CN111166712A - 一种无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，包括质量分数在0.1％至0.5％的脱羧肌肽、3％至10％的可溶性茯苓多糖、不超过1.5％花椒提取物、以及不超过1％的连翘提取物，余量为芽孢杆菌发酵液。本发明由于采用芽孢杆菌天然发酵制备的发酵液作为基底，可在不添加增稠剂、化学抑菌剂的情况下保持较长时间的保持多肽、淄醇、维生素等有效成分不被氧化分解，同时其pH值适合皮肤微环境，添加脱羧肌肽和可溶性茯苓多糖，使得皮肤表面处于还原性条件下皮肤免疫细胞受到双向调节，综合以上效果使得菌群失调的皮肤表面微环境趋向于菌群平衡，能修护皮肤表面微环境。

Description

一种无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液
技术领域
本发明属于日用化工领域，更具体地，涉及一种无增稠剂皮肤表面微环境维护预制液。
背景技术
皮肤表面微生态是指，由皮肤表面微生物与皮肤、皮肤分泌物以及外界环境相互作用而取得平衡状态的生态系统。皮肤表面微生物包括细菌、真菌、病毒、螨虫，皮肤包括角质层、真皮层等细胞组织、皮肤分泌物包括汗液油脂等，外界环境包括空气、清洗习惯、皮肤涂抹的外用化妆品等。
皮肤表面的微生态对皮肤表层安全和健康起到重要作用。如果皮肤表面为生态失衡，则会导致粉刺、痤疮、角质层变薄、毛细血管增生、皮肤瘙痒、干燥、表皮脱落等多种问题。
目前由于外部环境的剧烈变化，如紫外线、空气干燥、污染物等因素影响，同时大部分女性有使用护肤品或化妆品的习惯，因此皮肤表面的化学构成遭到破坏。尤其是化妆品、护肤品中其预制基底几乎必须使用的防腐剂、增稠剂、抗菌剂，导致皮肤表面微生态系统遭到持续性破坏，难以修复。
发明内容
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种无增稠剂皮肤表面微环境维护预制液，其目的在于通过酵母菌多肽和芽孢杆菌发酵液为基底，作为化妆品预制液，能较长时间的保持多肽、淄醇、维生素等有效成分不被氧化分解，同时为皮肤表面提供稳定的利于菌群平衡的外界环境，改善皮肤表面微生物群分布，从而修复皮肤表面微生态，由此解决现有技术化妆品基底持续性破坏皮肤表面生态，损害皮肤健康的技术问题。
为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其包括质量分数在0.1％至0.5％的脱羧肌肽、3％至10％的可溶性茯苓多糖、不超过1.5％花椒提取物、以及不超过1％的连翘提取物，余量为芽孢杆菌发酵液。
优选地，所述无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其所述芽孢杆菌发酵液，pH值在4.5至5.0之间，其含有分子量在1200kDa以上的聚γ-谷氨酸40g/L以上。
优选地，所述无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其所述芽孢杆菌发酵液pH值为4.8。
优选地，所述无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其所述芽孢杆菌发酵液其制备方法如下：
(1)将活化后的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02菌种种子液加入按照体积比例5％接种量，接入培养基进行培养，所述培养基包括：75-80g/L甘油，15-20g/L柠檬酸钠，20-25g/L谷氨酸钠，8g/L氯化铵，0.5g/L磷酸氢二钾，0.15g/L氯化钙，0.5g/L硫酸镁，0.04g/L氯化铁，0.04g/L硫酸锰；
(2)在发酵8h后，开始以0.25g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液至发酵结束，其中硝酸钠溶液浓度为50g/L：开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.02g/L；发酵48h结束，聚γ-谷氨酸钠产量为40g/L以上；
(3)将步骤(2)中获得的发酵产物，过滤后取滤液高温灭菌，加入盐酸和/或硝酸调节pH值在4.0至5.0之间。
优选地，所述无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其所述可溶性茯苓多糖，按照如下方法制备：
第一步：将干燥过的茯苓菌核进行粉碎过80或100目筛，得到粒度均匀的茯苓粉；
第二步：将第一步获得的茯苓粉以60Co-γ为辐照源，对其进行辐照，辐照剂量为9kGy～27kGy；
第三步：以辐照后的茯苓粉作为羧甲基化反应底物，加入乙醇溶液进行溶胀；所述乙醇溶液浓度为85％，溶胀料液比为酒精溶液与茯苓粉的料液比在5～7∶1之间；
第四步：溶胀后加入氢氧化钠进行碱化反应，反应结束后，冷却；碱化反应中所述的氢氧化钠加入的量为茯苓粉质量的0.3～0.4倍；加入氢氧化钠之后进行搅拌，碱化反应0.5～1h，反应温度为40～60℃；反应结束后，应进行冷却，冷却至温度10～30℃；
第五步：加入氯乙酸和过量的氢氧化钠与茯苓全粉进行羧甲基化反应，得到所述取代度在0.69至0.73的羧甲基茯苓多糖。具体地，羧甲基化反应中所述氯乙酸的加入量为茯苓粉质量的0.8～1.2倍，使茯苓粉和氯乙酸在过量的氢氧化钠下进行醚化反应3～4h，反应温度为50～70℃，反应完毕后，用冰乙酸调至pH至5.0～6.0，用体积分数80～90％的乙醇洗涤3～5次，除去多余氯离子，并洗至白色或淡黄色，在50℃温度条件下干燥。
优选地，所述无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其所述花椒提取物，为花椒Zanthoxylum bungeanum Maxim.的成熟果皮的水提物。
优选地，所述无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其所述花椒提取物质量分数在0.5％至1.5％。
优选地，所述无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其所述连翘提取物为，为连翘Forsythia suspensa的碱醇法提取物。
优选地，所述无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其所述连翘提取物质量分数在0.5％至1％。
按照本发明的另一个方面提供了一种本发明提供的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液的应用，其应用于具有皮肤表面微生态修护作用的化妆品、药品的制备。
总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，由于采用芽孢杆菌天然发酵制备的发酵液作为基底，可在不添加增稠剂、化学抑菌剂的情况下保持较长时间的保持多肽、淄醇、维生素等有效成分不被氧化分解，同时其pH值适合皮肤微环境，添加脱羧肌肽和可溶性茯苓多糖，使得皮肤表面处于还原性条件下皮肤免疫细胞受到双向调节，综合以上效果使得菌群失调的皮肤表面微环境趋向于菌群平衡，能修护皮肤表面微环境。优选技术方案，采用花椒提取物和连翘提取物协同形成的抑菌体系，能在不影响皮肤表面微生态的前提下，更长时间的保持化妆皮有效成分的活性。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
本发明提供的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，包括质量分数在0.1％至0.5％的脱羧肌肽、3％至10％的可溶性茯苓多糖、不超过1.5％优选为0.5％至1.5％花椒提取物、以及不超过1％优选为0.5％至1％的连翘提取物，余量为芽孢杆菌发酵液；
所述芽孢杆菌发酵液，pH值在4.5至5.0之间，优选pH值为4.8，其含有分子量在1200kDa以上的聚γ-谷氨酸40g/L以上，其制备方法如下：
(1)将活化后的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02菌种(于2008年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M208065)种子液加入按照体积比例5％接种量，接入培养基进行培养，所述培养基包括：75-80g/L甘油，15-20(18.4)g/L柠檬酸钠，20-25(23)g/L谷氨酸钠，8g/L氯化铵，0.5g/L磷酸氢二钾，0.15g/L氯化钙，0.5g/L硫酸镁，0.04g/L氯化铁，0.04g/L硫酸锰；
(2)在发酵8h后，开始以0.25g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液至发酵结束，其中硝酸钠溶液浓度为50g/L。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.02g/L。发酵48h结束，聚γ-谷氨酸钠产量为40g/L以上。
