone，命名为桃儿七酮NF(sinoflavonoid NF)。
Figure BDA0002514627840000082
化合物Ⅱ，黄色粉末，盐酸-镁粉反应呈阳性，提示可能为黄酮类化合物。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 491.1685[M﹢Na]+(calcd.for C26H28O8Na,491.1682)，确定分子式为C26H28O8。IR(KBr,cm-1)显示该化合物具有游离羟基(3325cm-1)，缔合羰基(1655cm-1)，苯环(1592cm-1)。UV(λmax)显示该化合物具有黄酮醇骨架(263，344nm)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)显示两组芳香质子偶合系统信号δ6.21(1H,s)、6.73(1H,d,J＝8.2Hz)、6.86(1H,d,J＝8.2Hz)分别归属于黄酮母核的A环和B环，提示结构中分别存在一个五取代和1,2,3,4-四取代苯环结构单元。由2组亚甲基质子信号δ2.59(2H,m)、1.72(2H,m)，2个与季碳相连的甲基质子信号δ1.31(3H,s)、1.29(3H,s)，表明结构中存在1个2,2-二甲基二氢吡喃环。由1个亚甲基质子信号δ2.27(2H,d,J＝6.3Hz)，1个与氧相连的次甲基质子信号δ4.10(1H,t,J＝6.3Hz)，1个季碳上的甲基质子信号δ1.53(3H,s)，1个末端双键上的烯氢质子δ4.57(1H,s)、4.53(1H,s)，提示结构中存在1个2-羟基-3-甲基-3-丙烯基(2-hydroxy-3-methyl-3-butenyl)。1个甲氧基质子信号δ3.57(3H,s)。1个与羰基缔合的5位酚羟基质子信号δ12.64(1H,s)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)显示含有26个碳原子，除了1个甲氧基的碳信号δ60.1，1组2-羟基-3-甲基-3-丙烯基碳信号δ27.4、73.9、148.0、110.9、17.1，1组2,2-二甲基二氢吡喃环的碳信号δ20.5、31.2、73.7、25.9、26.8之外，还给出12个芳香碳信号，1个羰基碳信号δ178.0，两个与氧相连的烯碳信号δ158.2、139.2，以上碳谱数据进一步表明化合物Ⅰ为异戊烯基化黄酮醇衍生物。HMBC谱中，由亚甲基质子信号δ2.59(2H,m,H-1″′)与δ120.3(C-1′)、121.0(C-2′)、142.1(C-3′)的远程相关，表明2,2-二甲基-二氢吡喃环连接在C-2′和C-3′位。通过亚甲基质子信号δ2.72(2H,d,J＝6.3Hz,H-1″)与δ161.0(C-7)、105.6(C-8)、154.9(C-9)的HMBC相关，提示2-羟基-3-甲基-3-丙烯基连接在C-8位。通过δ3.57(3H,s)与δ139.2(C-3)的远程相关，表明甲氧基连接在C-3位。将化合物Ⅱ的1H NMR、13C NMR信号通过HSQC、HMBC谱进行归属(见Table 2)：
Table 2.NMR(500MHz,DMSO-d6)assignments forⅡ.
Figure BDA0002514627840000091
Figure BDA0002514627840000101
因此化合物Ⅱ的结构为：
8-(2-hydroxy-3-methyl-3-butenyl)-2′,3′-(2,2-dimethyldihydropyrano)-5,7,4′-trihydroxy-3-met hoxyflavone，命名为桃儿七酮NG(sinoflavonoid NG)。
Figure BDA0002514627840000102
化合物Ⅲ，黄色粉末，盐酸-镁粉反应呈阳性，提示可能为黄酮类化合物。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 523.1967[M–H]–(calcd for C29H31O9,523.1968)，确定分子式为C29H32O9。IR(KBr,cm-1)显示该化合物具有游离羟基(3337cm-1)，缔合羰基(1650cm-1)，苯环(1585cm-1)。UV(λmax)显示该化合物具有黄酮醇骨架(263，349nm)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)显示两组芳香质子偶合系统信号δ6.20(1H,s)，6.76(1H,d,J＝8.2Hz)、6.78(1H,d,J＝8.2Hz)分别归属于黄酮母核的A环和B环，提示结构中分别存在一个五取代和1,2,3,4-四取代苯环结构单元。2个季碳上的甲基质子信号δ1.05(3H,s)、1.30(3H,s)，一个二连氧碳信号δ109.0，提示结构中存在1个异丙二氧基。由2个连氧次甲基氢信号δ5.32(1H,d,J＝6.3Hz)、4.29(1H,d,J＝6.3Hz)，2个季碳上的甲基质子信号δ1.17(3H,s)、1.44(3H,s)，提示结构中存在1个3,4-二羟基-2,2-二甲基二氢吡喃环。由1个亚甲基质子信号δ3.44(2H,d,J＝7.2Hz)，两个与季碳相连的的甲基质子信号δ1.27(3H,s)、1.44(3H,s)，一个烯氢质子δ5.00(1H,m)，提示结构中存在1个异戊烯基。1个与烯碳相连的甲氧基氢信号δ3.55(3H,s)。3个酚羟基信号δ12.71(1H,s)、9.92(1H,s)、8.56(1H,s)，其中δ12.71(1H,s)为与羰基缔合的5位酚羟基氢信号。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)显示含有29个碳原子，除了1组3,4-二羟基-2,2-二甲基二氢吡喃基δ65.9、76.6、77.4、22.1、24.7，一组异丙二氧基δ27.7、109.0、26.4，一组异戊烯基δ25.0、123.0、130.2、17.3、24.7，一个甲氧基δ59.7之外，还给出12个芳香碳信号，1个羰基碳信号δ178.1，两个连氧烯碳信号δ159.8、139.2，以上碳谱数据进一步表明化合物Ⅲ为异戊烯基化黄酮醇衍生物。由亚甲基质子信号δ3.44(2H,d,J＝7.2Hz,H-1″′)与δ120.6(C-1′)、128.3(C-2′)、143.2(C-3′)的HMBC远程相关，表明异戊烯基连接在2′位。由连氧次甲基质子信号δ5.32(1H,d,J＝6.3Hz,H-1″)与δ158.1(C-7)、101.6(C-8)、155.8(C-9)的远程相关，表明3,4-二羟基-2,2-二甲基二氢吡喃环与黄酮母核的C-7和C-8位骈和。由2个连氧次甲基质子信号δ5.32(1H,d,J＝6.2Hz,H-1″)、4.29(1H,d,J＝6.3Hz,H-2″)与δ109.0(C-6″)的远程相关，表明异丙基与2,2-二甲基二氢吡喃环通过2个醚键相连。甲氧基氢信号δ3.55(3H,s)与139.2(C-3)的远程相关，表明甲氧基与C-3相连。将化合物Ⅲ的1H NMR、13CNMR信号通过HSQC、HMBC谱进行归属(见Table 3)：
Table 3.NMR(500MHz,DMSO-d6)assignments forⅢ.
Figure BDA0002514627840000111
因此化合物Ⅲ的结构为：
7,8-(3,4-isopropyldioxy-2,2-dimethyldihydropyrano)-2′-(3-methyl-2-butenyl)-5,3,4′-trihydroxy-3-methoxyflavone，命名为桃儿七酮NH(sinoflavonoidNH)。
Figure BDA0002514627840000121
化合物Ⅳ，黄色粉末，盐酸-镁粉反应呈阳性，提示可能为黄酮类化合物。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 471.1425[M﹢Na]+(calcd for C26H24O7Na,471.1420)，确定分子式为C26H24O7。IR(KBr,cm-1)显示该化合物具有游离羟基(3337cm-1)，缔合羰基(1650cm-1)，苯环(1585cm-1)。UV(λmax)显示该化合物具有黄酮醇骨架(263，349nm)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)显示两组芳香质子偶合系统信号δ6.31(1H,s)，6.92(1H,d,J＝8.4Hz)、7.58(1H,d,J＝8.4Hz)分别归属于黄酮母核的A环和B环，提示结构中分别存在一个五取代和1,2,3,4-四取代苯环结构单元。由1个亚甲基质子信号δ3.34(2H,d,J＝7.2Hz)，两个与季碳相连的的甲基质子信号δ1.51(3H,s)、1.54(3H,s)，一个烯氢质子δ5.10(1H,t,J＝7.4Hz)，提示结构中存在1个异戊烯基。1个季碳上的甲基质子信号δ2.08(3H,s)，末端双键上的两个烯氢质子信号δ5.78(1H,s)、5.30(1H,s)，提示结构中存在1个异丙烯基。由1个烯氢质子信号δ7.04(1H,s)，2个烯碳信号δ104.4、156.8，提示结构中存在1个呋喃环。1个与烯碳相连的甲氧基氢信号δ3.67(3H,s)。1个与羰基缔合的5位酚羟基氢信号δ12.67(1H,s)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)显示含有26个碳原子，除了1组呋喃基δ104.4、156.8，一组异丙烯基δ132.4、114.2、18.8，一组异戊烯基δ21.1、122.3、130.8、17.4、25.4，一个甲氧基δ60.1之外，还给出12个芳香碳信号，1个羰基碳信号δ178.2，两个连氧烯碳信号δ156.6、137.8，以上碳谱数据进一步表明化合物Ⅳ为异戊烯基化黄酮醇衍生物。由亚甲基质子信号δ3.34(2H,d,J＝7.4Hz,H-1″)与δ161.6(C-7)、105.9(C-8)、153.9(C-9)的HMBC远程相关，表明异戊烯基连接在8位。由烯氢质子信号δ7.04(1H,s,H-1″′)与δ122.9(C-1′)、129.4(C-2′)、142.7(C-3′)的远程相关，表明呋喃环与黄酮母核的C-2′和C-3′位骈和。由甲基质子信号δ2.08(3H,s,H-5″′)与δ156.8(C-2″′)的远程相关，表明异丙烯基连接在C-32″′位。甲氧基氢信号δ3.67(3H,s)与137.8(C-3)的远程相关，表明甲氧基与C-3相连。将化合物Ⅳ的1H NMR、13C NMR信号通过HSQC、HMBC谱进行归属(见Table 4)：
Table 4.NMR(500MHz,DMSO-d6)assignments forⅣ.
Figure BDA0002514627840000122
Figure BDA0002514627840000131
因此化合物Ⅳ的结构为：
8-(3-methyl-2-butenyl)-2′,3′-(2-isopropenylfurano)-5,7,4′-trihydroxy-3-methoxyflavone，命名为桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NIⅣ)。
Figure BDA0002514627840000132
二、细胞毒活性
1.实验材料
人前列腺癌细胞株(PC-3)由中国医学科学院药物研究所提供，胎牛血清购自Gibco公司。
2.细胞培养
PC-3细胞培养于含有10％经加热灭活的胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI1640培养基中，将培养瓶置于37℃，5％CO2饱和湿度培养箱培养，每1～2天换培养液一次。当细胞生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面时，用0.25％胰蛋白酶消化，传代。
3.MTT法
对数生长期细胞培养于96孔培养板内，每孔100μL(含4000个肿瘤细胞)，置37℃、5％CO2温箱中培养。次日，给药组加入含有不同浓度的测试化合物的稀释液，设4–5个剂量组，每组至少设五个平行孔。对照组加入与给药组等体积的溶剂。置37℃、5％CO2温箱中培养。2天后弃培养液，每孔加50μL(1mg/ml)MTT溶液(培养基配置)。37℃孵育4小时，弃去上清液，每孔加入DMSO 200μL溶解甲簪颗粒，轻度振荡溶解。用酶标仪，在检测波长490nm条件下测定光密度值(OD)，以溶剂对照处理的细胞为对照组，用下面公式计算药物对细胞的抑制率，根据计算得到的各浓度的抑制率通过SPSS 13.0软件处理得到半数抑制浓度(IC50)，重复测试3次，取平均值为最终结果。
Figure BDA0002514627840000141
4.实验结果
通过MTT法采用人前列腺癌细胞株(PC-3)分别对桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NFⅠ)、桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NGⅡ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NHⅢ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NIⅣ)进行细胞毒活性测试，结果表明，结果见Table 5。
Table 5.化合物Ⅰ-Ⅳ对PC-3细胞的细胞毒活性
Figure BDA0002514627840000142
通过反复大量的实验证实，异戊烯基化黄酮类化合物由于黄酮母核及其所连异戊烯基化基团的位置、数目、种类的不同，其细胞毒活性会存在很大的差异，实验表明，本发明从小叶莲中制备出的桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NFⅠ)、桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NGⅡ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NHⅢ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NIⅣ)对人前列腺癌细胞(PC-3)具有细胞毒活性，具有制备临床上抗前列腺癌药物的前景，开拓了小叶莲的药用价值和治疗前列腺癌药物的新途径，是抗前列腺癌细胞PC-3药物上的一大创新，有显著的经济和社会效益。

Claims (7)

1.一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮，其特征在于，所述的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮为桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NF Ⅰ)、桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NG Ⅱ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NH Ⅲ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NI Ⅳ)，分子结构式分别为：
Figure FDA0002514627830000011
2.权利要求1所述的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮的制备方法，其特征在于，以小叶莲药材6–9kg为原料，以2–5倍原料重量、体积浓度为75％–95％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90–95℃，每次提取时间为1.5–2h，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于2–3.2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2–3.2L，时间为1.5–2h；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用9.1–13L洗脱液，流速为10–15mL/min，每350–500mL体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到组份Fr.1–Fr.16；将组份Fr.2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为20–32mL/h，每5–9mL为一流份、收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–11、流份12–18、流份19–25，得到3个亚组份Fr.2-1、Fr.2-2、Fr.2-3；将亚组份Fr.2-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为70:30的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为19min的色谱峰，回收溶剂，得桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NGⅡ)；将组分Fr.7经开放ODS柱色谱，以体积比60:40、70:30、80:20、90:10的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，每一梯度400–600mL，每一流份为40–60mL，流速为1mL/min，共收集40个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比2:3的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–7、流份8–14、流份16–25、流份26–32、流份33–36、流份37–40，得到6个亚组份Fr.7-1、Fr.7-2、Fr.7-3、Fr.7-4、Fr.7-5、Fr.7-6；亚组份Fr.7-5经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为80:20的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，分别收集保留时间为39min、42min、58min的色谱峰，回收溶剂，分别得桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NF Ⅰ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NH Ⅲ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NI Ⅳ)。
3.根据权利要求2所述的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮的制备方法，其特征在于，以小叶莲药材9kg为原料，以18L、体积浓度为95％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为95℃，每次提取时间为1.5h，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于3.2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次3.2L，时间为1.5h；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用13L洗脱液，流速为15mL/min，每500mL体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到组份Fr.1–Fr.16；将组份Fr.2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为32mL/h，每6–9mL为一流份、收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–11、流份12–18、流份19–25，得到3个亚组份Fr.2-1、Fr.2-2、Fr.2-3；将亚组份Fr.2-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为70:30的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为19min的色谱峰，回收溶剂，得桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NG Ⅱ)；将组分Fr.7经开放ODS柱色谱，以体积比60:40、70:30、80:20、90:10的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，每一梯度600mL，每一流份为60mL，流速为1mL/min，共收集40个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比2:3的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–7、流份8–14、流份16–25、流份26–32、流份33–36、流份37–40，得到6个亚组份Fr.7-1、Fr.7-2、Fr.7-3、Fr.7-4、Fr.7-5、Fr.7-6；亚组份Fr.7-5经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为80:20的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，分别收集保留时间为39min、42min、58min的色谱峰，回收溶剂，分别得桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NF Ⅰ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NH Ⅲ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NI Ⅳ)。
4.根据权利要求2所述的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮的制备方法，其特征在于，以小叶莲药材6kg为原料，以5倍原料重量、体积浓度为75％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90℃，每次提取时间为2h，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2L，时间为1.5h；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用9.1L洗脱液，流速为10mL/min，每350mL体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到组份Fr.1–Fr.16；将组份Fr.2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为20mL/h，每5mL为一流份、收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–11、流份12–18、流份19–25，得到3个亚组份Fr.2-1、Fr.2-2、Fr.2-3；将亚组份Fr.2-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为70:30的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为19min的色谱峰，回收溶剂，得桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NG Ⅱ)；将组分Fr.7经开放ODS柱色谱，以体积比60:40、70:30、80:20、90:10的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，每一梯度400mL，每一流份为40mL，流速为1mL/min，共收集40个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比2:3的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–7、流份8–14、流份16–25、流份26–32、流份33–36、流份37–40，得到6个亚组份Fr.7-1、Fr.7-2、Fr.7-3、Fr.7-4、Fr.7-5、Fr.7-6；亚组份Fr.7-5经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为80:20的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，分别收集保留时间为39min、42min、58min的色谱峰，回收溶剂，分别得桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NF Ⅰ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NH Ⅲ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NI Ⅳ)。
5.根据权利要求2所述的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮的制备方法，其特征在于，以小叶莲药材8kg为原料，以24L、体积浓度为85％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为92℃，每次提取时间为1.8h，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于2.8L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2.8L，时间为1.8h；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用11.7L洗脱液，流速为13mL/min，每450mL体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到组份Fr.1–Fr.16；将组份Fr.2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为28mL/h，每8mL为一流份、收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–11、流份12–18、流份19–25，得到3个亚组份Fr.2-1、Fr.2-2、Fr.2-3；将亚组份Fr.2-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为70:30的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为19min的色谱峰，回收溶剂，得桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NG Ⅱ)；将组分Fr.7经开放ODS柱色谱，以体积比60:40、70:30、80:20、90:10的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，每一梯度400–600mL，每一流份为40–60mL，流速为1mL/min，共收集40个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比2:3的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–7、流份8–14、流份16–25、流份26–32、流份33–36、流份37–40，得到6个亚组份Fr.7-1、Fr.7-2、Fr.7-3、Fr.7-4、Fr.7-5、Fr.7-6；亚组份Fr.7-5经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为80:20的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，分别收集保留时间为39min、42min、58min的色谱峰，回收溶剂，分别得桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NF Ⅰ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NH Ⅲ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NI Ⅳ)。
6.根据权利要求2所述的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮的制备方法，其特征在于，以小叶莲药材7kg为原料，以21L、体积浓度为75％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90℃，每次提取时间为2h，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于2.4L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2.4L，时间为2h；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用10.4L洗脱液，流速为12mL/min，每400mL体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到组份Fr.1–Fr.16；将组份Fr.2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为24mL/h，每7mL为一流份、收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比1:1的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–11、流份12–18、流份19–25，得到3个亚组份Fr.2-1、Fr.2-2、Fr.2-3；将亚组份Fr.2-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为70:30的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为19min的色谱峰，回收溶剂，得桃儿七酮NG(Sinoflavonoid NG Ⅱ)；将组分Fr.7经开放ODS柱色谱，以体积比60:40、70:30、80:20、90:10的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，每一梯度400–600mL，每一流份为40–60mL，流速为1mL/min，共收集40个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比2:3的石油醚-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–7、流份8–14、流份16–25、流份26–32、流份33–36、流份37–40，得到6个亚组份Fr.7-1、Fr.7-2、Fr.7-3、Fr.7-4、Fr.7-5、Fr.7-6；亚组份Fr.7-5经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为80:20的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，分别收集保留时间为39min、42min、58min的色谱峰，回收溶剂，分别得桃儿七酮NF(Sinoflavonoid NF Ⅰ)、桃儿七酮NH(Sinoflavonoid NH Ⅲ)、桃儿七酮NI(Sinoflavonoid NI Ⅳ)。
7.权利要求1所述的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮NF、桃儿七酮NG、桃儿七酮NH、桃儿七酮NI在制备抗前列腺癌细胞PC-3药物中的应用。
CN202010472123.0A 2020-05-29 2020-05-29 一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮及其制备方法与应用 Pending CN111471053A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010472123.0A CN111471053A (zh) 2020-05-29 2020-05-29 一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010472123.0A CN111471053A (zh) 2020-05-29 2020-05-29 一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮及其制备方法与应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111471053A true CN111471053A (zh) 2020-07-31

Family

ID=71765086

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010472123.0A Pending CN111471053A (zh) 2020-05-29 2020-05-29 一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111471053A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114699371A (zh) * 2022-04-12 2022-07-05 河南中医药大学 转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮u脂质体复合物及其制备方法和应用
CN115521322A (zh) * 2022-09-21 2022-12-27 南京中医药大学 一种异戊烯基黄酮化合物及制备方法和应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102382092A (zh) * 2011-07-15 2012-03-21 北京大学 新的异戊烯基黄酮类化合物及其应用
CN103819445A (zh) * 2014-03-26 2014-05-28 河南中医学院 小叶莲中两个具有降血脂活性的新异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法
CN105131008A (zh) * 2015-09-21 2015-12-09 河南中医学院 一种具有抗肝癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及其应用
CN105130940A (zh) * 2015-09-21 2015-12-09 河南中医学院 一种具有抗乳腺癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及其应用
CN105198854A (zh) * 2015-09-21 2015-12-30 河南中医学院 一种具有神经保护作用的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及应用
CN110483488A (zh) * 2019-09-03 2019-11-22 河南中医药大学 一种异戊烯基化黄酮类化合物及其制备方法和应用
CN110483541A (zh) * 2019-09-03 2019-11-22 河南中医药大学 一种异戊烯基化黄酮类化合物及其制备方法和应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102382092A (zh) * 2011-07-15 2012-03-21 北京大学 新的异戊烯基黄酮类化合物及其应用
CN103819445A (zh) * 2014-03-26 2014-05-28 河南中医学院 小叶莲中两个具有降血脂活性的新异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法
CN105131008A (zh) * 2015-09-21 2015-12-09 河南中医学院 一种具有抗肝癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及其应用
CN105130940A (zh) * 2015-09-21 2015-12-09 河南中医学院 一种具有抗乳腺癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及其应用
CN105198854A (zh) * 2015-09-21 2015-12-30 河南中医学院 一种具有神经保护作用的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及应用
CN110483488A (zh) * 2019-09-03 2019-11-22 河南中医药大学 一种异戊烯基化黄酮类化合物及其制备方法和应用
CN110483541A (zh) * 2019-09-03 2019-11-22 河南中医药大学 一种异戊烯基化黄酮类化合物及其制备方法和应用

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114699371A (zh) * 2022-04-12 2022-07-05 河南中医药大学 转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮u脂质体复合物及其制备方法和应用
CN114699371B (zh) * 2022-04-12 2023-04-28 河南中医药大学 转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮u脂质体复合物及其制备方法和应用
CN115521322A (zh) * 2022-09-21 2022-12-27 南京中医药大学 一种异戊烯基黄酮化合物及制备方法和应用
CN115521322B (zh) * 2022-09-21 2023-08-25 南京中医药大学 一种异戊烯基黄酮化合物及制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112159378B (zh) 一种吉马烷型倍半萜内酯类化合物及其制备方法和应用
CN110272342A (zh) 马齿苋中一种萘酸化合物及其提取分离方法与用途
CN111471053A (zh) 一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮及其制备方法与应用
CN105131008B (zh) 一种具有抗肝癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及其应用
CN110483488B (zh) 一种异戊烯基化黄酮类化合物及其制备方法和应用
CN110483541B (zh) 一种异戊烯基化黄酮类化合物及其制备方法和应用
CN110396076B (zh) 一种异戊烯基化黄酮类化合物及其制备方法和应用
CN110551163A (zh) 一种从小叶莲中提取黄酮苷类化合物的方法及其应用
CN110396097B (zh) 异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮u及其制备方法和应用
CN112300104A (zh) 马齿苋中一种木脂素类化合物及其提取分离方法和应用
CN105130940B (zh) 一种具有抗乳腺癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及其应用
CN108129439A (zh) 一种桃儿七中两个具有抗肿瘤活性的双黄酮类化合物的制备方法及其应用
CN109761977B (zh) 一种黄精生物碱c及其制备方法与应用
CN112920151B (zh) 异戊烯基黄酮类化合物及其制备方法和应用
CN110305094B (zh) 马齿苋中两种黄酮类化合物及其提取分离方法与用途
CN114369076A (zh) 马齿苋中两种茚类化合物及其提取分离方法
CN113968817B (zh) 马齿苋中两种四氢异喹啉的提取分离方法及其应用
CN118126050B (zh) 一种6-甲氧基咔唑生物碱类化合物及其制备方法和应用
CN109824685A (zh) 马齿苋中化合物oleracone G及其提取分离方法与应用
CN116789657B (zh) 一种具有抗炎活性的化合物及其提取分离方法和应用
CN118108727B (zh) 一种咔唑生物碱类化合物及其制备方法和应用
CN114349723B (zh) 多烯炔类化合物及其制备方法和应用
CN114031625B (zh) 甘草中具有抗结直肠癌活性的化合物制备及其应用
CN109897079B (zh) 一种香豆素糖苷类化合物的制备方法及其应用
CN111995647B (zh) 从绿萼梅中分离的具有抗肿瘤活性的化合物及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20200731

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication