CN102090341A - 一种金线莲的快繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种金线莲的快繁方法，包括种苗消毒、芽诱导、芽增殖、幼苗培养、根诱导、试管苗移栽，所述芽增殖的培养基为：去除肌醇的MS+ZnSO₄·7H₂O6mg/L+KH₂PO₄180mg/L+6-BA4mg/L+NAA1mg/L+2%蔗糖。本发明以筛选金线莲诱导、增殖、幼苗培养和根诱导培养基为目的，达到优化培养、除去肌醇，节约成本的目的。同时突破传统的幼苗土培方式，采用流动循环式溶液培养，有利于金线莲生长发育，适合组培苗驯化移栽。

Description

一种金线莲的快繁方法

技术领域

本发明涉及一种金线莲的快繁方法。

背景技术

金线莲（Anoectochilus. roxburghii (Wall.) Lindl.）自古以来就是民间使用的珍贵药材，对治疗小儿惊风、高热、百日咳等有奇效。现代医学研究认为：野生、栽培或组培的金线莲具有强心、止痛和降血糖等功效，对于高血压、肿瘤有一定的疗效。兼具赏叶、观花之功用，是观赏价值极高的花卉珍品。

金线莲为典型的阴性植物，生长在阴蔽的阔叶林下，肥沃腐殖土中，对空气、温度、光照、积温等生态条件要求严格。由于金线莲属的植物种子不具胚乳，无发芽能力，只有在与真菌共生条件下，才能促使其种子萌发生长，因此金线莲的种子发芽率很低。长期以来，对金线莲的有性繁殖均未取得突破性进展。近年来，随着金线莲赖以生存的自然环境发生了变化，野生资源锐减，加上人为的大量采挖，现已濒临灭绝。

由于组织培养具有环境因子可人工控制，繁殖周期短、速度快，可周年进行生产，节省生产材料，同时还具有保持植物原有优良性状等优势，所以被广泛采用于很多植物种苗的工厂化繁育，取得了巨大的的经济效益。经过多年的组织培养实践，金线莲组培快繁技术日趋成熟，但是在快繁过程中仍存在着一些影响快繁的突出问题：（1）金线莲丛生芽诱导、增殖、幼苗培养与生根所使用的基本培养基（MS）仍需进一步改良。（2）金线莲试管苗移植栽培技术仍然深受传统的人工栽培技术的影响。这势必给金线莲苗健壮生长、快速繁殖、简化栽培管理、降低生产成本等生产技术环节的改良、发展带来一定困难与局限性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种金线莲的快繁方法。

本发明的金线莲的快繁方法，包括种苗消毒、芽诱导、芽增殖、幼苗培养、根诱导、试管苗移栽，其中所述芽增殖的培养基为：去除肌醇的MS+ ZnSO4·7H₂O

6mg/L+KH₂PO₄180mg/L+6-BA4mg/L+ NAA1mg/L+2%蔗糖；所述幼苗培养的培养基为：去除肌醇的MS+ZnSO₄·7H₂O3mg/L +KH₂PO₄280mg/L+NAA 0.6mg/L+4%蔗糖，pH5-6；所述根诱导的培养基为：

MS+ ZnSO₄·7H₂O 3mg/L+KH₂PO4 280mg/L+IBA0.6mg/L+4%蔗糖+0.2%活性碳；所述试管苗移栽采用流动循环式溶液培养。

所述流动循环式溶液培养的具体步骤如下：

（1）取茎段粗壮，高3~3.5cm的试管苗进行移栽；

（2）移栽前先打开瓶塞炼苗10d，然后将试管苗从培养瓶取出，洗净附着其上的固体培养基后，放入400倍多菌灵稀释液中，消毒5-7min；

（3）将上述消毒后的试管苗固定在泡沫板上，株间距8′8 cm；

（4）向培养槽中注入稀释4倍浓度的MS培养基，pH值5.4~6.5，初始水位达5-6 cm，根据每天蒸发情况，及时补充无菌水；

（5）将固定有试管苗的泡沫板置于培养槽中培养，培养条件：温度20~25℃，湿度75~85%，光照强度2600~800 lx； 

（6）培养30天左右，叶面追施叶面肥，叶面喷雾，以叶面滴水为度，根据金线莲苗的生长情况，适时叶面追肥，时间每隔半个月一次。

针对影响组培快繁中的突出问题，本发明以筛选金线莲诱导、增殖、幼苗培养和根诱导培养基为目的，把简化培养基的成分，优化激素的种类、配比和浓度做为研究的重点，运用正交试验设计和完全随机区组试验设计，达到优化培养、除去肌醇，节约成本的目的。同时突破传统的幼苗土培方式，采用流动循环式溶液培养，克服了土培金线莲土壤水分不易控制、根系不发达、缓苗时间长、幼苗生长慢的缺点，流动循环式溶液培养有利于金线莲生长发育，适合组培苗驯化移栽，其植株生长健壮，叶片较大生长旺盛且为墨绿色，有光泽，最大的叶片宽幅可达2.1cm。由于营养液流动，便于水气交流，营养均衡，特别能促进根部生长，单株平均鲜生高达2.29g，比同期土培重0.37g，从株高、新叶数、发根率、鲜质量等生物量指标来看，都明显优于传统土培栽培方式，而且易于进行人工操作管理。

附图说明

图1为不同栽培方式对移栽组培苗生长的影响。

具体实施方式

1、消毒

选择生长健壮的野生金线莲或人工栽培的金线莲植株，用流动水将植株洗净，去掉根、叶，再用小刀把叶鞘及顶芽外叶削掉，注意不要伤及腋芽，再用肥皂水振荡1-2min，洗去肥皂水后，用无菌水冲洗一遍，用70-75%乙醇浸泡1-2min，再放入1-2%氯化汞溶液中浸泡5-10min，之后用无菌水冲洗4~5遍备用。

2、接种

将消毒好的材料切成带1~2个腋芽的茎段，接到芽诱导培养基上1/2MS+6-BA 5mg/L + NAA 2mg/L+ZT 0.1mg/L +琼脂 0.65g/L+4%蔗糖，pH5-6。

3、培养

在金线莲的芽诱导培养过程中，培养温度控制在23-25⁰C，光照度为500~600lx。 

4、芽增殖

将诱导芽接种到芽增殖培养基上，进行暗培养，培养温度20-22⁰C，所述芽增殖培养基为：MS（去除肌醇）+ZnSO₄·7H₂O3mg/L+KH₂PO₄180mg/L+6-BA2mg/L+ NAA1mg/L+4%蔗糖，pH5-6；接种20 d后侧芽开始萌动。在芽体器官分化的同时，继续大量增殖新芽，40 d后每个外植体大约可以分化出15-20个茎高1-2cm的新芽，扩繁迅速，生长密集。

5、幼苗培养

芽增殖培养3个月左右长出幼苗，选择有2-3个叶片、高约3-4cm的生长良好的小苗，接在幼苗培养基上，每个培养基上接2-3株，进行光培养，每天光照12h，光照强度为500-600 lx，温度控制在20-22⁰C；所述幼苗培养基为：MS（去除肌醇）+ZnSO₄·7H₂O3mg/L +KH₂PO₄280mg/L+NAA 0.6mg/L+4%蔗糖，pH5-6。

6、根诱导

幼苗培养3个月左右可转入生根培养基（MS+ ZnSO₄·7H₂O 3mg/L+

KH₂PO4 280mg/L+IBA0.6mg/L+4%蔗糖+0.2%活性碳），每天光照10-12 h，光照强度1200~1500lx，温度控制在20-22⁰C；培养10 d后开始生根，根从靠近培养基的每个节长出1-2条，呈肉质状，根比较短且不分枝，其上有细密、乳白色的根毛，培养50 d左右，植株长至4-5cm，叶色暗绿，根系发育完好时可进行室外移栽。

7、金线莲流动循环式溶液培养

（1）取茎段粗壮，长势好，高约3~3.5cm，适宜移植的试管苗；

（2）移栽前先打开瓶塞炼苗10d，然后将试管苗从培养瓶取出，洗净附着其上的固体培养基后，放入400倍多菌灵稀释液中，消毒5-7min；

（3）将上述消毒后的试管苗用软性海绵固定在泡沫板（100′60 ′2.5cm ）上，株间距（8′8 cm）；

（4）向培养槽（105′65 ′10cm）中注入稀释4倍浓度的常用培养基MS，pH值5.4~6.5，初始水位达5-6 cm左右，根据每天蒸发情况，每天及时补充无菌水；

（5）将固定有试管苗的泡沫板置于培养槽中培养，培养条件：温度20~25℃，湿度75~85%，光照强度2600~800 lx； 

（6）培养30天左右，叶面追施叶面肥（0.6%尿素（w/w）+0.2%磷酸二氢钾液（w/w）），叶面喷雾，以叶面滴水为度，根据金线莲苗的生长情况，适时叶面追肥，时间每隔半个月一次。

8、不同栽培方式对金线莲生长的影响

比较不同栽培方式对金线莲生长的影响，如表1和图1所示，采用本发明的金线莲快繁方法，其植株生长健壮，根系粗壮，叶片较大生长旺盛且为墨绿色，有光泽，最大的叶片宽幅可达2.1cm。由于营养液流动，便于水气交流，营养均衡，特别能促进根部生长，单株平均鲜生高达2.29g，比同期土培重0.37g，从株高、新叶数、发根率、鲜质量等生物量指标来看，都明显优于传统土培栽培方式，而且易于进行人工操作管理。

表1不同栽培方式对金线莲生长的影响

Claims (5)

1.一种金线莲的快繁方法，包括种苗消毒、芽诱导、芽增殖、幼苗培养、根诱导、试管苗移栽，其特征在于：所述芽增殖的培养基为：去除肌醇的MS+ ZnSO4·7H₂O

6mg/L+KH₂PO₄180mg/L+6-BA4mg/L+ NAA1mg/L+2%蔗糖。

2.根据权利要求1所述的金线莲的快繁方法，其特征在于：所述幼苗培养的培养基为：去除肌醇的MS+ZnSO₄·7H₂O3mg/L +KH₂PO₄280mg/L+NAA 0.6mg/L+4%蔗糖，pH5-6。

3.根据权利要求1或2所述的金线莲的快繁方法，其特征在于：所述根诱导的培养基为：

MS+ ZnSO₄·7H₂O 3mg/L+KH₂PO4 280mg/L+IBA0.6mg/L+4%蔗糖+0.2%活性碳。

4.根据权利要求1、2或3所述的金线莲的快繁方法，其特征在于：所述试管苗移栽采用流动循环式溶液培养。

5.根据权利要求4所述的金线莲的快繁方法，其特征在于：所述流动循环式溶液培养的具体步骤如下：

（1）取茎段粗壮，高3~3.5cm的试管苗进行移栽；

（2）移栽前先打开瓶塞炼苗10d，然后将试管苗从培养瓶取出，洗净附着其上的固体培养基后，放入400倍多菌灵稀释液中，消毒5-7min；

（3）将上述消毒后的试管苗固定在泡沫板上，株间距8′8 cm；

（4）向培养槽中注入稀释4倍浓度的MS培养基，pH值5.4~6.5，初始水位达5-6 cm，根据每天蒸发情况，及时补充无菌水；

（5）将固定有试管苗的泡沫板置于培养槽中培养，培养条件：温度20~25℃，湿度75~85%，光照强度2600~800 lx； 

（6）培养30天左右，叶面追施叶面肥，叶面喷雾，以叶面滴水为度，根据金线莲苗的生长情况，适时叶面追肥，时间每隔半个月一次。