(3)将步骤(2)中获得的发酵产物，过滤后取滤液高温灭菌，加入盐酸和/或硝酸调节pH值在4.0至5.0之间。
所述脱羧肌肽，具有显著的抗氧化作用，为皮肤表面提供持续的还原环境。
所述可溶性茯苓多糖，在还原环境下表现出对皮肤表面朗格汉斯细胞的活性具有双向调节作用，按照如下方法制备：
第一步：将干燥过的茯苓菌核进行粉碎过80或100目筛，得到粒度均匀的茯苓粉；
第二步：将第一步获得的茯苓粉以60Co-γ为辐照源，对其进行辐照，辐照剂量为9kGy～27kGy；
第三步：以辐照后的茯苓粉作为羧甲基化反应底物，加入乙醇溶液进行溶胀；所述乙醇溶液浓度为85％，溶胀料液比为酒精溶液与茯苓粉的料液比在5～7∶1之间。
第四步：溶胀后加入氢氧化钠进行碱化反应，反应结束后，冷却；碱化反应中所述的氢氧化钠加入的量为茯苓粉质量的0.3～0.4倍；加入氢氧化钠之后进行搅拌，碱化反应0.5～1h，反应温度为40～60℃；反应结束后，应进行冷却，冷却至温度10～30℃；
第五步：加入氯乙酸和过量的氢氧化钠与茯苓全粉进行羧甲基化反应，得到所述取代度在0.69至0.73的羧甲基茯苓多糖。具体地，羧甲基化反应中所述氯乙酸的加入量为茯苓粉质量的0.8～1.2倍，使茯苓粉和氯乙酸在过量的氢氧化钠下进行醚化反应3～4h，反应温度为50～70℃，反应完毕后，用冰乙酸调至pH至5.0～6.0，用体积分数80～90％的乙醇洗涤3～5次，除去多余氯离子，并洗至白色或淡黄色，在50℃温度条件下干燥。
所述花椒提取物，为花椒Zanthoxylum bungeanum Maxim.的成熟果皮的水提物；所述连翘提取物为，为连翘Forsythia suspensa的碱醇法提取物。所述花椒提取物与所述连翘提取物组成仿佛体系，对细菌有一定的抑制作用，然而其不以使得细菌蛋白变性为机理一直细菌，对皮肤表面蛋白构成的微环境平衡，几乎没有影响。
本发明提供的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，由于芽孢杆菌的大量存在，因此抑制了其发酵液中其他微生物的繁殖，为预制液提供了抗菌能力，因此在使用花椒、连翘提取物作为抗菌剂和防腐剂的条件下仍能维持最终化妆品有效成分较长时间内的品质不至于变质，减小了对皮肤表面蛋白质构成的微环境的影响。当所述芽孢杆菌发酵液pH值在4.0至5.0之间时，脱羧肌肽具有良好的抗氧化性能，提供稳定的还原环境，帮助护肤活性成分稳定。在芽孢杆菌发酵液的的及脱羧肌肽的提供的还原性酸性环境下，可溶性茯苓多糖，发挥提高皮肤的免疫能力，其影响朗格汉斯细胞的活性，可以双向调节皮肤表面的菌相，趋近于健康皮肤表面的菌群分布，从而修护皮肤表面的微生态环境，适合长期使用。
本发明提供的混合物，由于其良好的抑菌性能和粘稠度，不需要添加化学合成的抑菌剂、增稠剂，即可作为护肤品基底使用，同时其能修护皮肤表面的为生态环境，从而帮助有效成分发挥护肤功效，是一种理想的化妆品预制液。
以下为实施例：
实施例中所述芽孢杆菌发酵液的制备方法如下：
(1)将活化后的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02菌种(于2008年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M208065)种子液加入按照体积比例5％接种量，接入培养基进行培养，所述培养基包括：75-80g/L甘油，15-20(18.4)g/L柠檬酸钠，20-25(23)g/L谷氨酸钠，8g/L氯化铵，0.5g/L磷酸氢二钾，0.15g/L氯化钙，0.5g/L硫酸镁，0.04g/L氯化铁，0.04g/L硫酸锰；地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02；
(2)在发酵8h后，开始以0.25g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液至发酵结束，其中硝酸钠溶液浓度为50g/L。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.02g/L。发酵48h结束，聚γ-谷氨酸钠产量为40g/L以上。
(3)将步骤(2)中获得的发酵产物，过滤后取滤液高温灭菌，加入盐酸和/或硝酸调节pH值在4.0至5.0之间。
所述可溶性茯苓多糖按照如下方法制备：
第一步：将干燥过的茯苓菌核进行粉碎过80或100目筛，得到粒度均匀的茯苓粉；
第二步：将第一步获得的茯苓粉以60Co-γ为辐照源，对其进行辐照，辐照剂量为9kGy～27kGy；
第三步：以辐照后的茯苓粉作为羧甲基化反应底物，加入乙醇溶液进行溶胀；所述乙醇溶液浓度为85％，溶胀料液比为酒精溶液与茯苓粉的料液比在5～7∶1之间。
第四步：溶胀后加入氢氧化钠进行碱化反应，反应结束后，冷却；碱化反应中所述的氢氧化钠加入的量为茯苓粉质量的0.3～0.4倍；加入氢氧化钠之后进行搅拌，碱化反应0.5～1h，反应温度为40～60℃；反应结束后，应进行冷却，冷却至温度10～30℃；
第五步：加入氯乙酸和过量的氢氧化钠与茯苓全粉进行羧甲基化反应，得到所述取代度在0.69至0.73的羧甲基茯苓多糖。具体地，羧甲基化反应中所述氯乙酸的加入量为茯苓粉质量的0.8～1.2倍，使茯苓粉和氯乙酸在过量的氢氧化钠下进行醚化反应3～4h，反应温度为50～70℃，反应完毕后，用冰乙酸调至pH至5.0～6.0，用体积分数85％的乙醇洗涤3～5次，除去多余氯离子，并洗至白色或淡黄色，在50℃温度条件下干燥。
所述脱羧肌肽、花椒提取物、连翘提取物为市售。
实施例1
一种无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，包括质量分数在0.3％的脱羧肌肽、5％的可溶性茯苓多糖、1％花椒提取物、以及1％的连翘提取物，余量为芽孢杆菌发酵液；
所述芽孢杆菌发酵液，pH值为4.8，其含有分子量在1200kDa以上的聚γ-谷氨酸40g/L以上。
实施例2
一种无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，包括质量分数在0.1的脱羧肌肽、10％的可溶性茯苓多糖、0.5％花椒提取物、以及0.8％的连翘提取物，余量为芽孢杆菌发酵液；
所述芽孢杆菌发酵液，pH值为4.5，其含有分子量在1200kDa以上的聚γ-谷氨酸40g/L以上。
实施例3
一种无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，包括质量分数在0.5％的脱羧肌肽、3％的可溶性茯苓多糖、1.5％花椒提取物、以及0.5％的连翘提取物，余量为芽孢杆菌发酵液；
所述芽孢杆菌发酵液，pH值为5.0之间，其含有分子量在1200kDa以上的聚γ-谷氨酸40g/L以上。
实施例4
文献调研显示，皮肤表面主要菌科包括：丙酸杆菌科、莫拉菌科、棒状杆菌科、葡萄球菌科、拟杆菌科、普雷沃氏菌科、肠杆菌科、瘤胃菌科、明串珠菌科、毛螺旋菌科、双歧杆菌科、奈瑟氏球菌科。对20例皮肤健康的受试者(年龄15至20岁之间，10名男性、10名女性)，采集皮肤贴片，对其皮肤贴片样本进行16SrRNA测序，分析皮肤表面菌落中各科菌种平均占比形成的菌群结构，作为正常皮肤标准菌落结构。选择4例皮肤长期患有糜烂性痤疮的受试者，施用实施例1提供混合物涂敷，早晚各一次，开始时(测试前)和30天后分别分析皮肤表面菌落结构，与正常皮肤标准菌落结构对比，计算欧氏距离。
16SrRNA测序是指对环境样本16S ribosomal RNA的基因(即16SrDNA)高变区进行PCR扩增及高通量测序的一种技术，可对特定环境下细菌和古菌的微生物种类和丰度进行有效的鉴定。16S序列由9个高变区组成(V1-V9)，中间穿插着保守区，是最常用的细菌分类标准。通过提取环境样品的DNA，并扩增其中16SrDNA基因；通过检测16SrRNA基因序列变异和丰度，反映环境样本中细菌的分类和丰度。16S序列可以用来鉴定绝大多数细菌。步骤如下：
(1)采用QIAamp DNA提取试剂盒进行抽提，并对抽提的DNA进行检测；
(2)采用荧光分光光度计检测DNA的浓度，并用1％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量；
(3)调整DNA溶液浓度，DNA工作液保存于4℃，储存液保存于-20℃；
(4)针对样本16S rRNA gene的V3-V4区进行PCR扩增；
(5)胶回收纯化：针对目标条带进行割胶回收，得到纯化的样本；
(6)各样本定量：利用Qubit荧光定量仪对各个样品定量；
(7)采用标准的IlluminaTruSeq DNA文库制备实验流程(IlluminaTruSeqDNASample Preparation Guide)构建上机文库；使用IlluminaMiSeq PE300进行上机测序。
结果如下表：
Figure BDA0002316798130000101
实验结果显示，4名受试者在测试后，面部菌群结构与标准菌群结构的欧氏距离在施用实施例1提供的预制液30天后，都出现明显的减小，其菌相结构趋于标准菌群结构。实验证实本发明提供的预制液具有修护皮肤表面微生态环境的作用。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其特征在于，包括质量分数在0.1％至0.5％的脱羧肌肽、3％至10％的可溶性茯苓多糖、不超过1.5％花椒提取物、以及不超过1％的连翘提取物，余量为芽孢杆菌发酵液。
2.如权利要求1所述的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其特征在于，所述芽孢杆菌发酵液，pH值在4.5至5.0之间，其含有分子量在1200kDa以上的聚γ-谷氨酸40g/L以上。
3.如权利要求2所述的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其特征在于，所述芽孢杆菌发酵液pH值为4.8。
4.如权利要求2所述的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其特征在于，所述芽孢杆菌发酵液其制备方法如下：
(1)将活化后的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02菌种种子液加入按照体积比例5％接种量，接入培养基进行培养，所述培养基包括：75-80g/L甘油，15-20g/L柠檬酸钠，20-25g/L谷氨酸钠，8g/L氯化铵，0.5g/L磷酸氢二钾，0.15g/L氯化钙，0.5g/L硫酸镁，0.04g/L氯化铁，0.04g/L硫酸锰；
(2)在发酵8h后，开始以0.25g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液至发酵结束，其中硝酸钠溶液浓度为50g/L：开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.02g/L；发酵48h结束，聚γ-谷氨酸钠产量为40g/L以上；
(3)将步骤(2)中获得的发酵产物，过滤后取滤液高温灭菌，加入盐酸和/或硝酸调节pH值在4.0至5.0之间。
5.如权利要求1所述的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其特征在于，所述可溶性茯苓多糖，按照如下方法制备：
第一步：将干燥过的茯苓菌核进行粉碎过80或100目筛，得到粒度均匀的茯苓粉；
第二步：将第一步获得的茯苓粉以60Co-γ为辐照源，对其进行辐照，辐照剂量为9kGy～27kGy；
第三步：以辐照后的茯苓粉作为羧甲基化反应底物，加入乙醇溶液进行溶胀；所述乙醇溶液浓度为85％，溶胀料液比为酒精溶液与茯苓粉的料液比在5～7∶1之间；
第四步：溶胀后加入氢氧化钠进行碱化反应，反应结束后，冷却；碱化反应中所述的氢氧化钠加入的量为茯苓粉质量的0.3～0.4倍；加入氢氧化钠之后进行搅拌，碱化反应0.5～1h，反应温度为40～60℃；反应结束后，应进行冷却，冷却至温度10～30℃；
第五步：加入氯乙酸和过量的氢氧化钠与茯苓全粉进行羧甲基化反应，得到所述取代度在0.69至0.73的羧甲基茯苓多糖。具体地，羧甲基化反应中所述氯乙酸的加入量为茯苓粉质量的0.8～1.2倍，使茯苓粉和氯乙酸在过量的氢氧化钠下进行醚化反应3～4h，反应温度为50～70℃，反应完毕后，用冰乙酸调至pH至5.0～6.0，用体积分数80～90％的乙醇洗涤3～5次，除去多余氯离子，并洗至白色或淡黄色，在50℃温度条件下干燥。
6.如权利要求1所述的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其特征在于，所述花椒提取物，为花椒Zanthoxylum bungeanum Maxim.的成熟果皮的水提物。
7.如权利要求6所述的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其特征在于，所述花椒提取物质量分数在0.5％至1.5％。
8.如权利要求1所述的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其特征在于，所述连翘提取物为，为连翘Forsythia suspensa的碱醇法提取物。
9.如权利要求8所述的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液，其特征在于，所述连翘提取物质量分数在0.5％至1％。
10.一种如权利要求1至9任意一项所述的无增稠剂皮肤表面微生态修护预制液的应用，其特征在于，应用于具有皮肤表面微生态修护作用的化妆品、药品的制备。
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