CN110946129A - 细胞复苏后高活率冻存液 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种细胞复苏后高活率冻存液，包括以下组分及含量：海藻糖 6‑10 v/v%；β‑葡聚糖 6‑10 v/v%；羟乙基淀粉 2‑5 v/v%；氨基酸 0.1‑2.0 v/v%；甲基纤维素 0.15‑1.5 v/v%；保护剂 0.18‑0.25 v/v%；甘油 16‑20 v/v%；余量为基础培养基。本发明的细胞复苏后高活率冻存液可以增加复苏后细胞的存活率达90％以上，保存于本发明细胞复苏后高活率冻存液中的细胞可以快速用于临床治疗，为间充质干细胞进一步应用于临床治疗奠定了基础。

Description

细胞复苏后高活率冻存液
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体是一种细胞复苏后高活率冻存液。
背景技术
间充质干细胞是来源于发育早期中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，广泛存在于全身多种组织中，可在体外培养扩增，并能在特定条件控制下分化为神经细胞、成骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞等，在细胞替代治疗及组织工程方面有极大的应用价值。目前，间充质干细胞MSC(Mesenchymal stem cells,MSC)主要来源于骨髓和脐带。
对于骨髓来源的间充质干细胞，目前已有将其应用于临床的报道，如Tan等报道骨髓来源MSC治疗降低肾移植术后6个月急性排斥反应的发生率，提示MSC有可能成为新的诱导耐受的方法。Peng等报道供体骨髓来源MSC输注可以在保证肾移植患者安全的情况下减少传统免疫抑制剂的用量，减少药物性肾损伤。
人脐带间充质干细胞是组织工程理想的种子细胞。其除具有取材方便，来源广，数量充足，增殖能力强，长期传代不改变，分泌具有合适构成的细胞外基质等特点外，还具有以下优点：采集脐带对产妇和新生儿没有任何危害及损伤；干/祖细胞更原始，有更强的增殖分化能力；免疫细胞功能活性低，免疫功能不够成熟，处于一种缄默状态，不会触发免疫反应及引起移植物抗宿主病；不会有肿瘤细胞，病毒和病原微生物的感染及传播几率也相对较低；不涉及社会、伦理及法律方面的更多争议。
目前，阻碍间充质干细胞广泛应用于临床的难题是细胞复苏后，细胞膜较为脆弱，此时若选用常规的临床试剂生理盐水作为细胞的保存液，细胞在长时间运输时，细胞容易坏死而使活性降低。因此，研发一种细胞复苏后高活率冻存液是非常有必要的。
发明内容
本发明就是为了解决上述技术问题，所提出一种细胞复苏后高活率冻存液。
本发明是按照以下技术方案实现的。
一种细胞复苏后高活率冻存液，包括以下组分：基础培养基、保护剂、甘油、海藻糖、β-葡聚糖、羟乙基淀粉、氨基酸，甲基纤维素。
进一步的，各组分的含量为：
海藻糖 6-10v/v％；
β-葡聚糖 6-10v/v％；
羟乙基淀粉 2-5v/v％；
氨基酸 0.1-2.0v/v％；
甲基纤维素 0.15-1.5v/v％；
保护剂 0.18-0.25v/v％；
甘油 16-20v/v％；
余量为基础培养基。
进一步的，各组分的含量为：
海藻糖 8v/v％；
β-葡聚糖 8v/v％；
羟乙基淀粉 3v/v％；
氨基酸 1.0v/v％；
甲基纤维素 0.8v/v％；
保护剂 0.2v/v％；
甘油 18v/v％；
余量为基础培养基。
进一步的，所述保护剂包括海藻酸钠和/或透明质酸钠。
进一步的，所述基础培养基包括Lonza基础培养基和/或DMEM高糖培养基。
进一步的，所述氨基酸为脯氨酸和/或谷氨酰胺。
进一步的，所述冻存液还包括依克多因。
进一步的，所述依克多因的含量为0.05-0.08v/v％。
进一步的，所述冻存液还包括聚乙烯吡咯烷酮。
进一步的，所述聚乙烯吡咯烷酮的含量为0.01-0.05v/v％。
本发明获得了如下的有益效果。
本发明有效的解决了细胞复苏后，细胞膜较为脆弱，选用常规的临床试剂细胞在长时间运输时，细胞容易坏死而活性降低的问题。本发明的细胞复苏后高活率冻存液可以增加复苏后细胞的存活率达90％以上，保存于本发明细胞复苏后高活率冻存液中的细胞可以快速用于临床治疗，为间充质干细胞进一步应用于临床治疗奠定了基础。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1
一种细胞复苏后高活率冻存液，包括以下组分和含量：
海藻糖 6v/v％；
β-葡聚糖 6v/v％；
羟乙基淀粉 2v/v％；
氨基酸 0.1v/v％；
甲基纤维素 0.15v/v％；
保护剂 0.18v/v％；
甘油 16v/v％；
余量为基础培养基。
实施例2
一种细胞复苏后高活率冻存液，包括以下组分和含量：
海藻糖 10v/v％；
β-葡聚糖 10v/v％；
羟乙基淀粉 5v/v％；
氨基酸 2.0v/v％；
甲基纤维素 1.5v/v％；
保护剂 0.25v/v％；
甘油 20v/v％；
余量为基础培养基。
实施例3
一种细胞复苏后高活率冻存液，包括以下组分和含量：
海藻糖 8v/v％；
β-葡聚糖 8v/v％；
羟乙基淀粉 3v/v％；
氨基酸 1.0v/v％；
甲基纤维素 0.8v/v％；
保护剂 0.2v/v％；
甘油 18v/v％；
余量为基础培养基。
实施例4
一种细胞复苏后高活率冻存液，包括以下组分和含量：
海藻糖 6v/v％；
β-葡聚糖 6v/v％；
羟乙基淀粉 2v/v％；
氨基酸 0.1v/v％；
甲基纤维素 0.15v/v％；
保护剂 0.18v/v％；
甘油 16v/v％；
依克多因 0.05v/v％；
余量为基础培养基。
实施例5
一种细胞复苏后高活率冻存液，包括以下组分和含量：
海藻糖 10v/v％；
β-葡聚糖 10v/v％；
羟乙基淀粉 5v/v％；
氨基酸 2.0v/v％；
甲基纤维素 1.5v/v％；
保护剂 0.25v/v％；
甘油 20v/v％；
依克多因 0.08v/v％；
余量为基础培养基。
实施例6
一种细胞复苏后高活率冻存液，包括以下组分和含量：
海藻糖 8v/v％；
β-葡聚糖 8v/v％；
羟乙基淀粉 3v/v％；
氨基酸 1.0v/v％；
甲基纤维素 0.8v/v％；
保护剂 0.2v/v％；
甘油 18v/v％；
依克多因0.06v/v％；
余量为基础培养基。
实施例7
一种细胞复苏后高活率冻存液，包括以下组分和含量：
海藻糖 6v/v％；
β-葡聚糖 6v/v％；
羟乙基淀粉 2v/v％；
氨基酸 0.1v/v％；
甲基纤维素 0.15v/v％；
保护剂 0.18v/v％；
甘油 16v/v％；
依克多因 0.05v/v％；
聚乙烯吡咯烷酮的含量为0.01v/v％；
余量为基础培养基。
实施例8
一种细胞复苏后高活率冻存液，包括以下组分和含量：
海藻糖 10v/v％；
β-葡聚糖 10v/v％；
羟乙基淀粉 5v/v％；
氨基酸 2.0v/v％；
甲基纤维素 1.5v/v％；
保护剂 0.25v/v％；
甘油 20v/v％；
依克多因0.08v/v％；
聚乙烯吡咯烷酮的含量为0.05v/v％；
余量为基础培养基。
实施例9
一种细胞复苏后高活率冻存液，包括以下组分和含量：
海藻糖 8v/v％；
β-葡聚糖 8v/v％；
羟乙基淀粉 3v/v％；
氨基酸 1.0v/v％；
甲基纤维素 0.8v/v％；
保护剂 0.2v/v％；
甘油 18v/v％；
依克多因0.06v/v％；
聚乙烯吡咯烷酮的含量为0.03v/v％；
余量为基础培养基。
实施例10实施例1-9细胞(骨髓来源的间充质干细胞)活率
Figure BDA0002266064920000051
Figure BDA0002266064920000061
实施例11实施例1-9不同来源细胞(1个月)
Figure BDA0002266064920000062
最后应说明的是以上各实施例仅用以说明本发明的实施例的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明的实施例进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明的实施例各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种细胞复苏后高活率冻存液，其特征在于：包括以下组分：基础培养基、保护剂、甘油、海藻糖、β-葡聚糖、羟乙基淀粉、氨基酸，甲基纤维素。
2.根据权利要求1所述的一种细胞复苏后高活率冻存液，其特征在于：各组分的含量为：
海藻糖 6-10 v/v%；
β-葡聚糖 6-10 v/v%；
羟乙基淀粉 2-5 v/v%；
氨基酸 0.1-2.0 v/v%；
甲基纤维素 0.15-1.5 v/v%；
保护剂 0.18-0.25 v/v%；
甘油 16-20 v/v%；
余量为基础培养基。
3.根据权利要求1所述的一种细胞复苏后高活率冻存液，其特征在于：各组分的含量为：
海藻糖 8 v/v%；
β-葡聚糖 8 v/v%；
羟乙基淀粉 3 v/v%；
氨基酸 1.0 v/v%；
甲基纤维素 0.8 v/v%；
保护剂 0.2 v/v%；
甘油 18 v/v%；
余量为基础培养基。
4.根据权利要求1所述的一种细胞复苏后高活率冻存液，其特征在于：所述保护剂包括海藻酸钠和/或透明质酸钠。
5.根据权利要求1所述的一种细胞复苏后高活率冻存液，其特征在于：所述基础培养基包括Lonza基础培养基和/或DMEM高糖培养基。
6.根据权利要求1所述的一种细胞复苏后高活率冻存液，其特征在于：所述氨基酸为脯氨酸和/或谷氨酰胺。
7.根据权利要求1所述的一种细胞复苏后高活率冻存液，其特征在于：所述冻存液还包括依克多因。
8.根据权利要求7所述的一种细胞复苏后高活率冻存液，其特征在于：所述依克多因的含量为0.05-0.08 v/v%。
9.根据权利要求1或7所述的一种细胞复苏后高活率冻存液，其特征在于：所述冻存液还包括聚乙烯吡咯烷酮。
10.根据权利要求9所述的一种细胞复苏后高活率冻存液，其特征在于：所述聚乙烯吡咯烷酮的含量为0.01-0.05 v/v%。
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