CN111280063A - 一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法 - Google Patents

一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111280063A
CN111280063A CN202010254295.0A CN202010254295A CN111280063A CN 111280063 A CN111280063 A CN 111280063A CN 202010254295 A CN202010254295 A CN 202010254295A CN 111280063 A CN111280063 A CN 111280063A
Authority
CN
China
Prior art keywords
callus
desert rose
desert
culture
rose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010254295.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111280063B (zh
Inventor
王鹏
张玉洁
刘水燕
张卫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ansapo Chongqing Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Ansapo Chongqing Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ansapo Chongqing Biotechnology Co Ltd filed Critical Ansapo Chongqing Biotechnology Co Ltd
Priority to CN202010254295.0A priority Critical patent/CN111280063B/zh
Publication of CN111280063A publication Critical patent/CN111280063A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111280063B publication Critical patent/CN111280063B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Abstract

本发明公开了一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法。通过对培养基中基础元素和激素进行大量筛选比较和其它实验条件摸索，建立了一种沙漠蔷薇的无菌苗培养和愈伤诱导方法，以沙漠蔷薇成熟种子为外植体，迅速萌发获得无菌苗，以沙漠蔷薇无菌苗的茎、叶片、根为外植体，在2周内快速获得愈伤组织，并建立了沙漠蔷薇愈伤组织继代培养方案，按此方法可以得到生长迅速、分散良好的沙漠蔷薇悬浮细胞系，接入一次性生物反应器进行逐级放大培养。有效的解决了解决沙漠蔷薇细胞产量不足的问题。

Description

一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法。
背景技术
沙漠蔷薇（Adenium obesum.），又名沙漠玫瑰，天宝花，是夹竹桃科沙漠玫瑰属多年生肉质植物。原产自非洲的科尼亚、坦桑尼亚、索马里及津巴布韦，因原产地接近沙漠且花红如玫瑰而得名。沙漠蔷薇喜高温干燥和阳光充足的环境，耐酷暑，不耐寒，忌水湿。喜富含钙质的、疏松透气的、排水良好的砂质壤土。沙漠玫瑰单叶互生，倒卵形，革质，有光泽；总状花序，个儿大、量多，花色丰富、艳丽，花期且长。
有研究表明沙漠蔷薇提取物有很好的药用价值和美容功效。沙漠蔷薇中可提取出30种强心苷和两种孕烷，可用于治疗心脏病和妇科病；沙漠蔷薇叶提取物中的活性成分具有保湿润肤，抗衰老等美容功效，花朵内含高浓度海藻糖，有减少晒黑和皮肤老化、有效保护细胞膜和肌肤的储水功能。
沙漠蔷薇自花结实率低，不容易长果荚，种子少，不易收集；且人工授粉较难，操作成功率低，一般是用半成熟枝扦插来来栽培，但繁殖速度慢。
植物组织培养技术，具体涉及沙漠蔷薇，以无菌苗的茎、叶片、根等作为外植体诱导细胞脱分化形成愈伤组织，愈伤组织的固体继代及液体悬浮培养基方法，高效培养沙漠蔷薇细胞。
目前国内尚无沙漠蔷薇植物组织培养方面的专利，几乎没有沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方面的文献报道。沙漠蔷薇的组织培养体系尚不成熟，该物种在常规植物培养条件下不能存活。
发明内容
本专利旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种快速获得沙漠蔷薇无菌苗、愈伤组织并进行规模化的方法，解决沙漠蔷薇细胞产量不足的问题。
为实现上述目的，本发明干红开了如下的技术内容：
一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法，其特征在于按如下的步骤进行：
（1）沙漠蔷薇种子消毒：将沙漠蔷薇种子用常温水浸泡10-15min，剥除软质种皮，立刻置入4%次氯酸钠溶液消毒8-10min，无菌水洗涤4次，置于种子萌发基础培养基BM上，27-29℃培养，光照强度＜1000 lux；种子萌发培养基BM指的是：1/2MS或MS+ 30g/L蔗糖 +0.1mg/L Gln + 0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0；
（2）沙漠蔷薇无菌苗培养：将已萌发的沙漠蔷薇无菌苗种子在基础培养基BM中培养至植株高2-3cm，开始快繁，快繁方式为将沙漠蔷薇无菌苗去除根部，移入快繁培养基PM，需要7-14d发生侧芽，待侧芽生长至1.5-2cm切下用于再次快繁或生根，培养过程温度控制在25℃-32℃，光照强度500-1500 lux；
所述的快繁培养基PM指的是：MS + 0.1-0.5 mg/L IAA （吲哚乙酸）+ 0.2-0.5 mg/L6-BA（6-苄氨基腺嘌呤） + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln（谷氨酰胺） + 0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0；
（3）沙漠蔷薇愈伤组织诱导：将沙漠蔷薇的叶片（或茎、根）剪成0.5-1cm长的小段，置于愈伤诱导培养基CIM，26-32℃培养，光照强度＜1000 lux，7-14d即在切口边缘形成白色疏松的愈伤组织；所述的愈伤诱导培养基CIM指的是B5植物组织培养基 + 1-2mg/L 2,4-D +30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln（谷氨酰胺） + 0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0；
（4）沙漠蔷薇愈伤组织继代：将诱导获得的沙漠蔷薇愈伤组织分成约0.5cm大小的小块，置于愈伤继代培养基CM1，26-32℃培养，光照强度＜1000 lux，每7-10d继代一次；所述的愈伤继代培养基CM1指的是：B5 + 0.5-1 mg/L 2,4-D + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln +0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0；
（5）沙漠蔷薇愈伤组织悬浮培养：选取质地疏松、颜色白色至浅黄色、生长速度快的沙漠蔷薇愈伤组织，按1g/10mL比例接入悬浮培养基CM2，置于摇床100-115 rpm培养，温度保持26-32℃，按5-15g/100mL比例（湿重）每7-10d继代一次，生长速度3-4倍/7d；所述的悬浮培养基CM2指的是：B5 + 0.5-1 mg/L 2,4-D + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln + 0.2mg/L 水解乳蛋白，pH5.8-6.0；
（6）沙漠蔷薇愈伤组织的一次性生物反应器培养：选取状态一致的已培养7d的悬浮培养材料，向5L一次性生物反应器中接入1000-1500 mL悬浮培养物和除菌处理的3500-4000mL 悬浮培养基CM2使终体积为5000 mL，振频为9.5次/min，通空气为0.1 m³/h，培养7d。继代时，将培养物接入新的一次性生物反应器，加入2-4倍体积的悬浮培养基CM2，振荡并通气培养，振荡频率范围为2-15次/min，通气量为0.05-0.3 m³/h，培养过程中反应器的振频为5-20次/min。培养是在公开号为CN103224882A或CN204385208U的中国专利文献所披露的生物反应器中进行的，培养过程中反应器的振频为5-20次/min。
本发明进一步公开了所述的培养方法在快速获得生长迅速、分散良好的沙漠蔷薇悬浮细胞系方面的应用。实验结果显示：以沙漠蔷薇成熟种子为外植体，可迅速萌发获取无菌苗，并在2周内获得质地疏松、生长迅速、白色至浅黄的愈伤组织，其悬浮细胞系分散良好，生长迅速，7d可生长3-4倍，并实现5-200L一次性生物反应器稳定培养。
本发明更加详细的描述如下：
本发明通过对培养基中基础元素和激素进行大量筛选比较和其它实验条件摸索，建立了一种沙漠蔷薇的无菌苗培养和愈伤诱导方法，以沙漠蔷薇成熟种子为外植体，迅速萌发获得无菌苗，以沙漠蔷薇无菌苗的茎、叶片、根为外植体，在2周内快速获得愈伤组织，并建立了沙漠蔷薇愈伤组织继代培养方案，按此方法可以得到生长迅速、分散良好的沙漠蔷薇悬浮细胞系，接入一次性生物反应器进行逐级放大培养。
沙漠蔷薇种子消毒：将沙漠蔷薇种子用常温水浸泡10-15min，剥除软质种皮，立刻置入4%次氯酸钠溶液消毒8-10min，无菌水洗涤4次，置于基础培养基BM（1/2MS或MS+ 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln + 0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0）上，27-29℃培养，光照强度＜1000 lux。3-10天即可萌发。
沙漠蔷薇无菌苗培养：将已萌发的沙漠蔷薇无菌苗种子在基础培养基BM中培养至植株高2-3cm，即可开始快繁。快繁方式为将沙漠蔷薇无菌苗去除根部，移入快繁培养基PM（MS + 0.1-0.5 mg/L IAA + 0.2-0.5 mg/L 6-BA + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln + 0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0），7-14d即可发生侧芽。待侧芽生长至1.5cm以上即可切下用于再次快繁或生根。培养过程温度控制在25℃-32℃，光照强度500-1500 lux。
沙漠蔷薇愈伤组织诱导：将沙漠蔷薇的叶片（或茎、根）剪成0.5-1cm长的小段，置于愈伤诱导培养基CIM（B5 + 1-2mg/L 2,4-D + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln + 0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0），26-32℃培养，光照强度＜1000 lux，7-14d即在切口边缘形成白色疏松的愈伤组织。
沙漠蔷薇愈伤组织继代：将诱导获得的沙漠蔷薇愈伤组织分成约0.5cm大小的小块，置于愈伤继代培养基CM1（B5 + 0.5-1 mg/L 2,4-D + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln +0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0），26-32℃培养，光照强度＜1000 lux，每7-10d继代一次。
沙漠蔷薇愈伤组织悬浮培养：选取质地疏松、颜色白色至浅黄色、生长速度快的沙漠蔷薇愈伤组织，按1g/10mL比例接入悬浮培养基CM2（B5 + 0.5-1 mg/L 2,4-D + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln + 0.2mg/L 水解乳蛋白，pH5.8-6.0），置于摇床100-115 rpm培养，温度保持26-32℃，按5-15g/100mL比例（湿重）每7-10d继代一次。生长速度3-4倍/7d。
沙漠蔷薇愈伤组织的一次性生物反应器培养：选取状态一致的已培养7d的悬浮培养材料，向5L一次性生物反应器中接入1000-1500 mL悬浮培养物和除菌处理的3500-4000mL 悬浮培养基CM2使终体积为5000 mL，振频为9.5次/min，通空气为0.1 m³/h，培养7d。继代时，将培养物接入新的一次性生物反应器，加入2-4倍体积的悬浮培养基CM2，振荡并通气培养，振荡频率范围为2-15次/min，通气量为0.05-0.3 m³/h。培养是在公开号为CN103224882A或CN204385208U的中国专利文献所披露的生物反应器中进行的，培养过程中反应器的振频为5-20次/min。
本发明主要解决了沙漠蔷薇繁殖速度慢，且常规培养条件生存、出愈困难等问题，主要的难点在于实现沙漠蔷薇悬浮细胞的规模化放大。
本发明公开的快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法与现有方案所不同的关键点在于：
（1）目前世界范围内几乎没有关于沙漠蔷薇无菌苗快繁的报道，在其它物种的愈伤培养条件下沙漠蔷薇不能存活或生长停滞。本专利获得了一种快速的沙漠蔷薇愈伤诱导方案，获得脱分化良好的愈伤组织仅需7-14d（多数植物愈伤组织诱导需要20-30天），进一步获得了稳定维持沙漠蔷薇愈伤组织生长的固体继代及悬浮培养方案。
（2）快速诱导获得沙漠蔷薇愈伤组织的方法（特定的温度范围下使用的沙漠蔷薇愈伤诱导及继代培养基）及一次性反应器技术规模化培养方案。
（3）本发明的方案可以在14d以内实现沙漠蔷薇细胞的迅速脱分化，愈伤诱导率高于90%。本发明愈伤培养策略使沙漠蔷薇细胞系保持快速、稳定的生长，能够实现5-200L一次性生物反应器培养。
附图说明
图1为: 快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法工艺流程图；
图2 沙漠蔷薇的种子和无菌苗；其中A是沙漠蔷薇的种子 B是沙漠蔷薇的无菌苗
图3 沙漠蔷薇愈伤诱导，其中A是愈伤化前的沙漠蔷薇叶片 B是沙漠蔷薇的愈伤组织；
图4沙漠蔷薇悬浮系细胞在CM1培养基中的生物量表现；
图5沙漠蔷薇悬浮细胞在生长过程中的比生长速率。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。沙漠蔷薇种子有市售，同时本发明所用原料及试剂均有市售。
实施例1：沙漠蔷薇的快繁和愈伤诱导
将沙漠蔷薇种子用常温水浸泡15min，剥除软质种皮，立刻置入4%次氯酸钠溶液消毒9min，无菌水洗涤4次，置于基础培养基BM（1/2MS + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln + 0.2mg/L水解乳蛋白，琼脂0.7 %，pH5.8）上，28℃培养，光照强度500 lux，5天已获得沙漠蔷薇无菌苗（图2）。
愈伤组织诱导：取无菌苗的叶片剪成0.5-1cm长的小段，置于愈伤诱导培养基CIM（B5 + 1-2mg/L 2,4-D + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln + 0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7%，pH5.9），28℃培养，光照强度500 lux，10d后，每一块叶片切口边缘均形成了白色疏松的愈伤组织（愈伤诱导率＞90%）。
实施例2：沙漠蔷薇的生长曲线
配制经激素筛选及优化后的CM2悬浮培养基（B5 + 0.5-1.0mg/L 2，4-D + 30g/L 蔗糖+0.1mg/L Gln + 0.2g/L 水解酪蛋白 pH5.8-6.0），装液量为 20mL/100mL，将培养至一个周期末的沙漠蔷薇细胞以40g/L（鲜重）浓度接入上述三角摇瓶中，26-32℃，106 rpm/min培养，分别在培养第0、2、4、6、8、11天检测鲜重、干重和折干率，制作出以下曲线，表明在一个生长周期内（7d）沙漠蔷薇的生物量可达3.5倍，一个生产周期应定为7-10天：
实施例3：沙漠蔷薇的5-200L扩大培养
小规模一次性反应器接种培养：选取状态一致的已培养7d的悬浮培养材料，向小号一次性生物反应器中接入1000 mL悬浮培养物和除菌处理的4000 mL 悬浮培养基CM2，在公开号为CN103224882A或CN204385208U的中国专利文献所披露的生物反应器中进行培养，振频为9.5次/min，通空气为0.1 m³/h，培养7d。
中等规模一次性反应器继代：向中号一次性生物反应器中接入3000 mL悬浮培养物，加入9000 mL除菌处理的悬浮培养基CM2，在公开号为CN103224882A或CN204385208U的中国专利文献所披露的生物反应器中进行培养，振频为9.5次/min，通空气为0.2 m³/h，培养7d。
大规模一次性反应器继代：向大号一次性生物反应器中接入25L悬浮培养物，加入75L除菌处理的悬浮培养基CM2，在公开号为CN103224882A或CN204385208U的中国专利文献所披露的生物反应器中进行培养，振频为5.5次/min，通空气为0.3 m³/h，通氧气（95%纯度）为0.06 m³/h培养8d。收获鲜细胞12kg。
实施例4
对比试验
Figure 719490DEST_PATH_IMAGE001
结论：本发明的方法获得脱分化良好的愈伤组织仅需7-14d（多数植物愈伤组织诱导需要20-30天），愈伤存活率＞90%。

Claims (2)

1.一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法，其特征在于按如下的步骤进行：
（1）沙漠蔷薇种子消毒：将沙漠蔷薇种子用常温水浸泡10-15min，剥除软质种皮，立刻置入4%次氯酸钠溶液消毒8-10min，无菌水洗涤4次，置于基础培养基BM上，27-29℃培养，光照强度＜1000 lux；所述的基础培养基BM指的是：1/2MS或MS+ 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln+ 0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0；
（2）沙漠蔷薇无菌苗培养：将已萌发的沙漠蔷薇无菌苗种子在基础培养基BM中培养至植株高2-3cm，开始快繁，快繁方式为将沙漠蔷薇无菌苗去除根部，移入快繁培养基PM，需要7-14d发生侧芽，待侧芽生长至1.5-2cm切下用于再次快繁或生根，培养过程温度控制在25℃-32℃，光照强度500-1500 lux；
所述的快繁培养基PM指的是：MS + 0.1-0.5 mg/L IAA + 0.2-0.5 mg/L 6-BA + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln + 0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0；
（3）沙漠蔷薇愈伤组织诱导：将沙漠蔷薇的叶片或茎、根剪成0.5-1cm长的小段，置于愈伤诱导培养基CIM，26-32℃培养，光照强度＜1000 lux，7-14d即在切口边缘形成白色疏松的愈伤组织；所述的愈伤诱导培养基CIM指的是B5 + 1-2mg/L 2,4-D + 30g/L蔗糖 +0.1mg/L Gln + 0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0；
（4）沙漠蔷薇愈伤组织继代：将诱导获得的沙漠蔷薇愈伤组织分成约0.5cm大小的小块，置于愈伤继代培养基CM1，26-32℃培养，光照强度＜1000 lux，每7-10d继代一次；所述的愈伤继代培养基CM1指的是：B5 + 0.5-1 mg/L 2,4-D + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln +0.2mg/L 水解乳蛋白，琼脂0.7-1.0%，pH5.8-6.0；
（5）沙漠蔷薇愈伤组织悬浮培养：选取质地疏松、颜色白色至浅黄色、生长速度快的沙漠蔷薇愈伤组织，按1g/10mL比例接入悬浮培养基CM2，置于摇床100-115 rpm培养，温度保持26-32℃，按5-15g/100mL比例，湿重，每7-10d继代一次，生长速度3-4倍/7d；
所述的悬浮培养基CM2指的是：B5 + 0.5-1 mg/L 2,4-D + 30g/L蔗糖 + 0.1mg/L Gln+ 0.2mg/L 水解乳蛋白，pH5.8-6.0；
（6）沙漠蔷薇愈伤组织的一次性生物反应器培养：选取状态一致的已培养7d的悬浮培养材料，向5L一次性生物反应器中接入1000-1500 mL悬浮培养物和除菌处理的3500-4000mL 悬浮培养基CM2使终体积为5000 mL，振频为9.5次/min，通空气为0.1 m³/h，培养7d；继代时，将培养物接入新的一次性生物反应器，加入2-4倍体积的悬浮培养基CM2，振荡并通气培养，振荡频率范围为2-15次/min，通气量为0.05-0.3 m³/h，培养过程中反应器的振频为5-20次/min。
2.权利要求1所述的培养方法在快速获得生长迅速、分散良好的沙漠蔷薇悬浮细胞系方面的应用。
CN202010254295.0A 2020-04-02 2020-04-02 一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法 Active CN111280063B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010254295.0A CN111280063B (zh) 2020-04-02 2020-04-02 一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010254295.0A CN111280063B (zh) 2020-04-02 2020-04-02 一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111280063A true CN111280063A (zh) 2020-06-16
CN111280063B CN111280063B (zh) 2023-09-05

Family

ID=71030429

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010254295.0A Active CN111280063B (zh) 2020-04-02 2020-04-02 一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111280063B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111887155A (zh) * 2020-06-29 2020-11-06 南京锦江园林景观有限公司 一种提高蔷薇属植物高效快速成苗的方法
CN114303944A (zh) * 2020-09-30 2022-04-12 伽蓝（集团）股份有限公司 细梗蔷薇愈伤组织培养基及提取物、制备方法和应用
CN114451094A (zh) * 2022-01-21 2022-05-10 中国科学院昆明植物研究所 促进蔷薇种子萌发的方法
CN115109739A (zh) * 2022-08-03 2022-09-27 肽源（广州）生物科技有限公司 一种快速高密度培养沙漠蔷薇悬浮细胞高产绿原酸的方法
CN115589946A (zh) * 2022-10-18 2023-01-13 安赛搏（重庆）生物技术有限公司（Cn） 一种沙漠蔷薇叶愈伤组织提取物的制备方法及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103858768A (zh) * 2014-04-01 2014-06-18 中国热带农业科学院海口实验站 一种鸡蛋花的组织培养方法
WO2016172998A1 (zh) * 2015-04-30 2016-11-03 南京博方生物科技有限公司 植物生物反应器及其使用方法
CN109588319A (zh) * 2019-02-01 2019-04-09 李凯凯 一种利用固定化黄芪细胞生产黄芪活性成分的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103858768A (zh) * 2014-04-01 2014-06-18 中国热带农业科学院海口实验站 一种鸡蛋花的组织培养方法
WO2016172998A1 (zh) * 2015-04-30 2016-11-03 南京博方生物科技有限公司 植物生物反应器及其使用方法
CN109588319A (zh) * 2019-02-01 2019-04-09 李凯凯 一种利用固定化黄芪细胞生产黄芪活性成分的方法

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘天颐等: "激素对沙漠玫瑰愈伤组织培养的影响", 《经济林研究》 *
张爽等: "沙漠玫瑰繁殖与盆栽管理技术", 《黑龙江农业科学》 *
曾智发等: "长春花组织培养研究进展", 《药学实践杂志》 *
柳成荫等: "植物细胞工程在农业生产中的应用", 《天津农业科学》 *
沈裕康: "药用植物组织和细胞培养技术研究进展(续)", 《中成药》 *
王亚珍: "植物细胞培养研究的最新进展", 《沈阳农业大学学报》 *
郝洪波: "沙漠玫瑰的生产栽培技术初探", 《南方农业(园林花卉版)》 *
高燕等: "印度萝芙木组织培养技术研究", 《热带农业科技》 *
黄勇等: "长春花的组织培养与快速繁殖", 《植物生理学通讯》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111887155A (zh) * 2020-06-29 2020-11-06 南京锦江园林景观有限公司 一种提高蔷薇属植物高效快速成苗的方法
CN114303944A (zh) * 2020-09-30 2022-04-12 伽蓝（集团）股份有限公司 细梗蔷薇愈伤组织培养基及提取物、制备方法和应用
CN114303944B (zh) * 2020-09-30 2023-08-11 伽蓝（集团）股份有限公司 细梗蔷薇愈伤组织培养基及提取物、制备方法和应用
CN114451094A (zh) * 2022-01-21 2022-05-10 中国科学院昆明植物研究所 促进蔷薇种子萌发的方法
CN115109739A (zh) * 2022-08-03 2022-09-27 肽源（广州）生物科技有限公司 一种快速高密度培养沙漠蔷薇悬浮细胞高产绿原酸的方法
CN115109739B (zh) * 2022-08-03 2023-10-27 肽源（广州）生物科技有限公司 一种快速高密度培养沙漠蔷薇悬浮细胞高产绿原酸的方法
CN115589946A (zh) * 2022-10-18 2023-01-13 安赛搏（重庆）生物技术有限公司（Cn） 一种沙漠蔷薇叶愈伤组织提取物的制备方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111280063B (zh) 2023-09-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111280063A (zh) 一种快速的沙漠蔷薇愈伤组织诱导和规模化悬浮培养方法
CN101647393B (zh) 毛花猕猴桃组培快速繁殖方法
CN103190347B (zh) 一种茶壶枣组织培养方法
CN107047320B (zh) 一种大花胡麻草组织培养方法
CN103380730B (zh) 一种杜梨组培快繁方法
CN102283129B (zh) 一种千层塔原叶体诱导和增殖方法
CN104106468B (zh) 一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法
CN106538382B (zh) 一种以幼穗为外植体建立假俭草高效再生体系的方法
CN102144543A (zh) 一项铁线莲阿拉贝拉组织培养快繁技术
CN102090341A (zh) 一种金线莲的快繁方法
CN102342246B (zh) 一种大白杜鹃组培快速繁殖方法
CN108040879B (zh) 一种黄花补血草生根诱导培养基和黄花补血草繁育方法
CN106613079A (zh) 一种半夏种茎生产方法
CN106962201B (zh) 一种吉祥草试管苗种质保存方法
CN103155869A (zh) 甜樱桃砧木Colt组织培养方法
CN112335549A (zh) 一种通过组织离体培养获得落叶松再生植株的方法
CN102119663A (zh) 一项铁线莲茱莉亚组织培养快繁技术
CN115606503B (zh) 一种紫菀的组织培养方法
CN100391333C (zh) 安祖花无菌苗组织培养和试管苗炼苗移栽方法
CN115245131B (zh) 一种扁果枸杞组织培养再生体系的构建方法
CN109349108A (zh) 一种甜荞体细胞胚胎发生与植株再生方法
KR101881305B1 (ko) 지황 기내 배양묘 및 종근 생산용 배지 조성물 및 이를 이용한 지황의 대량 생산방법
CN115152629A (zh) 一种树莓组织培养方法
CN104285816A (zh) 一种文冠果的组织培养快繁方法
CN107667858A (zh) 一种土人参离体组培快繁方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant