CN108267522A - 检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法 - Google Patents
检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108267522A CN108267522A CN201711472500.5A CN201711472500A CN108267522A CN 108267522 A CN108267522 A CN 108267522A CN 201711472500 A CN201711472500 A CN 201711472500A CN 108267522 A CN108267522 A CN 108267522A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- olanzapine
- blood
- detected
- liquid phase
- mentioned
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- KVWDHTXUZHCGIO-UHFFFAOYSA-N olanzapine Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=NC2=CC=CC=C2NC2=C1C=C(C)S2 KVWDHTXUZHCGIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 81
- 229960005017 olanzapine Drugs 0.000 title claims abstract description 80
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 53
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 53
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 29
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 33
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 claims description 25
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims description 22
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 18
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 13
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 11
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 claims description 11
- 229940093499 ethyl acetate Drugs 0.000 claims description 8
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 claims description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 6
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical class N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 claims description 3
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 claims description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000164 antipsychotic agent Substances 0.000 abstract description 2
- 229940005529 antipsychotics Drugs 0.000 abstract description 2
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 abstract description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 abstract description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 2
- 238000004780 2D liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003693 atypical antipsychotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000008451 emotion Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法是使用液相色谱分析仪和紫外检测器对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，取待测血液样品，在该待检测血液经过处理后，同样使用液相色谱分析仪和紫外检测器对待测的样品进行检测，得到待测血液y值，将待测血液y代入标准曲线方程中，通过计算得到待检测血液中的奥氮平药物浓度，该方法是外标法与高效液相色谱法相结合，更适于高通量样本检测；采用小粒径色谱柱和低流速，减少有机溶剂的耗费，使实验成本降低且环保，更利于在临床治疗中对患者体内的奥氮平血药浓度进行监测，为抗精神病药物奥氮平的个性化给药、减少毒副反应的发生提供实验基础。
Description
技术领域
本发明涉及精神类药物的血药浓度监测技术领域，尤其涉及一种检测血液中奥氮平药物浓度的方法。
背景技术
奥氮平(Olanzapine，OLZ)，分子式C17H20N4S，具体结构如下图1所示。奥氮平为黄色结晶性粉末，熔点为191-196℃。精神分裂症是常见的精神障碍性疾病，我国成人终身发病率约为1％-2％。奥氮平是常用的传统非典型抗精神病药，在体内吸收迅速，具有强大的镇静催眠作用，用于治疗精神分裂症、精神病性障碍和情感障碍。奥氮平的日推荐剂量为5-20mg，文献报道治疗精神分裂症的有效血清或血浆阈浓度仅为9μg/L，其血药浓度与药理作用具有相关性，且和靶组织浓度具有显著相关，但药动学个体差异大，可能发生严重的不良反应，影响疗效，故有必要检测奥氮平血药浓度。
奥氮平血药浓度的常用检测方法有高效液相色谱-紫外检测法、高效液相色谱-电化学法、气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱联用法等。LC-MS/MS法灵敏度高，但稳定性较差，且成本很高，对人员与场地要求较高。2D-LC/UV分离效果好，灵敏度高，具有较高的稳健性及自动化能力，但目前检测方法所需血液的量很大，且前处理过程中消耗的试剂量也较大。
发明内容
针对上述技术问题，本发明目的是提供一种检测血液中奥氮平药物浓度的方法，使奥氮平血药浓度的测定快速准确，并缩短样品分析时间，通过优化前处理方案，提高回收率和检测灵敏度。
本发明采用以下技术方案：
本发明的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：它包括以下步骤：
(一)标准溶液的标定
首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL和190μL空白血清或血浆分别置于1.5ml离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为800-1200rpm下涡旋混匀1-2min后，加入含有5-20％体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂的1000μL，并在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀4-6min后，再加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-12min，得到清液，分别取上述清液720ul置于另一个1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL，然后在1200-2000rpm转速下涡旋混匀1-2min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液，分别取上述上清液90uL，用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的奥氮平色谱图，以上述至少三个标准溶液的奥氮平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有奥氮平的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为含有奥氮平的溶液；
(a)标准工作液的配制：
精确称取奥氮平标准品5mg置于10ml容量瓶，用含水量为0％-25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于10ml，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为20％-50％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有10-5000μg/mL奥氮平的范围内配置出各标准工作液，并在-80℃条件下保存；
(二)检测血液的离心
取待检测血液至少5ml，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；
(三)待测样品处理
(b)用移液枪移取200μL步骤(二)中所述血清或血浆于1.5ml离心管中，然后用移液枪移取含有5-20％体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂1ml加入到上述离心管中，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min，然后在上述离心管中加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-10min，得到清液；
(c)取步骤(b)清液720μL放入另一支1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；
(d)向步骤(c)的上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL，然后在1200-2000rpm转速下涡旋混匀1-2min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液即为待测样品；
(四)待测样品的检测
使用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述步骤(d)待测的样品进行检测，得出上述待测样品的奥氮平色谱图，将上述色谱图中的奥氮平峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中目标物浓度x，即为待检测血液中的奥氮平药物浓度；
本发明的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：在步骤(一)中使用七种不同浓度的标准工作液，七种不同浓度的标准工作液分别为含有80、160、320、640、1280、1920、2880μg/mL浓度的奥氮平溶液；
本发明的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述萃取剂是由9∶1的甲基叔丁基醚和乙酸乙酯组成萃取剂；
本发明的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：在步骤(a)中用由4∶6的水和甲醇组成的稀释液进行稀释；
本发明的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述高效液相色谱仪所使用的在线过滤器为SSI COL PRE-FILTER WATER 1/160.5M；
本发明的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述高效液相色谱仪所使用的色谱柱为Waters公司的XBridgeCl8；
本发明的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述高效液相色谱仪设置的柱温为35℃；
本发明的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述高效液相色谱仪所使用流动相为含0.3％甲酸和20nmol/L乙酸铵的水-甲醇，并且采用梯度洗脱，流速为0.35mL/min，进样量为15uL；
本发明的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述紫外检测器是VANQISH检测器，其检测波长为275nm，采集频率为5.0Hz；
本发明的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述含水量为体积比的含水量。
本发明有益效果：
本发明所述的检测血液中奥氮平药物浓度的方法，将外标法与高效液相色谱法相结合，更适于高通量样本检测；采用小粒径色谱柱和低流速，减少有机溶剂的耗费，使实验成本降低且环保，更利于在临床治疗中对患者体内的奥氮平血药浓度进行监测，为抗精神病药物奥氮平的个性化给药、减少毒副反应的发生提供实验基础。
附图说明
图1为奥氮平化学结构式；
图2为实施例中标准溶液中奥氮平色谱图，图2中标号1为标准溶液的奥氮平峰；
图3为实施例中加标血清或血浆样本中奥氮平色谱图，在图3中标号1为待检测血液的奥氮平峰。
下面将结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。
具体实施方式
本发明的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，它包括以下步骤：
(一)标准溶液的标定
首先将七种不同浓度的标准工作液10μL和190μL空白血清或血浆分别置于1.5ml的七个离心管中混合制成七种标准溶液，空白血清或血浆是指不含有奥氮平的血清或血浆，上述标准溶液分别在转速为1000rpm下涡旋混匀1min后，加入由9∶1的甲基叔丁基醚和乙酸乙酯组成的萃取剂1000μL，并在转速为1000rpm下涡旋混匀5min后，再加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在2000rpm的转速下涡旋混合2min后，再在12000rpm的转速下高速离心10min，得到清液，分别取上述清液720ul置于另一个1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL，然后在2000rpm转速下涡旋混匀1min后，再在10000rpm的转速下高速离心5min，得到清液，分别取上述清液90uL，用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测，得出上述七种标准溶液的奥氮平色谱图，如图2是其中的一个，以上述七个标准溶液的奥氮平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有奥氮平的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为含有奥氮平的溶液；
(a)标准工作液的配制：
精确称取奥氮平标准品5mg置于10ml容量瓶，用含水量为0％-25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于10ml，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为20％-50％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，例如：由4∶6的水和甲醇组成的稀释液进行稀释，分别在含有10-5000μg/mL奥氮平的范围内配置出各标准工作液，例如：七种不同浓度的标准工作液分别为含有80、160、320、640、1280、1920、2880μg/mL浓度的奥氮平溶液，并在-80℃条件下保存；
(二)检测血液的离心
取待检测血液至少5ml，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；
(三)待测样品处理
(b)用移液枪移取200μL步骤(二)中所述血清或血浆于1.5ml离心管中，然后用移液枪移取由9∶1的甲基叔丁基醚和乙酸乙酯组成的萃取剂1ml，并加入到上述离心管中，并在2000rpm的转速下涡旋混合5min，然后在上述离心管中加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在2000rpm的转速下涡旋混合5min后，再在12000rpm的转速下高速离心10min，得到清液；
(c)取步骤(b)清液720μL放入另一支1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；
(d)向步骤(c)的上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL，然后在2000rpm转速下涡旋混匀1min后，再在12000rpm的转速下高速离心5min，得到上清液即为待测样品；
(四)待测样品的检测
使用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述步骤(d)待测的样品进行检测，得出上述待测样品的奥氮平色谱图(如图3所示)，将上述色谱图中的奥氮平峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中目标物浓度x，即为待检测血液中的奥氮平药物浓度。
高效液相色谱仪所使用的在线过滤器为SSI COL PRE-FILTER WATER 1/160.5M；色谱柱为Waters公司的XBridgeC18；柱温为35℃；流动相为含0.3％甲酸和20nmol/L乙酸铵的水-甲醇，并且采用梯度洗脱，流速为0.35mL/min，进样量为15uL。
紫外检测器是VANQISH检测器，其检测波长为275nm，采集频率为5.0Hz。
本申请文件中所述含水量为体积比的含水量。
表1液相色谱洗脱程序
| 时间/min | H2O(0.3％FA，20nmol/L NH4Ac)％ | MeOH％ |
| 0.00 | 45 | 55 |
| 6.80 | 45 | 55 |
| 6.81 | 10 | 90 |
| 8.90 | 10 | 90 |
| 8.91 | 45 | 55 |
| 13.80 | 45 | 55 |
本实施例中技术方法论证如下：
一、该方法的线性关系和定量限
将上述配制的10μL的各个浓度的奥氮平标准工作液，加入190μL空白血清或血浆混匀，经前处理操作后，按本实施例测定条件，按浓度由低到高进行测定，以定量色谱峰面积-浓度作图，得到标准曲线，结果表明奥氮平的线性范围和定量限如下：
(1)检测限(LOD)：0.69μg/L。
(2)定量限(LOQ)：2.31μg/L。
(3)线性范围：
奥氮平在4μg/L到144μg/L范围内，线性良好，相关系数R2＞0.99。
二、该方法的回收率和精密度
取奥氮平标准工作液配制成高、中、低3种浓度进行加样回收率实验和精密度实验，按本实施例方法进行测定，重复分析测定3批次，其回收率和精密度分别如下表2。其在低、中、高的3个添加水平范围内的平均回收率为97.9％～100.3％，相对标准偏差为0.56％～3.80％，结果见表2。
表2奥氮平加标回收率和精密度
| 加标量 | 8μg/L | 32μg/L | 96μg/L |
| 平均回收率 | 97.9％ | 99.4％ | 100.3％ |
| 精密度RSD | 3.80％ | 0.56％ | 0.98％ |
综合上述验证试验，本实施例的检测限，回收率和精密度等各项技术指标均符合要求，方法检测血液中奥氮平药物浓度，重现性良好，加样回收率高，提高了检测结果的准确度。血清或血浆样本中奥氮平色谱图见图3，标准溶液中奥氮平色谱图见图3，奥氮平保留时间为7.0min，由图2和图3可知本实施例方法目标化合物的识别准确，且分析时间短、干扰小，特异性强。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (10)
1.一种检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：它包括以下步骤：
(一)标准溶液的标定
首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL和190μL空白血清或血浆分别置于1.5ml离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为800-1200rpm下涡旋混匀1-2min后，加入含有5-20％体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂的1000μL，并在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀4-6min后，再加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-12min，得到清液，分别取上述清液720ul置于另一个1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL，然后在1200-2000rpm转速下涡旋混匀1-2min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液，分别取上述上清液90uL，用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的奥氮平色谱图，以上述至少三个标准溶液的奥氮平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有奥氮平的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为含有奥氮平的溶液；
(a)标准工作液的配制：
精确称取奥氮平标准品5mg置于10ml容量瓶，用含水量为0％-25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于10ml，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为20％-50％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有10-5000μg/mL奥氮平的范围内配置出各标准工作液，并在-80℃条件下保存；
(二)检测血液的离心
取待检测血液至少5ml，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；
(三)待测样品处理
(b)用移液枪移取200μL步骤(二)中所述血清或血浆于1.5ml离心管中，然后用移液枪移取含有5-20％体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂1ml加入到上述离心管中，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min，然后在上述离心管中加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-10min，得到清液；
(c)取步骤(b)清液720μL放入另一支1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；
(d)向步骤(c)的上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL，然后在1200-2000rpm转速下涡旋混匀1-2min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液即为待测样品；
(四)待测样品的检测
使用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述步骤(d)待测的样品进行检测，得出上述待测样品的奥氮平色谱图，将上述色谱图中的奥氮平峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中目标物浓度x，即为待检测血液中的奥氮平药物浓度。
2.如权利要求1所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：在步骤(一)中使用七种不同浓度的标准工作液，七种不同浓度的标准工作液分别为含有80、160、320、640、1280、1920、2880μg/mL浓度的奥氮平溶液。
3.如权利要求2所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述萃取剂是由9∶1的甲基叔丁基醚和乙酸乙酯组成萃取剂。
4.如权利要求3所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：在步骤(a)中用由4∶6的水和甲醇组成的稀释液进行稀释。
5.如权利要求4所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪所使用的在线过滤器为SSI COL PRE-FILTER WATER 1/160.5M。
6.如权利要求4所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪所使用的色谱柱为Waters公司的XBridgeC18。
7.如权利要求4所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪设置的柱温为35℃。
8.如权利要求4所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪所使用流动相为含0.3％甲酸和20nmol/L乙酸铵的水-甲醇，并且采用梯度洗脱，流速为0.35mL/min，进样量为15uL。
9.如权利要求4至9之一所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述紫外检测器是VANQISH检测器，其检测波长为275mn，采集频率为5.0Hz。
10.如权利要求9所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：所述含水量为体积比的含水量。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711472500.5A CN108267522A (zh) | 2017-12-28 | 2017-12-28 | 检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711472500.5A CN108267522A (zh) | 2017-12-28 | 2017-12-28 | 检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108267522A true CN108267522A (zh) | 2018-07-10 |
Family
ID=62772937
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711472500.5A Pending CN108267522A (zh) | 2017-12-28 | 2017-12-28 | 检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108267522A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109725092A (zh) * | 2019-03-19 | 2019-05-07 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 检测血液中齐拉西酮含量的液相色谱分析方法 |
| CN110068644A (zh) * | 2019-03-12 | 2019-07-30 | 首都医科大学附属北京朝阳医院 | 高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法 |
| CN110632234A (zh) * | 2019-11-12 | 2019-12-31 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 检测血液中奥氮平的方法 |
| CN112305140A (zh) * | 2020-09-25 | 2021-02-02 | 上海市精神卫生中心（上海市心理咨询培训中心） | 一种检测体内精神药物及其代谢物的方法和应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101896815A (zh) * | 2007-10-17 | 2010-11-24 | 萨利克斯药品有限公司 | 肠疾病中的新的治疗靶标 |
| CN102276592A (zh) * | 2011-06-17 | 2011-12-14 | 大连理工大学 | 一种奥氮平有关物质及其制备方法、分析方法 |
| CN102276624A (zh) * | 2011-06-17 | 2011-12-14 | 大连理工大学 | 一种奥氮平有关物质及其制备方法和高效液相色谱分析方法 |
| CN106018586A (zh) * | 2016-05-12 | 2016-10-12 | 山西省食品药品检验所 | 同时检测7种睡眠类化学药品的检测方法 |
-
2017
- 2017-12-28 CN CN201711472500.5A patent/CN108267522A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101896815A (zh) * | 2007-10-17 | 2010-11-24 | 萨利克斯药品有限公司 | 肠疾病中的新的治疗靶标 |
| CN102276592A (zh) * | 2011-06-17 | 2011-12-14 | 大连理工大学 | 一种奥氮平有关物质及其制备方法、分析方法 |
| CN102276624A (zh) * | 2011-06-17 | 2011-12-14 | 大连理工大学 | 一种奥氮平有关物质及其制备方法和高效液相色谱分析方法 |
| CN106018586A (zh) * | 2016-05-12 | 2016-10-12 | 山西省食品药品检验所 | 同时检测7种睡眠类化学药品的检测方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| DAVID W. BOULTON ET AL.: "A high-performance liquid chromatography assay with ultraviolet detection for olanzapine in human plasma and urine", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 * |
| 丰丽莼 等: "UPLC-MS/MS法测定人血浆中奥氮平、利培酮和帕潘立酮的浓度", 《中国药房》 * |
| 刘伟忠 等: "HPLC法测定人血浆中奥氮平浓度", 《海峡药学》 * |
| 夏运岳 等: "反相高效液相色谱法测定血清中奥氮平的浓度", 《传染病药学》 * |
| 肖红 等: "高效液相色谱法测定人血浆中奥氮平的浓度", 《色谱》 * |
| 董根山 等: "UPLC-MS/MS法同时测定人血浆中的奥氮平和氯氮平", 《华西药学杂志》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110068644A (zh) * | 2019-03-12 | 2019-07-30 | 首都医科大学附属北京朝阳医院 | 高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法 |
| CN110068644B (zh) * | 2019-03-12 | 2021-06-08 | 首都医科大学附属北京朝阳医院 | 高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法 |
| CN109725092A (zh) * | 2019-03-19 | 2019-05-07 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 检测血液中齐拉西酮含量的液相色谱分析方法 |
| CN110632234A (zh) * | 2019-11-12 | 2019-12-31 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 检测血液中奥氮平的方法 |
| CN112305140A (zh) * | 2020-09-25 | 2021-02-02 | 上海市精神卫生中心（上海市心理咨询培训中心） | 一种检测体内精神药物及其代谢物的方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108267522A (zh) | 检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法 | |
| CN104991017A (zh) | 一种水基胶中异噻唑啉酮杀菌剂测定的液相色谱-串联质谱法 | |
| CN110243990A (zh) | 一种化妆品中非法添加物的测定方法 | |
| CN111272902A (zh) | 一种艾地骨化醇血药浓度的检测方法 | |
| CN104849373A (zh) | 一种基于柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测器测定皮革中全氟辛酸残留量的方法 | |
| CN114216983B (zh) | 一种液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法 | |
| CN106950317A (zh) | 一种合相色谱‑串联质谱法测定烟用纸张中偶氮染料释放的特定芳香胺的方法 | |
| CN107941962A (zh) | 检测血液中艾司西酞普兰药物含量的液相色谱分析方法 | |
| CN108132312A (zh) | 检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法 | |
| CN108241031A (zh) | 检测血液中茶碱药物含量的液相色谱分析方法 | |
| CN105467035A (zh) | 参芎葡萄糖注射液中大分子物质检测方法 | |
| CN110887911A (zh) | 一种动物源食品中克霉唑残留的气相色谱-串联质谱检测方法 | |
| CN109725092A (zh) | 检测血液中齐拉西酮含量的液相色谱分析方法 | |
| CN111426760B (zh) | 一种多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法 | |
| CN108469488A (zh) | 检测血液中丙戊酸含量的液相色谱分析方法 | |
| CN104359989A (zh) | 焦糖色素中2、4-甲基咪唑和2-乙酰基-4-四羟基-丁基咪唑的液相色谱检测方法 | |
| CN115060828A (zh) | 一种n-甲基乙醇胺有关物质的检测方法 | |
| CN109298092B (zh) | 检测工业废液中甲基磺酰氯含量的hplc方法 | |
| CN105974037A (zh) | 一种离子色谱法测定癸二酸铵中痕量阴离子的前处理方法 | |
| CN112697921B (zh) | 马普替林的检测方法 | |
| CN112098550A (zh) | 日常消费品中硫脲的测定方法 | |
| CN105954431B (zh) | 一种用hplc分离测定奥培米芬原料药有关物质的方法 | |
| CN110361486A (zh) | 一种血液中阿立哌唑药物浓度监测试剂盒及其检测方法 | |
| CN110531020A (zh) | 一种复方电解质葡萄糖注射液中果糖限度的测定方法 | |
| CN108303488A (zh) | 一种检测血液中氯硝西泮含量的液相色谱分析方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180710 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |