CN110150669A - 一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物及其应用 - Google Patents

一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110150669A
CN110150669A CN201910356855.0A CN201910356855A CN110150669A CN 110150669 A CN110150669 A CN 110150669A CN 201910356855 A CN201910356855 A CN 201910356855A CN 110150669 A CN110150669 A CN 110150669A
Authority
CN
China
Prior art keywords
probiotic composition
lactobacillus
subject
patients
cfu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910356855.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110150669B (zh
Inventor
赵林森
霍文敏
李云旭
孙新凯
路江浩
鄢梦洁
赵星
杨美景
张士成
杨玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hebei Inatural Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Hebei Inatural Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hebei Inatural Biotechnology Co ltd filed Critical Hebei Inatural Biotechnology Co ltd
Priority to CN201910356855.0A priority Critical patent/CN110150669B/zh
Publication of CN110150669A publication Critical patent/CN110150669A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110150669B publication Critical patent/CN110150669B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/152Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations containing additives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52Adding ingredients
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/20Reducing nutritive value; Dietetic products with reduced nutritive value
    • A23L33/21Addition of substantially indigestible substances, e.g. dietary fibres
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/20Reducing nutritive value; Dietetic products with reduced nutritive value
    • A23L33/21Addition of substantially indigestible substances, e.g. dietary fibres
    • A23L33/22Comminuted fibrous parts of plants, e.g. bagasse or pulp
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745Bifidobacteria
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/10Laxatives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12Antidiarrhoeals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04Anorexiants; Antiobesity agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06Antihyperlipidemics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/113Acidophilus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/169Plantarum
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51Bifidobacterium
    • A23V2400/531Lactis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物及其应用,所提供的益生菌组合物的组成包括植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)YMC 1005(商业编号LP45),嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)La28,乳双歧杆菌为乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BAL531,以及益生元。该益生菌组合物可作为功能性食品供2型糖尿病患者食用,能够改善2型糖尿病患者的血糖状况,食用方便且安全可靠。

Description

一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物及其应用
技术领域
本发明属于功能性食品技术领域,涉及一种益生菌组合物,具体涉及一种 适于2型糖尿病患者食用的益生菌组合物。
背景技术
糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病,根据发病原因不同,糖尿病 可分为1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病和其他类型糖尿病。其中2型糖尿 病(Type 2diabetesmellitus,T2DM)是指胰岛素抵抗引起的胰岛β细胞破坏或 胰岛素相对缺乏导致的以高血糖为特征的代谢失调,是数量最多的一种糖尿病 亚型。根据国际糖尿病联合会(International Diabetes Federation)最近的估计,全 世界约有3.82亿糖尿病患者,到2035年,这一数字预计将升至5.92亿,这些 患者中,近85%-95%为2型糖尿病。我国糖尿病总患病率约为10.9%,其中, 成人2型糖尿病发病率已达10.4%。而且,随着近年来城市化进程、老龄化、遗 传、超重肥胖及生活方式的改变等因素,糖尿病的发病率呈现逐年上升趋势。 由于糖尿病是慢性代谢性疾病,因其不能根治且易引起心、肾、神经系统方面 的并发症,给患者及家庭和社会带来巨大负担,已成为全球性的重大公共卫生 问题。
虽然饮食调节和运动可以在一定程度上防止T2DM的发生发展,但效果只 是暂时的,难以长期维持。而药物对血糖的控制并不总是有效的,还可能伴有 严重的副作用。因此,对糖尿病进行早期防治的研究工作极其重要。
目前,糖尿病具体的发病原因尚不清楚,但是最近积累的科学证据提示肠 道微生物群在T2DM的发生、发展中发挥着重要作用。肠道菌群是指定植在机 体消化道内数量与种类较多的微生物群,成年人肠道被大约100万亿细菌定植, 约是人体总细胞数量的10倍,可作为人体的“虚拟器官”对体内稳态发挥重要 作用。有研究显示,与非糖尿病患者肠道菌群相比,T2DM患者具有中等程度 的肠道微生物生态失调,例如,罗氏菌属、柔嫩梭菌等产丁酸盐细菌丰度降低, 梭菌、大肠埃希菌等各种机会致病菌数量增加,以及其他微生物的硫酸盐还原 和氧化应激抵抗功能强化,进而引起胰岛素抵抗和血糖的升高。另有研究显示, 与非糖尿病患者相比,T2DM患者肠道菌群中厚壁菌门、梭菌纲的比例降低, β-变形菌纲比例升高。可见,T2DM患者已出现肠道菌群种类和比例的失调。 既往研究表明,肠道菌群参与T2DM发生发展的机制可能与机体糖脂代谢、肠 壁通透性、循环内毒素、低度慢性炎症、脂多糖含量和短链脂肪酸的产生、氧 化应激及胰岛素抵抗等多种因素有关。
近年来,对肠道菌群的干预成为防治2型糖尿病的新靶点。常见的肠道菌 群干预方式有粪便移植、粪菌胶囊、益生菌、食物等。然而,由于粪便移植、 粪便胶囊需要对粪便提供者进行病毒感染、可传播疾病和自身免疫性疾病等广 泛筛查,耗费人力财力,同时也会增加T2DM患者的并发症及患病风险,且合 格的粪便提供者只有约15%,此类方法并不是T2DM的理想疗法。另外,由食 物引入的微生物,短时间内对肠道菌群的改变影响不大。因此,鉴定可防止T2DM 发生发展的特定微生物(益生菌)并制备成“功能性食品”是一种可行实用的 方法。
发明内容
本发明的目的就是为了提供一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,该 益生菌组合物能够降低2型糖尿病患者的血糖水平,改善其症状。
为了实现上述目的,发明人提供了以下技术方案。
一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,其组成包括植物乳杆菌、嗜酸 乳杆菌、乳双歧杆菌、益生元,所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)YMC1005,保藏编号为CGMCC No.8072,所述嗜酸乳杆菌为嗜 酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)La28,保藏编号为CGMCC No.11506, 所述乳双歧杆菌为乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BAL531,保藏编号为 CGMCC No.17329。
上述适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,所述益生菌组合物中植物乳杆 菌的数量为2×108CFU/g,嗜酸乳杆菌的数量为5×108CFU/g,乳双歧杆菌的数 量为5×108CFU/g。
