CN113952420A - 一种利用乳双歧杆菌发酵复合中药提取物的降血糖精华液制备方法 - Google Patents

一种利用乳双歧杆菌发酵复合中药提取物的降血糖精华液制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种利用乳双歧杆菌发酵复合中药提取物的降血糖精华液制备方法，其包括：S1、制备中药提取物所述中药包括丹参、桑叶、地黄和玉米须；将所述中药分别进行水提浓缩并制取药粉；S2、混合发酵制备精华液：配制发酵培养基，根据发酵培养基总量添加一定量的混合药粉，接种乳双歧杆菌BAL531(保藏编号为CGMCC No.17329)进行混合发酵，发酵结束后，离心取上清液制得降血糖中药发酵精华液；发酵培养基组成为：每1L培养液含有葡萄糖16‑24g，乳粉55‑65g，乳清蛋白3‑6g，酵母浸粉3‑6g，磷酸氢二钾1.5‑2.5g，无水乙酸钠1.5‑2.5g，硫酸镁0.54‑0.62g,L‑半胱氨酸盐酸盐0.45‑0.55g，吐温0.8‑1.2g，pH值调为6.8‑7.2，BAL531接种量为3±0.5％。本发明的精华液将具有良好降血糖活性的中药材和具有特殊代谢调节功能的乳双歧杆菌相结合，对α‑葡萄糖苷酶抑制率高达47.8‑64％，降糖效果显著。

Description

一种利用乳双歧杆菌发酵复合中药提取物的降血糖精华液制 备方法
技术领域
本发明涉及中药发酵药物技术领域，尤其是一种利用乳双歧杆菌发酵复合中药提取物的降血糖精华液制备方法。
背景技术
糖尿病是由遗传和环境因素相互作用而引起的一组代谢异常综合征。长期的糖尿病可引起多个系统器官的慢性并发症，导致功能障碍和衰竭，成为致残、致死的主要原因。现代人们受饮食习惯和生活节奏的影响，高血糖患病率逐渐增多，高血糖对人体的危害巨大，会引起一些急性或慢性并发症；急性的并发症如糖尿病酮症、酮症酸中毒或者导致高血糖高渗状态；慢性的并发症如眼底病变、糖尿足等；另外血糖高还可能增加心脑血管疾病、细菌感染和口腔疾病等疾病的发生率。目前控制血糖的大多靠限制饮食和服用降血糖药物，这两种方法对患者的生活质量和人体健康都造成严重的影响，因此开发一种效果好，无毒副作用的降血糖产品具有重要意义。乳双歧杆菌(Bifidobacterium)，是人和动物肠道菌群中的优势菌群之一，科学研究表明，该菌对人体预防肠道疾病具有重要的作用，是人体肠道中重要的生理性细菌，参与人体肠道免疫、疾病预防、消化保护等一系列生理过程，可以改善机体的代谢紊乱。然而现有技术尚未公开与乳双歧杆菌相关的降血糖产品。
发明内容
(一)要解决的技术问题
鉴于现有技术的上述缺点、不足，本发明提供一种利用乳双歧杆菌发酵复合中药提取物的降血糖精华液制备方法，通过筛选出具有良好降血糖效果的中药材与发酵益生菌复配，得到具有优良降血糖活性的发酵精华液，该发酵精华液被证实对α-葡萄糖苷酶的抑制率高达47.8％-64％，通过人群试吃证明肥胖组和高血糖组人群在试吃后血糖整体下降，对肥胖及高血糖的餐后血糖具有很好的调节作用，同时肠道菌群数据显示双歧杆菌、乳杆菌呈现增加趋势，少数人肠道AKK菌增加。
(二)技术方案
为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：
一方面，本发明提供一种利用乳双歧杆菌发酵复合中药提取物的降血糖精华液制备方法，包括：
S1、制备中药提取物
所述中药包括丹参、桑叶、地黄和玉米须；将所述中药分别进行水提，并将水提液浓缩，分别得到丹参提取物、桑叶提取物、地黄提取物、玉米须提取物的药粉；
S2、制备降血糖中药发酵精华液
配制乳双歧杆菌BAL531的发酵培养基，根据发酵培养基的总量添加一定比例的混合药粉，然后接种乳双歧杆菌BAL531(保藏编号为CGMCC No.17329)，按照乳双歧杆菌BAL531的发酵条件进行发酵，发酵结束后，离心取上清液，以该上清液制作降血糖中药发酵精华液；
其中，所述发酵培养基组成为：每1L培养液中，含有葡萄糖16-24g，乳粉55-65g，乳清蛋白3-6g，酵母浸粉3-6g，磷酸氢二钾1.5-2.5g，无水乙酸钠1.5-2.5g，硫酸镁0.54-0.62g,L-半胱氨酸盐酸盐0.45-0.55g，吐温0.8-1.2g，pH值调为6.8-7.2；
乳双歧杆菌BAL531的初始接种量为3±0.5％；发酵过程过程中，实时监测pH，pH值达到4.25-4.40，即发酵结束。
根据本发明的较佳实施例，S1中，制备中药提取物的方法为：
分别将丹参、桑叶、地黄、玉米须按照每1g药材加入12-18mL的水比例进行蒸煮，蒸煮40-60min后，过滤保留滤液，药渣再按照每1g药材加入8-12mL的水进行蒸煮，蒸煮25-35min后，再次过滤，将两次滤液合并蒸煮浓缩；
之后分别将浓缩液进行冻干处理，分别得到丹参提取物、桑叶提取物、地黄提取物、玉米须提取物的冻干药粉。
根据本发明的较佳实施例，S2中，添加药粉的比例为每1L发酵培养基总量添加8-15g的混合药粉。
根据本发明的较佳实施例，S2中，所述混合药粉包含18-22％的桑叶提取物药粉、30-40％丹参提取物药粉、20-30％地黄提取物药粉和10-30％玉米须提取物药粉。
根据本发明的较佳实施例，S2中，添加药粉的比例为每1L发酵培养基总量添加10g的混合药粉，所述混合药粉包含20％的桑叶提取物药粉、35％丹参提取物药粉、25％地黄提取物药粉和20％玉米须提取物药粉。降糖实验证明，在该条件下得到的中药发酵精华液其对α-葡萄糖苷酶的抑制率高达64％，具有最为显著的降血糖效果。
根据本发明的较佳实施例，S2中，在接种乳双歧杆菌BAL531之前，先将乳双歧杆菌BAL531的发酵培养基及药粉的混合物进行灭菌处理，灭菌之后再接种乳双歧杆菌BAL531；所述灭菌条件为121℃，15-25min。
根据本发明较佳实施例，S2中，发酵条件为:发酵温度为37±1℃(优选为37℃)，搅拌速度20-40rpm，发酵时长12-18h。
在上述发酵条件下发酵，使乳双歧杆菌BAL531具有最佳的增殖活性和代谢速度，以缩短发酵时间，提高生产效率。
另一方面，本发明提供一种降血糖中药发酵精华液，其采用上述任一实施例的制备方法制得。
在制得降血糖中药发酵精华液后，可根据精华液中药效成分和乳双歧杆菌BAL531的浓度进行调理，调理包括：稀释/浓缩，或添加稳定剂/赋形剂/矫味剂等，以得到便于服用的产品。
(三)有益效果
本发明的降血糖中药发酵精华液，通过从多种具有良好降血糖活性的中药中分别进行实验和筛选，最终选定以丹参、桑叶、地黄、玉米须作为中药材料，分别提取水提物药粉，然后按照一定比例投加到乳双歧杆菌BAL531的发酵培养基中，灭菌后接种一定浓度的乳双歧杆菌BAL531共同发酵，发酵完成后得到上清，该上清即为降血糖中药发酵精华液。
本发明将具有良好降血糖活性的中药材和具有特殊代谢调节功能的乳双歧杆菌BAL531结合，共同制得本发明的降血糖精华液，已被(体外实验)证实对α-葡萄糖苷酶的抑制率高达47.8％-64％；同时通过人群试吃证明肥胖组和高血糖组人群在试吃后血糖整体下降，对肥胖及高血糖的餐后血糖具有很好的调节作用，同时肠道菌群数据显示双歧杆菌、乳杆菌呈现增加趋势，少数人肠道Akk菌(Akkermansia mucinipHila，该菌具有改善代谢的能力，健康人中Akk菌的丰度比糖尿病、肥胖人群和超重人群高，Akk对肠道黏液层厚度和肠屏障完整性存在正向调节作用)增加,。本发明降血糖精华液降糖效果显著，安全无毒副作用，天然原料来源便捷、制备简单、成本低廉，具有极高的市场推广价值和应用价值。
附图说明
图1为受试者口服本发明的降血糖中药发酵精华液四周(4weeks)时肥胖、高血糖、健康受试者空腹血糖变化。
图2为受试者口服本发明的降血糖中药发酵精华液四周时肥胖(Obesity)、高血糖(T2DM)、健康(Health)受试者餐后2h血糖变化。
图3为受试者口服本发明的降血糖中药发酵精华液四周时肥胖、高血糖、健康受试者肠道菌群变化。
图4为受试人群口服本发明的降血糖中药发酵精华液1个月、2个月、3个月时糖化血红蛋白(HbA1c)的整体下降趋势。
具体实施方式
为了更好的解释本发明，以便于理解，下面结合附图，通过具体实施方式，对本发明作详细描述。
实施例1
本实施例的步骤如下：
1、分别称取1Kg桑叶、1Kg丹参、1Kg地黄、1Kg玉米须。
2、将1Kg丹参加15L纯水进行蒸煮炮制45min，过滤留取滤液，药渣在分别加入10L纯水蒸煮30min，再次过滤留取滤液。将两次滤液合并进行蒸煮浓缩，得到桑叶水提浓缩液。
3、按照上述相同的方法处理丹参、地黄、玉米须，分别得到丹参水提浓缩液、地黄水提浓缩液、玉米须水提浓缩液。
4、将四种中药浓缩蒸煮液进行冻干机冻干，冻干机为东富龙冻干机，冻干时间为24小时，之后将冻干粉装袋备用。
5、按照桑叶提取物冻干粉20％、丹参提取物冻干粉30％、地黄提取物冻干粉20％、玉米须提取物冻干粉30％进行混合，得到10g混合药粉。
6、配制乳双歧杆菌BAL531(保藏编号为CGMCC No.17329)的基础发酵培养基，该培养基的具体成分为：葡萄糖20g，乳粉60g，乳清蛋白5g，酵母浸粉5g，磷酸氢二钾2g，无水乙酸钠2g，硫酸镁0.58g,L-半胱氨酸盐酸盐0.5g，吐温1g，pH值调为6.8，配制总量为1L。然后加入10g第5步得到的混合药粉。
7、将发酵培养基与混合药粉的混合物放置在高压灭菌锅灭菌备用，灭菌条件121℃，20min。
8、将灭菌的培养基和混合药粉转移至发酵罐发酵，接种3％(质量浓度)的乳双歧杆菌BAL531，发酵过程中保持发酵温度为37℃，搅拌速度30rpm。
9、发酵过程中，实时监测pH，pH值达到4.25-4.40，即表示发酵完成。发酵完成后，将菌液离心，取上清备用。
10、测试上清液的体外降血糖活性。测试方法如下：
(1)初始反应液制备
①缓冲液制备将8.16gKH2PO4溶解于300ml纯中，加入20％NaOH溶液调节pH至7.0。
②底物PNPG((4-NitropHenyl-β-D-glucopyranoside))溶液配制：称取120mgPNPG粉末于20ml容量瓶中，加入配制好的磷酸盐缓冲液定容至20ml，充分混合摇匀，27℃超声溶解，溶解完全避光4℃保存，备用。
③反应终止液的配制：称取10.6g碳酸钠粉末，先加适量水溶解，之后定容至500ml，混合摇匀，备用。
④将第9步离心得到的上清液量取2ml，加入8ml配制好的PNPG底物，混合摇匀，备用。
⑤配制α-葡萄糖苷酶溶液：称取20ul的α-葡萄糖苷酶酶液(酶活力为100u/mg)于棕色EP管内，用1mol/L磷酸缓冲液稀释到活度为1u/ml，备用。
(2)反应
在96孔板中设置实验组、空白组和空白对照组，每一组分别设定实验组和对照组。
在配制好的150ul磷酸盐缓冲液中加入100ul配制好的各组方混合液(执行步骤④)，将混合物于37℃水浴10min，加入50ul配制好的α-葡萄糖苷酶溶液(执行步骤⑤)继续反应10min。反应结束加入1ml配制好的碳酸钠终止液，摇匀避光静置两分钟，将反应液在波长405nm下，用酶标仪测定吸光度。反应体系中磷酸盐缓冲液作为空白组对照，空白对照组为配制的阿卡波糖标准液。
(3)测量吸光度
分别将上述反应液于96孔板内，405nm下，用酶标仪测定吸光度。
(4)计算上清液对α-葡萄糖苷酶的抑制率
抑制率(％)＝[A空白-(A样品-A背景)/A空白]*100％
A空白：不加样品反应后的吸收值；
A样品：加入样品反应后的吸收值；
A背景：只加样品反应后的吸收值。
最后，通过计算抑制率，本实施例制备的精华液对α-葡萄糖苷酶的抑制率为58％。
实施例2
本实施例与实施例1的区别主要在于，本实施例中的第5步为：按照桑叶提取物冻干粉20％、丹参提取物冻干粉35％、地黄提取物冻干粉25％、玉米须提取物冻干粉20％进行混合，得到10g混合药粉。
其余实验步骤和条件均参照实施例1，发酵完成后，取上清备用，并按照实施例1的方法测试上清液的体外降血糖活性。
最后，通过计算抑制率，本实施例制备的精华液对α-葡萄糖苷酶的抑制率为64％。
实施例3
本实施例与实施例1的区别主要在于，本实施例中的第5步为：按照桑叶提取物冻干粉20％、丹参提取物冻干粉40％、地黄提取物冻干粉30％、玉米须提取物冻干粉10％进行混合，得到10g混合药粉。
其余实验步骤和条件均参照实施例1，发酵完成后，取上清备用，并按照实施例1的方法测试上清液的体外降血糖活性。
最后，通过计算抑制率，本实施例制备的精华液对α-葡萄糖苷酶的抑制率为47.8％。
通过上述实施例1-3可知，三个实施例制备的精华液对α-葡萄糖苷酶的抑制率在47％-64％之间，说明实施例1-3制备的发酵上清液是一种α-葡萄糖苷酶抑制剂，可以延缓肠道碳水化合物吸收而达到治疗糖尿病的功效，可作为口服降糖药物。进一步地，其中以实施例2制备的菌液上清液的α-葡萄糖苷酶抑制率最高，故将实施例2制备的菌液上清液装瓶，即制得具有降血糖活性的精华液。
对照例1
本对照例申请人在研发过程中，做过的另一组实验。即使用了益生菌LGG替换实施例1的乳双歧杆菌BAL531，最后离心菌液，得到上清，测试该上清的体外降糖效果。通过计算抑制率，该上清对α-葡萄糖苷酶的抑制率仅为32.05％。
对照例2
本对照例申请人在研发过程中，做过的另一组实验。区别主要在于中药提取物来源不同。本例中，中药提取物包括：麦冬的提取物30％、山药的提取物20％、枸杞的提取物20％、五味子的提取物20％、番石榴提取物10％，共混得到10g提取物冻干粉。
按照实施例1相同的方法，制备发酵菌液上清，测试该上清的体外降糖效果。通过计算抑制率，该上清对α-葡萄糖苷酶的抑制率仅为29.04％。
对照例3
为了比较采用乳双歧杆菌BAL531发酵前后，30％丹参、20％桑叶、20％地黄、30％玉米须的水提冻干粉的体外降糖功效的变化，本对照例直接以丹参、桑叶、地黄、玉米须的水提冻干粉10g加1L水搅拌混合得到药液。按照实施例1的体外降糖率测试方法，该药液对α-葡萄糖苷酶的抑制率仅为34.15％。
接下来，按照实施例2的条件进行生产制备，得到降血糖精华液，并进行人群试吃试验。人群试吃试验包括小型群体试验和大型群体试验两个部分。
小型群体(7人)试吃试验：
1.人群筛选：
健康：BMI:18-24kg/m2；2hPBG:＜7.8mmol/L
超重肥胖：BMI:＞27kg/m2；2hPBG:6.8-7.8mmol/L
高血糖：BMI:＞27kg/m2；
2.技术路线：筛选志愿者→干预前取粪便；基线身高、体重，调查患者饮食、运动情况；患者空腹血糖、餐后2h血糖→血糖、体重正常3人；肥胖、血糖正常5人；肥胖、高血糖2人→干预→肠道微生物测定：AKK、乳杆菌；血糖指标：空腹血糖、餐后2h血糖。
3.试吃样品
每天早、晚饭后60ml-100ml
4.检测方法
血糖检测：口服75g葡萄糖试验，用血糖仪检测空腹血糖、糖负荷2h血糖。菌群检测：q-PCR检测肠道菌群。
如图1所示为受试者口服本发明的降血糖中药发酵精华液四周(4weeks)时(Obesity)、高血糖(T2DM)、健康(Health)受试者空腹血糖变化。图2为受试者口服本发明的降血糖中药发酵精华液四周(4weeks)时肥胖(Obesity)、高血糖(T2DM)、健康(Health)受试者餐后2h血糖变化。
由上图的整体数据来看，与基线相比，使用本发明制备的发酵精华液干预4周后，肥胖组和健康组的空腹血糖在干预期间有波动但是干预四周和基线相比差异不大，高血糖组的3个人的空腹血糖整体呈下降趋势，从7.52mmol/L下降至6.72mmol/L，下降0.8mmol/L；餐后2h血糖肥胖组和高血糖组餐后2h血糖都呈下降趋势，肥胖组整体从7.05mmol/L下降至6.11mmol/L，下降0.94mmol/L；高血糖组整体从10.2下降至9.25，下降0.95mmol/L；健康组餐后2h血糖呈升高的趋势，由于人数太少，一人升高对于整体数据影响较大。从4周的检测结果看：此产品对肥胖及高血糖的餐后2h血糖具有很好的调节作用。
图3为受试者口服本发明的降血糖中药发酵精华液四周(4weeks)时肥胖(Obesity)、高血糖(T2DM)、健康(Health)受试者肠道菌群变化。其中，Bifidobacterium为双歧杆菌，Lactobacillus为乳酸菌、AKK为Akkermansia mucinipHila菌。由图3可以看出，使用本发明制备的发酵精华液干预4周后，5人肠道中的总双歧杆菌略有增加，1人下降，AKK菌有1人增加。
大型群体(107人)试吃试验：
1.试验概况：招募107人入组。107人干预1个月，90人干预两个月,18人干预三个月结束。
2.试验结果：
107人干预1个月，63人糖化血红蛋白下降占比59％；
107人中的90人干预2个月，60人下降占比67％；
90人中的18人干预3个月：11人下降占比61％。
3.具体实验数据分析
3.1整体数据分析
表1干预整体数据分析
项目 1个月 2个月 3个月
总人数 107 90 18
下降人数 63 60 11
下降比例 59％ 66.6％ 61％
下降＞10％人 24 26 5
降＞10％占比 22％ 32％ 27％
如图4所示为受试人群口服本发明的降血糖中药发酵精华液1个月、2个月、3个月时糖化血红蛋白(HbA1c)的整体下降趋势。整体自身前后对照，干预后随着时间延长下降幅度增加，整体糖化血红蛋白下降幅度为0.4％，下降率为60％。
3.2按年龄分析
将人群分为：青年(19-35岁)2人、中年(36-59岁)54人、老年(＞60岁)50人观察益生菌对不同年龄段的人群的作用，如表2、表3所示：干预1个月，中年和老年人下降占比为57％和60％，无差异。同时下降幅度＞10％的占比分别为24％和20％，无差异。干预2个月，老年组下降占比为72％高于中年组59％，同时整体下降幅度-0.5644±0.3838高于中年组-0.211±0.3856，但下降幅度＞10％的人数占比无差异。
表2干预1个月不同年龄段血糖变化情况
Figure BDA0003320228720000111
表3干预2个月不同年龄段血糖变化情况
Figure BDA0003320228720000112
3.3按药物分析
将中年组和老年组按照用药：胰岛素、口服药、不服药分为三组进一步分层，观察此产品干预后不同药物组的糖化血红蛋白变化关系，如表4、表5所示，中年组干预两个月打胰岛素和不服药组下降率高于口服药物组；老年组中干预1个月主要是口服药组下降，干预两个月，不服药组和口服药组下降比例较高分别为100％、71％，其中口服药物组下降幅度＞10％的占比最高38％。
表4：干预对中年组不同用药糖化血红蛋白的变化
Figure BDA0003320228720000113
表5：干预对老年组不同用药糖化血红蛋白的变化
Figure BDA0003320228720000121
将中年组和老年组按照性别：
表6：干预对中年组女性糖化血红蛋白的变化
Figure BDA0003320228720000122
表7：干预对中年组男性糖化血红蛋白的变化
Figure BDA0003320228720000123
表8：干预对老年组女性糖化血红蛋白的变化
Figure BDA0003320228720000124
表9：干预对老年组男性糖化血红蛋白的变化
Figure BDA0003320228720000131
整体来看干预1个月：
中年组下降：女性占61％(21/34)，男性占52％(11/21)；
下降幅度大于10％的人数占比：女性24％，男性29％。
老年组：女性下降占63％，男性占64％；
下降幅度大于10％的人数：女性占25％，男性占18％；
干预2个月：
中年组下降：女性占48％，男性占77％；
下降幅度大于10％的人数占比：女性31％，男性31％。
老年组：女性下降占61％，男性占71％；
下降幅度大于10％的人数：女性占33％，男性占36％。
结合用药与性别分组，由以表4-9可以看出，老年组男性口服药物组人群干预两个月，整体下降率最高为83％。因此，本发明的发酵精华液尤其适用于老年男性高血糖患者。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (9)

1.一种利用乳双歧杆菌发酵复合中药提取物的降血糖精华液制备方法，其特征在于，包括：
S1、制备中药提取物
所述中药包括丹参、桑叶、地黄和玉米须；将所述中药分别进行水提，并将水提液浓缩，分别得到丹参提取物、桑叶提取物、地黄提取物、玉米须提取物的药粉；
S2、制备降血糖中药发酵精华液
配制乳双歧杆菌BAL531的发酵培养基，根据发酵培养基的总量添加一定比例的混合药粉，然后接种乳双歧杆菌BAL531(保藏编号为CGMCC No.17329)，按照乳双歧杆菌BAL531的发酵条件进行发酵，发酵结束后，离心取上清液，以该上清液制作降血糖中药发酵精华液；
其中，所述发酵培养基组成为：每1L培养液中，含有葡萄糖16-24g，乳粉55-65g，乳清蛋白3-6g，酵母浸粉3-6g，磷酸氢二钾1.5-2.5g，无水乙酸钠1.5-2.5g，硫酸镁0.54-0.62g,L-半胱氨酸盐酸盐0.45-0.55g，吐温0.8-1.2g，pH值调为6.8-7.2；
乳双歧杆菌BAL531的初始接种量为3±0.5％；发酵过程中，实时监测pH，pH值达到4.25-4.40，即发酵结束。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S1中，制备中药提取物的方法为：
分别将丹参、桑叶、地黄、玉米须按照每1g药材加入12-18mL的水比例进行蒸煮，蒸煮40-60min后，过滤保留滤液，药渣再按照每1g药材加入8-12mL的水进行蒸煮，蒸煮25-35min后，再次过滤，将两次滤液合并蒸煮浓缩；
之后分别将浓缩液进行冻干处理，分别得到丹参提取物、桑叶提取物、地黄提取物、玉米须提取物的冻干药粉。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S2中，添加药粉的比例为每1L发酵培养基总量添加8-15g的混合药粉。
4.根据权利要求1或3所述的制备方法，其特征在于，S2中，所述混合药粉包含18-22％的桑叶提取物药粉、30-40％丹参提取物药粉、20-30％地黄提取物药粉和10-30％玉米须提取物药粉。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S2中，添加药粉的比例为每1L发酵培养基总量添加10g的混合药粉，
所述混合药粉包含20％的桑叶提取物药粉、35％丹参提取物药粉、25％地黄提取物药粉和20％玉米须提取物药粉。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S2中，在接种乳双歧杆菌BAL531之前，先将乳双歧杆菌BAL531的发酵培养基及药粉的混合物进行灭菌处理，灭菌之后再接种乳双歧杆菌BAL531。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，S2中，所述灭菌是将乳双歧杆菌BAL531的发酵培养基及药粉的混合物放置于高压灭菌锅中灭菌，灭菌条件为121℃，15-25min。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S2中，所述发酵条件为:发酵温度为37±1℃、搅拌速度20-40rpm、发酵时长12-18h。
9.一种降血糖中药发酵精华液，其采用权利要求1-8任一项所述的制备方法制得。
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陈广垠编著: "《糖尿病家庭医生百科》", 30 April 2018 *

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