CN111077238A - 检测血液中瑞波西汀药物含量液相色谱分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明采用液相色谱分析方法检测血液样本中瑞波西汀的血药浓度含量，该检测方法利用液相色谱分析仪和DAD检测器对标准溶液进行标定，分别拟合得出代表瑞波西汀浓度的标准曲线方程为y1＝a*x1+b，取待测血液样品，对该待检测血液样品经过前处理后，使用相同的液相色谱分析仪和DAD检测器对待测的样品进行检测，得到待测血液y1值，将待测血液样品的y1代入上述标准曲线方程中，通过计算分别得到待测血液样品中瑞波西汀的相对浓度x1，内标物工作液浓度是已知的，通过计算可以得到待检测血液样品中的瑞波西汀的浓度，本发明为瑞波西汀的给药提供实验基础。

Description

检测血液中瑞波西汀药物含量液相色谱分析方法
技术领域
本发明涉及精神类药物的临床血药浓度监测技术领域，尤其涉及一种检测血液中抗抑郁药 物瑞波西汀含量的方法。
背景技术
抑郁症又称抑郁障碍，以显著而持久的心境低落为主要临床特征，是心境障碍的主要类型。 甲磺酸瑞波西汀为选择性去甲肾上腺素(NE)重摄取抑制剂，通过对NE再摄取的选择性阻滞， 提高中枢内NE的活性，从而改善患者的情绪。临床用于治疗抑郁症，还可用于多动症的治疗。 对5-羟色胺、多巴胺重吸收位点没有亲和力，对毒蕈碱、组胺或肾上腺素受体几无亲和作用。 口服吸收迅速，2小时即达到最高血浆浓度，若同时进食，会使达峰时间延迟2～3小时，但 生物利用度不受影响。重复给药未见药物及其代谢物的蓄积。本品口服后以原药形式存在于血 浆中，大部分(76％)由尿液排出，半衰期13小时左右，血浆蛋白结合率约为97％，绝对生 物利用度为94％。瑞波西汀的有效血药浓度参考区间为：60-350ng/mL，实验室警戒浓度为 700ng/mL。
目前测定血液中瑞波西汀含量通常采用的方法为高效液相色谱法和高效液相色谱质谱联 用法。其中，高效液相色谱质谱联用法分析成本高，对场地要求较高，且需要专业人员进行操 作，不适合在中小医院广泛开展。高效液相色谱法具有定量准确，重现性好，成本低等优点， 但已被报道的文献方法大多存在着前处理操作较复杂，外标法定量易导致结果不够准确，分析 时间较长等问题，尚不适于大通量的样本检测。
发明内容
针对上述技术问题，本申请的发明目的是提供一种检测血液中瑞波西汀血药含量的方法， 将内标法与高效液相色谱法相结合，使瑞波西汀血药含量的测定结果更准确，并缩短样品分析 时间。
为了完成本申请的发明目的，本申请采用以下技术方案：
本发明的检测血液样品中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其中：它包括以下 步骤：
(一)标准溶液的标定
(a)制备瑞波西汀的标准储备液
精确称取瑞波西汀标准品10mg置于10mL容量瓶，用甲醇进行溶解，并定容于10mL，得到瑞波西汀的标准储备液，并在-80℃条件下保存；
(b)制备瑞波西汀的标准中间液
用含水量为40-60％甲醇水溶液稀释上述瑞波西汀的标准储备液，制成含有浓度为 800-14400ng/mL的瑞波西汀的至少三种瑞波西汀的标准中间液，并在-80℃条件下保存；
(c)制备内标工作液
精确称取盐酸赛庚啶标准品5mg于5mL容量瓶，用甲醇溶解，并定容至5mL，然后用含 水量为40-60％的甲醇水溶液进行稀释，得到含有1μg/mL盐酸赛庚啶的标准内标工作液，并 在-80℃条件下保存。
(d)制备标准溶液
分别移取10μL上述至少三种浓度的瑞波西汀的标准中间液分别置于三个2.0mL离心 管中，在上述每一种瑞波西汀的标准中间液中分别加入10μL内标工作液和190μL空白血清或血浆，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-3min后，再分别加入4％三氯乙酸 100μL，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，再加入1mol/L氢氧化钠75μL， 并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，加入萃取剂1000μL正己烷后，在转速为 1500-2000rpm下涡旋混匀8-12min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-12min，得 到上清液，分别移取850μL上述上清液并置于另一个离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向 上述吹干的离心管中加入100μL由50∶50的水和甲醇组成的复溶液，进行溶解，然后在 1500-2000rpm转速下涡旋混匀1-3min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min， 得到上清液，制成至少三种不同浓度的标准溶液，其中每一种浓度的标准溶液中内标物的浓度相同；
(e)拟合标准曲线方程
利用液相色谱分析仪和DAD检测器检测上述每一种浓度的标准溶液，得到至少三种不同 浓度的瑞波西汀和盐酸赛庚啶的标准溶液色谱图，从上述每种浓度的标准溶液色谱图中分别 得到瑞波西汀的色谱峰峰面积和盐酸赛庚啶的色谱峰峰面积，分别以上述至少三个不同浓度 的瑞波西汀标准溶液的峰面积与盐酸赛庚啶峰面积的比值作为标准曲线方程的纵坐标y1，以 上述瑞波西汀的浓度与盐酸赛庚啶浓度的比值为作为标准曲线方程的横坐标x1，将以上检测 所得的至少三种不同浓度的数据进行线性回归，拟合得到瑞波西汀和盐酸赛庚啶对应的标准曲 线方程为y1＝a*x1+b，并且得出权重系数a、b；
(二)检测血液的离心与待测血液的前处理
取待检测血液至少5mL，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆， 上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；
用移液枪移取10μL步骤(c)的盐酸赛庚啶的内标工作液于2.0mL的离心管中，然后加入 200μL上述待测血液的上清液，在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-3min后，加入4％三氯 乙酸100μL，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，再加入1mol/L氢氧化钠75μL， 并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，加入萃取剂1000μL正己烷，并在转速为 1500-2000rpm下涡旋混匀8-12min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-12min，得 到上清液；取上述上清液850μL放入另一支1.5mL离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向上 述吹干的离心管中加入100μL由50∶50的水和甲醇组成的复溶液，然后在1500-2000rpm转 速下涡旋混匀1-3min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液即为 待测血液样本；
(三)待测血液样本的检测
使用液相色谱分析仪和DAD检测器检测上述待测血液样本，得出上述待测样品的瑞波西 汀的色谱峰峰面积和盐酸赛庚啶的色谱峰峰面积，将待测血液样本中的瑞波西汀峰面积与盐酸 赛庚啶峰面积的比值作为y1，代入上述步骤(e)得到的标准曲线方程y1＝a*x1+b中，通过计 算得到待测血液样本中瑞波西汀与盐酸赛庚啶的相对浓度x1，由于上述待测血液样本中，盐酸 赛庚啶的浓度是已知的，由此计算得到待测血液样本中的瑞波西汀的血药浓度。
本发明的检测血液样品中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其中：在步骤(b) 中，制备七种含有不同浓度瑞波西汀的标准中间液，它们分别是含有800ng/mL、1200ng/mL、 1800ng/mL、2400ng/mL、4800ng/mL、7200ng/mL、14400ng/mL瑞波西汀浓度的标准中间 液。
本发明的检测血液样品中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其中：在步骤(b) 和(c)中的甲醇水溶液是由1∶1的甲醇和水组成的。
本发明的检测血液样品中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其中：所述高效液 相色谱仪所使用的在线过滤器为SSI COL PRE-FILTER WATER 1/16 0.5M。
本发明的检测血液样品中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其中：所述高效液 相色谱仪所使用的色谱柱为Waters X-Bridge C18。
本发明的检测血液样品中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其中：所述高效液 相色谱仪设置的柱温为30℃。
本发明的检测血液中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其特征在于：所述的液 相色谱分析方法为以水溶液和甲醇作为流动相，其中水溶液为含有10mMol/L磷酸二氢钠和 0.0075％磷酸的水溶液，采用等度比例(水溶液∶甲醇＝47∶53)分析目标物加梯度冲洗色谱柱 程序，流速为1mL/min，进样量为20μL。
Figure BDA0002268824130000041
本发明的检测血液样品中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其中：所述DAD检测器是Vanquish DAD检测器，检测波长为275nm，响应常数为1s，采集频率为5Hz。
本发明的检测血液样品中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其中：所述含水量 为体积比的含水量。
本发明有益效果：
本发明所述的检测血液中瑞波西汀含量的方法，将内标法与高效液相色谱法相结合，提高 了定量结果的准确性，清除系统误差；该方法采用等度比例(水溶液∶甲醇＝47∶53)分析目标 物加流动相梯度冲洗色谱柱程序，充分保证色谱柱无杂质残留，确定分析检测良好的重现性， 且检测过程简便快速，更利于在临床治疗中对患者体内的瑞波西汀的含量进行监测，为瑞波西 汀的个性化给药、减少毒副反应的发生提供实验基础。
附图说明
图1为瑞波西汀的标准品(甲磺酸瑞波西汀)化学结构式；
图2为标准溶液中瑞波西汀与内标色谱图；其中，标号1为瑞波西汀；标号2为内标物盐 酸赛庚啶；
图3为实施例中加标血清样本中瑞波西汀与内标色谱图；其中，标号1为瑞波西汀；标号2为内标物盐酸赛庚啶。
下面将结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。
具体实施方式
本发明的检测血液样品中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法包括以下步骤：
(一)标准溶液的标定
(a)制备瑞波西汀的标准储备液
精确称取瑞波西汀标准品10mg置于10mL容量瓶，用甲醇进行溶解，并定容于10mL，得到瑞波西汀的标准储备液，并在-80℃条件下保存；
(b)制备瑞波西汀的标准中间液
用含水量为50％甲醇水溶液稀释上述瑞波西汀的标准储备液，制成含有浓度为800-14400ng/mL的瑞波西汀的七种瑞波西汀的标准中间液，它们分别是含有800ng/mL、1200 ng/mL、1800ng/mL、2400ng/mL、4800ng/mL、7200ng/mL、14400ng/mL瑞波西汀浓度的标准中间液，并在-80℃条件下保存；
(c)制备内标工作液
精确称取盐酸赛庚啶标准品5mg于5mL容量瓶，用甲醇溶解，并定容至5mL，然后用含 水量为50％的甲醇水溶液进行稀释，得到含有1μg/mL盐酸赛庚啶的标准内标工作液，并在 -80℃条件下保存。
(d)制备标准溶液
分别移取10μL上述七种浓度的瑞波西汀的标准中间液分别置于三个2.0mL离心管中， 在上述每一种瑞波西汀的标准中间液中分别加入10μL内标工作液和190μL空白血清或血 浆，并在转速为1500rpm下涡旋混匀1min后，再分别加入4％三氯乙酸100μL，并在转速为1500rpm下涡旋混匀3min后，再加入1mol/L氢氧化钠75μL，并在转速为1500rpm下涡 旋混匀3min后，加入萃取剂1000μL正己烷后，在转速为1500rpm下涡旋混匀10min后，再 在12000rpm的转速下高速离心10min，得到上清液，分别移取850μL上述上清液并置于另一 个离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向上述吹干的离心管中加入100μL由50∶50的水和 甲醇组成的复溶液，进行溶解，然后在1500rpm转速下涡旋混匀1min后，再在12000rpm的 转速下高速离心5min，得到上清液，制成七种不同浓度的标准溶液，其中每一种浓度的标准 溶液中内标物的浓度相同；
(e)拟合标准曲线方程
利用液相色谱分析仪和DAD检测器检测上述每一种浓度的标准溶液，得到七种不同浓度 的瑞波西汀和盐酸赛庚啶的标准溶液色谱图，从上述每种浓度的标准溶液色谱图中分别得到 瑞波西汀的色谱峰峰面积和盐酸赛庚啶的色谱峰峰面积，分别以上述七个不同浓度的瑞波西 汀标准溶液的峰面积与盐酸赛庚啶峰面积的比值作为标准曲线方程的纵坐标y1，以上述瑞波西 汀的浓度与盐酸赛庚啶浓度的比值为作为标准曲线方程的横坐标x1，将以上检测所得的七种 不同浓度的数据进行线性回归，拟合得到瑞波西汀和盐酸赛庚啶对应的标准曲线方程为y1＝a*x 1+b，并且得出权重系数a、b；
(二)检测血液的离心与待测血液的前处理
取待检测血液至少5mL，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆， 上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；
用移液枪移取10μL步骤(c)的盐酸赛庚啶的内标工作液于2.0mL的离心管中，然后加入 200μL上述待测血液的上清液，在转速为1500rpm下涡旋混匀1min后，再分别加入4％三氯 乙酸100μL，并在转速为1500rpm下涡旋混匀3min后，再加入1mol/L氢氧化钠75μL，并在转速为1500rpm下涡旋混匀3min后，加入萃取剂1000μL正己烷后，在转速为1500rpm 下涡旋混匀10min后，再在12000rpm的转速下高速离心10min，得到上清液，分别移取850μL 上述上清液并置于另一个离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向上述吹干的离心管中加入 100μL由50∶50的水和甲醇组成的复溶液，进行溶解，然后在1500rpm转速下涡旋混匀1min 后，再在12000rpm的转速下高速离心5min，得到上清液即为待测血液样本；
(三)待测血液样本的检测
使用液相色谱分析仪和DAD检测器检测上述待测血液样本，得出上述待测样品的瑞波西 汀的色谱峰峰面积和盐酸赛庚啶的色谱峰峰面积，将待测血液样本中的瑞波西汀峰面积与盐酸 赛庚啶峰面积的比值作为y1，代入上述步骤(e)得到的标准曲线方程y1＝a*x1+b中，通过计 算得到待测血液样本中瑞波西汀与盐酸赛庚啶的相对浓度x1，由于上述待测血液样本中，盐酸 赛庚啶的浓度是已知的，由此计算得到待测血液样本中的瑞波西汀的血药浓度。
高效液相色谱仪所使用的在线过滤器为SSI COLPRE-FILTER WATER 1/16 0.5M。所述高 效液相色谱仪所使用的色谱柱为Waters X-Bridge C18，5μm，4.6mm×150mm；高效液相色谱 仪设置的柱温为30℃；使用水溶液和甲醇作为流动相，其中水溶液为含有10mMol/L磷酸二 氢钠和0.0075％磷酸的水溶液，采用等度比例(水溶液∶甲醇＝47∶53)分析目标物加梯度冲洗 色谱柱程序流速为1mL/min，进样量为20μL，DAD检测器是Vanquish DAD检测器，检测 波长为275mn，响应常数为1s，采集频率为5Hz，分析时间为14.5min；含水量为体积比的含 水量。
Figure BDA0002268824130000071
本实施例中技术方法论证如下：
一、该方法的线性关系和定量限
将上述配制的10μL的各个浓度的瑞波西汀标准工作液，分别加入10μL内标工作液，并 加入空白血清或血浆190μL混匀，经前处理后进样分析，瑞波西汀浓度在40ng/mL到720ng/mL 范围内，按本实施例测定条件，按浓度由低到高进行测定，以定量色谱峰面积-浓度作图，得 到标准曲线，结果表明线性范围和定量限如下：
(1)检测限(LOD)：瑞波西汀为5.74ng/mL。
(2)定量限(LOQ)：瑞波西汀为15.30ng/mL。
(3)线性范围：
瑞波西汀在40ng/mL到720ng/mL范围内，线性良好，相关系数R2＞0.99。
二、该方法的回收率和精密度
分别取瑞波西汀标准工作液配制成低、中、高3种浓度进行加样回收率实验和精密度实验， 按本实施例方法进行测定，重复分析测定3批次，瑞波西汀回收率和精密度分别如表1所示。 瑞波西汀在低、中、高的3个添加水平范围内的平均回收率为96.96％～100.43％，相对标准偏 差为1.53％～7.43％，结果见表1。
加标量 60ng/mL 120ng/mL 567ng/mL
平均回收率 100.43％ 98.26％ 96.96％
精密度RSD 7.43％ 3.45％ 1.53％
表1瑞波西汀加标回收率和精密度
综合上述验证试验，本实施例的检测限，回收率和精密度等各项技术指标均符合要求，方 法检测血液中瑞波西汀含量，重现性良好，加样回收率高，提高了检测结果的准确度。
血清样本中瑞波西汀和内标的色谱图见图3，标准溶液中瑞波西汀和内标的色谱图见图2， 瑞波西汀和盐酸赛庚啶的保留时间分别为5.85min和7.89min，由图2和图3可知本实施例方 法以盐酸赛庚啶为内标，系统误差得以消除，目标化合物的识别更为准确，且分析时间短、 干扰小，特异性强。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限 定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种 变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (9)

1.一种检测血液样品中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其特征在于：它包括以下步骤：
(一)标准溶液的标定
(a)制备瑞波西汀的标准储备液
精确称取瑞波西汀标准品10mg置于10mL容量瓶，用甲醇进行溶解，并定容于10mL，得到瑞波西汀的标准储备液，并在-80℃条件下保存；
(b)制备瑞波西汀的标准中间液
用含水量为40-60％甲醇水溶液稀释上述瑞波西汀的标准储备液，制成含有浓度为800-14400ng/mL的瑞波西汀的至少三种瑞波西汀的标准中间液，并在-80℃条件下保存；
(c)制备内标工作液
精确称取盐酸赛庚啶标准品5mg于5mL容量瓶，用甲醇溶解，并定容至5mL，然后用含水量为40-60％的甲醇水溶液进行稀释，得到含有1μg/mL盐酸赛庚啶的标准内标工作液，并在-80℃条件下保存。
(d)制备标准溶液
分别移取10μL上述至少三种浓度的瑞波西汀的标准中间液分别置于三个2.0mL离心管中，在上述每一种瑞波西汀的标准中间液中分别加入10μL内标工作液和190μL空白血清或血浆，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-3min后，再分别加入4％三氯乙酸100μL，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，再加入1mol/L氢氧化钠75μL，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，加入萃取剂1000μL正己烷后，在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀8-12min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-12min，得到上清液，分别移取850μL上述上清液并置于另一个离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向上述吹干的离心管中加入100μL由50：50的水和甲醇组成的复溶液，进行溶解，然后在1500-2000rpm转速下涡旋混匀1-3min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液，制成至少三种不同浓度的标准溶液，其中每一种浓度的标准溶液中内标物的浓度相同；
(e)拟合标准曲线方程
利用液相色谱分析仪和DAD检测器检测上述每一种浓度的标准溶液，得到至少三种不同浓度的瑞波西汀和盐酸赛庚啶的标准溶液色谱图，从上述每种浓度的标准溶液色谱图中分别得到瑞波西汀的色谱峰峰面积和盐酸赛庚啶的色谱峰峰面积，分别以上述至少三个不同浓度的瑞波西汀标准溶液的峰面积与盐酸赛庚啶峰面积的比值作为标准曲线方程的纵坐标y1，以上述瑞波西汀的浓度与盐酸赛庚啶浓度的比值为作为标准曲线方程的横坐标x1，将以上检测所得的至少三种不同浓度的数据进行线性回归，拟合得到瑞波西汀和盐酸赛庚啶对应的标准曲线方程为y1＝a*x1+b，并且得出权重系数a、b；
(二)检测血液的离心与待测血液的前处理
取待检测血液至少5mL，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；
用移液枪移取10μL步骤(c)的盐酸赛庚啶的内标工作液于2.0mL的离心管中，然后加入200μL上述待测血液的上清液，在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀1-3min后，加入4％三氯乙酸100μL，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，再加入1mol/L氢氧化钠75μL，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀2-4min后，加入萃取剂1000μL正己烷，并在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀8-12min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-12min，得到上清液；取上述上清液850μL放入另一支1.5mL离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向上述吹干的离心管中加入100μL由50∶50的水和甲醇组成的复溶液，然后在1500-2000rpm转速下涡旋混匀1-3min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液即为待测血液样本；
(三)待测血液样本的检测
使用液相色谱分析仪和DAD检测器检测上述待测血液样本，得出上述待测样品的瑞波西汀的色谱峰峰面积和盐酸赛庚啶的色谱峰峰面积，将待测血液样本中的瑞波西汀峰面积与盐酸赛庚啶峰面积的比值作为y1，代入上述步骤(e)得到的标准曲线方程y1＝a*x1+b中，通过计算得到待测血液样本中瑞波西汀与盐酸赛庚啶的相对浓度x1，由于上述待测血液样本中，盐酸赛庚啶的浓度是已知的，由此计算得到待测血液样本中的瑞波西汀的血药浓度。
2.如权利要求1所述的检测血液中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其特征在于：在步骤(b)中，制备七种含有不同浓度瑞波西汀的标准中间液，它们分别是含有800ng/mL、1200ng/mL、1800ng/mL、2400ng/mL、4800ng/mL、7200ng/mL、14400ng/mL瑞波西汀浓度的标准中间液。
3.如权利要求2所述的检测血液中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其特征在于：在步骤(b)和(c)中的甲醇水溶液是由1∶1的甲醇和水组成的。
4.如权利要求3所述的检测血液中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪所使用的在线过滤器为SSI COL PRE-FILTER WATER 1/16 0.5M。
5.如权利要求4所述的检测血液中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪所使用的色谱柱为Waters X-Bridge C18。
6.如权利要求5所述的检测血液中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪设置的柱温为30℃。
7.如权利要求6所述的检测血液中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其特征在于：所述的液相色谱分析方法为以水溶液和甲醇作为流动相，其中水溶液为含有10mMol/L磷酸二氢钠和0.0075％磷酸的水溶液，采用等度比例(水溶液∶甲醇＝47∶53)分析目标物加梯度冲洗色谱柱程序，流速为1mL/min，进样量为20μL。
Figure FDA0002268824120000031
8.如权利要求7所述的检测血液中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其特征在于：所述DAD检测器是Vanquish DAD检测器，检测波长为275nm，响应常数为1s，采集频率为5Hz。
9.如权利要求8所述的检测血液中瑞波西汀血药浓度的液相色谱分析方法，其特征在于：所述含水量为体积比的含水量。
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