上述适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,所述益生菌组合物中植物乳杆 菌的数量为5×109CFU/g,嗜酸乳杆菌的数量为8×109CFU/g,乳双歧杆菌的数 量为7×109CFU/g。
上述适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,所述益生菌组合物中植物乳杆 菌的数量为1×1010CFU/g,嗜酸乳杆菌的数量为1×1010CFU/g,乳双歧杆菌的 数量为1.5×1010CFU/g。
上述适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,所述益生元选自抗性淀粉、抗 性糊精、低聚果糖、菊粉、低聚木糖、低聚半乳糖、水苏糖、β-葡聚糖、葡萄 籽粉、木聚糖、阿拉伯半乳聚糖中的任意一种或多种。
上述适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,以重量份数计,植物乳杆菌、 嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌的总重与益生元的比例为7:50-85。
本发明所提供的适于糖尿病患者食用的益生菌组合物在食品中的应用。
本发明所提供的益生菌组合物适于2型糖尿病患者食用,可直接食用,也 可将其添加至普通食品(比如水、饮料、牛奶、粥)中。
本发明所述的植物乳杆菌YMC 1005(商品编号为LP45)分离自内蒙古乌 兰察布市的传统奶酪,菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心,保藏中心地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生 物研究所,保藏日期为:2013年8月26日,保藏编号为:CGMCC No.8072。
本发明所述的嗜酸乳杆菌La28也分离自内蒙古乌兰察布市的传统奶酪,菌 株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏中心地址为: 北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏日期为:2015 年10月15日,保藏编号为:CGMCC No.11506。
本发明所述的乳双歧杆菌BAL531分离自健康婴儿的粪便,菌株已保藏于 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏中心地址为:北京市朝 阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏日期为:2019年3月 13日,保藏编号为:CGMCCNo.17329。
乳双歧杆菌BAL531分离方法:①取健康婴儿粪便,将粪便溶于灭菌生理 盐水中,稀释10倍涂布于适宜的固体培养基37℃(需厌氧)培养;②根据形 态、颜色挑单菌落,至少3次划线,直到确定得到纯的单菌株;③镜检菌株形态, 证明菌落形态相同为止。
本发明提供的益生菌组合物在体外试验发现对2型糖尿病患者肠道菌群产 乙酸、丁酸有促进作用,同时能够促进抑炎微生物增长,抑制促炎微生物的生 长。人群试服进一步验证了益生菌组合物对2型糖尿病患者、超重肥胖患者肠 道菌群、血糖、便秘/腹泻在体感上有很好的改善作用,服用期间没有任何不良 反应。临床试验结果进一步验证了益生菌组合物能够改善肠道菌群、降低机体 炎症IL-6从而降低糖化血红蛋白,改善2型糖尿病患者胰岛素抵抗引起的高血 糖。
本发明所提供的益生菌组合物能够改善2型糖尿病患者的肠道环境,使其 肠道中有益菌(抑炎微生物)数量增加,有害菌(促炎微生物)数量减少。肠 道中有益菌数量的增加能够使有益菌产生的乙酸、丁酸量增加,从而能够使受 损的肠道粘膜屏障得到修复。肠道中有害菌数量的减少,能够使肠道中有害菌 产生的内毒素的量降低。最终由肠道炎症、内毒素引起的机体炎症被阻断,由 炎症引起的胰岛素抵抗得到缓解,2型糖尿病患者的血糖值降低。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明所述内容作进一步详细的说明。
实施例1菌株的筛选
短链脂肪酸(SCFA)是肠道上皮细胞的能量来源,尤其是丁酸,它是肠道 中重要的短链脂肪酸,有利于肠粘膜的修复。
发明人对14名健康人和17名2型糖尿病患者粪便中SCFA(乙酸、丙酸、 丁酸)的含量进行了检测,结果显示,健康人粪便中SCFA的含量普遍高于2 型糖尿病患者,尤其是乙酸和丁酸的含量,在统计学上具有极显著性。因此, 发明人将健康人和2型糖尿病患者粪便中SCFA(乙酸、丁酸)的含量作为筛选 益生菌菌株的标准。
发明人利用体外发酵试验(SCFA含量的检测)筛选出了对2型糖尿病患者 肠道菌群产短链脂肪酸能力有提升作用的菌株,分别为植物乳杆菌LP45、嗜酸 乳杆菌La28、乳双歧杆菌BAL531。
表1给出了体外发酵试验中接种植物乳杆菌LP45后测定的乙酸含量。
表2给出了体外发酵试验中接种植物乳杆菌LP45后测定的丁酸含量。
表3给出了体外发酵试验中接种嗜酸乳杆菌La28后测定的乙酸含量。
表4给出了体外发酵试验中接种嗜酸乳杆菌La28后测定的丁酸含量。
表5给出了体外发酵试验中接种乳双歧杆菌BAL531后测定的乙酸含量。
表6给出了体外发酵试验中接种乳双歧杆菌BAL531后测定的丁酸含量。
表1
表2
表3
表4
表5
表6
发明人同时利用体外发酵试验(QPCR方法检测),分析备选菌株对2型糖 尿病患者肠道菌群的影响,筛选出了对肠道有益菌有促进作用,对肠道有害菌 有抑制作用的菌株,分别为植物乳杆菌LP45、嗜酸乳杆菌La28、乳双歧杆菌L531。LP45、La28对于肠道中乳杆菌属和青春双歧杆菌有明显促进作用,同时 能够显著降低肠道中产内毒素的拟杆菌属。BAL531对于肠道有益菌如双歧杆菌 属、乳杆菌属、青春双歧杆菌均有显著促进作用。肠道中抑炎微生物数量的增 加或促炎微生物数量的减少能够改善2型糖尿病患者由于肠道炎症导致的胰岛 素抵抗。
表7、表8、表9分别给出了三种菌株的试验结果。
表7
表8
表9
体外发酵试验的操作步骤包括:
粪便预处理:0.8g新鲜粪便+8mL生理盐水正当混匀后过滤取1mL溶液, 梯度稀释10-5,用流式细胞仪检测活菌数,确定接种量。
菌群发酵:分别按照109cfu/mL的接菌量将菌株接种于体外发酵小瓶中,振 荡混合均匀,放入37℃培养箱厌氧培养24h。
SCFA含量的检测:将发酵小瓶中的液体离心,收集上清液,然后将上清液 酸化、萃取后,取上层有机相,利用GC-MS检测SCFA(乙酸、丁酸)的含量。 与对照组相比较,分析菌株对2型糖尿病患者肠道菌群产乙酸、丁酸的影响, 筛选出具有促进肠道菌群产乙酸、丁酸的作用的菌株。
QPCR方法检测:将发酵小瓶中的液体离心,收集菌体,利用QPCR方法 检测乳杆菌属、双歧杆菌属、青春双歧杆菌、拟杆菌属的数量。
实施例2预试验
为了验证本发明所提供的益生菌组合物的安全性和有效性,发明人在公司 内部进行了试吃试验,具体内容如下。
一、试验目的
①验证益生菌组合物对超重、肥胖及高血糖人群血糖和肠道菌群的影响;
②验证益生菌组合物对受试者便秘、腹泻等胃肠道症状的影响;
③验证益生菌组合物的安全性。
二、受试者的筛选
(一)纳入标准
1、糖尿病组:2型糖尿病患者;或者,肥胖患者:BMI值24以上(BMI 值24以上为超重,28以上为肥胖);
2、年龄>18岁;
3、理解此次研究目的,并且征得员工同意。
(二)排除标准
1、合并其它内分泌疾病如甲亢、库欣综合征等;
2、严重肝、肾功能异常者;
3、使用胰岛素治疗者;
4、严重心、肺、脑疾患者;
5、不能正常进食者;
6、不能按照研试验要求食用试验样品者。
参照上述标准,共筛选出肥胖受试者8人,糖尿病组受试者9人。另外, 筛选出健康受试者6人。三组受试者基本信息如表10所示。
表10
基本信息 健康组,n=6 肥胖组,n=8 糖尿病组,n=9
年龄 33.5±3.019 40±2.188 49.78±3.94
BMI 22.5±0.4919 26.45±0.6176 25.5±0.8268
三、试验内容
试验样品:益生菌组合物中植物乳杆菌的数量为2×108CFU/g,嗜酸乳杆菌 的数量为5×108CFU/g,乳双歧杆菌的数量为5×108CFU/g,益生元为抗性淀粉 0.5g、菊粉0.3g、低聚果糖0.3、低聚半乳糖0.1g。
样品规格:2g/袋
服用方法:口服,一次2袋,一日2次,早、晚餐后半小时用温水或温牛 奶送服。
服用时间:连续服用6周。
四、检测指标及结果
1、空腹血糖
表11给出了三组受试者服用益生菌组合物前后检测的空腹血糖值。
表11
注:“*”代表在统计学上具有显著性差异。
由表11可以看出,益生菌组合物干预6周后糖尿病组的空腹血糖值下降具 有显著性。
2、餐后2h血糖
表12给出了三组受试者服用益生菌组合物前后检测的餐后2h血糖值。
表12
注:“***”代表在统计学上具有极显著性差异。
由表12可以看出,益生菌组合物干预6周后,糖尿病组的餐后2h血糖呈 下降趋势;肥胖组餐后2h血糖下降明显,具有极显著性(P值0.0001);健康组 的血糖略有下降,但是仍在正常范围内,没有出现低血糖情况。
3、肠道菌群
表13给出了糖尿病组服用益生菌组合物前后肠道菌群中AKK、双歧杆菌 属、乳杆菌属数量的变化。
表13
糖尿病组 AKK(%) 双歧杆菌属(%) 乳杆菌属(%)
0周 0.7377±0.4031 0.8765±0.3862 1.01±0.4138
6周 3.826±2.084 0.855±0.6814 4.663±2.513
表14给出了肥胖组服用益生菌组合物前后肠道菌群中AKK、双歧杆菌属、 乳杆菌属数量的变化。
表14
4、安全性
表15给出了糖尿病组受试者在试验期间的胃肠道症状不良反应调查表。
表15
五、试验结论
1、本发明提供的益生菌组合物能够改善超重肥胖、2型糖尿病患者中的肠 道菌群,缓解糖尿病患者肠易激、便秘及身体乏力感。同时,对超重肥胖患者 餐后2h血糖有显著降低作用,对2型糖尿病患者的空腹血糖具有显著降低作用。
2、本发明提供的益生菌组合物不会显著降低健康人群的血糖值,不会引起 低血糖,同时三组受试者试验期间均没有出现不良反应。
实施例3临床试验
为了进一步验证本发明所提供的益生菌组合物的有效性,发明人进行了临 床试吃试验,检测了受试者服用益生菌组合物前后与糖尿病相关的一些特征指 标,具体内容如下。
一、受试者的筛选
(一)纳入标准:
1.年龄30岁-70岁;
2.确诊2型糖尿病≥6个月;
3.经生活方式干预控制或仅服用二甲双胍治疗后病情较稳定≥3个月(生 活方式干预患者过去3个月未调整治疗方案,且预期未来3个月无需调整治疗 方案;口服二甲双胍治疗者需维持稳定的药物剂量≥3个月,且预期未来3个月 无需调整治疗方案);
4.空腹血糖≤14mmol/L;
5.自愿签署知情同意书者。
(二)排除标准:
1.六个月内曾发生急性代谢并发症,包括有或无昏迷、前躯昏迷的糖尿病 酮症酸中毒、高渗性高血糖状态和乳酸性酸中毒;
2.合并糖尿病足、糖尿病肾病终末期、心血管病等严重的糖尿病并发症(除 高血压和高脂血症);
3.具有难以控制的恶心和呕吐、不能吞咽药物,合并溃疡性结肠炎、克罗 恩病、肠结核等严重胃肠道疾病(除功能性消化不良)或有过胃肠道切除手术 史者;
4.合并系统性红斑狼疮、甲状腺机能亢进、干燥综合征等自身免疫性疾病
5.合并晚期恶性肿瘤或正在接受化疗、放疗、靶向、免疫等抗肿瘤治疗者;
6.合并肝功能不全:谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)>2.5×正 常上限值(ULN)或总胆红素>1.5×ULN;
7.合并肾功能不全:肌酐>1.5×ULN;
8.有免疫缺陷病史,包括HIV检测阳性或患有其它获得性、先天性免疫缺 陷疾病,或有器官移植史者;
9.乙肝病毒有活跃复制的患者(DNA>500cps/mL),或活动性丙型肝炎患 者;
10.六周内接受过任何类型抗生素治疗;
11.已知有本研究所涉及药物的过敏史者。
根据上述标准,本次试验共筛选出8名受试者。
表16给出了8名受试者的基本信息。
表16
受试者 1 2 3 4 5 6 7 8
性别
年龄 31 43 45 43 57 52 45 64
身高(m) 1.76 1.76 1.665 1.73 1.61 1.61 1.635 1.62
体重(kg) 66 91 70.5 110.5 62 84 81 56
BMI 21.3 29.4 25.4 36.9 23.9 32.4 30.3 21.3
肠道情况 肠易激 腹泻 腹泻 便秘 便秘 便秘
体感 乏力感 乏力感 乏力感
二、试验内容
试验样品:益生菌组合物中植物乳杆菌的数量为益生菌组合物中植物乳杆 菌的数量为1×1010CFU/g,嗜酸乳杆菌的数量为1×1010CFU/g,乳双歧杆菌的 数量为1.5×1010CFU/g,益生元为葡萄籽粉0.5g、低聚木糖0.7g、水苏糖0.5g。
样品规格:2g/袋
服用方法:口服,一次2袋,一日2次,早、晚餐后半小时用温水或温牛 奶送服。
服用时间:连续服用4周。
三、检测指标及结果
1、空腹血糖
表17给出了8名受试者在服用益生菌组合物前和服用益生菌组合物4周后 的空腹血糖,其中受试者4服用益生菌组合物4周后的血糖值为餐后值,数据 剔除。
表17
受试者 0周(mmol/L) 4周(mmol/L)
受试者1 6.35 6.4
受试者2 6.07 7.03
受试者3 7.14 8.77
受试者4 6.2 13.88
受试者5 7.94 7.22
受试者6 9.88 5.63
受试者7 9.51 7.65
受试者8 6.91 6.67
2、糖化血清白蛋白
表18给出了8名受试者在服用益生菌组合物前和服用益生菌组合物4周后 的糖化血清白蛋白值。糖化血清白蛋白的正常范围为205-285μmol/L。
表18
受试者 0周(μmol/L) 4周(μmol/L)
受试者1 302 270
受试者2 302 318
受试者3 349 350
受试者4 305 289
受试者5 387 340
受试者6 398 384
受试者7 443 359
受试者8 269 248
由表18中数据可以看出,8名受试者中,6名受试者的(75%)糖化血清白 蛋白值下降,整体平均下降8.6%,其中2人下降至正常范围内,1个人接近正 常值。
3、糖化血红蛋白
表19给出了8名受试者在服用益生菌组合物前和服用益生菌组合物4周后 的糖化血红蛋白值。糖化血红蛋白的正常范围为4-6%。
表19
由表19中数据可以看出,8名受试者中,有7人的(87.5%)糖化血红蛋白 值下降,由7.74%下降至7.35%,整体平均下降5%(P值0.0013),具有显著性。 4、空腹胰岛素
表20给出了8名受试者在服用益生菌组合物前和服用益生菌组合物4周后 的空腹胰岛素值。受试者4服用益生菌组合物4周后的空腹胰岛素值为餐后值, 数据剔除。
表20
受试者 0周(μU/mL) 4周(μU/mL)
受试者1 3.92 6.77
受试者2 12.64 16.22
受试者3 7.06 8.76
受试者4 17.26 99.02
受试者5 9.31 7.12
受试者6 5.77 4.69
受试者7 11.19 22.21
受试者8 7.14 5.19
由表20中数据可以看出,8名受试者整体空腹胰岛素水平略有升高,平均 值由原来的8.02μU/mL升高至10.1μU/mL。
5、炎症指标IL-6、C-反应蛋白、空腹C肽
2型糖尿病患者全身处于慢性炎症状态,其血液中的炎症因子IL-6\TNF-α \C-反应蛋白\空腹C肽普遍高与健康人。本次试验主要检测了IL-6、C-反应蛋白、 空腹C肽三个炎症指标。
表21给出了8名受试者在服用益生菌组合物前和服用益生菌组合物4周后 的IL-6值。
表21
受试者 0周(pg/mL) 4周(pg/mL)
受试者1 2 2
受试者2 7.09 2
受试者3 3.65 2
受试者4 7.09 6.26
受试者5 4.36 2.02
受试者6 7.53 4.18
受试者7 4.08 2.41
受试者8 2.47 2
表22给出了8名受试者在服用益生菌组合物前和服用益生菌组合物4周后 的C-反应蛋白值。
表22
受试者 0周(mg/L) 4周(mg/L)
受试者1 1 0.3
受试者2 0.2 0.8
受试者3 0.4 0.6
受试者4 10.8 15.9
受试者5 0.6 0.4
受试者6 2.8 1.7
受试者7 2.8 2
受试者8 0.1 0.2
表23给出了8名受试者在服用益生菌组合物前和服用益生菌组合物4周后 的空腹C肽值。
表23
可以看出,益生菌干预后整体炎症水平呈下降趋势,其中7人(87.5%)IL-6 含量下降,平均下降率28%。
6、甘油三酯
表24给出了8名受试者在服用益生菌组合物前和服用益生菌组合物4周后 的甘油三酯值。
表24
受试者 0周(mmol/L) 4周(mmol/L)
受试者1 0.91 0.87
受试者2 2.73 2.64
受试者3 5.11 1.63
受试者4 1.71 2.82
受试者5 3.67 4.44
受试者6 3.07 1.98
受试者7 3.85 7.88
受试者8 0.76 0.61
可以看出,益生菌干预对受试者甘油三酯有下降作用,平均下降5/8(62%)。 7、肠道菌群
表25给出了8名受试者在服用益生菌组合物前和服用益生菌组合物4周后 肠道有益菌丰度的变化。
表25
由上表可以看出,受试者的双歧杆菌属、乳杆菌属均有不同程度的增加, 说明本发明提供的益生菌组合物对于2型糖尿病患者肠道的有益菌双歧杆菌属、 乳杆菌属都有改善作用。
8、体感
表26给出了8名受试者在服用益生菌组合物前和服用益生菌组合物4周后 的体感情况。
表26
体感 正常(人) 肠易激(人) 便秘(人) 腹泻(人)
0周 2 1 4 1
4周 8 0 3 0
改善率 89% 100% 75% 100%
由上表可以看出,本发明提供的益生菌组合物对于2型糖尿病患者的肠易 激、腹泻、便秘症状均有缓解作用。
9、腹部症状及不良反应
表27给出了8名受试者在服用益生菌组合物前和服用益生菌组合物4周后 的腹部症状。
表27
腹部症状 腹痛(人) 腹部胀满(人) 腹鸣(人) 排气(人)
0周 0 0 0 4
4周 0 0 0 6
由上表可以看出,本发明提供的益生菌组合物能够促进2型糖尿病患者肠 道排气,同时不会引起其他腹部不适症状及其它不良反应。

Claims (7)

1.一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,其特征在于,组成包括植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、益生元,所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)YMC 1005,保藏编号为CGMCC No.8072,所述嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)La28,保藏编号为CGMCC No.11506,所述乳双歧杆菌为乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BAL531,保藏编号为CGMCC No.17329。
2.根据权利要求1所述的一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,其特征在于,所述益生菌组合物中植物乳杆菌的数量为1×107~1×1010CFU/g,嗜酸乳杆菌的数量为1×108~1×1010CFU/g,乳双歧杆菌的数量为1×108~1×1010CFU/g。
3.根据权利要求1所述的一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,其特征在于,所述益生菌组合物中植物乳杆菌的数量为2×108CFU/g,嗜酸乳杆菌的数量为5×108CFU/g,乳双歧杆菌的数量为5×108CFU/g。
4.根据权利要求1所述的一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,其特征在于,所述益生菌组合物中植物乳杆菌的数量为1×1010CFU/g,嗜酸乳杆菌的数量为1×1010CFU/g,乳双歧杆菌的数量为1.5×1010CFU/g。
5.根据权利要求1所述的一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,其特征在于,所述益生元选自抗性淀粉、抗性糊精、低聚果糖、菊粉、低聚木糖、低聚半乳糖、水苏糖、β-葡聚糖、葡萄籽粉、木聚糖、阿拉伯半乳聚糖中的任意一种或多种。
6.根据权利要求1所述的一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物,其特征在于,以重量份数计,植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌的总重与益生元重量的比例为7:50-85。
7.如权利要求1所述的一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物在食品中的应用。
CN201910356855.0A 2019-04-29 2019-04-29 一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物及其应用 Active CN110150669B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910356855.0A CN110150669B (zh) 2019-04-29 2019-04-29 一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910356855.0A CN110150669B (zh) 2019-04-29 2019-04-29 一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110150669A true CN110150669A (zh) 2019-08-23
CN110150669B CN110150669B (zh) 2022-09-06

Family

ID=67633325

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910356855.0A Active CN110150669B (zh) 2019-04-29 2019-04-29 一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110150669B (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111773252A (zh) * 2020-08-21 2020-10-16 武汉科技大学 一种高效降低2型糖尿病患者血糖、血脂和体重的益生元组合
WO2021073197A1 (zh) * 2019-10-14 2021-04-22 鲁南制药集团股份有限公司 含乳酸菌的组合物及其用途
CN113337427A (zh) * 2021-06-03 2021-09-03 海南大学 一种植物乳杆菌hnu082、组合物及其应用
CN114145459A (zh) * 2020-09-08 2022-03-08 鲁南制药集团股份有限公司 一种含乳酸菌的组合物、制备方法及其用途
CN114250182A (zh) * 2021-12-23 2022-03-29 河北一然生物科技股份有限公司 益生菌配方设计方法及其在设计调节肠道和免疫的乳双歧杆菌bal531配方中的应用
CN114350547A (zh) * 2021-12-17 2022-04-15 四川省医学科学院·四川省人民医院 一种乳双歧杆菌菌株b-622及其在制备治疗糖尿病药物中的应用
TWI777475B (zh) * 2021-03-30 2022-09-11 豐華生物科技股份有限公司 使用乳酸菌菌株組合來治療第1型糖尿病
CN115671132A (zh) * 2020-06-01 2023-02-03 山东新时代药业有限公司 一种益生菌和益生元的组合物及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102458415A (zh) * 2009-06-19 2012-05-16 丹尼斯科公司 治疗糖尿病及相关病症的双歧杆菌
US20150250835A1 (en) * 2014-03-07 2015-09-10 Genmont Biotech Inc. Composition and method of lactobacillus reuteri gmnl-89 in treating type 2 diabetes
CN107156587A (zh) * 2017-06-05 2017-09-15 北京天宝瑞健康科技有限公司 活性益生菌固体饮料及其在治疗2型糖尿病中应用
CN108157973A (zh) * 2017-12-14 2018-06-15 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种有益糖脂代谢功能的益生菌组合物及其制剂和应用
CN109481510A (zh) * 2018-10-11 2019-03-19 张军毅 一种有助于改善2型糖尿病及其并发症的合生元复方制剂及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102458415A (zh) * 2009-06-19 2012-05-16 丹尼斯科公司 治疗糖尿病及相关病症的双歧杆菌
US20150250835A1 (en) * 2014-03-07 2015-09-10 Genmont Biotech Inc. Composition and method of lactobacillus reuteri gmnl-89 in treating type 2 diabetes
CN107156587A (zh) * 2017-06-05 2017-09-15 北京天宝瑞健康科技有限公司 活性益生菌固体饮料及其在治疗2型糖尿病中应用
CN108157973A (zh) * 2017-12-14 2018-06-15 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种有益糖脂代谢功能的益生菌组合物及其制剂和应用
CN109481510A (zh) * 2018-10-11 2019-03-19 张军毅 一种有助于改善2型糖尿病及其并发症的合生元复方制剂及其制备方法

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021073197A1 (zh) * 2019-10-14 2021-04-22 鲁南制药集团股份有限公司 含乳酸菌的组合物及其用途
CN115671132A (zh) * 2020-06-01 2023-02-03 山东新时代药业有限公司 一种益生菌和益生元的组合物及其应用
CN115671132B (zh) * 2020-06-01 2024-03-15 山东新时代药业有限公司 一种益生菌和益生元的组合物及其应用
CN111773252A (zh) * 2020-08-21 2020-10-16 武汉科技大学 一种高效降低2型糖尿病患者血糖、血脂和体重的益生元组合
CN114145459A (zh) * 2020-09-08 2022-03-08 鲁南制药集团股份有限公司 一种含乳酸菌的组合物、制备方法及其用途
TWI777475B (zh) * 2021-03-30 2022-09-11 豐華生物科技股份有限公司 使用乳酸菌菌株組合來治療第1型糖尿病
CN113337427A (zh) * 2021-06-03 2021-09-03 海南大学 一种植物乳杆菌hnu082、组合物及其应用
CN114350547A (zh) * 2021-12-17 2022-04-15 四川省医学科学院·四川省人民医院 一种乳双歧杆菌菌株b-622及其在制备治疗糖尿病药物中的应用
CN114350547B (zh) * 2021-12-17 2023-05-16 四川省医学科学院·四川省人民医院 一种乳双歧杆菌菌株b-622及其在制备治疗糖尿病药物中的应用
CN114250182A (zh) * 2021-12-23 2022-03-29 河北一然生物科技股份有限公司 益生菌配方设计方法及其在设计调节肠道和免疫的乳双歧杆菌bal531配方中的应用
CN114250182B (zh) * 2021-12-23 2023-02-17 河北一然生物科技股份有限公司 益生菌配方设计方法及其在设计调节肠道和免疫的乳双歧杆菌bal531配方中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN110150669B (zh) 2022-09-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110150669A (zh) 一种适于糖尿病患者食用的益生菌组合物及其应用
CN110169983B (zh) 一种用于治疗肠易激综合征的复合益生菌乳酸菌粉剂及其用途
CN110964650B (zh) 一种用于预防和治疗代谢疾病的菌株及其应用
CN107523526A (zh) 一种罗伊氏乳杆菌及其用途
CN106176833A (zh) 一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌液及其制备方法
CN110623182A (zh) 一种用于治疗高尿酸及痛风的益生菌植物固体饮料
CN113308421B (zh) 一种植物乳杆菌bufx及其在代谢综合征中的应用
CN113322216B (zh) 一种副干酪乳杆菌b111h及其在代谢综合征中的应用
CN111213885A (zh) 一种具有调节血脂功效的益生菌组合物及其制备方法与应用
CN110522035B (zh) 一种人源性益生菌剂及其在辅助降低血糖方面的应用
CN116445346B (zh) 一种改善多囊卵巢综合征的罗伊氏乳杆菌及其应用
CN106138114A (zh) 一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌制剂的制备方法
CN102845695B (zh) 一种魔芋发酵食饮品及其制备方法
CN115414391B (zh) 植物乳杆菌ma2在制备预防或改善由腺嘌呤诱导的慢性肾脏疾病药物中的应用
CN109010616A (zh) 一种增加肠道益生菌、改善肠道菌群的纯植物制剂
CN114432346A (zh) 一种治疗高尿酸血症和痛风的复合益生菌组合物及其制备方法和用途
CN104430849B (zh) 用于辅助抗糖尿病的多菌发酵脱脂驼乳及其生产方法
JP4540376B2 (ja) 乳酸菌生産物質
CN112770749A (zh) 双歧杆菌与黄连素联用对糖尿病前期和2型糖尿病的作用
CN109432333A (zh) 一种有助于缓解无实质性病变高血压症状的合生元复方制剂及其制备方法
CN116855413B (zh) 利用鼠李糖乳杆菌YSs069制备调节人体微生态平衡的生物活性物质及其应用
CN111304134B (zh) 一株能有效缓解糖尿病的植物乳杆菌
CN116211956B (zh) 一种调节肠道和/或改善肥胖的组合物和制备方法、一种咀嚼片及其应用
CN107158225A (zh) 一种生脉饮组合物及其制备方法和应用
CN113249264B (zh) 一株青春双歧杆菌及其在代谢综合征中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information

Address after: 050000 No.16, East bangxiu Road, North Zone, Zhengding high tech Industrial Development Zone, Zhengding District, China (Hebei) pilot Free Trade Zone, Shijiazhuang City, Hebei Province

Applicant after: Hebei Yiran Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 050000 No.16, bangxiu East Road, North District, high tech Industrial Development Zone, Zhengding County, Shijiazhuang City, Hebei Province

Applicant before: HEBEI INATURAL BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.

CB02 Change of applicant information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant