CN114216983B

CN114216983B - 一种液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法

Info

Publication number: CN114216983B
Application number: CN202111542995.0A
Authority: CN
Inventors: 林绪; 蓝梦哲; 陈惠琴; 郭楚红; 袁浪
Original assignee: Radio And Tv Measurement And Testing Group Co ltd
Current assignee: Radio And Tv Measurement And Testing Group Co ltd
Priority date: 2021-12-16
Filing date: 2021-12-16
Publication date: 2024-04-30
Anticipated expiration: 2041-12-16
Also published as: CN114216983A

Abstract

本发明属于食品检测领域，公开了一种液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法。该方法通过1％乙酸乙腈溶液提取，正己烷净化，利用液相色谱三重四级杆质谱法测定，以空白样品基质配标，保留时间和离子碎片丰度比定性，同位素内标法定量。该方法处理样品方式简单、分析速度快、灵敏度高、成本低、使用试剂少，对环境友好，采用同位素内标法定量减少基质效应及前处理过程目标物损耗对测定结果的影响，适用于动物源性食品中咪多卡的检测。为以后关于动物源性食品中咪多卡的检测提供重要的理论依据。

Description

一种液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法

技术领域

本发明属于食品检测领域，特别涉及一种液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法。

背景技术

咪多卡(Imidocartb，IMDP)又称咪唑苯脲或双脒苯脲，化学名为N,N'-二[3-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)苯基]脲，分子式为C₁₉H₂₀N₆O，属苯氨基类衍生物之一，具有疗效高、毒性低、剂量小的特点。本品有二盐酸盐和二丙酸盐两种形式，为新型抗梨形虫药物，对多种巴贝斯虫、梨形虫均有良好的治疗效果。由于二盐酸盐具有较强的局部刺激性，临床上使用较多的是二丙酸咪唑苯脲，目前，该药已广泛应用于世界各地，为国际公认的最佳抗梨形虫药物，是美国药典唯一收录的应用于梨形虫病的治疗药物。因静脉注射毒性最大，一般采用肌肉或皮下注射两种给药方式。在动物体内，该药的主要蓄积器官是肝脏与肾脏，心脏与肌肉次之，脑残留量也很高，可能产生一定的神经毒性。欧盟药品管理局(EMEA)报道的牛各组织中咪多卡最高残留限量(MRL)为:牛奶和脂肪0.05μg/g,肌肉0.3μg/g,肾脏1.5μg/g,肝脏2μg/g。我国GB 31650-2019规定牛各组织中咪唑苯脲最高残留限量(MRL)为:牛奶和脂肪50μg/kg,肌肉300μg/kg,肾脏2000μg/kg,肝脏1500μg/kg。

查阅相关文献，目前咪多卡残留检测方法少见报道，近期有报道采用高亲和力单克隆抗体的免疫层析法测定。报道的检测方法中高效液相色谱法较为常用，但由于受到其检测器的限制，该方法不能提供结构信息，而在实际样品分析时，动物源性样品含有脂肪、蛋白质、矿物质等基质容易干扰测定而产生假阳性、假阴性现象。有采用高效液相色谱-质谱法对乳制品中咪多卡进行测定的方法，但是改方法只针对乳制品检测方法的研究，无法满足其他动物源性食品中咪多卡检测需要。也有采用液相法测定、液质法定性的方法，该方法不能一次性准确定量并定性，原因可能是在质谱分析中基质效应会影响质谱的准确定量。而采用高亲和力单克隆抗体的免疫层析法测定需用到特异特性的单克隆抗体，目前对于检测不易满足。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法。

本发明的目的通过下述方案实现：

一种液相色谱串联质谱法检测动物源性食品中咪多卡的残留量的方法，其通过正己烷净化，基质配标并内标法定量的液相色谱质谱联用仪测定动物源性食品中咪多卡的残留量。

优选的，一种液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，通过乙腈体系提取，正己烷净化，利用液相色谱三重四级杆质谱法测定，以空白样品基质配标，保留时间和离子碎片丰度比定性，同位素内标法定量。

更优选的，一种液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，具体包括以下步骤：

(1)提取：向待测动物源性食品中加入内标物质，然后再加入提取液进行提取，将所得提取液氮吹至干，待净化；

(2)净化：向步骤(1)中待净化的产物中加入溶解液，溶解之后再加净化液正己烷进行净化，取净化后的清液，过0.22μm滤膜后装瓶，得到待测样品液；

(3)空白基质样品液的制备：去掉步骤(1)中“加入内标物质溶液”的操作，然后按修改后的步骤(1)和步骤(2)对不含有咪多卡的动物源性食品进行提取和净化，即得到空白基质样品液；

(4)标准工作液的制备：配制咪多卡的标准储备液，然后用步骤(3)中的空白基质样品液稀释咪多卡的标准储备液，同时加入内标物质，配制至少5个不同浓度的标准工作液；

(5)分析和测定：将步骤(4)中不同浓度的标准工作液通过液相色谱-质谱联用仪进行检测，以标准工作液中咪多卡的峰面积与内标物质的峰面积的比值对标准工作液中咪多卡浓度进行回归分析，得到空白基质配制的标准工作曲线；在相同条件下，将步骤(2)制备的待测样品液通过液相色谱-质谱联用仪进行检测，以保留时间和离子碎片丰度比定性，然后计算待测样品液中咪多卡的峰面积与内标物质的峰面积的比值，再代入标准工作曲线中，得到待测样品液中咪多卡浓度，然后根据待测样品液所代表的试样的质量计算得到待测动物性食品中咪多卡的含量。

步骤(1)中所述的动物源性食品为动物源乳品、动物源内脏以及动物源肉中的一种，优选为猪肉、牛肉、羊肉、牛奶、羊奶、猪肝、猪肾、鸡肉、鸭肉、鹅肉、兔肉等中的一种；

步骤(1)中所述的内标物质为咪多卡-D8，内标物质优选为以咪多卡-D8溶液的形式加入，其中溶剂为70％甲醇溶液；步骤(1)中所述的内标物质用量满足步骤(2)中所得待测样品液中内标物质的浓度与步骤(4)中标准工作液的浓度相同；

步骤(1)中所述的提取液为乙腈以及酸化乙腈中的一种，其中酸化乙腈是指含有乙酸的乙腈；所述的酸化乙腈优选为乙酸体积分数为0.1-4％的乙酸乙腈，更优选为1％乙酸乙腈；

步骤(1)中所述的提取液的用量满足每1g的动物性食品对应加入3～8mL的提取液，优选为5mL；

步骤(1)中所述的提取是指通过涡旋振荡和超声中的至少一种方式进行提取，提取后所得上清液即为提取液；优选的，所述的提取是指先涡旋振荡5min后再超声提取10min，然后离心取上清液；为了充分提取，可对滤渣多次重复萃取后合并上清液。

步骤(2)中所述的溶解液是指体积比为1：9的乙腈：0.1％甲酸水；

步骤(2)中所述的净化液正己烷优选为经过体积比为1：9的乙腈：0.1％甲酸水饱和后的，正己烷的用量满足每1g的动物性食品对应加入1-4mL的净化液，优选为1.5mL；所述的净化是指通过离心净化，优选为在8000r/min离心5min，取下清液；

步骤(4)中所述的标准工作液中内标物质的浓度为10-30ng/mL；优选为20ng/mL；所述的标准工作液中咪多卡的浓度优选为1-50ng/mL。

步骤(5)中所述的液相色谱-质谱联用仪中色谱条件为：

ACQUITYHSS T3色谱柱(1.8μm，2.1×100mm)；进样量5μL；流速：0.4mL/min；柱温40℃；梯度洗脱：洗脱液A为5mmol/L乙酸铵含0.1％(v/v)甲酸水(即1L的0.1％的甲酸水中含有5mmol的乙酸铵)，洗脱液B为含乙腈，洗脱程序见表1。

表1流动相梯度洗脱程序

步骤(5)中所述的液相色谱-质谱联用仪中质谱条件为：

气帘气流速：30L/min；雾化气流速(GS1)：50L/min；辅助加热气流速(GS2)：50L/min；碰撞气(CAD)：中等强度(medium)；辅助加热气温度：500℃；喷雾电压：5000V(ESI+)；扫描模式:多反应监测模式；定性离子对、定量离子对、碰撞能量(CE)、去簇电压(DP)、碰撞室入口电压(EP)和碰撞室出口电压(CXP)见表2。

表2目标化合物的质谱检测参数

注：*为定量离子。

本发明的原理为：

首先，优化出咪多卡残较好的流动相体系及色谱峰峰型。对比0.1％(v/v)甲酸水-甲醇、0.1％(v/v)甲酸水-乙腈、5mmol/L乙酸铵含0.1％(v/v)甲酸水-甲醇、5mmol/L乙酸铵含0.1％(v/v)甲酸水-乙腈做流动相，旨在找出咪多卡的响应值较好的流动相体系。对比BEH C18色谱柱、HSS T3色谱柱和Hilic色谱柱在响应值较好的流动相体系中的峰型和分离度，旨在找出更适用于咪多卡的色谱柱。

其次，优化出咪多卡提取效率较好的提取溶剂。称取2g阳性牛肉样品，对比乙腈、0.1％乙酸乙腈(v/v)、0.5％乙酸乙腈(v/v)、1％乙酸乙腈(v/v)、2％乙酸乙腈(v/v)、4％乙酸乙腈(v/v)作为提取溶剂，对咪多卡的提取效果。旨在找出一种适合动物源性食品中咪多卡残留量提取的较好提取溶剂。

再有，针对动物源性食品基质比较复杂，含有蛋白质、脂肪、矿物质等。按照样品前处理步骤提取不含目标化合物的空白基质提取液，并把提取液与标准品溶液混合而成，配成工作曲线，采用同位素内标法定量，对基质效应进行校正，降低项目分析的基质干扰。

最后，开发出了一个适用于动物源性食品中咪多卡检测准确灵敏可靠的液相色谱三重四级杆质谱检测方法，使用液相色谱三重四级杆质谱法测定进行检测，每针总时长为5.0min，与高效液相色谱法完成数据分析需要不少于15min相比，检测效率大大提高；而且还可根据保留时间和离子丰度比值进行定性，定量离子进行定量，提高方法的准确度。

因此本发明中动物源性食品中咪多卡残留量的测定通过：1％乙酸乙腈溶液提取，正己烷净化，利用液相色谱三重四级杆质谱法测定，以空白样品基质配标，保留时间和离子碎片丰度比定性，同位素内标法定量。

本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：

本发明建立了一种动物源性食品中咪多卡检测的高效液相色谱-串联质谱检测方法。该方法处理样品方式简单、分析速度快、灵敏度高、成本低、使用试剂少，对环境友好，采用同位素内标法定量减少基质效应及前处理过程目标物损耗对测定结果的影响，适用于动物源性食品中咪多卡的检测。为以后关于动物源性食品中咪多卡的检测提供重要的理论依据。

附图说明

图1为不同流动相体系下咪多卡的响应值；

图2为三种色谱柱(C18色谱柱、T3色谱柱、Hilic色谱柱)的色谱图；

图3为在优化的色谱及质谱条件下，咪多卡的总离子流色谱图；

图4为采用溶剂配曲线外标法定量，不同提取溶剂提取的咪多卡含量图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例中所用试剂如无特殊说明均可从市场常规购得。

一、流动相条件以及色谱柱的优化

本发明中，对比0.1％(v/v)甲酸水-甲醇、0.1％(v/v)甲酸水-乙腈、5mmol/L乙酸铵含0.1％(v/v)甲酸水-甲醇、5mmol/L乙酸铵含0.1％(v/v)甲酸水-乙腈做流动相，旨在找出咪多卡响应值最佳的流动相条件，待测液选择实施例1中浓度为50ng/mL的标准工作液，利用实施例1中液相色谱三重四级杆质谱进行咪多卡检测，结果如图1所示。从图1中可以看出，5mmol/L乙酸铵含0.1％(v/v)甲酸水-乙腈做为流动相，咪多卡的响应值最佳，因此，选5mmol/L乙酸铵含0.1％(v/v)甲酸水-乙腈为测试的流动相。

在5mmol/L乙酸铵含0.1％(v/v)甲酸水-乙腈流动相下，对比BEH C18色谱柱、HSST3色谱柱和Hilic色谱柱的峰型和分离度，C18色谱柱、T3色谱柱、Hilic色谱柱的图谱见图2。由图2种的色谱峰型可知HSS T3色谱柱的峰型最佳。在优化的色谱及质谱条件下，咪多卡的总离子流色谱图见图3。

二、提取和净化条件的优化

对于动物源性中的药物残留，采用QuEChERS净化方式或用正己烷净化测定时，乙腈和酸化乙腈是常用的提取溶剂；乙腈和甲醇在沉淀蛋白质方面优于其他溶剂，通过离心即可除去蛋白质等杂质。而常用的QuEChERS净化填料为C18、PSA、中性氧化铝、GBC、NH₂、Si，本实验对比了以上填料的净化效果，发现均对目标物有较强的吸附作用，所以未采用QuEChERS净化方式对咪多卡进行净化。本试验在对比乙腈体系及甲醇体系提取液时，发现甲醇体系作为提取溶液，氮吹后管内残留大量粘稠的杂质而无法吹干，影响提取效率及回收率。因此本试验选用乙腈提取溶剂，对其酸度及比例进行优化，比较了乙腈、0.1％乙酸乙腈(v/v)、0.5％乙酸乙腈(v/v)、1％乙酸乙腈(v/v)、2％乙酸乙腈(v/v)、4％乙酸乙腈(v/v)作为提取溶剂，对咪多卡的提取效果。在乙腈体系提取后已经除去大部分的蛋白质，在提取液中主要的杂质是油脂类和其他非极性组分，而正己烷能很好的去除提取液中的杂质，且操作简单，大大提高效率，同时相比SPE净化及QuEChERS成本大大降低，节约试剂，减少环境污染，因此采用正己烷直接净化的方式。称取2g阳性牛肉样品(精确至0.001g)于50mL离心管中，加入10mL提取溶液，涡旋混合器上振荡5min，超声提取10min，8000r/min离心5min，取上清液于另一离心管中，残渣加入10mL提取液重复提取一次，合并提取液，在40℃下氮吹至干，准确加入5mmol/L乙酸铵含0.1％(v/v)甲酸水+乙腈(9+1)(v/v)1mL于离心管中，超声溶解1min，加3mL正己烷振荡混合1min，8000r/min离心5min，取下层清液过0.22μm滤膜，采用溶剂配曲线外标法定量(此时色谱和质谱的条件同实施例1)，咪多卡的含量见图4。由图4可知，以1％乙酸乙腈(v/v)的溶液作为提取溶剂时，提取效率最好，同时乙腈能沉淀液态乳中的蛋白质等杂质且提液中蛋白质的含量低。因此，采用1％乙酸乙腈(v/v)溶液作为咪多卡的提取溶剂。

三、优化定量方法

通过溶剂配制标准和空白基质(空白基质的制备同实施例1)配制标准建立5点校正曲线，咪多卡在猪肝、牛奶、牛肉、鸡肉中的基质效应测定结果见表3。其中基质效应通过其斜率进行计算：ME(％)＝(基质标曲斜率/溶剂标曲斜率-1)×100；ME：0％-20％：弱基质效应；ME：20％-50％，中等基质效应；ME＞50％，强基质效应；若为负值则是负效应。

表3咪多卡在不同基质中的基质效应

从上述结果可知，利用液相色串联三重四级杆质谱法测定猪肝、牛奶、牛肉、鸡肉中咪多卡，其基质效应为弱负效应。基质效应不能被消除，但可以通过基质配标准工作曲线同时加入内标，对基质效应进行校正，相比传统的溶剂配标准工作曲线，能提高回收率，且其定量准确性更高。因此采用样品空白基质配标，同位素内标法定量，减少基质效应。

实施例1：一种液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法

一、仪器和试剂

1、液相色谱三重四级杆串联质谱仪(AB Triple Quad 4500)

2、标准物质：咪多卡、二盐酸咪多卡-D8(简称咪多卡-D8)标准品均购于阿尔塔科技有限公司

3、分析纯试剂：甲酸(华润化学，500mL),乙酸(华润化学，500mL)，无水硫酸钠(大茂，500g)

4、色谱纯试剂：乙腈(CNW 4L)，甲醇(CNW 4L)，正己烷(CNW4L)

5、质谱纯试剂：甲酸(fisher 50mL)，乙酸铵(fisher 50g)

二、试剂配制

1％乙酸乙腈：移取10mL冰乙酸，用乙腈定容至1L。

0.1％甲酸水：移取1mL甲酸，用水定容至1L。

乙腈+0.1％甲酸水(1+9)：取乙腈和0.1％甲酸水按1:9(体积比)混匀。

70％甲醇溶液：准确移取70mL甲醇用水定容至100mL。

三、标准溶液的配制

①储备液配制:准确称取咪多卡、二盐酸咪多卡-D8标准物质适量，用70％甲醇溶液溶解并稀释成咪多卡浓度为1μg/mL、咪多卡-D8浓度为1μg/mL。

②标准工作液配制:分别吸取标准储备液，用空白基质提取液稀释咪多卡为1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL，内标咪多卡-D8浓度为20ng/mL。

四、空白基质提取液的制备

1、提取称取试料2g(精确至0.001g)于50mL聚乙烯离心管中，加入10mL1％乙酸乙腈溶液，涡旋混合器上振荡5min，超声提取10min，8000r/min离心5min，取上清液于另一离心管中，残渣加入10mL1％乙酸乙腈溶液重复提取一次，合并提取液，在40℃下氮吹至干，待净化。

2、净化准确加入乙腈+0.1％甲酸水(1+9)1mL于离心管中，超声溶解1min，加3mL正己烷振荡混合1min，8000r/min离心5min。

3、取下层清液过0.22μm滤膜，即得空白基质提取液。

五、样品溶液的制备

1、提取称取试料2g(精确至0.001g)于50mL聚乙烯离心管中，加入20μL浓度为1μg/mL的咪多卡-D8标准溶液，10mL1％乙酸乙腈溶液，涡旋混合器上振荡5min，超声提取10min，8000r/min离心5min，取上清液于另一离心管中，残渣加入10mL1％乙酸乙腈溶液重复提取一次，合并提取液，在40℃下氮吹至干，待净化。

3、取下层清液过0.22μm滤膜，装瓶，得样品液，上机。

六、色谱条件

ACQUITYT3色谱柱(1.8μm，2.1×100mm)；进样量5μL；流速：0.4mL/min；柱温40℃；梯度洗脱：洗脱液A为5mmol/L乙酸铵含0.1％(v/v)甲酸水，洗脱液B为含乙腈，洗脱程序见表1。

表1流动相梯度洗脱程序

七、质谱条件

气帘气流速：30L/min；雾化气流速(GS1)：50L/min；辅助加热气流速(GS2)：50L/min；碰撞气(CAD)：中等强度(medium)；辅助加热气温度：500℃；喷雾电压：5000V(ESI+)；扫描模式:多反应监测模式。定性离子对、定量离子对、碰撞能量(CE)、去簇电压(DP)、碰撞室入口电压(EP)和碰撞室出口电压(CXP)见表2。

表2目标化合物的质谱检测参数

注：*为定量离子。

八、定性和定量

将样品溶液利用液相色谱串联三重四级杆质谱仪检测，以保留时间和离子碎片丰度比定性，定量离子峰面积内标法定量测定咪多卡。定量过程具体如下：

将不同浓度的标准工作液经液相色谱串联三重四级杆质谱仪检测，以标准工作液中咪多卡的峰面积与内标物质的峰面积的比值对标准工作液中咪多卡浓度进行回归分析，线性范围如下表4所示，得到空白基质配制的标准工作曲线；在相同条件下，将步骤五制备的待测样品溶液通过液相色谱串联三重四级杆质谱仪进行检测，计算待测样品液中咪多卡的峰面积与内标物质的峰面积的比值，然后代入标准工作曲线中，得到待测样品液中咪多卡浓度，然后根据待测样品液所代表的试样的质量计算得到待测动物性食品中咪多卡的含量。

表4线性范围(ng/mL)

可参照“GB31650-2019食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量”判定动物源性食品中咪多卡含量是否超标。

实施例2：检出限和定量限

在空白基质中分别添加咪多卡，以定量离子信噪比为3时的浓度为检出限，信噪比为10时的浓度为定量限，结果如表5所示。

表5检出限和定量限

从表中可以看出，6种基质的咪多卡的检出限在均小于等于0.3μg/kg，定量限均小于等于1μg/kg，检出限和定量限均较低，能满足判定标准的要求。

实施例3：精密度和准确度

采用不同类型基质(牛奶、猪肝、猪肾、鸡肉)空白样品，进行添加回收率和精密度的实验。空白样品分别添加咪多卡1μg/kg，2μg/kg，10μg/kg3个浓度水平并按照实施例1的方法对每个添加水平进行平行测定6次，采用空白基质配制曲线内标法定量进而验证方法适用性，结果表6：

表6 4种基质咪多卡的回收率

结果表明样品检测平行性良好，RSD小于等于RSD≤10％，回收率在83.0％-105.3％。

实施例4：样品实用性

在市场随即采购了一批牛奶、牛肉、猪肝、鸭肉，按照该方法开展检测工作，咪多卡的检出结果如表7(单位μg/kg)。

表7实际样品测定数据

结论：经过对乳、内脏及肉样品提取方式进行优化，有效除去样品中的干扰测定的基质，空白样品基质配标，内标法定量，利用液相色谱串联三重四级杆质谱仪检测，以保留时间和离子碎片丰度比定性，定量离子峰面积内标法定量测定咪多卡。经过优化后，牛奶、猪肝、猪肾、鸡肉基质中咪多卡回收率在83.0％-105.3％，24h内精密度和稳定性测试RSD≤10％，线性范围在0.5μg/kg～25μg/kg之间，检出限和定量限均能满足相关标准的要求。

方法分离良好专属性强，检出限和定量限足够低，线性范围良好，重复性好，准确可靠，可推广应运用于动物源性食品种咪多卡的监督检测当中。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，其特征在于具体包括以下步骤：

(3)空白基质样品液的制备：去掉步骤(1)中“加入内标物质”的操作，然后按修改后的步骤(1)和步骤(2)对不含有咪多卡的动物源性食品进行提取和净化，即得到空白基质样品液；

(5)分析和测定：将步骤(4)中不同浓度的标准工作液通过液相色谱-质谱联用仪进行检测，以标准工作液中咪多卡的峰面积与内标物质的峰面积的比值对标准工作液中咪多卡浓度进行回归分析，得到空白基质配制的标准工作曲线；在相同条件下，将步骤(2)制备的待测样品液通过液相色谱-质谱联用仪进行检测，以保留时间和离子碎片丰度比定性，然后计算待测样品液中咪多卡的峰面积与内标物质的峰面积的比值，再代入标准工作曲线中，得到待测样品液中咪多卡浓度，然后根据待测样品液所代表的试样的质量计算得到待测动物性食品中咪多卡的含量；

步骤(1)中所述的提取液为酸化乙腈，其中酸化乙腈是指含有乙酸的乙腈；所述的酸化乙腈为乙酸体积分数为0.1-4％的乙酸乙腈；

步骤(5)中所述的液相色谱-质谱联用仪中色谱条件为：

HSS T3色谱柱，1.8μm，2.1×100mm；进样量5μL；流速：0.4mL/min；柱温40℃；梯度洗脱：洗脱液A为5mmol/L乙酸铵含0.1％甲酸水，洗脱液B为含乙腈，洗脱程序见表1：

表1流动相梯度洗脱程序

2.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的动物源性食品为动物源乳品、动物源内脏以及动物源肉中的一种。

3.根据权利要求2所述的液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的动物源性食品为猪肉、牛肉、羊肉、牛奶、羊奶、猪肝、猪肾、鸡肉、鸭肉、鹅肉、兔肉中的一种。

4.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的内标物质为二盐酸咪多卡-D8；步骤(1)中所述的内标物质用量满足步骤(2)中所得待测样品液中内标物质的浓度与步骤(4)中标准工作液的浓度相同。

5.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的提取液的用量满足每1g的动物性食品对应加入3-8mL的提取液；

步骤(1)中所述的提取是指通过涡旋振荡和超声中的至少一种方式进行提取。

6.根据权利要求5所述的液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的酸化乙腈为乙酸体积分数为1％乙酸乙腈；

步骤(1)中所述的提取液的用量满足每1g的动物性食品对应加入5mL的提取液。

7.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的净化液正己烷的用量满足每1g的动物性食品对应加入1-4mL的净化液；所述的净化是指通过离心净化。

8.根据权利要求7所述的液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的净化液正己烷的用量满足每1g的动物性食品对应加入1.5mL的净化液；所述的净化是指在8000r/min离心5min，取下清液。

9.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，其特征在于：

步骤(4)中所述的标准工作液中内标物质的浓度为10-30ng/mL；步骤(2)中所得待测样品液中内标物质的浓度与步骤(4)中标准工作液的浓度相同。

10.根据权利要求9所述的液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，其特征在于：

步骤(4)中所述的标准工作液中内标物质的浓度为20ng/mL。

11.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法检测动物性食品中咪多卡的残留量的方法，其特征在于：

步骤(5)中所述的液相色谱-质谱联用仪中质谱条件为：

气帘气流速：30L/min；雾化气流速：50L/min；辅助加热气流速：50L/min；碰撞气：中等强度；辅助加热气温度：500℃；喷雾电压：5000V；扫描模式:多反应监测模式；定性离子对、定量离子对、碰撞能量、去簇电压、碰撞室入口电压和碰撞室出口电压见表2；

表2目标化合物的质谱检测参数

注：*为定量离子。