CN107667858A - 一种土人参离体组培快繁方法 - Google Patents

一种土人参离体组培快繁方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种土人参离体组培快繁方法，特征是一年生草本，高可达70 厘米。主根粗壮，土黄色。茎基部稍木质化。叶互生，肉质有光泽，倒卵形或倒卵状长椭圆形，全缘。夏季开花，圆锥花序顶生和侧生，花小，淡紫红色。蒴果圆球形，熟时灰褐色，开裂成3瓣。种子细小，黑色。秋季采根，洗净，除去须根，刮去表皮，蒸熟晒干。生长在我国大部份省区，多生于园林，村庄或空旷阴湿之处，多为栽培。本发明以土人参种子为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖、分化、生根、炼苗移栽等过程成功获得了土人参离体再植株，建立土人参组织培养快速繁殖技术体系，为节约栽培生产中的用种量，提高产量。具良好的生态效益、经济效益和社会效益。

Description

一种土人参离体组培快繁方法
技术领域
本发明属于培育技术领域，具体地说，涉及一种土人参离体组培快繁方法。
背景技术
土人参又名：假参、土红参、沙参、桃参、灯参、飞来参。特征是：一年生草本，高可达70 厘米。主根粗壮，土黄色。茎基部稍木质化。叶互生，肉质有光泽，倒卵形或倒卵状长椭圆形，全缘。夏季开花，圆锥花序顶生和侧生，花小，淡紫红色。蒴果圆球形，熟时灰褐色，开裂成3瓣。种子细小，黑色。秋季采根，洗净，除去须根，刮去表皮，蒸熟晒干。生长在我国大部份省区，多生于园林，村庄或空旷阴湿之处，多为栽培。土人参味甘，性平、无毒。具有补中益气，润肺生津，凉血消肿。近年来人们滥采毛挖，资源不断减小。 为此，必须研制出一种行之有效的保种保源方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以土人参种子为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖、分化、生根、炼苗移栽等过程成功获得土人参离体再植株，建立土人参组织培养快速繁殖技术体系，设备简单，操作容易，见效快，繁育的树苗粗壮，成活率高的具良好的生态效益、经济效益和社会效益的一种土人参离体组培快繁方法。
本发明的技术方案是采用如下步骤方法：
（1）无菌苗的获得：选取饱满的土人参种子,用75%酒精消毒60s，再用0.1%升汞溶液消毒12min，最后用无菌水漂洗3次，用无菌滤纸吸干表面水分后接种到种子萌发培养基中，接种后每天光照21小时，光照强度为2100lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为75%的条件下培养18天后统计萌发率，萌发培养基为：1/2MS+0.03mg/LNAA+28g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
（2）愈伤诱导：当无菌苗的子叶刚展开时,取无菌苗的茎尖作为外植体,用解剖刀切成0.4cm左右长度,接种于用于愈伤诱导的培养基中培养，接种后每天光照12小时，光照强度为2100lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为70%的条件下培养28天后统计诱导率；愈伤诱导培养基为：MS+5.0mg/L6-BA+0.8mg/LNAA+1.2mg/L KT+30g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到的愈伤组织切割成0.4cm3大小的小块并转入增殖培养基进行扩繁，接种后每天光照13小时，光照强度为3200lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为70%的条件下培养28天后统计增殖情况；增殖培养基为：MS+1.8mg/L6-BA+0.4mg/L NAA+28g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
（4）分化培养：将步骤（3）增殖得到的愈伤组织切割成0.4cm3大小的小块并转入分化培养基诱导不定芽的产生，接种后每天光照12小时，光照强度为3200lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为70%的条件下培养28天后统计分化情况；分化培养基为：MS+1.1mg/LKT+2.1mg/LNAA+28g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂，pH为5.8；
（5）生根培养：将步骤（4）分化得到不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根，接种后每天光照12小时，光照强度为3200lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为70%的条件下培养28天后统计生根情况；生根培养基为：1/2MS+1.1mg/LIBA+0.6mg/L NAA+1.1%活性炭+28g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
（6）炼苗移栽：生根28天后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应，8天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:3:1组成的基质中，用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,15天将薄膜揭去,然后室外培养,隔天浇一次水,移栽28天后统计成活率。
本发明的优点是：以土人参种子为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖、分化、生根、炼苗移栽等过程成功获得了土人参离体再植株，建立土人参组织培养快速繁殖技术体系，为节约栽培生产中的用种量，提高其药材的产量提供了一条行之有效的途径。具良好的生态效益、经济效益和社会效益。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1 ：
（1）无菌苗的获得：选取饱满的土人参种子,在超净工作台中用手术剪刀剥去种皮，用75%酒精消毒30s,再0.1%升汞溶液消毒10min,最后用无菌水漂洗5次，用无菌滤纸吸干表面水分后接种到种子萌发培养基中。接种后置于每天光照23小时，光照强度为1100lx，置于培养温度为22℃，空气相对湿度为70%的条件下培养20天后萌发率达到96%。所述的萌发培养基为：1/2MS+0.04mg/L NAA+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.5。
（2）愈伤诱导：当无菌苗的子叶刚展开时,取无菌苗的茎尖作为外植体,用解剖刀切成0.4cm左右长度,接种于用于愈伤诱导的培养基中培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为1100lx，置于培养温度为22℃，空气相对湿度为70%的条件下培养28天后诱导率达到92%。愈伤诱导培养基为：MS+1.8mg/L 6-BA+0.33mg/LNAA+0.9mg/L KT+25g/L蔗糖+4.7g/L琼脂，pH为5.6。
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到的愈伤组织切割成0.4cm3大小的小块并转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照11小时，光照强度为2100lx，置于培养温度为22℃，空气相对湿度为70%的条件下培养30天后增殖倍数达到4.5倍。增殖培养基为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.34mg/L NAA+19g/L蔗糖+3.8g/L琼脂，pH为5.6。
（4）分化培养：将步骤（3）增殖得到的愈伤组织切割成0.4cm3大小的小块并转入分化培养基诱导不定芽的产生。接种后置于每天光照10小时，光照强度为2100lx，置于培养温度为22℃，空气相对湿度为70%的条件下培养30天后分化率达到92%，平均不定芽数为4.6个。分化培养基为：MS+0.9mg/LKT+1.5mg/L NAA+32g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.6。
（5）生根培养：将步骤（4）分化得到不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照10小时，光照强度为2100lx，置于培养温度为22℃，空气相对湿度为70%的条件下培养30天后生根率93%。生根培养基为：1/2MS+0.9mg/L IBA+0.3mg/LNAA+0.5%活性炭+12g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.6。
（6）炼苗移栽：生根28天后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应，5天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到基质由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:3:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,10天将薄膜揭去,然后置于室外培养,隔天浇一次水,移栽30天后成活率达到92%以上。
实施例2：
（1）无菌苗的获得：选取饱满的土人参种子,在超净工作台中用手术剪刀剥去种皮，用75%酒精消毒42s,再0.2%升汞溶液消毒10min,最后用无菌水漂洗5次，用无菌滤纸吸干表面水分后接种到种子萌发培养基中。接种后置于每天光照23小时，光照强度为1500lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为70%的条件下培养20天后萌发率达到100%。萌发培养基为：1/2MS+0.05mg/L NAA+18g/L蔗糖+3.8g/L琼脂，pH为5.6。
（2）愈伤诱导：当无菌苗的子叶刚展开时,取无菌苗的茎尖作为外植体,用解剖刀切成0.6cm左右长度,接种于用于愈伤诱导的培养基中培养。接种后置于每天光照10小时，光照强度为1200lx，置于培养温度为23℃，空气相对湿度为70%的条件下培养31天后诱导率达到90%。愈伤诱导培养基为：MS+2.0mg/L 6-BA+0.9mg/LNAA+1.6mg/L KT+28g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.6。
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到的愈伤组织切割成0.6cm3大小的小块并转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照11小时，光照强度为2400lx，置于培养温度为23℃，空气相对湿度为70%的条件下培养31天后增殖倍数达到5.0倍。增殖培养基为：MS+1.8mg/L 6-BA+0.8mg/L NAA+26g/L蔗糖+4.8g/L琼脂，pH为5.8。
（4）分化培养：将步骤（3）增殖得到的愈伤组织切割成0.6cm3大小的小块并转入分化培养基诱导不定芽的产生。接种后置于每天光照11小时，光照强度为2300lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为70%的条件下培养31天后分化率达到93%，平均不定芽数为5个。分化培养基为：MS+1.1mg/LKT+1.6mg/L NAA+26g/L蔗糖+5.2g/L琼脂，pH为5.6。
（5）生根培养：将步骤（4）分化得到不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2900lx，置于培养温度为26℃，空气相对湿度为70%的条件下培养31天后生根率95.2%。生根培养基为：1/2MS+1.1mg/L IBA+0.5mg/L NAA+0.6%活性炭+16g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.6。
（6）炼苗移栽：生根26天后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应,5天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:3:1组成的基质中。用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,10天将薄膜揭去,然后置于室外培养,隔天浇一次水,移栽26天后成活率达到95%。

Claims (1)

1.一种土人参离体组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）无菌苗的获得：选取饱满的土人参种子,用75%酒精消毒60s，再用0.1%升汞溶液消毒12min，最后用无菌水漂洗3次，用无菌滤纸吸干表面水分后接种到种子萌发培养基中，接种后每天光照21小时，光照强度为2100lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为75%的条件下培养18天后统计萌发率，萌发培养基为：1/2MS+0.03mg/LNAA+28g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
（2）愈伤诱导：当无菌苗的子叶刚展开时,取无菌苗的茎尖作为外植体,用解剖刀切成0.4cm左右长度,接种于用于愈伤诱导的培养基中培养，接种后每天光照12小时，光照强度为2100lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为70%的条件下培养28天后统计诱导率；愈伤诱导培养基为：MS+5.0mg/L6-BA+0.8mg/LNAA+1.2mg/L KT+30g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
（3）增殖培养：将步骤（2）诱导得到的愈伤组织切割成0.4cm3大小的小块并转入增殖培养基进行扩繁，接种后每天光照13小时，光照强度为3200lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为70%的条件下培养28天后统计增殖情况；增殖培养基为：MS+1.8mg/L6-BA+0.4mg/L NAA+28g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
（4）分化培养：将步骤（3）增殖得到的愈伤组织切割成0.4cm3大小的小块并转入分化培养基诱导不定芽的产生，接种后每天光照12小时，光照强度为3200lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为70%的条件下培养28天后统计分化情况；分化培养基为：MS+1.1mg/LKT+2.1mg/LNAA+28g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂，pH为5.8；
（5）生根培养：将步骤（4）分化得到不定芽从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根，接种后每天光照12小时，光照强度为3200lx，培养温度为21℃，空气相对湿度为70%的条件下培养28天后统计生根情况；生根培养基为：1/2MS+1.1mg/LIBA+0.6mg/L NAA+1.1%活性炭+28g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
（6）炼苗移栽：生根28天后,打开其瓶口,并灌入无菌水,以保证其水分供应，8天后取出生根苗洗净根上所带培养基,移栽到由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:3:1组成的基质中，用留有透气孔的薄膜覆盖,放置在阴凉透气的室内,15天将薄膜揭去,然后室外培养,隔天浇一次水,移栽28天后统计成活率。
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