CN110801016A - 润肠通便及促进消化吸收的益生元多肽复合益生菌及制备方法 - Google Patents

润肠通便及促进消化吸收的益生元多肽复合益生菌及制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种润肠通便及促进消化吸收的益生元多肽复合益生菌及制备方法，按重量份计，其包括：山梨糖醇2‑3份、麦芽糊精5‑8份、综合蔬果粉10‑15份、抗性糊精5‑6份、低聚果糖3‑5份、大豆多肽粉8‑10份、苦瓜肽粉10‑15份、嗜热链球菌0.5‑0.6份、嗜酸乳杆菌0.3‑0.5份、干酪乳杆菌0.3‑0.5份、鼠李糖乳杆菌0.4‑0.5份、长双歧杆菌0.2‑0.3份、动物双歧杆菌0.2‑0.3份、无水柠檬酸1‑2份、葡萄糖3‑5份、食用香料0.2‑0.3份。其具有丰富的膳食纤维，苦瓜肽粉等降血糖、血脂成分以及嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、动物双歧杆菌等多种益生菌，通过合理的复配使用后能够充分促进肠道吸收，润肠通便。

Description

润肠通便及促进消化吸收的益生元多肽复合益生菌及制备 方法
技术领域
本发明涉及营养功能性食品与生物发酵领域。更具体地说，本发明涉及一种润肠通便 及促进消化吸收的益生元多肽复合益生菌及制备方法。
背景技术
肠胃是人体的重要消化器官，是机体营养物质的消化吸收场所，也是对肠道有害物质 进行免疫防护的重要部位。所有进入人体的食物都要经常肠胃吸收转化为营养传输给人体 全身，肠胃蠕动慢，会造成对人体的吸收营养缓慢，发育不健康。
现代人工作繁忙、进餐时间不定时、多吃快餐等问题都会引起胃肠道功能紊乱，临床 表现主要在胃肠道涉及进食和排泄等方面的不正常，也常伴有失眠、焦虑、注意力涣散，健忘、神经过敏、头痛等其他功能性症状。
胃肠道常见疾病有便秘，而便秘是一种常见多发性的疾病，严重影响人们的正常生活， 而且往往会诱发其他疾病，例如当大便排出不畅时，过度用力屏气的话，会增加腹压，血 压也同时升高，可诱发心绞痛、心肌梗死、脑出血、中风猝死等。近年来，便秘造成的心 脑血管疾病发作有逐年增多的趋势；常年便秘会导致生活质量下降，健康受损，甚至引发 致命的严重后果。
而目前以排便为主要治疗目的西药主要是泻药类药物，均存在不同程度的毒副作用与 不良反应。同时，由于便秘具有反复发作的特点，在使用泻药治疗会产生耐药性，患者多 难以长期接受西药治疗，而且长期服用泻药对身体损害也很大。
因此，有必要提供一种能有效防治缓解肠胃不适、消化不良、便秘，且同时能摆脱耐 药性的保健食品或药物。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种润肠通便及促进消化吸收的益生元多肽复合 益生菌及其制备方法，其具有丰富的膳食纤维，苦瓜肽粉等降血糖、血脂成分以及嗜热链 球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、动物双歧杆菌等多种益生 菌，通过合理的复配使用后能够充分促进肠道吸收，润肠通便。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种润肠通便及促进消化吸收的 益生元多肽复合益生菌，其特征在于，按重量份计，其包括：山梨糖醇2-3份、麦芽糊精5-8份、综合蔬果粉10-15份、抗性糊精5-6份、低聚果糖3-5份、大豆多肽粉8-10份、 苦瓜肽粉10-15份、嗜热链球菌0.5-0.6份、嗜酸乳杆菌0.3-0.5份、干酪乳杆菌0.3-0.5份、 鼠李糖乳杆菌0.4-0.5份、长双歧杆菌0.2-0.3份、动物双歧杆菌0.2-0.3份、无水柠檬酸 1-2份、葡萄糖3-5份、食用香料0.2-0.3份。
优选的，所述苦瓜肽粉的制备方法包括如下步骤：
S11、取新鲜苦瓜、干燥苦瓜、苦瓜籽中的一项或几项作为苦瓜原料，加入苦瓜原料重量5倍的去离子水，并在25℃水温下浸泡8-12h，取出再用去离子水冲洗2-3遍；
S12、将清洗后的苦瓜原料进行干燥，打碎磨浆，得到苦瓜浆液；
S13、取苦瓜浆液以及缓冲液进行混合，以获得混合体系，按重量比计，按照苦瓜浆液：缓冲液＝1:(4.5-5.5)；记录混合体系总体积数值，将pH值调节为7后对混合体系进 行温度处理，以获得浸提物；
所述温度处理过程包括：
升温至45-55℃，保温45-60min，再降温至20-25℃，保温25-30min，并记录此时液体的第一体积数值；按照(总体积-第一体积)*60％补入含有去离子水和缓冲液的第一混合液，且按照重量比计，去离子水：缓冲液＝4：1；补入第一混合液后，升温至60-75℃， 保温60-75min，再降温至45-55℃，保温30-35min，并记录此时液体的第二体积数值；按 照(总体积-第二体积)*75％补入含有去离子水和缓冲液的第二混合液，且按照重量比计， 去离子水：缓冲液＝3：1；补入第二混合液后，升温至80-90℃，保温75-85min，再降温 至60-75℃，保温35-45min；
S14、将浸提物温度降至20-25℃后对所述浸提物进行酶解，以获得苦瓜肽酶解体系； 其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将浸提物的pH值调节至8.0，按浸提物重量的4.5％加入胰蛋白酶，80-100 转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至35-40℃，保温45-60min后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5，按第一酶解体系重量的3％加入果胶酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至45-55℃，保温40-60min后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.8，按第二酶解体系重量的2％加入纤维素酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至55-60℃，保温30-45min后得到第三酶解体系；
S15、待步骤S14中的酶解过程完成后，对获得的第三酶解体系升温至90℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得苦瓜肽粗提体系；再在所述苦瓜肽粗提体系中按其重量 的4-5％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温60-90min后离心，去沉渣后获得苦瓜肽粗 提液；
将所述苦瓜肽粗提液经硅藻土过滤，以得到苦瓜肽清液，且过滤压力为0.2-0.3MPa； 再在所述苦瓜肽清液中按其重量加入4.5％的活性炭，静置45-50min后离心，去沉渣；
S16、将去沉渣后的苦瓜肽清液经过滤孔径为0.5-0.8μm的微滤陶瓷膜进行过滤，过 滤温度为60℃，以获得微滤膜透过液；
再将所述微滤膜透过液经截留分子量为100-200kDa卷式超滤膜进行过滤，过滤温度 为45-50℃，以获得超滤膜透过液；
再将所述超滤膜截留液经截留分子量为150-1000Da的卷式高压反渗透膜进行浓缩， 以除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质，浓缩温度在40℃以下，以得到苦瓜肽浓缩 液；
S17、通过真空冷冻干燥方法对所述苦瓜肽浓缩液进行干燥，以获得苦瓜多肽蛋白含 量不低于30％的苦瓜肽粉。
优选的，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。
优选的，所述综合果蔬粉的制备方法包括：
S21、将果蔬原料放入其重量5-8倍的水中浸泡10-12h，取出沥干后再进行超声清洗， 超声功率为180-200W、超声频率为40-50KHz、超声清洗时间为10-15min；超声清洗后沥干果蔬原料，置100℃烘箱中干燥8-10小时，再于35-40℃下粉碎，过100目筛，以获得 果蔬原料粉；
S22、将康宁木霉菌种接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，再放入培养箱中，于28-35℃ 条件下活化48-72h，以获得活化的康宁木霉菌种；
采用配制好的液体培养基培养活化的康宁木霉菌种，以获得液态康宁木霉菌种种子 液；
再将所述液态康宁木霉菌种种子液接种到发酵罐中的发酵培养基上进行扩大培养，调 节pH至6.5-7.5，扩大培养温度25-35℃，转速500-800rpm条件下搅拌，培养时间为1-2d， 以获得康宁木霉孢子悬浮液；
S23、取所述果蔬原料粉，并在其中加入其重量5-10％的康宁木霉孢子悬浮液以及果 蔬原料粉重量4-5倍的水后进行酶解，以获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：按果蔬原料粉重量的3-4％加入脂肪酶，调节pH值至6.5-7.5，充分搅拌，且搅拌的同时升温至30-45℃，保温35-40min后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一次酶解体系温度降温至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-4.5，按第一次酶解体系重量的2-2.5％加入β-葡聚糖酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至 40-50℃，保温30-35min后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-5.5，按第二次酶解液体系重量的2-3％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃，保温25-35min后得到第三酶解体系；
S24、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得果蔬酶解液；
S25、在所述果蔬酶解液中按其重量的4％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min后离心，去沉渣后获得果蔬粗提液；
S26、对所述果蔬粗提液进行真空浓缩，当果蔬粗提液体积缩小到原来的12-15％时停 止浓缩，以获得果蔬浓缩液，再对所述果蔬浓缩液进行真空干燥，过筛后获得所述综合蔬 果粉。
优选的，按重量比计，所述液体培养基包括：茶多酚1％、蔗糖1.5％、葡萄糖2.5％、麦芽提取物5％、CoCl.6H2O 0.1％、CuSO4.5H2O 0.05％、FeNaEDTA 2％、H3BO30.15％、Na2MoO4.2H2O 0.15％、ZnSO4.7H2O 0.1％、MgSO4 0.1％、KNO3 0.1％、MnSO4.H2O 0.25％、 去离子水87％。
优选的，按重量比计，所述发酵培养基包括：麸皮10％、可溶性淀粉2％、蔗糖2％、乳糖2％、玉米粉2.5％、MgSO4 0.05％、KH2PO4 0.05％、(NH4)2SO4 0.15％、去离子水81.25％。
还提供一种润肠通便及促进消化吸收的益生元多肽复合益生菌的制备方法，其包括：
S100、按照权利要求1中的组分用量称取各组分，并混合4-6分钟，得到混合料；
S200、将混合料送入造粒机内造粒，以获得粗成品，且造粒机内的蒸汽压力为0.5-0.8Mpa，造粒温度为40-50℃，造粒机的模孔直径为1.5-3mm；
S300、对所述粗成品进行300目过筛，最终获得所述润肠通便及促进消化吸收的益生 元多肽复合益生菌。
本发明至少包括以下有益效果：
本发明通过阶段性升温、反复酶解以及多重过滤的提取工艺，使得苦瓜肽中苦瓜多肽 蛋白含量不低于20％，使其充分发挥降血糖、血脂的功效以及将康宁木霉菌种作为发酵 菌种，结合多阶段的酶解过程，可充分提取果蔬原料中氨基酸、果胶低聚糖、维生素等营养元素，同时，还可获得大量富含可溶性膳食纤维，该膳食纤维容易被可以被嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、动物双歧杆菌等被益生菌利用， 以提高益生菌在肠道的生长及繁殖能力，增加益生菌菌的种类和数量，降低大肠pH值， 改善肠道微生态环境，促进消化吸收，起到润肠通便的作用。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明 的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能 够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或 多个其它元件或其组合的存在或添加。
需要说明的是，下述实施方案中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述 试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
<实施例1>
按重量份计，本实施例中的润肠通便及促进消化吸收的益生元多肽复合益生菌包括： 山梨糖醇2份、麦芽糊精5份、综合蔬果粉10份、抗性糊精5份、低聚果糖3份、大豆 多肽8份、苦瓜肽粉12份、嗜热链球菌0.5份、嗜酸乳杆菌0.3份、干酪乳杆菌0.4份、 鼠李糖乳杆菌0.4份、长双歧杆菌0.2份、动物双歧杆菌0.2份、无水柠檬酸1.5份、葡萄 糖3份、食用香料0.2份。
进一步的，所述苦瓜肽粉的制备方法包括如下步骤：
S11、取新鲜苦瓜、干燥苦瓜、苦瓜籽中的一项或几项作为苦瓜原料，加入苦瓜原料重量5倍的去离子水，并在25℃水温下浸泡8-10h(优选8.5h)，取出再用去离子水冲洗 2-3遍，以去除农残药残以及杂质；
S12、将冲洗后的苦瓜原料风干干燥，取出打碎磨浆，得到苦瓜浆液；
S13、取苦瓜浆液以及缓冲液(所述缓冲液为包含有酸、碱、盐等试剂的缓冲体系，如磷酸盐缓冲液)进行混合，以获得混合体系，按重量比计，按照苦瓜浆液：缓冲液＝1:(4.5-5.5)(优选为1:5)；记录混合体系总体积数值，将pH值调节为7后对混合体系进 行温度处理，以获得浸提物；
其中，所述温度处理过程包括：
升温至45-55℃(优选为50℃)，保温45-60min(优选为55min)，降温至20-25℃ (优选为22℃)，保温25-30min(优选为28min)，并记录此时液体的第一体积数值；因 在前述升温、保温过程中，其反应体系内的水、酸等会被蒸发，有可能会导致其中酸、碱 以及无机离子的溶解度产生变化，从而影响浸提效果，因此，在前述升温、保温过程后， 需按照(总体积-第一体积)*60％补入含有去离子水和所述缓冲液的第一混合液，且按照 重量比计，去离子水：缓冲液＝4：1，由此对水、酸等蒸发后的反应体系进行补偿，使反 应体系始终处于较优的浸提环境中；补入第一混合液后，升温至60-75℃(优选为65℃)， 保温60-75min(优选为65min)，降温至45-55℃(优选为50℃)，保温30-35min(优选 为32℃)，并记录此时液体的第二体积数值；按照(总体积-第二体积)*75％补入含有去 离子水和缓冲液的第二混合液，且按照重量比计，去离子水：缓冲液＝3：1，该次升温、 保温的温度相较第一次而言有所提高，因此，反应体系内的水、酸等的蒸发效果更为明显， 因此此次补入的第二混合液的比例要有所上升(增加到75％)，且第二混合液中缓冲液的 比例有所增加；补入第二混合液后，升温至80-90℃(优选为85℃)，保温75-85min(优 选为80min)，降温至60-75℃(优选为70℃)，保温35-45min(优选为40min)；
本步骤中，通过阶段性的升温、保温，可使得组分的细胞结构(如细胞壁等)组成在不同的温度变化环境下被反复冲击、破坏，同时，每一升温、保温阶段结束后补充相应比 例的水以及缓冲液，由此对水、酸等蒸发后的反应体系进行补偿，使反应体系始终处于较 优的浸提环境中，以达到最佳的浸提效果；
S14、将浸提物温度降至20-25℃后对所述浸提物进行酶解，以获得苦瓜肽酶解体系； 其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将浸提物的pH值调节至8.0，按浸提物重量的4.5％加入胰蛋白酶，80-100 转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至35-40℃(优选为37℃)，保温45-60min(优选 55min)后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5，按第一酶解体系重量的3％加入果胶酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至45-55℃(优选为50℃)，保温40-60min(优选50min)后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.8，按第二酶解体系重量的2％加入纤维素酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至55-60℃(优选为58℃)，保温30-45min(优选35min)后得到第三酶解体系；
由于本发明中的组分多为植物组分，其细胞结构中包含有细胞壁，因此，本步骤中， 通过在不同阶段采用不用的酶及酶解条件对细胞壁进行充分酶解，使细胞壁中的纤维素、 果胶等成分破坏殆尽，可使得细胞壁内的有效成分(如苦瓜多肽蛋白)得以充分释放，以 提高其提取效率；
S15、待步骤S14中的酶解过程完成后，对获得的第三酶解体系升温至90℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得苦瓜肽粗提体系；再在所述苦瓜肽粗提体系中按其重量 的4-5％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温60-90min(优选75min)后离心，去沉渣 后获得苦瓜肽粗提液；
将所述苦瓜肽粗提液经硅藻土过滤，以得到苦瓜肽清液，且过滤压力为0.2-0.3MPa (优选0.25MPa)；再在所述苦瓜肽清液中按其重量加入4-5％的活性炭，静置45-50min 后离心，去沉渣；
通过上述活性炭、硅藻土的吸附处理，苦瓜肽酶解液中的色素、悬浮颗粒以及胶体等 杂质，使最后获得的成品纯度更高；
S16、将去沉渣后的苦瓜肽清液经过滤孔径为0.5-0.8μm的微滤陶瓷膜进行过滤，过 滤温度为55-65℃(优选为60℃)，以获得微滤膜透过液；进一步的，所述微滤陶瓷膜采用三支膜并联使用；
再将所述微滤膜透过液经截留分子量为100-200kDa卷式超滤膜进行过滤，除去大分 子杂质，操作温度控制在55-65℃，以获得超滤膜透过液；其中，卷式超滤膜为能截留分子量为100-200kDa的卷式超滤膜，且所述卷式超滤膜采用两支膜并联使用；
再将所述超滤膜截留液经截留分子量为150-1000Da的卷式高压反渗透膜进行浓缩， 以除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质，浓缩温度在40℃以下，以得到苦瓜肽浓缩 液，且苦瓜肽浓缩液的固形物含量≥40％；其中，卷式高压反渗透膜系统为高压浓缩膜，具体由(PS)聚砜或(PFS)聚醚砜材料等复合材料膜制成，且采用四支膜串联使用；
该步骤中采用多层次的膜分离纯化技术分离纯化苦瓜多肽蛋白，其浓缩温度低，有效 保证苦瓜蛋白多肽的天然活性及其高含量；
S17、通过真空冷冻干燥方法对所述苦瓜肽浓缩液进行干燥，以获得苦瓜多肽蛋白含 量不低于30％的苦瓜肽粉。
此外，为充分发挥综合果蔬粉、益生菌协同作用时的功效，以提高其促进肠胃消化， 增强免疫力的效果，因此，本实施例中还提供了一种综合果蔬粉的制备方法，其具体包括：
S21、将果蔬原料(包括水果、蔬菜、果皮、果渣中的一项或几项)放入其重量5-8 倍(优选6.5倍)的水中浸泡10-12h(优选10.5h)，取出沥干后再进行超声清洗，超声 功率为180-200W、超声频率为40-50KHz、超声清洗时间为10-15min；超声清洗后沥干果 蔬原料，置100℃烘箱中干燥8-10小时，再于35-40℃(优选37℃)下粉碎，过100目筛， 以获得果蔬原料粉；
S22、将康宁木霉菌种接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，再放入培养箱中，于28-35℃ (优选32℃)条件下活化48-72h，以获得活化的康宁木霉菌种；其中，
采用配制好的液体培养基培养活化的康宁木霉菌种，以获得液态康宁木霉菌种种子 液；其中，按重量比计，所述液体培养基包括：茶多酚1％、蔗糖1.5％、葡萄糖2.5％、 麦芽提取物5％、CoCl.6H2O 0.1％、CuSO4.5H2O 0.05％、FeNaEDTA 2％、H3BO30.15％、Na2MoO4.2H2O 0.15％、ZnSO4.7H2O 0.1％、MgSO4 0.1％、KNO3 0.1％、MnSO4.H2O 0.25％、 去离子水87％；
再将所述液态康宁木霉菌种种子液接种到发酵罐中的发酵培养基上进行扩大培养，调 节pH至6.5-7.5(优选7.0)，扩大培养温度25-35℃(优选30℃)，转速500-800rpm条件下搅拌，培养时间为1-2d，以获得康宁木霉孢子悬浮液；其中，按重量比计，所述发 酵培养基包括：麸皮10％、可溶性淀粉2％、蔗糖2％、乳糖2％、玉米粉2.5％、MgSO4 0.05％、KH2PO4 0.05％、(NH4)2SO4 0.15％、去离子水81.25％；
S23、取所述果蔬原料粉，并在其中加入其重量5-10％(优选8％)的康宁木霉孢子悬 浮液以及果蔬原料粉重量4-5倍的水后进行酶解，以获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：按果蔬原料粉重量的3-4％(优选为3.5％)加入脂肪酶，调节pH值至6.5-7.5(优选7.0)，充分搅拌，且搅拌的同时升温至30-45℃(优选37℃)，保温35-40min 后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一次酶解体系降温至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-4.5(优选4.2)，按第一次酶解体系重量的2-2.5％(优选为2.2％)加入β-葡聚糖酶，充分搅拌， 且搅拌的同时升温至40-50℃(优选45℃)，保温30-35min后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二次酶解体系降至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-5.5(优选5.0)， 按第二次酶解液体系重量的2-3％(优选为2.5％)加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同 时升温至50-65℃(优选60℃)，保温25-35min后得到第三酶解体系；
S24、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得果蔬酶解液；
S25、在所述果蔬酶解液中按其重量的4％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min(优选75min)后离心，去沉渣后获得果蔬粗提液；
S26、对所述果蔬粗提液进行真空浓缩，当果蔬粗提液体积缩小到原来的12-15％时停 止浓缩，以获得果蔬浓缩液，再对所述果蔬浓缩液进行真空干燥，过筛后获得所述综合蔬 果粉。
<实施例2>
本实施例与实施例1的不同之处仅在于，按重量份计，本实施例中的具润肠通便及促 进消化吸收的益生元多肽复合益生菌由以下组分组成：山梨糖醇3份、麦芽糊精8份、综合蔬果粉12份、抗性糊精6份、低聚果糖5份、大豆多肽粉10份、苦瓜肽粉15份、嗜 热链球菌0.6份、嗜酸乳杆菌0.4份、干酪乳杆菌0.5份、鼠李糖乳杆菌0.5份、长双歧杆 菌0.3份、动物双歧杆菌0.3份、无水柠檬酸2份、葡萄糖4.5份、食用香料0.3份。
<实施例3>
本实施例与实施例1的不同之处仅在于，按重量份计，本实施例中的具润肠通便及促 进消化吸收的益生元多肽复合益生菌由以下组分组成：山梨糖醇2.5份、麦芽糊精7份、综合蔬果粉12份、抗性糊精5.5份、低聚果糖4份、大豆多肽粉8.5份、苦瓜肽粉14份、 嗜热链球菌0.55份、嗜酸乳杆菌0.4份、干酪乳杆菌0.4份、鼠李糖乳杆菌0.45份、长双 歧杆菌0.25份、动物双歧杆菌0.25份、无水柠檬酸1.5份、葡萄糖4.5份、食用香料0.25 份。
<苦瓜肽分子量检测结果>
采用申请号201710832199.8(“一种全程低温生产苦瓜多肽蛋白提取物的新方法、苦 瓜多肽蛋白提取物及其应用”)的专利申请中实施例1所述的方法提取苦瓜肽，以作为对比例1，将其与通过本发明实施例1-3中的苦瓜肽粉制备方法制备获得的苦瓜肽粉进行高效凝胶过滤色谱法检测，以获得苦瓜肽分子量大小及分布范围，其结果如表1所示。
表1苦瓜肽分子量大小及分布范围
由此可见，本发明的苦瓜肽粉制备方法中，首先通过阶段性的升温、保温，可使得组 分的细胞结构(如细胞壁等)组成在不同的温度变化环境下被反复冲击、破坏，同时，每一升温、保温阶段结束后补充相应比例的水以及缓冲液，由此对水、酸等蒸发后的反应体系进行补偿，使反应体系始终处于较优的浸提环境中，进一步再进行阶段性升温、反复酶解以及多层次的膜分离纯化技术提取工艺来制备苦瓜多肽蛋白，使得到的苦瓜多肽提取物中苦瓜多肽蛋白的含量高于30％，且提取物产品中不含大豆蛋白多肽等其他非苦瓜来源的多肽蛋白。从表1中可以看出，本发明制备获得的1000-5000Da范围内的苦瓜多肽片段 占比接近35％，而1000-5000Da范围内的苦瓜多肽片段可以促进肠道蠕动，增加肠胃动力， 清理肠道垃圾，进一步起到润肠通便、缓解便秘的功效。
<综合果蔬粉检测>
先将混合好的水果蔬菜原料添加适量水，通过常规粉碎打浆机打浆后泵送进微通道粉 碎机中进行超微粉碎，泵送压力80Mpa，流速可达到120m/s；将得到的超微粉碎的果蔬浆液进行干燥、粉碎，即得作为对比例2的综合果蔬粉；再将其与通过本发明实施例1-3 中的制备方法获得的综合果蔬粉进行感官评价以及纤维素含量、果胶含量、可溶性β-葡 萄糖含量、可溶性木聚糖含量、溶解率检测，其结果如表2所示；其中感官评价分值为外 观20分、质地25分、风味30分、口感25分。
表2综合果蔬粉检测
性能指标 实施例1 实施例2 实施例3 对比例1
纤维素含量(％) 34.31±1.25 35.12±0.58 34.33±1.41 72.61±0.88
果胶含量(％) 14.21±0.54 16.25±1.43 15.75±0.74 7.82.25±0.33
可溶性β-葡萄糖含量(％) 7.51±0.22 8.35±0.56 7.35±0.76 4.26±0.28
可溶性木聚糖含量(％) 8.65±1.01 9.45±0.12 8.35±0.99 5.61±0.91
外观 19 20 20 18
质地 24 24 25 22
风味 28 29 30 24
口感 23 24 24 15
溶解率(％) 97.56±1.57 98.33±0.78 97.26±1.16 34.27±1.46
从上述表2中可以看出，通过本发明的方法制备获得综合果蔬粉中，其不溶性纤维素 含量较对比例2降低50％以上，但同时果胶、可溶性β-葡萄糖、可溶性木聚糖这三种可溶性膳食纤维的含量显著增加，以此通过与不溶性纤维素的协同作用延长胃的排空时间、增加胃肠动力、延缓葡萄糖的吸收、降低血胆固醇水平，减少排泄物在肠道的停留时间， 增加体积，润肠通便，在此基础上，本发明制备获得的综合果蔬粉溶解率约为97％，带来 良好口感和风味的同时利于肠胃吸收。而这种对于果蔬粉成分含量的改变正是通过将康宁 木霉菌种作为发酵菌种，结合多阶段的酶解过程所获得的。
<实施例4>
本实施例还提供了一种实施例1-3任一项所述润肠通便及促进消化吸收的益生元多肽 复合益生菌的制备方法，其包括：
S100、按照实施例1-3之一中的组分用量称取各组分，并混合4-6分钟(优选5分钟)， 得到混合料；
S200、将混合料送入造粒机内造粒，以获得粗成品，且造粒机内的蒸汽压力为0.5-0.8Mpa(优选0.65Mpa)，造粒温度为40-50℃(优选45℃)，造粒机的模孔直径为 1.5-3mm；
S300、对所述粗成品进行300目过筛，最终获得所述润肠通便及促进消化吸收的益生 元多肽复合益生菌。
<促进排便功效评价试验>
取100只小鼠，随机分成空白对照组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，按以下方式喂养15天：空白对照组：自由饮食；阳性对照组：口服复方地芬诺酯混悬液25mg/kg·d，自由饮食；高剂量组：按给药剂量为2g/kg·d将本发明的益生元多肽复合 益生菌与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液，进行灌胃，自由饮食；中剂量组：按给药剂 量为1g/kg·d将本发明的益生元多肽复合益生菌(以下均为“益生元多肽复合益生菌”) 与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液，进行灌胃，自由饮食；低剂量组：按给药剂量为 0.5g/kg·d将本发明的益生元多肽复合益生菌与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液，进行灌 胃，自由饮食。
15天后禁食，空白对照组灌胃给予蒸馏水配成的含2％墨汁的混悬液，阳性对照组灌 胃给予口服复方地芬诺酯配成的含2％墨汁的混悬液，低剂量组、中剂量组、高剂量组分别灌胃给予本发明的益生元多肽复合益生菌与蒸馏水配成的含2％墨汁的混悬液,给药后将小鼠放入小鼠笼中,每笼1只,下垫白色干净滤纸,连续观察5h,记录小鼠第一次排黑 便的时间以及粪便点数，结果如表3所示。
表3益生元多肽复合益生菌对正常小鼠排便的影响
Figure BDA0002247055960000122
Figure BDA0002247055960000131
表3结果显示，低剂量组、中剂量组、高剂量组能明显缩短正常小鼠首次排黑便时间， 增加5h内排黑粪粒数，其相对于空白对照组比较均有显著性差异，而阳性对照组仅能增 加正常小鼠5h排黑便粒数，不能缩短正常小鼠首次排黑便时间，说明本发明中的益生元多肽复合益生菌能显著促进排便。
<缓解便秘功效评价试验1>
取小鼠120只，随机分为空白对照组、模型对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组及阳性对照组。除空白对照组外，其余各组小鼠禁水不禁食72h造成燥结失水便秘模型。 按以下进行给药：空白对照组：自由饮食；模型对照组：禁水不禁食；阳性对照组：禁水 不禁食，按照给药剂量为15mg/kg·d饲喂复方地芬诺酯；高剂量组：禁水不禁食，按给 药剂量为2g/kg·d将本发明的益生元多肽复合益生菌与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液 进行灌胃；中剂量组：禁水不禁食，按给药剂量为1g/kg·d将本发明的益生元多肽复合 益生菌与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液进行灌胃；低剂量组：禁水不禁食，按给药剂 量为0.5g/kg·d将本发明的益生元多肽复合益生菌与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液进 行灌胃。
造模10天后空白对照组和模型组灌胃给予蒸馏水配成的2％墨汁混悬液，阳性对照 组灌胃给予口服复方地芬诺酯配成的含2％墨汁的混悬液，低剂量组、中剂量组、高剂量组分别灌胃给予本发明的益生元多肽复合益生菌与蒸馏水配成的含2％墨汁的混悬液，给药后将小鼠放入小鼠笼中，下垫白色的干净滤纸,观察记录每只小鼠首次排出黑粪的时间(min)和5h内小鼠排出的黑粪总数，其结果如表4所示。
表4益生元多肽复合益生菌对便秘模型小鼠排便的影响
Figure BDA0002247055960000132
Figure BDA0002247055960000141
表4结果显示，模型对照组首次排黑便时间较空白对照组明显增加，而5h内排黑粪点数明显减少，表示造模成功。相对于模型组而言，中剂量组、高剂量组能显著缩短便秘 模型小鼠首次排黑便时间，低、高、中剂量组能显著增加5h排黑粪粒数，说明本发明中 的益生元多肽复合益生菌能显著缓解便秘。
<缓解便秘功效评价试验2>
取小鼠120只，随机分为空白对照组、模型对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组及阳性对照组。除空白对照组灌胃给予蒸馏水外,其余各组灌胃按体重给予复方地芬诺酯(DC)混悬液50mg/kg的药量造成便秘模型。30min后按以下进行给药：空白对照组：等 量蒸馏水；模型对照组：等量蒸馏水；阳性对照组：培菲康1g/kg与等量蒸馏水配成混悬 液进行灌胃；高剂量组：禁水不禁食，按给药剂量为2g/kg·d将本发明的益生元多肽复 合益生菌与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液进行灌胃；中剂量组：禁水不禁食，按给药 剂量为1g/kg·d将本发明的益生元多肽复合益生菌与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液进 行灌胃；低剂量组：禁水不禁食，按给药剂量为0.5g/kg·d将本发明的益生元多肽复合益 生菌与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液进行灌胃。
观察记录12h内每组小鼠排出的干粪点数，其结果如表5所示。
表5益生元多肽复合益生菌对复方地芬诺酯便秘模型小鼠排便的影响
Figure BDA0002247055960000151
表5结果显示，高剂量组、中剂量组、低剂量组及阳性对照组均能明显增加复方地芬诺酯便秘模型小鼠的干粪粒数，与模型对照组相比均有显著性差异。但阳性对照组相对于模型组，其干粪粒数仅增加30.4％，而本发明最多可增加72.7％(高剂量组实施例3)， 由此可见，本发明中的益生元多肽复合益生菌可显著促进复方地芬诺酯便秘模型小鼠排 便。
<小肠推进运动功效评价试验>
取小鼠120只，随机分为空白对照组、模型对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组及阳性对照组。按以下进喂养2天：空白对照组：自由饮食；模型对照组：禁水不禁食； 阳性对照组：禁水不禁食，按照给药剂量为15mg/kg·d饲喂培菲康进行治疗；高剂量组： 禁水不禁食，按给药剂量为2g/kg·d将本发明的益生元多肽复合益生菌与蒸馏水配成浓 度为2g/L的混悬液进行灌胃；中剂量组：禁水不禁食，按给药剂量为1g/kg·d将本发明 的益生元多肽复合益生菌与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液进行灌胃；低剂量组：禁水 不禁食，按给药剂量为0.5g/kg·d将本发明的益生元多肽复合益生菌与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液进行灌胃。
空白对照组灌胃给予用蒸馏水配置的含2％炭墨混悬液，各用药组则灌胃给予用培菲 康、本发明的益生元多肽复合益生菌与蒸馏水配成浓度为2g/L的混悬液配置成的含2％ 炭墨的混悬液，灌胃后30min，颈椎脱臼处死小鼠，立即剖腹取出胃肠，平铺于玻璃板上， 测量炭末头端在肠管内移动距离和小肠全长(自幽门至回肠)，计算小肠推进百分率推进百 分率(％)＝炭末前端与幽门的距离/小肠全长×100％，其结果如表6所示。
表6益生元多肽复合益生菌对正常小鼠小肠推进运动的影响
Figure BDA0002247055960000161
表6结果显示，实施例高、中、低剂量及培菲康能明显增加小鼠小肠墨汁推进距离和 推进百分率，相对于模型组，两者最多可增加69％和86％，由此可证明得出本发明的益生 元多肽复合益生菌对正常小鼠小肠推进运动具有明显促进作用，具有增强肠蠕动的功能。
需要说明的是，上述实施例1至4中的技术方案可进行任意组合，且组合后获得的技 术方案均属于本发明的保护范围。
综上所述，本发明通过阶段性升温、反复酶解以及多重过滤的提取工艺，使得苦瓜肽 中苦瓜多肽蛋白含量不低于20％，使其充分发挥降血糖、血脂的功效以及将康宁木霉菌种作为发酵菌种，结合多阶段的酶解过程，可充分提取果蔬原料中氨基酸、果胶低聚糖、 维生素等营养元素，同时，还可获得大量富含可溶性膳食纤维，该膳食纤维容易被可以被 嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、动物双歧杆菌等被 益生菌利用，以提高益生菌在肠道的生长及繁殖能力，增加益生菌菌的种类和数量，降低 大肠pH值，改善肠道微生态环境，促进消化吸收，起到润肠通便的作用。
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改 和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运 用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地 实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的实例。

Claims (7)

1.润肠通便及促进消化吸收的益生元多肽复合益生菌，其特征在于，按重量份计，其包括：山梨糖醇2-3份、麦芽糊精5-8份、综合蔬果粉10-15份、抗性糊精5-6份、低聚果糖3-5份、大豆多肽粉8-10份、苦瓜肽粉10-15份、嗜热链球菌0.5-0.6份、嗜酸乳杆菌0.3-0.5份、干酪乳杆菌0.3-0.5份、鼠李糖乳杆菌0.4-0.5份、长双歧杆菌0.2-0.3份、动物双歧杆菌0.2-0.3份、无水柠檬酸1-2份、葡萄糖3-5份、食用香料0.2-0.3份。
2.如权利要求1所述的益生元多肽复合益生菌，其特征在于，所述苦瓜肽粉的制备方法包括如下步骤：
S11、取新鲜苦瓜、干燥苦瓜、苦瓜籽中的一项或几项作为苦瓜原料，加入苦瓜原料重量5倍的去离子水，并在25℃水温下浸泡8-12h，取出再用去离子水冲洗2-3遍；
S12、将清洗后的苦瓜原料进行干燥，打碎磨浆，得到苦瓜浆液；
S13、取苦瓜浆液以及缓冲液进行混合，以获得混合体系，按重量比计，按照苦瓜浆液：缓冲液＝1:(4.5-5.5)；记录混合体系总体积数值，将pH值调节为7后对混合体系进行温度处理，以获得浸提物；
所述温度处理过程包括：
升温至45-55℃，保温45-60min，再降温至20-25℃，保温25-30min，并记录此时液体的第一体积数值；按照(总体积-第一体积)*60％补入含有去离子水和缓冲液的第一混合液，且按照重量比计，去离子水：缓冲液＝4：1；补入第一混合液后，升温至60-75℃，保温60-75min，再降温至45-55℃，保温30-35min，并记录此时液体的第二体积数值；按照(总体积-第二体积)*75％补入含有去离子水和缓冲液的第二混合液，且按照重量比计，去离子水：缓冲液＝3：1；补入第二混合液后，升温至80-90℃，保温75-85min，再降温至60-75℃，保温35-45min；
S14、将浸提物温度降至20-25℃后对所述浸提物进行酶解，以获得苦瓜肽酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将浸提物的pH值调节至8.0，按浸提物重量的4.5％加入胰蛋白酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至35-40℃，保温45-60min后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5，按第一酶解体系重量的3％加入果胶酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至45-55℃，保温40-60min后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.8，按第二酶解体系重量的2％加入纤维素酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至55-60℃，保温30-45min后得到第三酶解体系；
S15、待步骤S14中的酶解过程完成后，对获得的第三酶解体系升温至90℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得苦瓜肽粗提体系；再在所述苦瓜肽粗提体系中按其重量的4-5％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温60-90min后离心，去沉渣后获得苦瓜肽粗提液；
将所述苦瓜肽粗提液经硅藻土过滤，以得到苦瓜肽清液，且过滤压力为0.2-0.3MPa；再在所述苦瓜肽清液中按其重量加入4.5％的活性炭，静置45-50min后离心，去沉渣；
S16、将去沉渣后的苦瓜肽清液经过滤孔径为0.5-0.8μm的微滤陶瓷膜进行过滤，过滤温度为60℃，以获得微滤膜透过液；
再将所述微滤膜透过液经截留分子量为100-200kDa卷式超滤膜进行过滤，过滤温度为45-50℃，以获得超滤膜透过液；
再将所述超滤膜截留液经截留分子量为150-1000Da的卷式高压反渗透膜进行浓缩，以除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质，浓缩温度在40℃以下，以得到苦瓜肽浓缩液；
S17、通过真空冷冻干燥方法对所述苦瓜肽浓缩液进行干燥，以获得苦瓜多肽蛋白含量不低于30％的苦瓜肽粉。
3.如权利要求2所述的益生元多肽复合益生菌，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。
4.如权利要求1所述的益生元多肽复合益生菌，其特征在于，所述综合果蔬粉的制备方法包括：
S21、将果蔬原料放入其重量5-8倍的水中浸泡10-12h，取出沥干后再进行超声清洗，超声功率为180-200W、超声频率为40-50KHz、超声清洗时间为10-15min；超声清洗后沥干果蔬原料，置100℃烘箱中干燥8-10小时，再于35-40℃下粉碎，过100目筛，以获得果蔬原料粉；
S22、将康宁木霉菌种接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，再放入培养箱中，于28-35℃条件下活化48-72h，以获得活化的康宁木霉菌种；
采用配制好的液体培养基培养活化的康宁木霉菌种，以获得液态康宁木霉菌种种子液；
再将所述液态康宁木霉菌种种子液接种到发酵罐中的发酵培养基上进行扩大培养，调节pH至6.5-7.5，扩大培养温度25-35℃，转速500-800rpm条件下搅拌，培养时间为1-2d，以获得康宁木霉孢子悬浮液；
S23、取所述果蔬原料粉，并在其中加入其重量5-10％的康宁木霉孢子悬浮液以及果蔬原料粉重量4-5倍的水后进行酶解，以获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：按果蔬原料粉重量的3-4％加入脂肪酶，调节pH值至6.5-7.5，充分搅拌，且搅拌的同时升温至30-45℃，保温35-40min后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一次酶解体系温度降温至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-4.5，按第一次酶解体系重量的2-2.5％加入β-葡聚糖酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-50℃，保温30-35min后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-5.5，按第二次酶解液体系重量的2-3％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃，保温25-35min后得到第三酶解体系；
S24、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得果蔬酶解液；
S25、在所述果蔬酶解液中按其重量的4％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min后离心，去沉渣后获得果蔬粗提液；
S26、对所述果蔬粗提液进行真空浓缩，当果蔬粗提液体积缩小到原来的12-15％时停止浓缩，以获得果蔬浓缩液，再对所述果蔬浓缩液进行真空干燥，过筛后获得所述综合蔬果粉。
5.如权利要求1所述的益生元多肽复合益生菌，其特征在于，按重量比计，所述液体培养基包括：茶多酚1％、蔗糖1.5％、葡萄糖2.5％、麦芽提取物5％、CoCl.6H2O 0.1％、CuSO4.5H2O 0.05％、FeNaEDTA 2％、H3BO3 0.15％、Na2MoO4.2H2O 0.15％、ZnSO4.7H2O0.1％、MgSO4 0.1％、KNO3 0.1％、MnSO4.H2O 0.25％、去离子水87％。
6.如权利要求1所述的益生元多肽复合益生菌，其特征在于，按重量比计，所述发酵培养基包括：麸皮10％、可溶性淀粉2％、蔗糖2％、乳糖2％、玉米粉2.5％、MgSO4 0.05％、KH2PO4 0.05％、(NH4)2SO4 0.15％、去离子水81.25％。
7.一种润肠通便及促进消化吸收的益生元多肽复合益生菌的制备方法，其特征在于，包括：
S100、按照权利要求1中的组分用量称取各组分，并混合4-6分钟，得到混合料；
S200、将混合料送入造粒机内造粒，以获得粗成品，且造粒机内的蒸汽压力为0.5-0.8Mpa，造粒温度为40-50℃，造粒机的模孔直径为1.5-3mm；
S300、对所述粗成品进行300目过筛，最终获得所述润肠通便及促进消化吸收的益生元多肽复合益生菌。
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