CN111166734A - 萘醌类物质治疗病原性生物引起的肺炎的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明为萘醌类物质治疗病原性生物引起的肺炎的用途,解决病原性生物引起的肺炎中的肺部细胞的修复和抵抗病原性生物的侵害的问题,萘醌类物质的主要结构式如下:
Description
技术领域
本发明涉及紫草中萘醌类物质的用途和提取方法。
紫草中萘醌类物质,主要包含的物质有以下几种,左旋紫草素,乙酰紫草素,β-乙酰氧基异戍酰阿卡宁,去氧紫草素,异丁酰紫草素,β-β“-二甲基丙烯酰阿卡宁,2-甲基丁基酰紫草素等类似的结合的活性成分,具有广谱抗菌作用,可治疗由病原性生物引起的肺炎(含NCP-新型冠状病毒感染的肺炎)。萘醌类物质的提取和纯化以及萘醌单体的分离纯化,主要采用多溶剂的方法进行,其中,多溶剂包括,甲醇,乙醇,乙酸乙酯,石油醚,三氯甲烷,丁醇,丙酮等中的两种或两种以上溶剂。
背景技术
紫草始载于《神农本草经》,列为中品,《本草纲目》、《名医别录》等历代医药经典都有载录,明确指出紫草“治斑疹痘毒”、“消解痘毒”,说明含有抗病毒的活性成分。紫草,味苦、性寒,归心、肝经,具凉血、活血、解毒透疹、补中益气功能。主治血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疮疡湿疹、水火烫伤等。
抗炎作用是紫草的传统药效,即消炎、收敛和解热。紫草提取物对动物实验性炎症和与炎症有关的疾病如静脉炎、色素性紫癜、过敏性紫癜等具有较好的抗炎症作用。林志彬等作了相关实验研究,其主要相关成分是β,β-二甲基丙烯酰紫草素和乙酰紫草素,它们对炎症急性渗出期的血管通透性亢进、渗出和水肿有明显的拮抗作用。其作用机制,王文杰等利用大鼠白细胞体外温孵系统,观察了紫草对LTB4和5HETE生物合成的影响,研究认为可能是影响了花生烯酸5-脂氧酶的代谢。
Chen等从细胞生物学原理出发,较详细地解释了紫草是一个选择性很强的抗炎药物,在治疗自身免疫性疾病方面很有潜力,例如风湿性关节炎和多硬化症等。
肝炎是病毒导致的一种疾病,临床上紫草的疗效确切。李学中等报道了乙肝宁(紫草为主要成分之一)治疗慢性乙型肝炎有效率达89.5%。夏建新等报道了乙肝宁抑制大鼠肝细胞癌变的实验研究,结果显示明显抑制DEN(二乙基亚硝胺)所诱发肝细胞癌变的作用,使肝细胞核、线粒体、内质网等结构基本保持正常,使血清AFP滴度处于正常范围内。
邵鸿娥]以紫草对四氯化碳引起实验动物SALT、胆红素升高、醋氨酚中毒小鼠生存率为指标,研究证实紫草可有效地防止四氯化碳引起血清SALT活力和血清胆红素含量异常,从而提示紫草具有抗四氯化碳所致动物肝细胞损伤,达到保护肝脏,恢复肝功能的作用。
买尔旦·马合木提等研究了新疆紫草提取物对D―氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用,结果表明可不同程度地改善D―氨基半乳糖所致小鼠肝脏病理性损伤,能显著地抑制小鼠ALT、AST、MDA的升高以及SOD、GSH-Px的降低,减轻肝脏受损程度。提示肝脏对损伤做出的保护反应是通过促进肝细胞再生修复完成的,可能与间质炎性细胞浸润有某种相关性,可能通过清除自由基、保护细胞膜和脂质过氧化而发挥肝细胞保护作用。
紫草的免疫调节作用是近几年紫草药效研究的重点之一。金锐等]用丝裂霉素C所致小鼠免疫功能低下模型,研究了紫草和其配伍方(紫草荣)的作用,结果显示:①可使小鼠腹腔内巨噬细胞伤害有所恢复;②可增加腹腔内巨噬细胞游走能力;③增加淋巴母细胞活性;④提高NK细胞细胞毒活性,且都有统计学差异,证明紫草能使丝裂霉素C引起的巨噬细胞和淋巴细胞功能抑制得到缓和。
刘立华等研究了紫草萘醌提取物Lm对小鼠NK细胞活性的影响。每天腹腔注射Lm6mg∕kg,连续5天,脾细胞NK细胞毒提高约20%,细胞毒动力学分析显示,给药小鼠的动力学实验参数Vmax和Kmapp均明显增加而Vmax/Kmapp比值则无明显变化,提示Lm增强NK活性的机理为增加杀伤细胞的频率。
郑肖莹等报道新疆软紫草的Me2co提取物(20μg∕ml),可对抗急性感染的H9细胞中的HIV病毒复制。对Me2co提取物的进一步分离得到的化合物2-4,在急性感染的H9细胞中显示了更强的抗HIV病毒活性。
徐杭民等报道“艾滋Ⅱ号”(其中紫草为一主药)的免疫药理作用。选用指标①天然杀伤细胞(NK)功能测定;②胸腺细胞(前T细胞)增殖反应;③脾脏淋巴细胞的转化、增殖反应。结果证明“艾滋Ⅱ号”方能增强或促进上述免疫指标,这对说明其防治艾滋病患者的作用有一定的意义。
原料药药学研究结果表明:阿卡宁B的化学结构已被确证,制品质量稳定可控,质量标准科学合理,检测方法可靠,鉴别专属性较强,可有效控制产品的质量。对有关物质进行的研究表明,AKJ-2(乙酰阿卡宁)、AKJ-A(异丁酰阿卡宁)、AKJ-E(阿卡宁)和AKJ-H(异戊酰阿卡宁)均已确定其结构,并经过动物急性毒性研究证明是安全的。对有机溶剂残留、重金属的检测结果表明均显著低于国家规定的标准,故未列入质量标准草案中。中试样品经高温、高湿、强光等影响因素试验以及在模拟上市包装条件下6个月的加速稳定性试验和36个月的长期稳定性试验,其外观、性状、重量、有关物质及含量等均无显著变化,证明原料药质量稳定。
根据目前的文献报导提取的方法有,超临界CO2萃取法,超声法,微波提取法,溶剂浸提法等,超临界CO2萃取法价格昂贵,暂时难以普及,超声法,微波提取法工业生产实用较少,本专利主要结合了溶剂浸提法和超声法基础上,采用多溶解方法进行提取和纯化,程序简单,可适用于生产,对紫草萘醌类物质的提取和纯化有重要的指导意义。
目前还没有研究表明紫草中萘醌类物质在治疗由病原性生物引起的肺炎的案例。面对如此突发性的,高传染性的病原体所造成的国际公共卫生危机,采用常规的抗病毒药物研发通常需要大量的资源和时间,显然不能解决问题,时间就会造成死亡的时刻,因此,新的抗病毒研发策略和技术显得尤为迫切。药物重新定位筛选在许多方面的优势将会使针对冠状病毒的广谱抗病毒药物的开发大大提速。
发明内容
本发明的目的是提供萘醌类物质治疗病原性生物引起的肺炎的用途。
本明的另一个目的是提供一种工艺简单,常规设备,易操作,提取效率高,可规模化生产的萘醌类物质的提取方法。
本发明是这样实现的:
萘醌类物质治疗病原性生物引起的肺炎的用途,萘醌类物质的主要结构式如下:
其中,R为自由基CH3COO-,H-,HO-,(CH3)2C(OH)CH2COO-,(CH3)2C=CHCO,(CH3)2C=C(CH3)CHCOO-,CH3-CH(CH3)-CH2-中的一种,所述萘醌类物质为上述七种中的一种或多种。
其中R为CH3COO-时为乙酰紫草素; R为H-时为去氧紫草素;R为HO-时为左旋紫草素;R为(CH3)2C(OH)CH2COO-时为β-乙酰氧基异戍酰阿卡宁;R为(CH3)2C=CHCOO-时为β-β“-二甲基丙烯酰阿卡宁;R为(CH3)2C=C(CH3)CHCOO-时为2-甲基丁基酰紫草素;R为CH3-CH(CH3)-CH2-时为异丁酰紫草素。
其中萘醌类物质的含量在1%-99.9%。
所述病原性生物包含细菌,病毒,真菌,衣原体,支原体。
所述病原性生物为冠状病毒SARS,HIV,埃博拉病毒,NCP病毒。
所述的萘醌类物质的提取方法,采用多溶剂方法提取和纯化紫草萘醌物质以及萘醌单体的分离纯化;多溶剂包括,甲醇,乙醇,乙酸乙酯,石油醚,三氯甲烷,丁醇,丙酮等中的两种或两种以上溶剂。
包括的步骤有:多溶剂浸泡预处理----浓缩---粗提取--多溶剂1次-3次分离纯化---得到高含量物质,其中,多溶剂包含甲醇,乙醇,乙酸乙酯,石油醚,三氯甲烷,丁醇,丙酮等中的两种或两种以上溶剂。
其步骤如下:
(1)粉碎原料:将紫草原料,用打粉机粉碎后,过筛,选择20-100目筛,
(2)多溶剂浸提:采用15倍质量溶剂甲醇、石油醚,甲醇、石油醚按照2:1比例,对紫草粉末进行浸泡3小时以上,在40度的温度下超声,提取60min以上,过滤得到多溶剂提取液,用5倍质量的上述溶剂,清洗提取的滤渣,将得到洗液和提取液一起进入下一个步骤,
(3)浓缩得到粗体物:将上述得到洗液和提取液采用低温高真空浓缩方法,浓缩至1/9-1/11,得到粗体物和上清液,上清液可循环用于提取,
(4)将上述粗体物,采用12倍质量的溶剂甲醇、丙酮,甲醇:丙酮= 1:1,在25度温度下完全溶解后,在温度0-5度进行结晶,利用不同温度下各种物质的溶解性不同,25度温度下,甲醇:丙酮-1:1的溶液对有效提取物的溶解度为4%;0度时,甲醇:丙酮=1:1的溶液对有效物的溶解度为0.8%,得到提取物;
(5)将上述提取物,采用20倍质量的溶剂乙酸乙酯和石油醚,乙酸乙酯和石油醚的比例为1:3,在40度温度下,完全溶解后,在0度的温度下结晶,利用40度和0度的温度下,物质的溶解性不同和加入已经纯化得到的含量为95%的提取物,重复将溶液升温到40度,再在0度下,保温12H,此过程循环3次后,得含量为98%的高纯萘醌类物质,收率为73%,
(6)溶剂回收:将多溶剂中的溶剂进行回收分离,并回收紫草中的萘醌提取物,紫草中萘醌类物质,包含左旋紫草素,乙酰紫草素,β-乙酰氧基异戍酰阿卡宁,去氧紫草素,异丁酰紫草素,β-β“-二甲基丙烯酰阿卡宁,2-甲基丁基酰紫草素,
(7)从萘醌提取物分离上述7种化合物,采用乙醇溶液将萘醌提取物完全溶解后,采用分离柱进行分离,在不同时间,取得到不同物质的乙醇溶液,再将乙醇溶液采用低温真空浓缩得到不同的化合物。
所述的7种化合物中的一种或几种组合制成片剂,其中,按照萘醌类物质30%-70%的含量进行制片。
到目前为止,还没有一个药能杀死这一次出现的冠状病毒的药。要延长生命,就要依靠人体自身产生抗体,这是目前治疗的主渠道。在肺受到病毒攻击和破坏时,免疫功能力下降,并伤害我们自身的肺,我们治疗最理想的方案是,一方面病毒在攻击,在破坏它,一方面有效的药物可以修复它,以此达到一个平衡,通过一到两周时间合成出新抗体,就可以杀死病毒了。我们能在筛选过程中需要寻找:1、能够保护和修复肺上皮细胞的物质,2、能广谱抵抗病原生物的物质,3、能抗病毒的物质,4、已经证明安全的物质。
通过大量查阅资料,在天然产物库,分析筛选出了一种广谱抗菌类物质,即紫草中的萘醌类物质,基于它的抗菌性,抗炎,以及对NK细胞的作用,从而提高人的免疫力,对于肺部的细胞,既能修复肺部的上皮细胞,又能抵抗病原性生物的侵害,萘醌类物质在新型冠状病毒感染的肺炎会有作用。
本发明选择的紫草萘醌类物质开发了一种新的提取和纯化工艺,主要包括的步骤有,浸泡(多溶剂)预处理----浓缩---粗提取-----多溶剂分离纯化(1次-3次)---得到高含量物质。
本发明的提取过程与传统工艺相比,主要的优点有:
(1)多溶剂的使用,提高了提取效率,比单一溶剂在溶解性方面更有优势,例如,选择溶解度小的溶剂,提取效率低,选择溶解度大的溶剂,很难得到萘醌类固体物质,在溶液中,不易得到。
(2)多溶剂的使用,在提取过程中,就在选择和纯化不同的杂质,
(3)溶剂的可循环使用。 多溶解的分离,主要是根据沸点不同,以及萘醌类物质在溶液中的溶解状态来分离。
(4)相对其他的提取方法来说,采用更短的路径得到高纯的萘醌类物质或者单体。
(5)过程简单,常规设备,易操作,可规模化生产;
本发明的物质中含有萘醌类的物质的含量范围在0.1%-99.9%,检测方法参照2015版药典中对紫草的检测,根据不同的制剂以及不同病症适当的选择,比如,胶囊,滴剂,喷剂,颗粒,片剂,汤剂等多种形态。该类物质的日使用量应该控制在1ug-20g之间,更有选为1mg-10g,根据患者的年龄,体重,病情等适当的选择,可单次或者多次施用。本发明的萘醌类物质,可以内服,可以外用,吸入或者透皮方式给药。
本发明的萘醌类物质可用于治疗病原性生物引起的肺炎,包括新型冠状病毒感染的肺炎,病原性生物主要包括病毒,细菌,真菌,原虫,衣原体,支原体,螺旋体,立克体等以及近年新发的感染的病原体,其中,细菌包含革兰阳性化脓性球菌,革兰阴性短杆菌,沙门菌,嗜血杆菌,百日咳杆菌,霍乱弧菌,白喉杆菌,炭疽杆菌,破伤风杆菌等,病毒主要包括天花病毒,乙型脑炎病毒,脊髓灰质炎病毒,麻疹病毒,腺病毒,肝炎病毒,人乳头瘤病毒,轮状病毒,流行性感冒病毒,柯萨奇病毒和埃可病毒。新发感染的病原体主要是新出现的病毒或者细菌,如传染性非典型性肺炎冠状病毒(SARS),HIV,新布尼亚病毒,埃博拉病毒,禽流感病毒,幽门螺旋菌,新型冠状病毒(NCP)等新型病毒。
本发明的萘醌类物质可用于治疗和调节免疫机制的失调的疾病,可通过促进NK细胞的免疫应答等作用,促进机体非特异性免疫和特异性免疫的细胞免疫作用。
具体实施方式
本发明的主要内容是紫草中萘醌类物质具有广谱抗菌作用,可治疗由病原性生物引起的肺炎(含NCP-新型冠状病毒感染的肺炎)以及一些免疫失调类的疾病。采用多溶剂方法进行提取和分离纯化得到可用于治疗病原性生物引起的肺炎的萘醌类物质。
紫草中的活性物质,主要包含的物质有左旋紫草素,乙酰紫草素,β-乙酰氧基异戍酰阿卡宁,去氧紫草素,异丁酰紫草素,β-β“-二甲基丙烯酰阿卡宁,2-甲基丁基酰紫草素等类似结构的物质,其主要的主体结构是:
其中R为CH3COO-时为乙酰紫草素;R为H-时为去氧紫草素;
R为HO-时为左旋紫草素;R为(CH3)2C(OH)CH2COO-时为β-乙酰氧基异戍酰阿卡宁;R为(CH3)2C=CHCOO-时为β-β“-二甲基丙烯酰阿卡宁;R为(CH3)2C=C(CH3)CHCOO-时为2-甲基丁基酰紫草素;
R为CH3-CH(CH3)-CH2-时为异丁酰紫草素;
上述化合物的任意1-7种组合,优选以含β-β-二甲基丙烯酰胺阿卡宁,和左旋紫草素和乙酰紫草素中的一种或者几种,本发明包含了紫草中的所有萘醌类物质及类似结构的盐;
本发明采用的方法是,在多溶剂分离纯化物质的发明专利的思想指导下,结合本物质的性质,开发的一种新的提取和纯化工艺,主要包括的步骤有,浸泡(多溶剂)预处理----浓缩---粗提取--多溶剂分离纯化(1次-3次)---得到高含量物质。其中,多溶剂包含甲醇,乙醇,乙酸乙酯,石油醚,三氯甲烷,丁醇,丙酮等中的两种或两种以上溶剂。
提取纯化:
其步骤如下:
(1)粉碎原料:将紫草原料,用打粉机粉碎后,过筛,选择20-100目筛,
(2)多溶剂浸提:采用15倍质量溶剂甲醇、石油醚,甲醇、石油醚按照2:1比例,对紫草粉末进行浸泡3小时以上,在40度的温度下超声,提取60min以上,过滤得到多溶剂提取液,用5倍质量的上述溶剂,清洗提取的滤渣,将得到洗液和提取液一起进入下一个步骤,
(3)浓缩得到粗体物:将上述得到洗液和提取液采用低温高真空浓缩方法,浓缩至1/9-1/11,得到粗体物和上清液,上清液可循环用于提取,
(4)将上述粗体物,采用12倍质量的溶剂甲醇、丙酮,甲醇:丙酮= 1:1,在25度温度下完全溶解后,在温度0-5度进行结晶,利用不同温度下各种物质的溶解性不同,25度温度下,甲醇:丙酮-1:1的溶液对有效提取物的溶解度为4%;0度时,甲醇:丙酮=1:1的溶液对有效物的溶解度为0.8%,得到提取物;
(5)将上述提取物,采用20倍质量的溶剂乙酸乙酯和石油醚,乙酸乙酯和石油醚的比例为1:3,在40度温度下,完全溶解后,在0度的温度下结晶,利用40度和0度的温度下,物质的溶解性不同和加入已经纯化得到的含量为95%的提取物,重复将溶液升温到40度,再在0度下,保温12H,此过程循环3次后,得含量为98%的高纯萘醌类物质,收率为73%,
(6)溶剂回收:将多溶剂中的溶剂进行回收分离,并回收紫草中的萘醌提取物,紫草中萘醌类物质,包含左旋紫草素,乙酰紫草素,β-乙酰氧基异戍酰阿卡宁,去氧紫草素,异丁酰紫草素,β-β“-二甲基丙烯酰阿卡宁,2-甲基丁基酰紫草素,
(7)从萘醌提取物分离上述7种化合物,采用乙醇溶液将萘醌提取物完全溶解后,采用分离柱进行分离,在不同时间,取得到不同物质的乙醇溶液,再将乙醇溶液采用低温真空浓缩得到不同的化合物。
制剂方案:
将得到紫草萘醌类提取物(含紫草中萘醌类物质,主要包含的物质有以下几种,左旋紫草素,乙酰紫草素,β-乙酰氧基异戍酰阿卡宁,去氧紫草素,异丁酰紫草素,β-β“-二甲基丙烯酰阿卡宁,2-甲基丁基酰紫草素等类似的结合的活性成分,为混合物,),按照本领域技术人员公知的方法制备上述的7种化合物中的一种或着几种组合的片剂,可按照萘醌类物质30%-70%的含量进行制片。
在无菌的操作条件下,取制备方案中得到的萘醌类物质100G,微晶纤维素100G,硬脂酸镁30G,羟丙甲基纤维素4G,按照公知的制片技术和制备成0.5G的片剂。
安全性实验:
(1)取小鼠 100 只,每只体重约50-80 g,每组20只,随机分为5组,即空白对照组和4个给药组(给药组药剂量分别为0、5、10、15和20 mg/kg体重),连续喂食40 天。试验组均按每只小鼠的体量计算给药量,将片剂研磨碎,用金属灌胃器一次性灌胃给药。对照组小白鼠保持自由采食和饮水。
(2)结果。经观察5组小鼠均未发现任何异常反应, 其皮肤、大便、呼吸、四肢活动、行为方式等均未发现任何异常现象,各组没有小鼠死亡。结果表明该药对小鼠口服用药无任何毒副作用。
本发明的用途试验如下:
试验例1:
治疗羊支原体肺炎效果试验
(1)在羊场挑选临床可见红眼、眼角有脓性分泌物、咳嗽、流鼻涕的1.5—2岁山羊,进行绵羊肺炎支原体的抗体检测,从中筛选出90头实验羊,随机分为3组:高剂量组、低剂量组、空白对照组,分栏饲养。各组药物按设计方案给药,连续给药5d。
(2)每天记录羊只的临床症状,计算病愈率,比较各组间的差异。
(3)结果显示,感染羊支原体肺炎的羊服用本发明中药组合物,病情得到控制,治愈率在70%-87%,表明复方中药对羊支原体肺炎有良好的的治疗作用,具有服用安全、治愈率高、治疗效果好等优点。说明紫草中的萘醌类物质对羊支原体肺炎有良好的治疗作用。
试验例2:
治疗小白鼠细菌性肺炎效果试验
(1)细菌性肺炎是临床最常见的肺炎,肺炎克雷伯杆菌(简称肺炎杆菌)是其中的一类重要菌类,选择肺炎杆菌(在药检所购买),在小白鼠体内做治疗效果,
(2)选择雌雄各半的健康小白鼠40只,体重在18-22g ,将肺炎杆菌用生理盐水将浓度稀释成1*108CFU ,将小白鼠晶10%的水和氯醛麻醉后,晶鼻腔滴入配置的肺炎杆菌菌液50UL,接种后使得小白鼠保持与桌面垂直的体位30S,确保菌液流入肺部,接种后,放入笼中,小白鼠出现情绪不高,精神萎靡的状态后,开始给药。
(3)将致病的小白鼠分成两组,一组空白组,一组实验组,每组各有10只雌雄小白鼠。
(4)空白组,按照正常方式,继续喂养,实验组,将紫草萘醌物质支撑的喷剂,稀释20倍后,通过鼻腔喷入药物,连续5天给药,发现,实验组的小白鼠精神状态好转,动作灵敏,吃食正常,空白组的小白鼠行动缓慢,出现2只死亡。
(5)实验说明,喷剂对感染了肺炎杆菌的小白鼠有一定的效果。
试验例3:
治疗小白鼠真菌性肺炎效果试验
(1)引起原发性真菌性肺炎的大多是皮炎芽生菌,荚膜组织胞浆菌或粗球孢子菌,选择球孢子菌(在药检所购买),在小白鼠体内做治疗效果,
(2)选择雌雄各半的健康小白鼠20只,体重在18-22g ,将球孢子菌用生理盐水将浓度稀释成1*108CFU ,将小白鼠晶10%的水和氯醛麻醉后,晶鼻腔滴入配置的球孢子菌菌液50UL,接种后使得小白鼠保持与桌面垂直的体位30S,确保菌液流入肺部,接种后,放入笼中,小白鼠出现发热,打喷嚏的状态后,开始给药。
(3)将致病的小白鼠分成两组,一组空白组,一组实验组,每组各有5只雌雄小白鼠。
(4)空白组,按照正常方式,继续喂养,实验组,将紫草萘醌物质支撑的喷剂,稀释20倍后,通过鼻腔喷入药物,连续3天给药,发现,实验组的小白鼠开始精神状态好转,咳嗽减少,空白组的小白鼠发热和打喷嚏情况逐渐严重。
(5)实验说明,喷剂对感染了球孢子菌的小白鼠有一定的效果。
试验例4:
体外抑制新型冠状病毒繁殖的试验
(1)菌株的来源是,丛锋所带领的团队成功表达了新型冠状病毒(2019-nCoV)N蛋白表达菌株,并决定将菌株无偿提供给全国范围内的科研院校和生物医药公司。
(2)按照本专业技术人员的常规操作,确定紫草萘醌提取物对
对新冠状病毒的是否有抑制作用。将本发明的紫草萘醌物质的提取物,用水加上吐温80,分散成水溶液,按照高剂量组1mg/ml,低剂量组1ug/ml和空白对照组分别加入,配置一定浓度1*108CFU的菌液,加入培养基,在96孔板中,接种,37度恒温培养18H,再加入1%的氯化三苯四氮唑5UL,再培养4H,有细菌生长呈红色,不显红色的最低药物浓度时最低抑菌浓度。
(3)结果显示,空白对照组呈红色,低剂量组呈浅红色,高剂量组不显红色。说明本物质可以抑制新型冠状病毒繁殖。
Claims (9)
2.如权利要求1所述的用途,其特征在于,R为CH3COO-时为乙酰紫草素; R为H-时为去氧紫草素;R为HO-时为左旋紫草素;R为(CH3)2C(OH)CH2COO-时为β-乙酰氧基异戍酰阿卡宁;R为(CH3)2C=CHCOO-时为β-β“-二甲基丙烯酰阿卡宁;R为(CH3)2C=C(CH3)CHCOO-时为2-甲基丁基酰紫草素;R为CH3-CH(CH3)-CH2-时为异丁酰紫草素。
3.如权利要求1所述的用途,其特征在于,其中萘醌类物质的含量在1%—99.9%。
4.如权利要求书1所述的用途,其特征在于,所述病原性生物包含细菌,病毒,真菌,衣原体,支原体。
5.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述病原性生物为冠状病毒SARS,HIV,埃博拉病毒,NCP病毒。
6.如权利要求1所述的萘醌类物质的提取方法,其特征在于,采用多溶剂方法提取和纯化紫草萘醌物质以及萘醌单体的分离纯化;多溶剂包括,甲醇,乙醇,乙酸乙酯,石油醚,三氯甲烷,丁醇,丙酮等中的两种或两种以上溶剂。
7.如权利要求6所述的萘醌类物质的提取方法,其特征在于,包括的步骤有:多溶剂浸泡预处理----浓缩---粗提取--多溶剂1次-3次分离纯化---得到高含量物质,其中,多溶剂包含甲醇,乙醇,乙酸乙酯,石油醚,三氯甲烷,丁醇,丙酮等中的两种或两种以上溶剂。
8.如权利要求7所述的萘醌类物质的提取方法,其特征在于,其步骤如下:
(1)粉碎原料:将紫草原料,用打粉机粉碎后,过筛,选择20-100目筛,
(2)多溶剂浸提:采用15倍质量溶剂甲醇、石油醚,甲醇、石油醚按照2:1比例,对紫草粉末进行浸泡3小时以上,在40度的温度下超声,提取60min以上,过滤得到多溶剂提取液,用5倍质量的上述溶剂,清洗提取的滤渣,将得到洗液和提取液一起进入下一个步骤,
(3)浓缩得到粗体物:将上述得到洗液和提取液采用低温高真空浓缩方法,浓缩至1/9-1/11,得到粗体物和上清液,上清液可循环用于提取,
(4)将上述粗体物,采用12倍质量的溶剂甲醇、丙酮,甲醇:丙酮= 1:1,在25度温度下完全溶解后,在温度0-5度进行结晶,利用不同温度下各种物质的溶解性不同,25度温度下,甲醇:丙酮-1:1的溶液对有效提取物的溶解度为4%;0度时,甲醇:丙酮=1:1的溶液对有效物的溶解度为0.8%,得到提取物;
(5)将上述提取物,采用20倍质量的溶剂乙酸乙酯和石油醚,乙酸乙酯和石油醚的比例为1:3,在40度温度下,完全溶解后,在0度的温度下结晶,利用40度和0度的温度下,物质的溶解性不同和加入已经纯化得到的含量为95%的提取物,重复将溶液升温到40度,再在0度下,保温12H,此过程循环3次后,得含量为98%的高纯萘醌类物质,收率为73%,
(6)溶剂回收:将多溶剂中的溶剂进行回收分离,并回收紫草中的萘醌提取物,紫草中萘醌类物质,包含左旋紫草素,乙酰紫草素,β-乙酰氧基异戍酰阿卡宁,去氧紫草素,异丁酰紫草素,β-β“-二甲基丙烯酰阿卡宁,2-甲基丁基酰紫草素,
(7)从萘醌提取物分离上述7种化合物,采用乙醇溶液将萘醌提取物完全溶解后,采用分离柱进行分离,在不同时间,取得到不同物质的乙醇溶液,再将乙醇溶液采用低温真空浓缩得到不同的化合物。
9.如权利要求8所述的萘醌类物质的提取方法,其特征在于,所述的7种化合物中的一种或几种组合制成片剂,其中,按照萘醌类物质30%-70%的含量进行制片。
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