CN116211956B - 一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物和制备方法、一种咀嚼片及其应用 - Google Patents
一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物和制备方法、一种咀嚼片及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物和制备方法、一种咀嚼片及其应用，属于医药技术领域。本发明提供了一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物，包括以下质量份的制备用原料：赤芍5～8份、蒲公英10～15份、鱼腥草5～7份、刺五加5～7份和百合5～8份。本发明所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物通过将赤芍、蒲公英、鱼腥草、刺五加和百合进行配伍使用，其中赤芍、蒲公英为主、辅以鱼腥草、刺五加和百合，诸药配合，共同发挥调节肥胖小鼠血糖、体重和肠道菌群以及改善肠道运动功能的作用。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物和制备方法、一种咀嚼片及其应用。
背景技术
肥胖是威胁大众健康的全球性问题，不仅会导致包括2型糖尿病、冠心病、高血压和骨关节炎等在内的诸多疾病，也给社会造成了严重的经济负担。作为一种公共卫生问题，肥胖的发病率随着人们生活水平与生活方式的改变在全球呈不断上升趋势，它已成为危害全人类的慢性非传染性疾病。
目前应用于肥胖的药物通常为奥利司他、氯卡色林和利拉鲁肽等，现有技术仍缺乏改善肥胖效果好的中药。
发明内容
本发明的目的在于提供一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物，具有调节肠道菌群和/或改善肥胖的功效。
本发明提供了一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物，包括以下质量份的制备用原料：赤芍5～8份、蒲公英10～15份、鱼腥草5～7份、刺五加5～7份和百合5～8份。
优选的，所述组合物包括以下质量份的制备用原料：赤芍8份、蒲公英15份、鱼腥草7份、刺五加7份和百合8份；
或者，所述组合物包括以下质量份的制备用原料：赤芍5份、蒲公英10份、鱼腥草5份、刺五加5份和百合5份。
本发明提供了一种上述技术方案所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物的制备方法，包括以下步骤：
将粉碎后的制备用原料进行发酵，得到发酵型植物提取液；
将所述发酵型植物提取液进行酶解，得到调节肠道和/或改善肥胖的组合物。
优选的，所述发酵用菌剂包括酵母菌，所述发酵的温度为25～32℃；所述发酵的时间为40～60h。
优选的，所述酶解用酶包括纤维素酶和果胶酶；所述纤维素酶的添加量为制备用原料混合物质量的0.3％～0.5％；所述果胶酶的添加量为制备用原料混合物质量的0.3％～0.5％；
所述纤维素酶的酶活为10万U/g；所述果胶酶的酶活为10万U/g。
优选的，所述酶解依次包括纤维素酶酶解和果胶酶酶解；
所述纤维素酶酶解的温度为50～60℃；pH为6.0～6.4；时间为2～4h；
所述果胶酶酶解的温度为55～65℃；pH为6.2～6.8；时间为2～4h。
优选的，所述粉碎将原料混合后进行；所述粉碎后还包括过筛，所述过筛的孔径为100～300目。
本发明提供了一种咀嚼片，制备用原料包括：上述技术方案所述组合物或者上述技术方案所述制备方法制备得到的组合物、慢消化淀粉、矫味剂、润滑剂、抗氧化剂和粘合剂。
本发明还提供了上述技术方案所述组合物、上述技术方案所述制备方法制备得到的组合物或上述技术方案所述咀嚼片在制备调节肠道和/或改善肥胖药物中的应用。
优选的，所述调节肠道包括调节肠道菌群和/或改善肠道运动功能；所述改善肥胖包括调节血糖和/或降低体重。
本发明的有益效果：
本发明提供了一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物，包括以下质量份的制备用原料：赤芍5～8份、蒲公英10～15份、鱼腥草5～7份、刺五加5～7份和百合5～8份。本发明所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物通过将赤芍、蒲公英、鱼腥草、刺五加和百合进行配伍使用，其中赤芍、蒲公英为主、辅以鱼腥草、刺五加和百合，诸药配合，共同发挥调节肥胖小鼠血糖、体重和肠道菌群以及改善肠道运动功能的作用。实施例结果表明，采用本发明提供的调节肠道和/或改善肥胖的组合物能够显著改善肥胖小鼠的体重，降低肥胖小鼠的体重情况；所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物能降低肥胖小鼠的高血糖，使其维持在正常水平；所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物能够改善肠道收缩舒张情况，能够调节肠道有益菌的菌群平衡，改善肠道功能。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为给药各组对小鼠体重的影响结果图；
图2为给药各组对小鼠血糖的影响结果图；
图3为给药各组对小鼠糖耐量的影响结果图。
具体实施方式
本发明提供了一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物，包括以下质量份的制备用原料：赤芍5～8份、蒲公英10～15份、鱼腥草5～7份、刺五加5～7份和百合5～8份。
如无特殊说明，本发明对各组分的来源没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知市售产品即可。
以质量份数计，本发明提供的调节肠道和/或改善肥胖的组合物制备用原料包括赤芍5～8份，进一步优选为5份或8份，更优选为8份。所述赤芍含芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药甘、苯甲酰芍药苷等，具有镇静、抗炎止痛、解痉的作用，同时对多种病原微生物有较强的抑制作用。
以所述赤芍的质量份为准，本发明提供的调节肠道和/或改善肥胖的组合物制备用原料包括蒲公英10～15份，进一步优选为10份或15份，更优选为15份。所述蒲公英对多种病原菌具有抑制作用，同时具有利胆、保肝、抗内毒素及利尿作用，能激发机体的免疫功能。
以所述赤芍的质量份为准，本发明提供的调节肠道和/或改善肥胖的组合物制备用原料包括鱼腥草5～7份，进一步优选为5份或7份，更优选为7份。所述鱼腥草对多种病原菌具有抑制作用，同时能够提高机体免疫力并有抗炎作用。
以所述赤芍的质量份为准，本发明提供的调节肠道和/或改善肥胖的组合物制备用原料包括刺五加5～7份，进一步优选为5份或7份，更优选为7份。所述刺五加具有抗炎杀菌、增强免疫力、降血压、祛湿止痛以及抗疲劳的功效。
以所述赤芍的质量份为准，本发明提供的调节肠道和/或改善肥胖的组合物制备用原料包括百合5～8份，进一步优选为5份或8份，更优选为8份。所述百合具有止咳、祛痰、强壮、镇静、抗过敏等作用。
作为本发明优选的实施例，所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物包括以下质量份的制备用原料：赤芍5份、蒲公英10份、鱼腥草5份、刺五加5份和百合5份。
作为本发明优选的实施例，所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物包括以下质量份的制备用原料：赤芍8份、蒲公英15份、鱼腥草7份、刺五加7份和百合8份。
本发明还提供了一种上述技术方案所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物的制备方法，包括以下步骤：
将粉碎后的制备用原料进行发酵，得到发酵型植物提取液；
将所述发酵型植物提取液进行酶解，得到调节肠道和/或改善肥胖的组合物。
本发明将粉碎后的制备用原料进行发酵，得到发酵型植物提取液。
本发明所述粉碎优选将调节肠道和/或改善肥胖的组合物制备用原料混合后进行。本发明对混合方式没有特殊限定，采用本领域常规混合方法均可。将原料混合后，本发明优选对混合后原料进行粉碎。本发明对粉碎的方式没有特殊限定，采用本领域常规药物粉碎方法均可。本发明实施例中所述粉碎采用粉碎机进行。本发明将所述制备用原料进行粉碎有利于后续发酵和酶解更充分的进行。本发明将原料粉碎后优选还包括过筛，所述过筛的孔径优选为100～300目，更优选为200目。本发明进行过筛后优选取筛下物与水混合作为发酵液进行发酵。在本发明中，所述水优选为蒸馏水；所述粉碎后原料与水混合的质量体积比优选为(30～45)g：500mL，更优选为45g：500mL。本发明所述发酵用菌剂优选为酵母菌；所述酵母菌的保藏编号优选为ATCC9763。在本发明中，用于接种的酵母菌的OD600nm值优选为0.35～0.45，更优选为0.4。本发明发酵时所述酵母菌的接种量优选为发酵液体积的0.3％～0.6％，更优选为0.5％。在本发明中，所述发酵的温度优选为25～32℃，进一步优选为26～30℃，更优选为28℃；所述发酵的时间优选为40～60h，进一步优选为45～50h，更优选为48h。本发明所述发酵优选为有氧发酵，所述发酵优选在摇床中进行；所述摇床的转速优选为200rpm。本发明将制备用原料进行发酵的目的为将药物组合物中的大分子物质分解为小分子物质，从而有利于有益成分更好地发挥相应的功效。
得到发酵型植物提取液后，本发明将所述发酵型植物提取液进行酶解，得到调节肠道和/或改善肥胖的组合物。
本发明所述酶解用酶优选包括纤维素酶和果胶酶。本发明所述酶解优选依次包括纤维素酶酶解和果胶酶酶解。本发明优选将发酵型植物提取液进行纤维素酶解。进行纤维素酶解时，本发明优选将纤维素酶直接添加到发酵型植物提取液中。在本发明中，所述纤维素酶的添加量优选为制备用原料混合物质量的0.3％～0.5％，更优选为0.3％；所述纤维素酶的酶活优选为10万U/g。在本发明中，所述纤维素酶酶解的温度优选为50～60℃，更优选为55℃；所述纤维素酶酶解的pH值优选为6.0～6.4，更优选为6；所述纤维素酶解的时间优选为2～4h，更优选为3h。在本发明中，所述纤维素酶酶解完成后，得到纤维素酶酶解产物。纤维素酶酶解完成后，本发明优选进行果胶酶酶解。进行果胶酶酶解时，本发明优选将果胶酶直接添加到纤维素酶酶解产物中。在本发明中，所述果胶酶的添加量优选为制备用原料混合物质量的0.3％～0.5％，更优选为0.3％；所述果胶酶的酶活优选为10万U/g。在本发明中，所述果胶酶酶解的温度优选为55～65℃，更优选为60℃；所述果胶酶酶解的的pH值优选为6.2～6.8，更优选为6.5；所述果胶酶酶解的时间为2～4h，更优选为3h。本发明将发酵型植物提取液依次进行纤维素酶解和果胶酶酶解的作用是将纤维素和果胶等大分子分解，使药物组合物中的有益成分更多地释放出来。所述果胶酶酶解完成后，本发明优选还包括对果胶酶产物进行高温处理，得到原料酶解产物。在本发明中，所述高温处理的温度优选为90～95℃，更优选为93℃；所述高温处理的时间为3～5min，更优选为3min。本发明对酶解产物进行高温处理的作用主要是灭菌和灭酶。得到原料酶解产物后，本发明优选对原料酶解产物进行离心，所得上清液即为调节肠道和/或改善肥胖的组合物。本发明所述离心的转速优选为8000～12000r/min，更优选为10000r/min；所述离心的时间优选为20～40min，更优选为30min。本发明所述离心的作用是去除药物分解液中的不溶性杂质。本发明对纤维素酶和果胶酶的来源没有特殊限定，采用本领域常规纤维素酶和果胶酶均可。本发明实施例中的纤维素酶和果胶酶购自青岛隆川生物科技有限公司。
本发明将调节肠道和/或改善肥胖的组合物的制备用原料依次进行发酵和酶解，能够使药物组合物中的有益成分更多地释放出来，从而更好地发挥相应的药物组合物的功效。
本发明提供了一种咀嚼片，制备原料包括：上述技术方案所述组合物或者上述技术方案所述制备方法制备得到的组合物、慢消化淀粉、矫味剂、润滑剂、抗氧化剂和粘合剂。
按质量份计，本发明所述咀嚼片中上述技术方案所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物添加量优选为60～70份，更优选为65份。
按所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物的质量份计，本发明所述咀嚼片中慢消化淀粉的添加量优选为20～30份，更优选为25份。在本发明中，所述慢消化淀粉大米优选为玉米淀粉。本发明对慢消化淀粉的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。本发明实施例中的慢消化淀粉的来源为无锡泰花淀粉有限公司。
按所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物的质量份计，本发明所述咀嚼片中矫味剂的添加量优选为10～15份，更优选为13份。在本发明中，所述矫味剂优选包括奶粉、甘露醇、乳糖和柠檬酸中的一种或两种以上，更优选为同时包括奶粉、甘露醇、乳糖和柠檬酸。本发明实施例中所述咀嚼片中的矫味剂为奶粉、甘露糖、乳糖和柠檬酸，所述咀嚼片中奶粉的添加量优选为5份，甘露醇的添加量优选为5份，乳糖的添加量优选为2份，柠檬酸的添加量优选为1份。本发明对矫味剂的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售即可。本发明实施例中所述甘露醇、乳糖和柠檬酸购自河南万邦实业有限公司；所述奶粉为完达山奶粉。
按所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物的质量份计，所述咀嚼片中润滑剂的添加量优选为0.5～1份，更优选为1份。在本发明中，所述润滑剂优选为硬脂酸镁。本发明对硬脂酸镁的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售即可。本发明实施例中所述硬脂酸镁购自河南庆飞食品配料有限公司。
按所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物的质量份计，所述咀嚼片中抗氧化剂的添加量优选为0.01～0.02份，更优选为0.01份。在本发明中，所述抗氧化剂优选为茶多酚。本发明对茶多酚的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。本发明实施例中所述茶多酚购自河南庆飞食品配料有限公司。
按所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物的质量份计，所述咀嚼片中粘合剂的添加量优选为1～2份，更优选为1份。在本发明中，所述粘合剂优选为聚乙烯毗咯烷酮的乙醇-水溶液，更优选为质量浓度为5％PVP的乙醇-水溶液。在本发明中，所述乙醇-水溶液中乙醇的体积分数优选为90％。本发明对聚乙烯毗咯烷酮的乙醇-水溶液的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品或者自行配制均可。本发明实施例中所述聚乙烯毗咯烷酮购自于阿拉丁。
在本发明中，每片咀嚼片的质量优选为1.2～1.5g，更优选为1.2g。
本发明提供了一种上述技术方案所述咀嚼片的制备方法，包括以下步骤：
将咀嚼片的制备用原料混合后，进行造粒压片，得到咀嚼片。本发明对所述造粒压片技术没有特殊限定，采用本领域常规药物造粒压片方法均可。
本发明还提供了上述技术方案所述组合物、上述技术方案所述制备方法制备得到的组合物或上述技术方案所述咀嚼片在制备调节肠道和/或改善肥胖药物中的应用。
在本发明中，所述调节肠道优选包括调节肠道菌群和/或改善肠道运动功能。在本发明中，所述组合物或者所述咀嚼片具有调节肠道菌群的功效，所述组合物或者所述咀嚼片能够显著降低高脂小鼠体内脱硫弧菌和瘤胃球菌的含量增加，使其恢复至正常水平。在本发明中，所述组合物或者所述咀嚼片能够改善肠道运动功能。在本发明中，所述组合物或者所述咀嚼片能够通过调节血清中的5-HT和IL-6水平达到增强小鼠肠道运动功能的效果。在本发明中，所述组合物或者所述咀嚼片能够增强高脂小鼠肠道收缩和舒张能力。
在本发明中，所述改善肥胖优选包括所述调节血糖和/或降低体重。在本发明中，所述组合物或者所述咀嚼片能显著降低高脂小鼠血糖含量，增强小鼠的糖耐量水平。在本发明中，所述组合物或者所述咀嚼片能够显著降低高脂小鼠的体重。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物和制备方法、一种咀嚼片及其应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
本发明实施例中所涉及的实验项目结题编号为LH2022C100。
实施例1
一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物，制备用原料为赤芍5g、蒲公英10g、鱼腥草5g、刺五加5g和百合5g。
调节肠道和/或改善肥胖的组合物的制备方法为：
将上述原料充分混合后进行粉碎，所述粉碎的采用粉碎机进行，得到混合物粉碎物；取混合物粉碎物过筛，过筛的孔径为200目，取筛下物进行发酵。
将筛下物加入到500mL蒸馏水中作为发酵液进行发酵。采用保藏编号为ATCC9763的酵母菌进行发酵处理，取OD600nm值为0.4的酵母菌菌液作为种子液，酵母菌种子液的接种量为发酵液体积的0.5％。发酵进行的温度为28℃，时间为48h。所述发酵在摇床中进行，所述摇床的转速为200rpm。发酵完成后，得到发酵型植物提取液。
在发酵型植物提取液中加入0.14g纤维素酶，纤维素酶的酶活为10万U/g，纤维素酶酶解的温度为55℃，pH为6，酶解时间为3h，纤维素酶酶解完成后得到纤维素酶酶解产物。
向纤维素酶酶解产物中加入0.14g果胶酶，果胶酶的酶活为10万U/g，果胶酶酶解的温度为60℃，pH为6.5，酶解时间为3h，果胶酶酶解完成后得到果胶酶酶解产物后，将果胶酶酶解产物进行高温处理，高温处理的温度为93℃，高温处理的时间为3min。高温处理后，得到酶解原料酶解产物。
对原料酶解产物进行离心，离心的转速为10000r/min，时间为30min，离心后取上清得到调节肠道和/或改善肥胖的组合物。
实施例2
一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物，制备用原料为赤芍8g、蒲公英15g、鱼腥草7g、刺五加7g和百合8g。
制备方法同实施例1。
实施例3
一种咀嚼片，制备用原料为：实施例1制备得到的调节肠道和/或改善肥胖的组合物、慢消化淀粉、矫味剂、润滑剂、粘合剂和抗氧化剂。
慢消化淀粉为玉米淀粉，购自无锡泰花淀粉有限公司；
矫味剂为完达山奶粉、甘露醇、乳糖和柠檬酸，购自河南万邦实业有限公司；
润滑剂为硬脂酸镁，购自河南庆飞食品配料有限公司；
粘合剂为质量分数为5％聚乙烯毗咯烷酮的乙醇水溶液，聚乙烯毗咯烷酮购自阿拉丁；
抗氧化剂为茶多酚，购自河南庆飞食品配料有限公司。
所述咀嚼片中制备用原料的质量份为：实施例1制备得到的调节肠道和/或改善肥胖的组合物65份、玉米淀粉25份、奶粉5份、甘露醇5份、乳糖2份、柠檬酸1份、硬脂酸镁1份、茶多酚0.01份和粘合剂1份。
每片咀嚼片的质量为1.2g。
制备方法为：
将上述制备用原料充分混合后，进行造粒压片，制备得到咀嚼片1。
实施例4
一种咀嚼片，制备原料为：实施例2制备得到的调节肠道和/或改善肥胖的组合物、慢消化淀粉、矫味剂、润滑剂、粘合剂和抗氧化剂。
所述咀嚼片中制备用原料的质量份为：实施例2制备得到的调节肠道和/或改善肥胖的组合物65份、玉米淀粉25份、奶粉5份、甘露醇5份、乳糖2份、柠檬酸1份、硬脂酸镁1份、茶多酚0.01份和粘合剂1份。
每片咀嚼片的质量为1.2g。
咀嚼片组分来源和制备方法同实施例3。
对比例1
药物制备方法同实施例1，区别在于制备用原料仅为5g赤芍，得到赤芍提取物。
将赤芍提取物作为原料替换实施例3中的组合物，其他原料的组成和来源同实施例3，进行咀嚼片的制备，咀嚼片的制备方法同实施例3，得到赤芍咀嚼片。
对比例2
药物制备方法同实施例1，区别在于制备用原料仅为10g蒲公英，得到蒲公英提取物。
将蒲公英提取物作为原料替换实施例3中的组合物，其他原料的组成和来源同实施例3，进行咀嚼片的制备，咀嚼片的制备方法同实施例3，得到蒲公英咀嚼片。
对比例3
药物制备方法同实施例1，区别在于制备用原料仅为5g鱼腥草，得到鱼腥草提取物。
将鱼腥草提取物作为原料替换实施例3中的组合物，其他原料的组成和来源同实施例3，进行咀嚼片的制备，咀嚼片的制备方法同实施例3，得到赤芍咀嚼片。
对比例4
药物制备方法同实施例1，区别在于制备用原料仅为5g刺五加，得到刺五加提取物。
将刺五加提取物作为原料替换实施例3中的组合物，其他原料的组成和来源同实施例3，进行咀嚼片的制备，咀嚼片的制备方法同实施例3，得到刺五加咀嚼片。
对比例5
药物制备方法同实施例1，区别在于制备用原料仅为5g百合，得到百合提取物。
将百合提取物作为原料替换实施例3中的组合物，其他原料的组成和来源同实施例3，进行咀嚼片的制备，咀嚼片的制备方法同实施例3，得到百合咀嚼片。
应用例1
1.实验材料
1.1实验动物
雄性小鼠，为牡丹江医学院培育的小鼠。
1.2受试品
实施例3制备的咀嚼片、实施例4制备的咀嚼片、对比例1制备的赤芍药物、对比例2制备的蒲公英药物、对比例3制备的鱼腥草药物、对比例4制备的刺五加药物和对比例5制备的百合药物。
2.分组和处理方法
将雄性小鼠适应性饲喂3d后，随机分为2个大组，分别为正常组(对照组)和实验组(高脂组)，其中正常组小鼠6只，实验组小鼠48只。
(1)正常组(对照组)：进行常规饲喂，饲喂的饲料为普通小鼠饲料。
(2)实验组(高脂组)：适应性常规饲喂3d后，喂养胆固醇含量高的高脂饲料，连续喂养4周，体重达到30g后开始分组。所述高脂饲料购自于小黍有泰(北京)生物科技有限公司，所述高脂饲料的名称为高糖高脂饲料。所述高脂饲料的配方为：66.5％大小鼠维持饲料、10％猪油、20％蔗糖、2.5％胆固醇和1％胆酸钠；所述高脂饲料产品特点：适合于饲料直接诱导的糖尿病模型。
(3)实验组分组：实验组随机分为模型组、给药一组、给药二组、赤芍组、蒲公英组、鱼腥草组、刺五加组和百合组。每组小鼠6只。
模型组继续饲喂高脂饲料3天，之后改为普通饲料；
给药一组继续饲喂高脂饲料3天，之后改为普通饲料，同时给予实施例3制备的咀嚼片，咀嚼片按体重直接投喂，一天饲喂一次，100mg/kg；
给药二组继续饲喂高脂饲料3天，之后改为普通饲料，同时给予实施例4制备的咀嚼片，咀嚼片按体重直接投喂，一天饲喂一次，100mg/kg；
赤芍组继续饲喂高脂饲料3天，之后改为普通饲料，同时给予对比例1制备的赤芍药物，赤芍药物按体重直接投喂，一天饲喂一次，100mg/kg；
蒲公英组继续饲喂高脂饲料3天，之后改为普通饲料，同时给予对比例2制备的蒲公英药物，蒲公英药物按体重直接投喂，一天饲喂一次，100mg/kg；
鱼腥草组继续饲喂高脂饲料3天，之后改为普通饲料，同时给予对比例3制备的鱼腥草药物，鱼腥草药物按体重直接投喂，一天饲喂一次，100mg/kg；
刺五加组继续饲喂高脂饲料3天，之后改为普通饲料，同时给予对比例4制备的刺五加药物，刺五加药物按体重直接投喂，一天饲喂一次，100mg/kg；
百合组继续饲喂高脂饲料3天，之后改为普通饲料，同时给予对比例5制备的百合药物，百合药物按体重直接投喂，一天饲喂一次，100mg/kg。
3.试验方法
(1)上述各实验组和对照组喂养时间4周，各给药组每天下午同一时间按照同样的顺序将相应的药物进行灌胃，正常组和模型组灌胃同样质量的水。每周同一时间在早上空腹状态下给小鼠称重，观察小鼠的体重变化。每天观察小鼠进食、饮水以及排尿量的变化情况。整个试验期间小鼠正常进行饮水。
(2)上述各实验组和对照组喂养时间4周，每周同一时间在早上空腹状态下，对小鼠进行尾静脉取血，记录试验小鼠4周的血糖值变化。上述各组试验进行4周后，禁食不禁水8h，每只小鼠按照体重2g/kg的用量灌胃葡萄糖溶液，灌胃葡萄糖溶液后，分别在30min、60min、90min和120min的时间点，从尾静脉取血，用血糖仪检查血糖值变化，检测糖耐量。
(3)上述各组试验进行4周时间后，对小鼠采取眼眶取血，血样静置30min后离心30min，取上清检测。用试剂盒检查血清中5-HT和IL-6的含量以表征各试验组对小鼠肠道运动功能的影响。其中，IL-6试剂盒购自于上海江莱生物科技股份有限公司，货号：JL20268-48T；5-HT试剂盒购自于南京建成生物工程研究所有限公司，货号：H104-1。
(4)肠道收缩实验
上述各组试验进行4周时间后，将小鼠颈脱臼后取结肠和小肠组织，进行肠道收缩实验。
具体方法为：
配置离体肠道缓冲液：将NaCl 8g、KCl 0.2g、MgSO4﹒7H2O 0.26g、NaH2PO4﹒2H2O0.065g、NaHCO31.0g、CaCl20.2g、葡萄糖1.0g溶于1000ml的纯净水中搅拌备用。
配制3mol/L的KCl溶液；10-6～10-1mol/L梯度的Ach(氯化乙酰胆碱)和Atrop(硫酸阿托品)溶液。
用高温消毒的手术剪取小鼠小肠组织，然后放入预冷的离体肠道缓冲液中。
将放置于缓冲液中的小肠组织剪成若干1厘米左右的小段，选择离体状态下自发蠕动状态最好的几段，用手术线对肠断两端进行结扎，然后与张力换能器连接，记录数据。每15min换一次液，30min后开始实验。张力换能器里通入的缓冲液要预先通15min的95％氧气和5％二氧化碳。期间将肠道初始静息张力调整为0.5g，缓冲液温度维持在37℃左右。
当小肠在受力情况下收缩状态达到平稳时，往水浴槽里加入300μL KCl溶液，当血管收缩到最大张力时，打开阀门换掉水浴槽中缓冲液，等张力恢复到0.5g时，依次调整张力至0.7g，0.9g等，以此寻找小肠最适受力。
前期为了使小鼠肠道适应离体缓冲液的环境，并且为了检测肠道的活性，使用累积加药法，每次加入50μLKCl，每次加完药后直至小肠收缩曲线平缓才可加下一次，直至水浴槽中KCl浓度为80mM，此刻观察各连接器上的小肠张力变化情况选择活性最好的一部分肠段进行后续的实验；
收缩舒张实验结果发现，当水浴槽中所加入的Atrop浓度为10-4mM时，小肠舒张达到最大值。所以向水浴槽里缓缓加入10-4mM的Atrop。在肠道舒张值达到稳定时，再向水浴槽中加入10-5mM的Ach，等小肠收缩达到最大值。
(5)肠道菌群检测
上述各组试验进行4周时间后，取小鼠新鲜粪便进行试验。
混合溶液由超纯水、甲醇和乙腈按体积比为1:1:1组成。将80mg粪便样品加入600μL预冷的混合溶液中，充分混匀，然后在13000g下4℃离心10min，重复2次，收集上清液。提取上清液中的粪便基因组，进行PCR检测，检测方法参见参考文献《加减知柏地黄汤通过调节肠道菌群改善肥胖小鼠表型的机制研究》(马丽蓉)。
5.实验结果
(1)小鼠体重变化
给药前、试验第一周、第二周以及第三周和第四周小鼠的体重记录情况分别如表1～5所示。小鼠四周的体重变化趋势如图1所示。
表1给药前各实验组小鼠体重(单位，g)
表2给药1周各实验组小鼠体重(单位，g)
表3给药2周各实验组小鼠体重(单位，g)
表4给药3周各实验组小鼠体重(单位，g)
表5给药4周各实验组小鼠体重(单位，g)
由表1～表5和图1可得，与高脂组相比，给药1组和2组小鼠体重可明显降低，(P<0.5或P<0.01)。各单独给药组有降低高脂小鼠体重的趋势，单与给药一组和给药二组相比，给药一组和给药二组相对于单独给药组能显著降低高脂小鼠的体重。
(2)小鼠血糖变化及糖耐量检测
I.给药前、试验第一周、第二周以及第三周和第四周小鼠的血糖记录情况分别如表6～10所示。小鼠四周的血糖变化趋势如图2所示。
表6给药前各实验组小鼠血糖(单位，mmol/L)
/>
表7给药1周各实验组小鼠血糖(单位，mmol/L)
表8给药2周各实验组小鼠血糖(单位，mmol/L)
表9给药3周各实验组小鼠血糖(单位，mmol/L)
表10给药4周各实验组小鼠血糖(单位，mmol/L)
由表6～表10和图2可得，结果显示正常组小鼠血糖水平在灌胃生理盐水4周后基本维持不变，而高脂组小鼠的血糖浓度在呈上升趋势，与高脂组相比，给药组小鼠血糖浓度稍有下降(P<0.5或P<0.01)，给药2组小鼠血糖浓度下降明显(P<0.01)，由20.1mmol/L下降到18.4mmol/L；与高脂组相比，给药1组和2组血糖浓度明显降低，其它各给药组均没有给药1和给药2效果明显。
II.小鼠糖耐量检测结果
葡萄糖溶液灌胃前、灌胃后30min、60min、90min以及120min的血糖记录情况分别如表11～15所示。小鼠糖耐量检测结果如图3所示。
表11葡萄糖溶液灌胃前小鼠血糖值(单位，mmol/L)
表12葡萄糖溶液灌胃30min时小鼠血糖值(单位，mmol/L)
表13葡萄糖溶液灌胃60min时小鼠血糖值(单位，mmol/L)
表14葡萄糖溶液灌胃90min时小鼠血糖值(单位，mmol/L)
表15葡萄糖溶液灌胃120min时小鼠血糖值(单位，mmol/L)
由表11～表15和图3可得，给药一组和给药二组能明显拮抗外源葡萄糖引起的血糖升高。而单独给药组不能拮抗外源葡萄糖引起的血糖升高，甚至相对于模型组，还具有使血糖升高的趋势。
(2)各试验组在血清水平上对肥胖小鼠肠道运动功能的影响
各试验组血清水平中5-HT(5-羟色胺)和IL-6(白细胞介素-6)的检查结果如表16所示。
表16各试验组血清水平中5-HT和IL-6的检测结果(单位：pg/mL)
| 分组 | 5-HT | IL-6 |
| 正常 | 12.463±1.231 | 1.021±0.231 |
| 模型组 | 9.634±0.835 | 1.302±0.327 |
| 给药一组 | 13.423±1.115 | 1.281±0.203 |
| 给药二组 | 17.675±2.236 | 1.174±0.314 |
| 赤芍组 | 14.352±1.376 | 1.272±0.536 |
| 蒲公英组 | 13.783±1.426 | 1.227±0.208 |
| 鱼腥草组 | 13.146±2.632 | 1.279±0.301 |
| 刺五加组 | 14.847±1.583 | 1.269±0.214 |
| 百合组 | 14.758±1.537 | 1.219±0.311 |
由表16可得，各给药组在血清水平上对肥胖小鼠肠道运动功能的增强作用结果显示，高脂喂养的环境会使小鼠体内5-HT含量降低，与对照组相比，具有显著性差异，结果具有统计学意义(P<0.05)，但是给小鼠进行药物处理之后，小鼠肠道的5-HT含量都有不同程度的升高，结果具有统计学意义(P<0.05)。单一组分给药各组均没有给药一组和给药二组效果明显。
高脂喂养的环境会使小鼠体内IL-6含量升高，与对照组相比，具有显著性差异，结果具有统计学意义(P<0.05)。但是给小鼠进行药物处理之后，小鼠肠道的IL-6含量都有不同程度的降低，给药二组对IL-6降低效果最明显。本发明提供的调节肠道和/或改善肥胖的组合物能够通过调节血清中的5-HT和IL-6水平达到增强小鼠肠道运动功能的效果。
(4)肠道收缩实验结果
各试验组肠道收缩实验结果和肠道舒张实验检测结果如表17所示。
表17各试验组肠道收缩实验结果和肠道舒张实验检测结果
由表17可得，高脂喂养的小鼠肠道在离体环境下用ACH处理后，收缩能力降低，与对照组具有显著性差异，结果具有统计学意义(P<0.05)。而给药一组和二组的收缩能力则有提高，与对照组也具有差异，结果具有统计学意义(P<0.05)。单一组分各给药组对肠道收缩值也有提高趋势，但给药一组和给药二组在提高肠道收缩能力方法效果更显著。
模型组的小鼠肠道在离体环境下用Atrop处理后，舒张能力降低，与对照组具有显著性差异，结果具有统计学意义(P<0.05)。而给药一组和给药二组的舒张能力则有提高，与对照组也具有差异，结果具有统计学意义(P<0.05)。单一组分各给药组对舒张能力也有提高趋势，但给药一组和给药二组在提高肠道舒张能力方法效果更明显。
(5)小鼠肠道菌群检测结果
小鼠肠道菌群检测结果如表18所示。
表18各试验组肠道菌群检测结果
由表18可得，在高脂环境下小鼠肠道中脱硫弧菌的含量增加，与对照组相比，具有显著性差异，结果具有统计学意义(P<0.05)。给药一组和二组处理后，小鼠体内的脱硫弧菌含量降低，与对照组也有显著性差异，结果具有统计学意义(P<0.05)。与单一组分各给药组相比，给药一组和给药二组对脱硫弧菌降低趋势更显著。
高脂环境下小鼠肠道中瘤胃球菌的含量与对照组相比降低，具有显著性差异，结果具有统计学意义(P<0.05)。给药1组和2组处理后，小鼠体内的瘤胃球菌含量增加，与对照组也有显著性差异，结果具有统计学意义(P<0.05)。与单一组分各给药组相比，给药一组和给药二组对瘤胃球菌增加趋势更显著。
综上，本发明提供的调节肠道和/或改善肥胖的组合物通过将赤芍、蒲公英、鱼腥草、刺五加和百合进行配伍使用，同时结合特定的制备方法，制备得到的组合物或者咀嚼片具有调节肥胖小鼠血糖、体重和肠道菌群以及改善肠道运动功能的作用。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (15)
1.一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物，其特征在于，由以下质量份的制备用原料组成：赤芍5～8份、蒲公英10～15份、鱼腥草5～7份、刺五加5～7份和百合5～8份。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物由以下质量份的制备用原料组成：赤芍8份、蒲公英15份、鱼腥草7份、刺五加7份和百合8份；
或者，所述组合物由以下质量份的制备用原料组成：赤芍5份、蒲公英10份、鱼腥草5份、刺五加5份和百合5份。
3.一种权利要求1或2所述调节肠道和/或改善肥胖的组合物的制备方法，包括以下步骤：
将粉碎后的制备用原料进行发酵，得到发酵型植物提取液；所述发酵用菌剂包括酵母菌，所述发酵的温度为25～32℃；所述发酵的时间为40～60h；
将所述发酵型植物提取液进行酶解，得到调节肠道和/或改善肥胖的组合物；
所述酶解用酶包括纤维素酶和果胶酶；所述纤维素酶的添加量为制备用原料混合物质量的0.3％～0.5％；所述果胶酶的添加量为制备用原料混合物质量的0.3％～0.5％；
所述纤维素酶的酶活为10万U/g；所述果胶酶的酶活为10万U/g；
所述酶解依次包括纤维素酶酶解和果胶酶酶解；
所述纤维素酶酶解的温度为50～60℃；pH为6.0～6.4；时间为2～4h；
所述果胶酶酶解的温度为55～65℃；pH为6.2～6.8；时间为2～4h。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述粉碎将原料混合后进行；所述粉碎后还包括过筛，所述过筛的孔径为100～300目。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述粉碎后，还包括将粉碎后原料和水混合作为发酵液进行发酵；所述粉碎后原料与水混合的质量体积比为(30～45)g：500mL。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述酵母菌的保藏编号为ATCC9763；用于接种的酵母菌的OD600nm值为0.35～0.45。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的温度为26～30℃；所述发酵的时间为45～50h。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的温度为28℃；所述发酵的时间为48h。
9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述纤维素酶的添加量为制备用原料混合物质量的0.3％；所述果胶酶的添加量为制备用原料混合物质量的0.3％；
所述纤维素酶酶解的温度为55℃；pH为6.0；时间为3h；
所述果胶酶酶解的温度为60℃；pH为6.5；时间为3h。
10.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，果胶酶酶解完成后，还包括对酶解产物进行高温处理；所述高温处理的温度为90～95℃；所述高温处理的时间为3～5min。
11.一种咀嚼片，其特征在于，制备用原料包括：权利要求1或2所述组合物或者权利要求3～10任一项所述制备方法制备得到的组合物、慢消化淀粉、矫味剂、润滑剂、抗氧化剂和粘合剂。
12.根据权利要求11所述的咀嚼片，其特征在于，按质量份计，组分为：
所述组合物60～70份、慢消化淀粉20～30份、矫味剂10～15份、润滑剂0.5～1份、抗氧化剂0.01～0.02份和粘合剂1～2份。
13.根据权利要求12所述的咀嚼片，其特征在于，按质量份计，组分为：
所述组合物65份、慢消化淀粉25份、矫味剂13份、润滑剂1份、抗氧化剂0.01份和粘合剂1份。
14.权利要求1或2所述组合物、权利要求3～10任一项所述制备方法制备得到的组合物或权利要求11～13任一项所述咀嚼片在制备调节肠道和/或改善肥胖的药物中的应用。
15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述调节肠道包括调节肠道菌群和/或改善肠道运动功能；所述改善肥胖包括调节血糖和/或降低体重。
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