CN109988788A - 一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及发酵工程领域，具体涉及一种通过控制亚硝酸盐积累来促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法。该方法以地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)为出发菌株，通过菌种活化和种子培养，将菌种接入发酵培养基中，初始培养基中不含有硝酸钠，而是在发酵过程中，采用恒速流加和pH反馈流加的方式补加硝酸钠溶液，从而避免发酵过程中亚硝酸盐的积累，确保地衣芽胞杆菌正常代谢(粗)甘油，促进聚谷氨酸钠合成。本发明的方法采用(粗)甘油为发酵原料，并使用硝酸钠部分替代谷氨酸，降低了发酵成本，同时也为微生物代谢硝酸盐产生亚硝酸盐的发酵问题提供一种新的解决策略。

Description

一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法

技术领域

本发明涉及发酵工程领域，具体涉及一种通过控制亚硝酸盐积累来促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法。

背景技术

聚-γ-谷氨酸(γ-PGA)，又称纳豆菌胶，是由L-谷氨酸和D-谷氨酸通过γ-酰胺键聚合而成的生物高分子，分子量可达到1,000KD以上。γ-PGA具有超强吸水性、金属螯合能力、可生物降解、对人和环境无毒无害等特点，可作为农业保水剂、增肥剂、化妆品保湿剂、污水絮凝剂、食品增稠剂、药物载体等，应用于农业、化工、环保、食品和医药等众多领域。目前，γ-PGA生产主要采用微生物发酵法。发酵过程中通常使用合成培养基，包括葡萄糖、柠檬酸、谷氨酸等碳、氮源物质，生产成本偏高，制约了γ-PGA的应用。

甘油是一种常见化工原料，其作为微生物培养的碳源与葡萄糖相比并没有明显的价格优势。但粗甘油则不同，它是生物柴油生产的主要副产物。随着生物柴油产业的快速发展，使得粗甘油大量积累无处消耗，导致粗甘油价格大幅下跌。因此，利用粗甘油作为原料发酵生产聚谷氨酸钠，既可以降低聚谷氨酸钠发酵成本，又可以有效处理粗甘油这种废弃物，不至于随意将其排放污染环境。

硝酸盐是无机含氮化合物，在微生物胞内其具有多种作用，可以作为氮源被微生物代谢，也可以作为终端电子受体在无氧条件下强化细胞ATP合成。CN103695485A报道过在葡萄糖为碳源的培养基中，初始添加20-40g/L硝酸盐可以促进谷氨酸利用，提高聚谷氨酸钠产量。但我们在使用甘油或粗甘油为碳源时发现，初始加入硝酸盐后，聚谷氨酸钠产量不但没有提高，反而降低了。通过分析发酵过程中底物消耗和相关产物合成，发现以甘油为碳源时添加硝酸钠，地衣芽胞杆菌WX-02会积累大量亚硝酸盐，这在以往的报道中是没有见过的。如何解除亚硝酸盐积累对地衣芽胞杆菌生长和聚谷氨酸钠合成的抑制作用是以甘油或粗甘油为碳源发酵的关键。

发明内容

为了克服现有技术的上述不足，本发明提供了一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，该方法在发酵初始的甘油培养基中不添加硝酸钠，而是在发酵过程中采用适宜流加策略补充硝酸钠溶液，从而避免发酵过程中亚硝酸盐的积累，确保地衣芽胞杆菌正常代谢甘油，促进聚谷氨酸钠合成。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术方案实现的：

一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，以地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)为出发菌株，通过液体深层发酵制备，包括如下步骤：

步骤1、菌种活化：取地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)原始菌株接种于LB固体培养基上，37℃培养12-18h，制备活化后的单菌落；

步骤2、种子培养：将步骤1活化的单菌落接种于种子培养基中，37℃，摇床转速220rpm培养至对数生长期，得到聚谷氨酸钠种子液；

步骤3、液体发酵：按照发酵培养基体积计，将步骤2的种子液以1.5％的接种量接种于发酵培养基中培养24-66.5h，发酵温度28-40℃，通风量0.5-1.5vvm，搅拌转速300-700rpm；在发酵至0-24h后，开始补加流加硝酸钠溶液至补加硝酸钠的总浓度至10g/L。

进一步地，所述发酵培养基各组分为：甘油40-100g/L、柠檬酸钠10-30g/L、谷氨酸钠10-70g/L、氯化铵4-20g/L、磷酸氢二钾0.25-1.0g/L、氯化钙0.1-1.0g/L、硫酸镁0.1-1.0g/L、氯化铁0-1.0g/L、硫酸锰0-1.0g/L，余量为水。

更进一步地，所述甘油选自粗甘油或精甘油。

进一步地，采用恒速补加流加硝酸钠溶液，流加速度≤0.75g/(L·h)。

更进一步地，采用恒速补加流加硝酸钠溶液，流加速度为0.15-0.5g/(L·h)。

更进一步地，在液体发酵过程中，所述发酵培养基中亚硝酸盐的最大积累量≤1.0g/L。

进一步地，通过pH值的反馈控制硝酸钠溶液流加，pH上升至8.5以上时停止流加，pH下降至6.0以下时启动流加；硝酸钠溶液流加速度≤1g/(L·h)。

更进一步地，通过pH值的反馈控制硝酸钠溶液流加，pH上升至7.5以上时停止流加，pH下降至7.0以下时启动流加；硝酸钠溶液流加速度≤1g/(L·h)。

更进一步地，在液体发酵过程中，所述发酵培养基中亚硝酸盐的最大积累量≤1.0g/L。

进一步地，所述方法还包括聚谷氨酸钠提取步骤，具体操作为：发酵结束后离心去菌体，然后用2-3倍上清液体积的乙醇，醇沉析出聚谷氨酸钠，然后再复溶于上清液体积的蒸馏水后，干燥、粉碎，制备出晶体状聚谷氨酸钠。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

(1)本发明的方法采用(粗)甘油为发酵原料，在发酵初始的甘油培养基中不添加硝酸钠，而是在发酵过程中采用适宜流加策略补充硝酸钠溶液，从而避免发酵过程中亚硝酸盐的快速积累，确保地衣芽胞杆菌正常代谢甘油，促进聚谷氨酸钠合成。

(2)本发明的方法采用(粗)甘油为发酵原料，并使用硝酸钠部分替代谷氨酸，降低了发酵成本。

(3)本发明采用恒速流加和pH反馈流加的方式补加硝酸钠溶液，控制发酵液中亚硝酸盐的积累，促进地衣芽胞杆菌利用(粗)甘油生产聚谷氨酸钠，为微生物代谢硝酸盐产生亚硝酸盐的发酵问题提供一种新的解决策略。

具体实施方式

展示一下实例来具体说明本发明的某些实施例，且不应解释为限制本发明的范围。对本发明公开的内容可以同时从材料、方法和反应条件进行改进，所有这些改进，均应落入本发明的的精神和范围之内。

下列实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下列实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1：

一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，以地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)WX-02为出发菌株，通过液体深层发酵制备，其中地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)WX-02已于2008年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编写为CCTCC NO:M208065。具体方法包括如下步骤：

步骤1、菌种活化：取-80℃保藏的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02原始菌株接种于LB固体培养基上，37℃培养12h，制备活化后的单菌落。其中固体培养基各组分浓度为：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母浸粉，5g/L氯化钠，15g/L琼脂；pH值7.0，蒸馏水配制，121℃高压灭菌20min。

步骤2、种子培养：将步骤1活化的单菌落接种于50mL种子培养基中，37℃，摇床转速220rpm培养8-10h至对数生长期，得到聚谷氨酸钠种子液。其中种子培养基为LB液体培养基，其各组分浓度为：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母浸粉，5g/L氯化钠，pH值7.0，余量为水；在温度121℃下灭菌20min。

步骤3、液体发酵：将步骤2中培养好的种子液，按照发酵培养基体积计，以1.5％的接种量接种于装有3L发酵培养基的5L发酵罐中培养，发酵温度37℃，通风量1vvm，搅拌转速500rpm；发酵培养基各组分浓度为：80g/L甘油，18.4g/L柠檬酸钠，23g/L谷氨酸钠，8g/L氯化铵，0.5g/L磷酸氢二钾，0.15g/L氯化钙，0.5g/L硫酸镁，0.04g/L氯化铁，0.04g/L硫酸锰。

在发酵8h后，开始以0.25g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液至发酵结束，其中硝酸钠溶液浓度为50g/L。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.02g/L。发酵48h结束，聚谷氨酸钠产量为35.82g/L。

实施例2：

一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，以地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)WX-02为出发菌株，通过液体深层发酵制备，包括如下步骤：

步骤1、菌种活化：取-80℃保藏的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02原始菌株接种于LB固体培养基上，37℃培养14h，制备活化后的单菌落。其中固体培养基各组分浓度同实施例1。

步骤2、种子培养：将步骤1活化的单菌落接种于装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，37℃，摇床转速220rpm培养8-10h至对数生长期，得到聚谷氨酸钠种子液。其中种子培养基为LB液体培养基，其各组分浓度同实施例1。

步骤3、液体发酵：将步骤2中培养好的种子液，按照发酵培养基体积计，以1.5％的接种量接种于装有3L发酵培养基的5L发酵罐中培养，发酵温度37℃，通风量0.5vvm，搅拌转速500rpm，初始pH值7.0；发酵培养基各组分浓度为：80g/L甘油，18.4g/L柠檬酸钠，23g/L谷氨酸钠，8g/L氯化铵，0.5g/L磷酸氢二钾，0.15g/L氯化钙，0.5g/L硫酸镁，0.04g/L氯化铁，0.04g/L硫酸锰。

在发酵9h后，开始以0.5g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液，至补加总浓度达到10g/L。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.85g/L。发酵48h结束，聚谷氨酸钠产量为27.41g/L。

实施例3：

一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，以地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)WX-02为出发菌株，通过液体深层发酵制备，包括如下步骤：

步骤1、菌种活化：取-80℃保藏的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02原始菌株接种于LB固体培养基上，37℃培养16h，制备活化后的单菌落。其中固体培养基各组分浓度同实施例1。

步骤2、种子培养：将步骤1活化的单菌落接种于装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，37℃，摇床转速220rpm培养8-10h至对数生长期，得到聚谷氨酸钠种子液。其中种子培养基为LB液体培养基，其各组分浓度同实施例1。

步骤3、液体发酵：将步骤2中培养好的种子液，按照发酵培养基体积计，以1.5％的接种量接种于装有3L发酵培养基的5L发酵罐中培养，发酵温度37℃，通风量1.5vvm，搅拌转速300rpm，初始pH值7.0；发酵培养基各组分浓度为：40g/L甘油，30g/L柠檬酸钠，10g/L谷氨酸钠，4g/L氯化铵，1.0g/L磷酸氢二钾，0.1g/L氯化钙，0.1g/L硫酸镁。

在发酵10h后，开始以0.75g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液，至补加总浓度达到10g/L。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为1g/L。发酵48h结束，聚谷氨酸钠产量为23.26g/L。

实施例4：

一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，以地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)WX-02为出发菌株，通过液体深层发酵制备，包括如下步骤：

步骤1、菌种活化：取-80℃保藏的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02原始菌株接种于LB固体培养基上，37℃培养14h，制备活化后的单菌落。其中固体培养基各组分浓度同实施例1。

步骤2、种子培养：将步骤1活化的单菌落接种于装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，37℃，摇床转速220rpm培养8-10h至对数生长期，得到聚谷氨酸钠种子液。其中种子培养基为LB液体培养基，其各组分浓度同实施例1。

步骤3、液体发酵：将步骤2中培养好的种子液，按照发酵培养基体积计，以1.5％的接种量接种于装有3L发酵培养基的5L发酵罐中培养，发酵温度28℃，通风量1.0vvm，搅拌转速400rpm，初始pH值7.0；发酵培养基各组分浓度同实施例2。

在接入种子液后(即发酵0h开始)，以0.15g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液，至补加总浓度达到10g/L。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.78g/L。发酵66.5h结束，聚谷氨酸钠产量为29.63g/L。

实施例5：

一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，以地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)WX-02为出发菌株，通过液体深层发酵制备，包括如下步骤：

步骤1、菌种活化：取-80℃保藏的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02原始菌株接种于LB固体培养基上，37℃培养14h，制备活化后的单菌落。其中固体培养基各组分浓度同实施例1。

步骤2、种子培养：将步骤1活化的单菌落接种于装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，37℃，摇床转速220rpm培养8-10h至对数生长期，得到聚谷氨酸钠种子液。其中种子培养基为LB液体培养基，其各组分浓度同实施例1。

步骤3、液体发酵：将步骤2中培养好的种子液，按照发酵培养基体积计，以1.5％的接种量接种于装有3L发酵培养基的5L发酵罐中培养，发酵温度37℃，通风量1vvm，搅拌转速500rpm，初始pH值7.0；发酵培养基各组分浓度为：80g/L甘油，18.4g/L柠檬酸钠，23g/L谷氨酸钠，8g/L氯化铵，0.5g/L磷酸氢二钾，0.15g/L氯化钙，0.5g/L硫酸镁，0.04g/L氯化铁，0.04g/L硫酸锰。

在发酵9h后，开始以1.0g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液，当pH高于7.5时停止流加，当pH低于7.0时开启流加，硝酸盐补加总浓度为10g/L时停止。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.31g/L。发酵48h结束，聚谷氨酸钠产量为33.51g/L。

实施例6：

同实施例5，但步骤3中发酵温度为40℃，搅拌转速为700rpm，在发酵至24h后开始流加硝酸钠溶液，流加速度为1.0g/(L·h)，当pH高于7.5时停止流加，当pH低于7.0时开启流加，硝酸盐补加总浓度为10g/L时停止。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.59g/L，发酵结束时，聚谷氨酸钠产量为34.53g/L。

实施例7：

一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，以地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)WX-02为出发菌株，通过液体深层发酵制备，包括如下步骤：

步骤1、菌种活化：取-80℃保藏的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02原始菌株接种于LB固体培养基上，37℃培养18h，制备活化后的单菌落。其中固体培养基各组分浓度同实施例1。

步骤2、种子培养：将步骤1活化的单菌落接种于装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，37℃，摇床转速220rpm培养8-10h至对数生长期，得到聚谷氨酸钠种子液。其中种子培养基为LB液体培养基，其各组分浓度同实施例1。

步骤3、液体发酵：将步骤2中培养好的种子液，按照发酵培养基体积计，以1.5％的接种量接种于装有3L发酵培养基的5L发酵罐中培养，发酵温度37℃，通风量1.5vvm，搅拌转速500rpm，初始pH值7.0；发酵培养基各组分浓度为：100g/L甘油，10g/L柠檬酸钠，70g/L谷氨酸钠，20g/L氯化铵，0.25g/L磷酸氢二钾，1.0g/L氯化钙，1.0g/L硫酸镁，1.0g/L氯化铁，1.0g/L硫酸锰。

在发酵8h后，开始以0.9g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液，当pH高于6.0时停止流加，当pH低于8.5时开启流加，硝酸盐补加总浓度为10g/L时停止。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.96g/L。发酵48h结束，聚谷氨酸钠产量为23.76g/L。

实施例8：

同实施例1，但使用粗甘油代替精甘油，亚硝酸盐最大积累量为0.02g/L，发酵结束时，聚谷氨酸钠产量为36.12g/L。

实施例9：

同实施例5，但使用粗甘油代替精甘油，亚硝酸盐最大积累量为0.25g/L，发酵结束时，聚谷氨酸钠产量为36.91g/L。

对比例1：

以地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02为出发菌株，通过液体深层发酵制备聚谷氨酸钠的方法，包括如下步骤：

步骤1：取-80℃保藏的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02接种于LB固体培养基上，37℃培养14h。LB固体培养基同实施例1。

步骤2：将固体平板上活化的单菌落接入装有50mL LB液体培养基的250mL三角瓶，摇床转速220rpm，37℃培养8-10h。其中LB液体培养基，其各组分浓度同实施例1。

步骤3：将培养好的种子液按照1.5％接种于装有3L发酵培养基的5L发酵罐中，搅拌转速500rpm，通气量1vvm，初始pH值7.0，发酵温度37℃。发酵初始培养基中加入10g/L硝酸钠。发酵9h后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为1.92g/L。发酵30h提前结束，细胞大量衰亡，聚谷氨酸钠产量为15.24g/L。

对比例2：

以地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02为出发菌株，通过液体深层发酵制备聚谷氨酸钠的方法，包括如下步骤：

步骤1：取-80℃保藏的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02接种于LB固体培养基上，37℃培养14h。LB固体培养基同实施例1。

步骤2：将固体平板上活化的单菌落接入装有50mL LB液体培养基的250mL三角瓶，摇床转速220rpm，37℃培养8-10h。其中LB液体培养基，其各组分浓度同实施例1。

步骤3：将培养好的种子液按照1.5％接种于装有3L发酵培养基的5L发酵罐中，搅拌转速500rpm，通气量1vvm，初始pH值7.0，发酵温度37℃。发酵9h后，一次性投加10g/L硝酸钠，每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，亚硝酸盐最大积累量为1.46g/L。发酵40h结束，聚谷氨酸钠产量为17.10g/L。

对比例3：

一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，以地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)WX-02为出发菌株，通过液体深层发酵制备，包括如下步骤：

步骤1、菌种活化：取-80℃保藏的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02原始菌株接种于LB固体培养基上，37℃培养18h，制备活化后的单菌落。其中固体培养基各组分浓度同实施例1。

步骤2、种子培养：将步骤1活化的单菌落接种于装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，37℃，摇床转速220rpm培养8-10h至对数生长期，得到聚谷氨酸钠种子液。其中种子培养基为LB液体培养基，其各组分浓度同实施例1。

步骤3、液体发酵：将步骤2中培养好的种子液，按照发酵培养基体积计，以1.5％的接种量接种于装有3L发酵培养基的5L发酵罐中培养，发酵温度37℃，通风量1.5vvm，搅拌转速500rpm，初始pH值7.0；发酵培养基各组分浓度为：80g/L甘油，18.4g/L柠檬酸钠，23g/L谷氨酸钠，8g/L氯化铵，0.5g/L磷酸氢二钾，0.15g/L氯化钙，0.5g/L硫酸镁，0.04g/L氯化铁，0.04g/L硫酸锰。

在发酵10h后，开始以1.0g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液，至补加总浓度达到10g/L。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度，发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为1.76g/L。发酵40h结束，聚谷氨酸钠产量为16.24g/L。

从实施例1-9与对比例1-3的对比中可以发现，在以甘油为碳源的培养基中，硝酸盐投加过量会导致其被菌体快速代谢，形成亚硝酸盐积累，导致发酵时间缩短，发酵产量低(≤18g/L)。如果在发酵初始的甘油培养基中不添加硝酸钠，而是在发酵过程中采用适宜的流加策略补充硝酸钠溶液，可以有效避免发酵过程中亚硝酸盐的积累，确保地衣芽胞杆菌正常代谢甘油，促进聚谷氨酸钠合成(≥23g/L)。并且在补充硝酸钠溶液的时候，要控制好流加速度，从而避免发酵过程中亚硝酸盐的快速积累。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，其特征在于，以地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)为出发菌株，通过液体深层发酵制备，包括如下步骤：

步骤1、菌种活化：取地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)原始菌株接种于LB固体培养基上，37℃培养12-18h，制备活化后的单菌落；

步骤2、种子培养：将步骤1活化的单菌落接种于种子培养基中，37℃，摇床转速220rpm培养至对数生长期，得到聚谷氨酸钠种子液；

步骤3、液体发酵：按照发酵培养基体积计，将步骤2的种子液以1.5％的接种量接种于发酵培养基中培养24-66.5h，发酵温度28-40℃，通风量0.5-1.5vvm，搅拌转速300-700rpm；在发酵至0-24h后，开始补加流加硝酸钠溶液至补加硝酸钠的总浓度至10g/L。

2.根据权利要求1所述的一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，其特征在于，所述发酵培养基各组分为：甘油40-100g/L、柠檬酸钠10-30g/L、谷氨酸钠10-70g/L、氯化铵4-20g/L、磷酸氢二钾0.25-1.0g/L、氯化钙0.1-1.0g/L、硫酸镁0.1-1.0g/L、氯化铁0-1.0g/L、硫酸锰0-1.0g/L，余量为水。

3.根据权利要求2所述的一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，其特征在于，所述甘油选自粗甘油或精甘油。

4.根据权利要求1所述的一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，其特征在于，采用恒速补加流加硝酸钠溶液，流加速度≤0.75g/(L·h)。

5.根据权利要求4所述的一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，其特征在于，采用恒速补加流加硝酸钠溶液，流加速度为0.15-0.5g/(L·h)。

6.根据权利要求4或5任一所述的一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，其特征在于，在液体发酵过程中，所述发酵培养基中亚硝酸盐的最大积累量≤1.0g/L。

7.根据权利要求1所述的一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，其特征在于，通过pH值的反馈控制硝酸钠溶液流加，pH上升至8.5以上时停止流加，pH下降至6.0以下时启动流加；硝酸钠溶液流加速度≤1g/(L·h)。

8.根据权利要求7所述的一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，其特征在于，通过pH值的反馈控制硝酸钠溶液流加，pH上升至7.5以上时停止流加，pH下降至7.0以下时启动流加；硝酸钠溶液流加速度≤1g/(L·h)。

9.根据权利要求7或8任一所述的一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，其特征在于，在液体发酵过程中，所述发酵培养基中亚硝酸盐的最大积累量≤1.0g/L。

10.根据权利要求1所述的一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法，其特征在于，所述方法还包括聚谷氨酸钠提取步骤，具体操作为：发酵结束后离心去菌体，然后用2-3倍上清液体积的乙醇，醇沉析出聚谷氨酸钠，然后再复溶于上清液体积的蒸馏水后，干燥、粉碎，制备出晶体状聚谷氨酸钠。