CN110882264A - 一种天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种天麻素与甘露糖醛酸寡糖的药物组合物及其用途，本发明通过实验证明，相比于天麻素和甘露糖醛酸寡糖单独给药，天麻素和甘露糖醛酸寡糖联合给药后，产生了显著优于单独给药的协同增效的保护神经细胞和心肌细胞的效果，并可显著协同提高线粒体的功能，促进线粒体新生，有效预防和治疗神经系统疾病和心肌缺氧损伤。

Description

一种天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物及其用途
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物及其用途。
背景技术
天麻素(Gastrodin)，又名4-羟甲基苯基-beta-D-吡喃葡萄糖甙，为兰科植物天麻的干燥根块提取物，具有较好的镇静和安眠作用，对神经衰弱、失眠、头痛症状有缓解作用。大量的现代药理学研究表明，天麻素对神经衰弱综合征、高血压、糖尿病及周围神经病变、阿尔兹海默综合症、帕金森病等都有一定的疗效。口服天麻素后，其首先在胃中大量溶解和降解，到达肠道后药物利用率不高。因此，对于天麻素联合用药以达到增强其疗效或者提高生物利用率的研究引起了科学家的广泛关注。
蔡军等2005年在CN 200510044530中公开了包括淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素的药物组合物及其制备方法和应用；刁文瑞等于2014年在CN201410423882中公开了一种天麻素阿魏酸酯类化合物的制备及其应用；李志勇等于2016年分别在CN 201610515787种公开了包括天麻素在内的血管保护药物组合物及其用途；但是，目前还没有将天麻素和甘露糖醛酸结合用于改善中枢神经系统疾病或者血栓性疾病以及代谢综合症中的公开报道。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种天麻素与甘露糖醛酸寡糖的药物组合物及其用途，该药物组合物中甘露糖醛酸寡糖和天麻素复配后，具有非常显著的协同增效保护神经细胞和心肌细胞的功能。
为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
本发明提供了一种天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物，所述药物组合物中天麻素和甘露糖醛酸寡糖的重量比为1∶6-3∶1。
进一步的，所述天麻素和甘露糖醛酸寡糖的重量比为1∶5-2∶1。
进一步的，所述天麻素和甘露糖醛酸寡糖的重量比为1∶5-1.5∶1。
进一步的，所述天麻素和甘露糖醛酸寡糖的重量比为1∶4-1.5∶1。
进一步的，所述天麻素和甘露糖醛酸寡糖的重量比为1∶4-1.25∶1。
进一步的，所述天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物的总含量为100ug/ml以上。
进一步的，单位剂量的药物组合物中所述天麻素的含量为10-500mg。
进一步的，单位剂量的药物组合物中，所述天麻素的含量为15-375mg。
进一步的，单位剂量的药物组合物中，所述天麻素的含量为35-300mg。
进一步的，所述的甘露糖醛酸寡糖选自褐藻降解产物及其进一步还原端氧化的产物。
本发明还提供了天麻素和/或甘露糖醛酸寡糖在用于制备治疗中枢神经系统疾病和心肌缺氧疾病的药物中的用途。
进一步的，所述中枢神经系统包括老年痴呆、帕金森、脑中风；心肌缺氧疾病包括心血管缺血缺氧导致的心血管损伤
进一步的，天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物为通过口服给药的药物组合物，所述的药物组合物为片剂、胶囊剂、口服液、散剂、颗粒剂。
进一步的，所述的天麻素和甘露糖醛酸寡糖包括其可药用的盐、选择性硫酸化、磷酸化、硝酸化、丙酯化取代类似物或者一种或者多种前述化合物的组合，还包括二者的衍生物及其衍生物在药物上可接受的盐或者盐的溶剂化物。
与现有技术相比，本发明的优点和技术效果是：本发明提供了一种天麻素与甘露糖醛酸寡糖的药物组合物及其用途，本发明通过实验证明，相比于天麻素和甘露糖醛酸寡糖单独给药，天麻素和甘露糖醛酸寡糖联合给药后，产生了显著优于单独给药的协同增效的保护神经细胞和心肌细胞的效果，并可显著协同提高线粒体的功能，促进线粒体新生，有效预防和治疗神经系统疾病和心肌缺氧损伤。
具体实施方式
下面对本发明实施实例中的技术方案进行细节描述，显然，所描述的实施实例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：天麻素与甘露糖醛酸寡糖联合应用显著保护神经细胞免受Aβ蛋白的损伤
将神经细胞PC12接种于MEM完全培养液中(含有100U/mL青霉素、100U/mL链霉素和10％FBS)，置于37℃、5％CO2培养箱中培养，将每孔8000个细胞种植于96孔板中，以未加Aβ1-42的细胞活力为阴性对照，观察天麻素与甘露糖醛酸寡糖联合应用对Aβ诱导产生的神经细胞毒的抑制作用。
具体实施步骤如下：将PC12细胞接种于MEM完全培养液中，置入96孔板中培养，放入恒温细胞培养箱孵育24小时后，加入提前聚集的Aβ蛋白寡聚体，2h后，每孔加入天麻素或者甘露糖醛酸寡糖，浓度为200ug/ml，联合组给予1份天麻素联合2.25份甘露糖醛酸寡糖(1：2.25)的复配物100或者200ug/ml，培养箱继续孵育24h。结束后，采用MTT法测定细胞存活率。每次三个平行，实验重复三次。
表1结果表明，各组均对Aβ诱导的神经细胞损伤具有保护作用，但联合组显著的优于单独的天麻素或者甘露糖醛酸寡糖组，同时，联合组在100ug/ml的剂量时显著优于单独的200ug/ml，这表明联合后具有显著的协同增效的效果。联合组在200ug/ml时细胞存活率高达75％。
表1天麻素与甘露糖醛酸寡糖各组对Aβ聚集体诱导神经细胞损伤的影响
Figure BDA0002270952650000021
Figure BDA0002270952650000031
实施例2、天麻素与甘露糖醛酸寡糖对CoCl2诱导神经细胞和心肌细胞缺氧损伤的保护作用
将神经细胞PC12或者心肌细胞H6C2接种于MEM完全培养液中(含有100U/mL青霉素、100U/mL链霉素和10％FBS)，置于37℃、5％CO2培养箱中培养，将每孔5000个细胞种植于96孔板中，以未加CoCl2的细胞活力为阴性对照，观察天麻素与甘露糖醛酸寡糖联合应用对CoCl2诱导产生的神经细胞毒的抑制作用。
具体实施步骤如下：将PC12和H9C2细胞接种于MEM或者DMEM完全培养液中，置入96孔板中培养，放入恒温细胞培养箱孵育24小时后，加入提前溶解好的含CoCl2的损伤液，2h后，每孔加入天麻素或者甘露糖醛酸寡糖，浓度为200ug/ml，联合组给予一份天麻素联合1.75份甘露糖醛酸寡糖的复配物100或者200ug/ml，培养箱继续孵育48小时。结束后，采用MTT法测定细胞存活率。每次三个平行，实验重复三次。
表2和3结果表明，各组均对CoCl2诱导的神经细胞和心肌细胞损伤具有保护作用，但联合组显著优于单独的天麻素或者甘露糖醛酸寡糖组，同时，联合组具有协同增效的显著效果，而且联合组在200ug/ml时细胞存活率高达85-88％。
表2天麻素与甘露糖醛酸寡糖各组对CoCl2缺氧诱导神经细胞损伤的影响
Figure BDA0002270952650000032
表3 天麻素与甘露糖醛酸寡糖各组对CoCl2缺氧诱导心肌细胞损伤的影响
Figure BDA0002270952650000033
实施例3：天麻素与甘露糖醛酸寡糖联合应用显著提高神经细胞的线粒体膜电位
将神经细胞PC12接种于MEM完全培养液中(含有100U/mL青霉素、100U/mL链霉素和10％FBS)，置于37℃、5％CO2培养箱中培养，将每孔8000个细胞种植于96孔板中，以未加Aβ1-42的细胞活力为阴性对照。
具体实施步骤如下：将PC12细胞接种于MEM完全培养液中，置入96孔板中培养，放入恒温细胞培养箱孵育24小时后，加入提前聚集的Aβ蛋白寡聚体，2h后，每孔加入天麻素或者甘露糖醛酸寡糖，浓度为200ug/ml，联合组给予一份天麻素联合2.25份甘露糖醛酸寡糖的复配物100或者200ug/ml，培养箱继续孵育24h。结束后，采用JC-1(1X)染色法检测线粒体膜电位，检测波长为(488/585和488/535)，结果为红色/绿色荧光比值。每次三个平行，实验重复三次。
表4结果表明，各组均对Aβ诱导的神经细胞和心肌细胞损伤具有保护作用，但联合组显著的优于单独的天麻素或者甘露糖醛酸寡糖组，同时，联合组具有协同增效的显著效果，而且联合组在200ug/ml时细胞的线粒体功能得到有效恢复。
表4 天麻素与甘露糖醛酸寡糖各组对线粒体膜电位的影响
Figure BDA0002270952650000041
实施例4：天麻素与甘露糖醛酸寡糖联合应用显著促进神经细胞和心肌细胞线粒体的新生
将神经细胞PC12接种于MEM完全培养液中(含有100U/mL青霉素、100U/mL链霉素和10％FBS)，置于37℃、5％CO2培养箱中培养，将每孔8000个细胞种植于96孔板中，以未加Aβ1-42的细胞活力为阴性对照。
具体实施步骤如下：将PC12细胞接种于MEM完全培养液中，置入96孔板中培养，放入恒温细胞培养箱孵育24小时后，加入提前聚集的Aβ蛋白寡聚体，2h后，每孔加入天麻素或者甘露糖醛酸寡糖，浓度为200ug/ml，联合组给予一份天麻素联合2.25份甘露糖醛酸寡糖的复配物100或者200ug/ml，培养箱继续孵育24h。结束后，Trizol提取总RNA，反转录cDNA并进行PCR的荧光定量：cDNA链是由1ug总RNA和少量dNTP用反转录酶XL(购自Takara，Shiga，Japan公司)合成的。用RT-PCR仪的多次循环来扩增以达到定量的目的(Bio-Rad，Hercules，CA)。这两种PCR产物的量通过SYBER Green的荧光接收器在每一个循环最后退火这一步进行跟踪定量。反应在含有200nmol正反因物的25ul体系中完成。数据表示为：2-Δct，ΔCt＝Ct-Ct 18S，数据表示为Fold of Control。
表5结果表明，各组均对Aβ诱导的神经细胞线粒体减少具有有效的恢复作用，但联合组显著的优于单独的天麻素或者甘露糖醛酸寡糖组，同时，联合组具有协同增效的显著效果，而且联合组在200ug/ml时细胞的线粒体数量得到有效恢复。
表5 天麻素与甘露糖醛酸寡糖各组对mtDNA数量的影响
Figure BDA0002270952650000051
以上实施例仅说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中天麻素和甘露糖醛酸寡糖的重量比为1： 6- 3：1。
2.根据权利要求1所述的天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物，其特征在于，所述天麻素和甘露糖醛酸寡糖的重量比为1：5-1.5：1。
3.根据权利要求1所述的天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物，其特征在于，所述天麻素和甘露糖醛酸寡糖的重量比为1：4-1.25：1。
4.根据权利要求1所述的天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物，其特征在于，单位剂量的药物组合物中所述天麻素的含量为10-500mg。
5.根据权利要求1所述的天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物，其特征在于，单位剂量的药物组合物中，所述天麻素的含量为15-375mg。
6.根据权利要求1所述的天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物，其特征在于，所述的甘露糖醛酸寡糖选自褐藻降解产物及其进一步还原端氧化的产物。
7.天麻素和/或甘露糖醛酸寡糖在用于制备治疗中枢神经系统疾病和心肌缺氧疾病的药物中的用途。
8.根据权利要求7所述的天麻素和/或甘露糖醛酸寡糖在用于制备治疗中枢神经系统疾病和心肌缺氧疾病的药物中的用途，其特征在于，所述中枢神经系统包括老年痴呆、帕金森、脑中风；心肌缺氧疾病包括心血管缺血缺氧导致的心血管损伤。
9.根据权利要求7所述的天麻素和/或甘露糖醛酸寡糖在用于制备治疗中枢神经系统疾病和心肌缺氧疾病的药物中的用途，其特征在于，天麻素和甘露糖醛酸寡糖的药物组合物为通过口服给药的药物组合物，所述的药物组合物为片剂、胶囊剂、口服液、散剂、颗粒剂。
10.根据权利要求7所述的天麻素和/或甘露糖醛酸寡糖在用于制备治疗中枢神经系统疾病和心肌缺氧疾病的药物中的用途，其特征在于，所述的天麻素和甘露糖醛酸寡糖包括其可药用的盐、选择性硫酸化、磷酸化、硝酸化、丙酯化取代类似物或者一种或者多种前述化合物的组合，还包括二者的衍生物及其衍生物在药物上可接受的盐或者盐的溶剂化物。
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