CN110396097B - 异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮u及其制备方法和应用 - Google Patents

异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮u及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U及其制备方法和应用，可效解决异戊烯基化黄酮类化合物的制备和制备抗肝癌活性药物的问题，所述的异戊烯基化黄酮类化合物是从小叶莲中提取的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U(sinoflavonoid U)，可有效用于制备抗肝癌活性的药物，原料丰富，制备方法易操作，具有实际的临床意义，经济和社会效益显著。

Description

异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及医药，特别是具有抗肝癌活性的一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U及其制备方法和应用。
背景技术
恶性肿瘤已经成为当前严重影响人类健康、威胁人类生命的主要疾病之一。肝癌是指发生于肝脏的恶性肿瘤，全世界每年新发肝癌患者约60万，发病率居恶性肿瘤的第五位，其死亡率仅次于胃癌和食道癌居第三位。我国每年死于肝癌的患者约11万，占全世界肝癌死亡人数的45％。目前临床上广泛使用的合成的抗肝癌药物普遍存在着毒副作用如脱发、贫血和胃肠不适等现象。因此加强肝癌治疗的研究，延长患者的生存期，改善患者的生活质量是药学工作者的当务之急。中草药在抗肿瘤方面的应用历史悠久，从中草药中寻找高效低毒的抗肿瘤活性物质，研制选择性强、毒副作用低的新型抗肿瘤药物是药学科研工作者迫切解决的首要问题。
小叶莲是小檗科桃儿七属植物桃儿七Sinopodophyllum hexandrum的干燥成熟果实。鬼臼是一种具有悠久历史的药用植物，古代《神农本草经》中就有记载：杀大毒，疗咳嗽喉疾，风邪烦感，失魄妄见。不入汤。以后的历代本草亦多有记载，主要用于活血散结、祛风除湿、虫蛇咬伤、跌打、心胃痛、风寒咳嗽、月经不调、铁棒锤中毒、风湿筋骨痛及气管炎等症。鬼臼分布比较广泛，我国主要分布在四川、青海、西藏、甘肃、陕西。小叶莲作为传统藏药始载于《月王药诊》，具有悠久的药用历史。化学成分研究表明主要含有木脂素类化合物和黄酮类化合物，其中异戊烯基化黄酮类化合物是小叶莲中代表性的活性成分，具有重要而广泛的生物活性如抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗骨质疏松、预防老年痴呆、抗糖尿病、心脑血管保护、雌激素样等。但涉及具有抗肝癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物及其生物活性，迄今为止未见有专利或文献报道。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U及其制备方法和应用，可效解决异戊烯基化黄酮类化合物的制备和制备抗肝癌活性药物的问题。
本发明解决的技术方案是，一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U，是从小叶莲中提取的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U(sinoflavonoid U)，分子结构式为：
Figure BDA0002190255370000021
其制备方法是，以小叶莲药材6–9kg为原料，以2–5倍原料重量、体积浓度为75％–95％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90–95℃，每次提取时间为1.5–2小时，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于2–3.2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取各3次，每次2–3.2L，时间为1.5–2小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、 0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用9.1–13L洗脱液，流速为 10–15mL/min，每350–500ml体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到组份Fr.1–Fr.16；将组份Fr.10经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为20–35mL/h，每4–8mL为一流份、收集32个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比5:3 的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5 min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–15、流份16–27、流份28–32、得到3个亚组份Fr.10-1，Fr.10-2，Fr.10-3；将亚组份Fr.10-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为69:31 的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为42min的色谱峰，回收溶剂后即得到桃儿七酮U(sinoflavonoid U)。
本发明制备的具有抗肝癌活性的新型异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U(sinoflavonoid U)可有效用于制备抗肝癌活性的药物，原料丰富，制备方法易操作，具有实际的临床意义，经济和社会效益显著。
附图说明
图1为本发明化合物桃儿七酮U(sinoflavonoid U)的核磁共振氢谱图。
图2为本发明化合物桃儿七酮U(sinoflavonoid U)的核磁共振碳谱图。
图3为本发明化合物桃儿七酮U(sinoflavonoid U)的HMBC谱图。
图4为本发明化合物桃儿七酮U(sinoflavonoid U)的HSQC谱图。
具体实施方式
以下结合实施例和具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施时可由以下实施例给出。
实施例1
本发明一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U的制备方法是，以小叶莲药材9kg为原料，以18L、体积比为95％乙醇加热回流提取3次，提取温度为95℃，每次提取时间为1.5小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于3.2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次3.2L，时间为1.5小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱初步分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、 100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用13L洗脱液，流速为15mL/min，每500ml体积为一流份，收集260个流份、各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到Fr.1–Fr.16 个组份；将组份Fr.10经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为35mL/h，每8mL 为一流份、收集32个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比4:1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–15、流份16–27、流份28–32、得到3 个亚组份Fr.10-1，Fr.10-2，Fr.10-3；将亚组份Fr.10-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为69:31的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为42min的色谱峰，回收溶剂后即得到桃儿七酮U(sinoflavonoid U)。
实施例2
本发明一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U的制备方法是，以小叶莲药材6kg为原料，以30L、体积比为75％乙醇加热回流提取3次，提取温度为90℃，每次提取时间为2小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2L，时间为2小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱初步分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用9.1L洗脱液，流速为 10mL/min，每350ml体积为一流份，收集260个流份、各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到Fr.1–Fr.16个组份；将组份Fr.10经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为20mL/h，每4mL为一流份、收集32个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比4:1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–15、流份16–27、流份28–32、得到3个亚组份Fr.10-1， Fr.10-2，Fr.10-3；将亚组份Fr.10-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为69:31的甲醇- 水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为42min 的色谱峰，回收溶剂后即得到桃儿七酮U(sinoflavonoid U)。
实施例3
本发明一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U的制备方法是，以小叶莲药材8kg为原料，以24L、体积比为85％乙醇加热回流提取3次，提取温度为92℃，每次提取时间为1.5小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2.8L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2.8L，时间为1.5小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱初步分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、 100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用11.7L洗脱液，流速为13mL/min，每450ml体积为一流份，收集260个流份、各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷- 甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到Fr.1–Fr.16 个组份；将组份Fr.10经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为28mL/h，每7mL 为一流份、收集32个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比4:1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–15、流份16–27、流份28–32、得到3 个亚组份Fr.10-1，Fr.10-2，Fr.10-3；将亚组份Fr.10-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为69:31的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为42min的色谱峰，回收溶剂后即得到桃儿七酮U(sinoflavonoid U)。
实施例4
本发明一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U的制备方法是，以小叶莲药材7kg为原料，以28L、体积比为75％乙醇加热回流提取3次，提取温度为90℃，每次提取时间为2小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2.4L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2.4L，时间为2小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱初步分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用10.4L洗脱液，流速为12mL/min，每400ml体积为一流份，收集260个流份、各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–35、流份36–85、流份86–104、流份105–115、流份116–132、流份133–144、流份145–157、流份158–163、流份164–170、流份171–182、流份183–188、流份189–195、流份196–204、流份205–208、流份209–234、流份235–260，得到Fr.1–Fr.16个组份；将组份Fr.10经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为24mL/h，每6mL为一流份、收集32个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比4:1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3–15、流份16–27、流份28–32、得到3个亚组份Fr.10-1， Fr.10-2，Fr.10-3；将亚组份Fr.10-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为69:31的甲醇- 水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为42min 的色谱峰，回收溶剂后即得到桃儿七酮U(sinoflavonoid U)。
本发明方法稳定可靠，易操作，实施例1-4所得产物经UV、IR、核磁共振光谱(1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC)及高分辨率质谱(HR-ESI-MS)等光谱学技术鉴定为对HepG2细胞具有细胞毒活性的新型异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U(sinoflavonoid U)，有关资料如下：
一、化合物的结构鉴定
黄色粉末，盐酸-镁粉反应呈阳性，提示可能为黄酮类化合物。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 423.1056[M﹢Na]+(calcd for C21H20O8Na,423.1056)，m/z 399.1084[M-H]-(calcd for C21H19O8,399.1080)，确定分子式为C21H20O8。IR(KBr,cm-1)显示该化合物具有游离羟基 (3393cm-1)，缔合羰基(1656cm-1)，苯环(1588cm-1)。UV(λmax)显示该化合物具有黄酮醇骨架(258，354nm)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)显示两组芳香质子偶合系统信号δ6.53(1H, s)，7.54(1H,d,J＝2.2Hz)、6.90(1H,d,J＝8.5Hz)、7.43(1H,dd,J＝8.5,2.2Hz)，分别归属于黄酮母核的A环和B环，提示结构中分别存在一个五取代和1,3,4-三取代苯环结构单元。由δ1.13(3H,s,H-4″)、1.14(3H,s,H-5″)与C-3″(δ70.0)、C-2″(δ91.5)，连氧次甲基δ4.75 (1H,t,J＝8.4Hz,H-2″)与C-1″(δ25.7)、C-3″(δ70.0)、C-4″(δ24.8)、C-5″(δ25.9)，亚甲二氧基δ3.06(2H,d,J＝8.4Hz,H-1″)与C-2″(δ91.5)的HMBC相关，提示2-(1-羟基-1-甲乙基)二氢呋喃基的存在。由连氧次甲基δ4.75(1H,t,J＝8.4Hz,H-2″)与C-7(δ166.2)，亚甲基δ3.06(2H,d,J＝8.4Hz,H-1″)与C-5(δ155.3),C-6(δ108.8),C-7(δ166.2)的HMBC相关,结合5位缔合酚羟基δ12.92(1H,s,5-OH)的存在，提示2-(1-羟基-1-甲乙基)二氢呋喃基与黄酮母核的C-6和C-7骈合。将该化合物的1H NMR、13C NMR信号通过HSQC、HMBC谱进行归属 (见Table 1)。因此该化合物的结构为 6,7-[2-(1-hydroxy-1-methylethyl)dihydrofurano]-5,3′,4′-trihydroxy-3-methoxyflavone,命名为桃儿七酮sinoflavonoid U。
Figure BDA0002190255370000061
Table1.NMR(500MHz,DMSO-d6)assignmentsforsinoflavonoidU.
Figure DEST_PATH_IMAGE001
二、细胞毒活性
1.实验材料
人肝癌细胞株(HepG2)由中国医学科学院药物研究所提供，胎牛血清购自Gibco公司。
2.细胞培养
HepG2细胞培养于含有10％经加热灭活的胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI1640培养基中，将培养瓶置于37℃，5％CO2饱和湿度培养箱培养，每1～2天换培养液一次。当细胞生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面时，用0.25％胰蛋白酶消化，传代。
3.MTT法
对数生长期细胞培养于96孔培养板内，每孔100μL(含4000个肿瘤细胞)，置37℃、5％ CO2温箱中培养。次日，给药组加入含有不同浓度的测试化合物的稀释液，设4–5个剂量组，每组至少设五个平行孔。对照组加入与给药组等体积的溶剂。置37℃、5％CO2温箱中培养。 2天后弃培养液，每孔加50μL(1mg/ml)MTT溶液(培养基配置)。37℃孵育4小时，弃去上清液，每孔加入DMSO 200μL溶解甲簪颗粒，轻度振荡溶解。用酶标仪，在检测波长490nm 条件下测定光密度值(OD)，以溶剂对照处理的细胞为对照组，用下面公式计算药物对细胞的抑制率，根据计算得到的各浓度的抑制率通过SPSS 13.0软件处理得到半数抑制浓度(IC50)，重复测试3次，取平均值为最终结果。
Figure BDA0002190255370000071
4.实验结果
通过MTT法采用人肝癌细胞株(HepG2)对桃儿七酮U(sinoflavonoid U)进行细胞毒活性测试，结果表明，IC50值为3.83μM。
发明人通过大量的实验证实，异戊烯基化黄酮类化合物由于黄酮母核及其所连异戊烯基化基团的位置、数目、种类的不同，其细胞毒活性会存在很大的差异，由上述实验表明，本发明制备出的桃儿七酮U(sinoflavonoid U)对人肝癌细胞(HepG2)具有细胞毒活性，具有制备临床上抗肝癌药物的前景，是抗肝癌药物上的一大创新，经济和社会效益显著。

Claims (5)

1.一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U的制备方法，其特征在于，以小叶莲药材6-9kg为原料，以体积为原料重量的2-5倍且体积单位为L，重量单位为kg、体积浓度为75％-95％的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90-95℃，每次提取时间为1.5-2小时，减压回收乙醇得浸膏状乙醇提取物，混悬于2-3.2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取各3次，每次2-3.2L，时间为1.5-2小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用9.1-13L洗脱液，流速为10-15mL/min，每350-500ml体积为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3-5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1-35、流份36-85、流份86-104、流份105-115、流份116-132、流份133-144、流份145-157、流份158-163、流份164-170、流份171-182、流份183-188、流份189-195、流份196-204、流份205-208、流份209-234、流份235-260，得到组份Fr.1-Fr.16；将组份Fr.10经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为20-35mL/h，每4-8mL为一流份、收集32个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比5:3的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3-5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3-15、流份16-27、流份28-32、得到3个亚组份Fr.10-1，Fr.10-2，Fr.10-3；将亚组份Fr.10-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为69:31的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为42min的色谱峰，回收溶剂后即得到桃儿七酮U，分子结构式为：
Figure FDA0003204289190000011
2.一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U的制备方法，其特征在于，以小叶莲药材9kg为原料，以18L、体积比为95％乙醇加热回流提取3次，提取温度为95℃，每次提取时间为1.5小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于3.2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次3.2L，时间为1.5小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱初步分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用13L洗脱液，流速为15mL/min，每500ml体积为一流份，收集260个流份、各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3-5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1-35、流份36-85、流份86-104、流份105-115、流份116-132、流份133-144、流份145-157、流份158-163、流份164-170、流份171-182、流份183-188、流份189-195、流份196-204、流份205-208、流份209-234、流份235-260，得到Fr.1-Fr.16个组份；将组份Fr.10经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为35mL/h，每8mL为一流份、收集32个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比4:1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3-5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3-15、流份16-27、流份28-32、得到3个亚组份Fr.10-1，Fr.10-2，Fr.10-3；将亚组份Fr.10-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为69:31的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为42min的色谱峰，回收溶剂后即得到桃儿七酮U，分子结构式为：
Figure FDA0003204289190000021
3.一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U的制备方法，其特征在于，以小叶莲药材6kg为原料，以30L、体积比为75％乙醇加热回流提取3次，提取温度为90℃，每次提取时间为2小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2L，时间为2小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱初步分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用9.1L洗脱液，流速为10mL/min，每350ml体积为一流份，收集260个流份、各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3-5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1-35、流份36-85、流份86-104、流份105-115、流份116-132、流份133-144、流份145-157、流份158-163、流份164-170、流份171-182、流份183-188、流份189-195、流份196-204、流份205-208、流份209-234、流份235-260，得到Fr.1-Fr.16个组份；将组份Fr.10经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为20mL/h，每4mL为一流份、收集32个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比4:1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3-5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3-15、流份16-27、流份28-32、得到3个亚组份Fr.10-1，Fr.10-2，Fr.10-3；将亚组份Fr.10-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为69:31的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为42min的色谱峰，回收溶剂后即得到桃儿七酮U，分子结构式为：
Figure FDA0003204289190000031
4.一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U的制备方法，其特征在于，以小叶莲药材8kg为原料，以24L、体积比为85％乙醇加热回流提取3次，提取温度为92℃，每次提取时间为1.5小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2.8L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2.8L，时间为1.5小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱初步分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用11.7L洗脱液，流速为13mL/min，每450ml体积为一流份，收集260个流份、各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3-5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1-35、流份36-85、流份86-104、流份105-115、流份116-132、流份133-144、流份145-157、流份158-163、流份164-170、流份171-182、流份183-188、流份189-195、流份196-204、流份205-208、流份209-234、流份235-260，得到Fr.1-Fr.16个组份；将组份Fr.10经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为28mL/h，每7mL为一流份、收集32个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比4:1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3-5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3-15、流份16-27、流份28-32、得到3个亚组份Fr.10-1，Fr.10-2，Fr.10-3；将亚组份Fr.10-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为69:31的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-PackODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为42min的色谱峰，回收溶剂后即得到桃儿七酮U，分子结构式为：
Figure FDA0003204289190000041
5.一种异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U的制备方法，其特征在于，以小叶莲药材7kg为原料，以28L、体积比为75％乙醇加热回流提取3次，提取温度为90℃，每次提取时间为2小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2.4L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2.4L，时间为2小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱色谱初步分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用10.4L洗脱液，流速为12mL/min，每400ml体积为一流份，收集260个流份、各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1:1的石油醚-丙酮和体积比5:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3-5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1-35、流份36-85、流份86-104、流份105-115、流份116-132、流份133-144、流份145-157、流份158-163、流份164-170、流份171-182、流份183-188、流份189-195、流份196-204、流份205-208、流份209-234、流份235-260，得到Fr.1-Fr.16个组份；将组份Fr.10经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，流速为24mL/h，每6mL为一流份、收集32个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比4:1的二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3-5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份3-15、流份16-27、流份28-32、得到3个亚组份Fr.10-1，Fr.10-2，Fr.10-3；将亚组份Fr.10-2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为69:31的甲醇-水混合溶剂系统洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为7mL/min，收集保留时间为42min的色谱峰，回收溶剂后即得到桃儿七酮U，分子结构式为：
Figure FDA0003204289190000042
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