CN106176833A - 一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌液及其制备方法；本发明的复合益生菌液含有布拉氏酵母菌、木醋杆菌、植物乳杆菌、青春双歧杆菌、地衣芽孢杆菌，丁酸梭菌，阿拉伯糖，低聚木糖，细菌纤维素等，本发明的益生菌与益生元进入人体后可以快速减少肠道对葡萄糖等糖原的吸收，从而控制体重与降低血糖；临床试验结果表明：口服本发明的复合益生菌液的患者，初步判定在血糖达标时间、改善糖耐量、改善胰岛素及c肽释放方面要优于单纯应用二甲双胍者；并且有显著的减肥效果；另外，本发明的复合益生菌液在改善胰岛素抵抗、保护胰岛细胞功能方面确有疗效，并且无副作用。

Description

一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌液及其制备方法
技术领域
本发明属于益生菌生物医药与保健品技术领域，具体涉及一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌液及其制备方法。
背景技术
糖尿病是一系列新陈代谢紊乱的总称，它会造成体内胰岛素数量减少或者胰岛素利用不充分，从而引起高血糖。简单来说，就是血液里的糖分过高，但是血液却无法正确利用那些糖分。
糖尿病分两种。I型糖尿病 (或称胰岛素依赖型糖尿病)中，身体只生成少量或根本不生成胰岛素，这被认为是一种自身免疫性疾病。这种糖尿病通常很早就会被诊断出来，因此有时被称为青少年糖尿病。
II型糖尿病 (或称非胰岛素依赖型糖尿病)中，身体控制血糖的能力下降。因为这种糖尿病常常是在年龄较大的时候被诊断出来，所以有时它又被叫做成人糖尿病。
糖尿病是一种很广泛的疾病，是全世界最常见的代谢紊乱现象。估计有6% 的美国人患有糖尿病，人数大约在1600万。其中大多数人患有II型糖尿病，是心脏病、肾病、中风、失明和早逝的最主要诱因。
与糖尿病相关的体重问题也是个世界性问题，特别是在美国和其他西方发达国家。大家公认，西方人之所以体重易超标是因为他们缺乏运动、食物脂肪含量过高。最近在美国的一项调查中，65% 的答卷者声称自己的体重超标5-30磅。而全国健康和营养中心的一项研究也得出了类似的结论，现在体重超标的成年人占64.5%。令人担忧的是，这种现象也同样出现在孩子中，这为我们敲响了警钟。
类似的研究得出了两个令人堪忧的结论:第一，体重超标现象并没有年龄、性别和种族之分，这也就意味着社会整体都出现了超重问题，而不是特定群组的人。第二，从20世纪70年代起，超重人群的比例正在稳步上升。
糖尿病是由什么引起的？
通过对大多数病例的研究，人们认为糖尿病是由基因紊乱引起的，因为胰脏无法生成和分泌足够的胰岛素。但对于II型糖尿病来说，生活方式、患病时间和能否得到有效治疗有密切联系。这些生活因素中最主要的就是体重超标。体重超标的人患II型糖尿病的可能性是正常人的两倍。
体重超标和患糖尿病之间的关系是 "先有鸡还是先有蛋"的问题。事实上，肥胖症和胰岛素抵抗之间的关系相当复杂。科学家们对这两者之间关系的研究，也才初见成效。然而，我们所知道的是，如果一个人变得肥胖，他或她的身体对胰岛素的敏感度就会下降。
胰岛素又被称为"致肥荷尔蒙"。在食物中能量过多时，它帮助身体利用葡萄糖制造脂肪。胰岛素是这样工作的：它是由胰腺中的特殊细胞分泌出来的，通过附着在细胞表面受体上来发挥作用。胰岛素通过复杂的信号组织通知大脑去利用葡萄糖。除了胰岛素，某些循环荷尔蒙对糖尿病和体重超标影响也很大。例如，瘦素在很大程度上控制着身体对胰岛素的反应能力，也指示大脑表现出饱足感。可以把它想象成。"饱足荷尔蒙"，因为它告知身体"你己经吃饱了"。
肠内细菌和糖尿病的发病虽然没有直接关系，但肠内专家认为：有害细菌在肠内占据优势时，会产生大量的有害物质，为了帮助排毒，肝脏的负荷会大大加重。因为产生胰岛素的胰腺与肝脏有密切关系，肝脏的负荷加大也会影响胰腺的不足，对胰岛素的分泌发生影响。
糖尿病会引起许多其他的健康问题，包括视网膜变性、失明、肾病、神经系统损伤。糖尿病还会引起动脉粥样硬化—— 一种常见的动脉硬化 (动脉变厚变硬)。在一些极端病例中，由此引起的动脉循环功能不良会导致截肢甚至死亡。
体重超标同样也会引起其他健康问题，例如心脏病、某些癌症、痛风 (和体内过量尿酸共同引起)、胆囊病。除此之外，它还会导致睡眠窒息 (睡眠中呼吸中断现象)和骨关节炎 (关节磨损)。体重越重，出现健康问题的可能性就越大。
纤维类食品对于防治糖尿病与控制体重来说是一个不错的选择。现在己有许多研究证实，纤维含量较多的食品 (它们是容易滋生益生菌的益生元)有助于预防II型糖尿病与控制体重。德国研究人员在新的研究中发现，全谷类食品和很多蔬菜所含的非水溶性纤维能够改善人体对胰岛素的利用状况，从而有助于预防II型糖尿病，食用大量的纤维素，可以减少更多能源的摄入，达到减肥效果。
胰岛素能调节血糖，胰岛素敏感度下降是人体罹患II型糖尿病的前兆。以往的一些研究己经表明，非水溶性纤维含量高的饮食有助于降低罹患糖尿病的风险。为查明其中的关联，德国人类营养研究所研究人员为17位体重超标的女性设计了不同的饮食方案，以探索非水溶性纤维的功用。
研究人员让参加实验的女性先连续3天吃富含非水溶性纤维的面包，此后3天再改吃纤维含量少的面包。对比分析表明，富含非水溶性纤维的饮食提高了这些女性的胰岛素敏感度。他们把研究成果发表在最新一期的 《糖尿病护理》上。
糖尿病的药物治疗分胰岛素治疗、口服降糖西药治疗和中医药治疗，目前已发展到生物技术治疗。中国专利99105621“一种治疗糖尿病的药品”是用单菌种的代谢产品税物提取液制成用于治疗糖尿病的药品。中国专利00804999“治疗糖尿病的药物”涉及生理上可接受的来源于微生物或动物的酶混合物。中国专利01130450“生物降糖制剂”是由放线菌、乳酸菌和酵母菌三种益生菌组成，经常规的活化、扩大培养、发酵、过滤、除渣、除菌、冷冻干燥等方法制成。中国专利200810031455.4“预防或治疗糖尿病和相关病症的微生物制剂”是表达活性苯丙氨酸脱氨酶和/或苯丙氨酸解氨酶的非致病菌。中国专利01801286.8“治疗或预防肥胖症和糖尿病的微生物及含有所述微生物的药物组合物”主要是由醋酸菌与乳酸菌的组合物，利用醋酸菌与乳酸菌进入肠道后将单糖如葡萄糖、果糖和半乳糖等和二糖转化为聚合物，而这些聚合物不能肠道吸收，因此可减少被吸收入人体中单糖或二糖的量。提供了两个菌种，但没有具体的制备方法，只是在小鼠体内进行试验，没有在人体中进行验证；中国专利200910238778.5“一种治疗糖尿病的复合微生物制剂及其制备方法和应用”主要由光合细菌、芽孢杆菌、酵母菌、乳酸杆菌、放线菌等经过多级复合而成。但放线菌还未列入食品添加剂的行列，不能直接给人体饮用。本发明人在专利号2013100002892中提供一种复合益生菌发酵中草药活性保健液及其制备方法，制备该保健液的原料为：银杏叶、银杏花粉、枸杞、茶叶、纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母、乳杆菌、木醋杆菌、双歧杆菌、白砂糖、红糖、脱脂大豆粉、蜂蜜、低聚糖、氯化钠、去离子水，等，能防治多种病症，但银杏叶与银杏花粉较难获得，难以大规模生产。
对病人来说，使用外源胰岛素是很昂贵和痛苦的方法，而且还会给病人带来多种有害的现象和并发症。例如，由于没有吃饭或不正常锻炼，胰岛素剂量的计算错误会导致胰岛素响应（低血糖），而有时并找不到具体的原因。此外，胰岛素注身可能发生对胰岛素的局部或全身过敏或免疫抗性。
有几种方法可用来预防或治疗肥胖和糖尿病，如饮食—锻炼疗法、手术或化疗等。饮食—锻炼疗法为一种方法，即吃低热量，低脂肪食物和进行有氧锻炼，但这种方法一般认为对普通大众不成功，因为其需要长期地经常性地坚持这种疗法。
去除体内脂肪手述能达到立竿见影的效果，但存在诸多限制，如手术风除、除脂效果难持久和花费太高等。
二甲双胍是临床常用的治疗糖尿病的双胍类药物，适用于单用饮食和运动治不能获良好控制的2型糖尿病患者。可单独用药，也可与磺脲类或胰岛素合用。用于治疗肥胖型的糖尿病效果很好，因些临床应用广泛，二甲双胍常见的不良反应为胃肠道不适，如恶心、呕吐、腹泻、腹痛、便秘、腹胀、消化不良、胃灼热，这种不良反应高达30%，此不良反应限制了二甲双胍的使用。
采用益生菌疗法能降低血糖水平，抑制葡萄糖的吸收，加强胰岛素的作用或者诱导减少食欲等，是一种目前在该领域最积极开发的方法。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种复合益生菌活菌含量高、活性高、稳定性高、作用效果快的、无副作用，具有防治糖尿病与控制人体重的复合益生菌液及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌液，其特征在于，所述复合益生菌组份及重量份数配比为：丁酸梭菌种子液10-20份、脱脂大豆粉10-20份、布拉氏酵母菌种子液10-40份、植物乳杆菌种子液5-15份、木醋杆菌种子液5-10份、青春双歧杆菌种子液10-20份、地衣芽孢杆菌种子液10-20份、红糖30-60份、脱脂奶粉10-20份、蜂蜜10-20份、氯化钠2-4份、阿拉伯糖10-20份、低聚木糖2-10份和纯化水800份，其制备过程包括：（1）.在1000L发酵罐A中加入红糖30-60份、脱脂大豆粉10-20份、氯化钠1-2份、纯化水400份，混匀后再在115℃下保温30分钟，然后降温至30℃；再向发酵罐A中加入布拉氏酵母菌种子液10-40份、植物乳杆菌种子液5-15份、木醋杆菌种子液5-10份，在30℃-35℃下培养72-120小时，每24小时搅拌30分钟；培养前期48小时，通气量为每分钟的液气比为1：0.8，通气过程维持发酵液pH5.8-6.8，48小时后不再通气，同时不再调pH，继续静置培养，待PH降低至4.2，布拉氏酵母菌含量不低于1亿CFU/ml，细菌纤维含量不低于1g/L，残葡萄糖含量低于0.2 g/L,总菌含量不低于10亿CFU/ml，即可停止A罐的第一阶段发酵；
（2）.在600L发酵罐B中加入蜂蜜10-20份、脱脂奶粉10-20份、阿拉伯糖10-20份、低聚木糖2-10份、氯化钠1-2份、纯化水400份，混匀后再在108℃下保温30分钟，然后降温至37℃；向发酵罐B中加入丁酸梭菌种子液10-20份、青春双歧杆菌种子液10-20份、地衣芽孢杆菌种子液10-20份，在35℃-37℃下静止厌氧培养72-96小时，检测丁酸梭菌的芽孢含量不低于20亿CFU/ml，总菌含量不低于30亿CFU/ml，即可停止发酵；
（3）. 当两个发酵罐达到指标后，将发酵罐B中的菌液移至发酵罐A中，搅拌均匀，在30℃-33℃下静止继续厌氧培养24-48小时，检测其PH降至3.0-3.2，总活菌含量不低于30亿CFU/ml，细菌纤维含量不低于0.5g/L，检测丁酸梭菌的芽孢含量不低于15亿CFU/ml，即可停止发酵，无菌灌装，100 ml/瓶，包装成品。
其中，布拉氏酵母菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用YPD固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种150毫升YPD培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时。种子采用5%的接种量，接种至装有2L酵母菌培养基的 5L大三角瓶中，30℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过5亿CFU/ml，即可作为布拉氏酵母菌种子液接种；其中，所述的YPD固体培养基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂20 g，水1000mL；其中，所述的酵母菌培养基：红糖15 g/L，酵母膏3 g/L，蛋白胨5 g/L，硫酸铵3 g/L，硫酸镁0.5 g/L；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
其中，植物乳杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用MRS固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种250毫升MRS培养基中，在培养箱中37℃厌氧培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有9L乳酸菌培养基的 10L大三角瓶中，37℃厌氧培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过50亿CFU/ml，即可作为植物乳杆菌种子液接种，其中，所述的MRS培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取物5 g/L，牛肉膏10 g/L，葡萄糖20 g/L，醋酸钠5 g/L，柠檬酸二铵2 g/L，吐温-80 1 ml/L，硫酸镁0.6 g/L，硫酸锰0.05 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，琼脂20 g/L，碳酸钙20 g/L；其中，所述的乳酸菌培养基：葡萄糖4%，蛋白胨1.2%，牛肉膏0.75%，氯化钠0.1%，硫酸锰0.001%，硫酸镁0.02%，醋酸钠0.05%，碳酸钙1%，pH6.0；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
其中，木醋杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用木醋杆菌固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至50毫升木醋杆菌液体培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有2L木醋杆菌液体培养基的 5L大三角瓶中，30℃，150r/min震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过10亿CFU/ml，即可作为木醋杆菌种子液接种，其中，所述木醋杆菌固体培养基：葡萄糖40.0，蛋白胨8，柠檬酸1.2，磷酸氢二钠1.0，磷酸二氢钠 2.0，硫酸镁0.3，琼脂18.0，去离子水1L，pH6.8，121℃灭菌20分钟；其中，所述的木醋杆菌液体培养基：葡萄糖20.0，蛋白胨4.0，柠檬酸2.0，磷酸二氢钠 2.7，硫酸镁0.25，去离子水1L，pH6.8，12l℃灭菌20分钟。
其中，地衣芽孢杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有2L 地衣芽孢杆菌液体培养基的5L大三角瓶中，37℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，芽孢含量超过60亿CFU/ml，即可作为地衣芽孢杆菌种子液接种。其中所述LB固体培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20 g，水1000mL，pH7.2；其中所述地衣芽孢杆菌液体培养基：葡萄糖10g/L，玉米淀粉10 g/L， 豆粕粉30 g/L，硫酸镁0.5 g/L，硫酸锰0.5g/L，磷酸二氢钠0.5 g/L，氯化钠2 g/L，pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
其中，青春双歧杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用双歧杆菌固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养72小时。在平板下挑取单个菌落接种50毫升双歧杆菌培养基中，在培养箱中37℃厌氧培养48小时，种子采用5%的接种量，接种至装有9.5L双歧杆菌培养基的 10L大三角瓶中，37℃厌氧培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过10亿CFU/ml，即可作为青春双歧杆菌种子液接种；其中，所述的双歧杆菌培养基：蛋白胨5.0g/L，酵母提取物5 g/L，牛肉膏5.0 g/L，胰蛋白胨10.0g/L，葡萄糖10.0 g/L，醋酸钠5.0 g/L，柠檬酸二铵2.0 g/L，吐温-80 1.0 ml/L，硫酸镁0.1 g/L，硫酸锌0.25 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，琼脂20 g；培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
其中，丁酸梭菌种子液按以下方法制备：
取-80℃甘油管保藏的菌种1mL接种于装有9mLRCM培养基的试管中，37℃条件下静态厌氧活化48h，将活化好的菌种按1%(v/v)的接种量转接到灭过菌的10L丁酸梭菌种子培养基中，37℃条件下静态厌氧培养24h~36h，菌含量超过5亿CFU/ml，即可作为丁酸梭菌种子液接种；
其中，所述的RCM培养基：胰蛋白陈10g/L，牛肉膏10g，酵母膏10g/L，葡萄糖5g/L，氯化钠5g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5克/L，醋酸钠3g/L，pH7.0，121℃灭菌20min；
其中，所述的丁酸梭菌种子培养基：:酵母膏15g/L，牛肉膏5g/L，KH2PO4 2g/L硫酸镁1g/L，半胱氨酸盐酸盐1g/L，NaHCO3 1g/L，CaCO3 1g/L，葡萄糖20g/L， PH7.0，121℃灭菌20min。
对于患有II型糖尿病的人来说，减肥、参加锻炼、使用药物（胰岛素）合改变生活方式可以控制血糖浓度。除了这些常规疗法外，益生菌疗法作为一种新的方式越来越显示出其优越性。
从病理学上来讲，对付糖尿病有三个基本策略 (益生菌在其中都发挥着重要作用)：(1)通过控制食物或服用药物减少肠道中葡萄糖的吸收量；(2)减少肝里葡萄糖的合成;(3)促进代谢过程对葡萄糖的使用。葡萄糖在第一和第三个策略中都十分有用，而在第二个策略中的作用却不大，所以我们在这里就不讨论这一点了。
第一个治疗策略一一减少胃肠道对葡萄糖的吸收 —— 可以通过含益生菌或益生元的食品来抑制葡萄糖的吸收。
葡萄糖在肠道里可以以不同形式存在。正如前面提到的，葡萄糖可以和其他糖类结合，形成更复杂的种类。然后它们将被身体分解，释放出葡萄糖，使其能被吸收。例如，身体要把蔗糖分解成最基本的组成部分 ——葡萄糖和果糖，然后再吸收它们，那么肠道里就一定要有蔗糖。事实上，身体里的各个组成部分都喜欢葡萄糖。它是最基本的能量来源，任何身体组织都能轻易地对其加以利用。所以，身体组织的代谢系统都把葡萄糖作为主要的能量来源。
既然如此，肠道里的益生菌是怎样帮助治疗糖尿病和控制体重的呢?假设你摄入了很多糖 (为了简单起见，假设这些糖是葡萄糖，但是对其他糖类来说，原理也是一样的)。如果你吃下了纯葡萄糖，会发生什么呢?不是发生糖尿病昏迷，就是葡萄糖被全部吸收。为了达到这个目的，葡萄糖必须先进入肠道，通过肠道上皮细胞中的任何东西 (如果有的话)。在健康的胃里，益生菌包围着这些上皮细胞 (或者说层叠其上);而在一个不健康的胃里，只有一堆病原细菌。
葡萄糖被这些肠道上皮细胞吸收，然后进入身体其他部分 (当然，这是建立在假设所有的葡萄糖都能被上皮细胞利用的基础上)。总而言之，胃肠道内的益生菌提供了第一个防护层，以免大量葡萄糖被吸收。这就是说，如果你补充大量益生菌，那么已经加强了这第一个防护层，因为益生菌喜欢利用葡萄糖。
那么，葡萄糖是益生元吗?不是。根据定义，益生元是含有某些益生菌而非大肠杆菌等病原有机体的食物。这也不会改变益生菌需要葡萄糖的事实。如果周围有大量葡萄糖的话，它们甚至都不碰其他的糖类。原因很简单，因为吞食葡萄糖对益生菌来说毫不费力。所有生物都认同成本/收益率。越容易做的事情，生命体就越有可能去做。益生菌体内有可以利用葡萄糖的组织，所以它们会吸收葡萄糖，然后吃掉它。
现在，回到我们摄取糖的例子：如果体内有大量益生菌存在，而且它们都在积极消耗有害菌，那么在体内输送的葡萄糖就会减少。直接结果就是血液里的葡萄糖减少。如果血液里葡萄糖含量减少，被肝用来制造肝糖 (或进行其他活动)的葡萄糖就减少了，而身体就是通过把葡萄糖转化成肝糖来对其进行储存的。最后，如果制造的肝糖减少了，一段时间之后，身体能够转化为葡萄糖的肝糖就减少了。记住，只需要提供大量益生菌，就能让这些变化发生。
这又把我们带回到控制体重和糖尿病的关系这个主题上来了。葡萄糖是一种非常好的能量来源，随时贡献自我以便生成其他物质。如果体内以葡萄糖形式存在的能量过多，超过了可以使用的量，那么身体会怎么做呢?它会以脂肪的形式储存起来，而那些肥肉很可能会陪伴你一生。公式很简单:过多能量(即葡萄糖)=体重上升。如果你摄入的卡路里比消耗的要多，你的体重就会上升。
在前面，我们谈到有三种主要的策略可以用来治疗糖尿病，第三种就是加速葡萄糖的代谢。
有几种方法可以使你体内的细胞更多地使用葡萄糖，食用益生菌是最有效的手段之一；它能够很大限度地影响肠道里的活动。事实上，发生在肠道里的活动比发生在身体里的活动更加重要。
为了证明这一点，可以把你的肠和它外部的身体想象成是相对的。科学家们就是这么干的。他们认为肠道是一个中空的管道，从口腔到肛门，身体就包裹在其外。·"管道"是个很形象的比喻，因为通过肠道的任何东西都不直接和身体产生联系。换句话说，你咽下的一切东西从管道的一头进去，又从另一头出来 ——在此期间一直停留在管道里。不仅食物如此，益生菌也一样。它们在肠道自成一体的环境中运行良好。
正如前面提到的，人体内的细菌数量比细胞还多。这也就意味着，益生菌这种有益细菌能在整个代谢过程中起很大作用。如果在进餐时补充大量益生菌，它们对食物的消耗将远远超过你的身体对食物的利用。你吞下的食物很少会被真正吸收。
不相信?那就自己试试吧。如果摄入1000亿个微生物 (100毫升益生菌)，你会感觉自己非常饿。益生菌会消耗体内大量的卡路里，这就是为什么你会有饥饿感。你需要同饥饿感作战。我们会把一膳食纤维之类的东西和益生菌共同使用，以减少饥饿感。
纤维类食品对于防治糖尿病与控制体重来说是一个不错的选择。现在己有许多研究证实，纤维含量较多的食品 (它们是容易滋生益生菌的益生元)有助于预防II型糖尿病与控制体重。德国研究人员在新的研究中发现，全谷类食品和很多蔬菜所含的非水溶性纤维能够改善人体对胰岛素的利用状况，从而有助于预防II型糖尿病，食用大量的纤维素，可以减少更多能源的摄入，达到减肥效果。
综上所述，好的益生菌与益生元是完全可以防治糖尿病并控制体重的，但如何选择出效果显著的防治糖尿病并控制体重的益生菌群与益生元配合，则是我们临床试验的重点，本发明中的几种益生菌与益生元是经过多年的临床试验应用效果组合研究得到的。
本发明的复合益生菌液中含有大量的木醋杆菌，木醋杆菌具有很强的纤维素的合成能力，一个木醋杆菌细胞每小时能够把一亿个葡萄糖单位连成纤维素，每天能产生3-4cm的纤维素。这些细菌纤维素完全不为人体消化吸收，食后具有饱腹感，可减少食量而作为低热量的减肥食品。且可增加粪便体积，稀释毒物，促进肠蠕动及排便，防治便秘。现在己有许多研究证实，纤维含量较多的食品 (它们是容易滋生益生菌的益生元)有助于预防II型糖尿病。德国研究人员在新的研究中发现，全谷类食品和很多蔬菜所含的非水溶性纤维能够改善人体对胰岛素的利用状况，从而有助于预防II型糖尿病。胰岛素能调节血糖，胰岛素敏感度下降是人体罹患II型糖尿病的前兆。以往的一些研究己经表明，非水溶性纤维含量高的饮食有助于降低罹患糖尿病的风险。为查明其中的关联，德国人类营养研究所研究人员为17位体重超标的女性设计了不同的饮食方案，以探索非水溶性纤维的功用。研究人员让参加实验的女性先连续3天吃富含非水溶性纤维的面包，此后3天再改吃纤维含量少的面包。对比分析表明，富含非水溶性纤维的饮食提高了这些女性的胰岛素敏感度。他们把研究成果发表在 《糖尿病护理》上。本发明中的复合益生菌液中细菌纤维含量不低于0.5g/L，是其他产品无法比拟的。
木醋杆菌是好气性细菌，需在有氧的条件下才能迅速大量的生长。但它和其它的醋酸菌不同，在缺氧的条件下，它可以利用葡萄糖进行嫌气发酵，可以使葡萄糖转化为醋酸和乳酸，不会因为缺氧而迅速地大量死亡。而在有氧的条件下木醋杆菌可以迅速使葡萄糖氧化成葡萄糖酸、2-酮葡萄糖酸，氧化乙醇为醋酸；因为这个特点，它在发酵液中除在培养液表层氧量足的情况下大量繁殖形成菌膜外，在菌液中也可以形成絮状物，保持相当数量的菌体。在有氧的条件下，木醋杆菌对葡萄糖有很强的氧化能力，具体途径为：葡萄糖→葡萄糖酸→葡萄糖醛酸→葡萄糖二酸→葡萄糖二酸1，4内酯，其中间产物均为解毒、抗癌的功能因子。葡萄糖醛酸，它是人体肝脏中最主要的解毒物质之一。葡萄糖醛酸可与外源的毒素或人体代谢产生的内源有毒物质相结合，变成水溶性的葡萄糖苷酸，并一起排出体外，从而使可能引起身体各种病变的或已经发生病变的毒素被及时清除，起到防病和治病的良好效果。木醋杆菌在发酵过程中存在的另一种功能性成分葡萄糖二酸1，4内酯可使肝素、透明质酸、硫酸粘多糖以及葡萄糖醛酸的破坏大大减少，帮助身体更有效地排出毒素，防癌抗癌，并缓解关节炎、痛风、气喘和相关组织功能下降所引起的其它不适。葡萄糖酸能与重金属结合形成水溶性复合物，帮助人体排出有害的重金属元素。
本发明中的复合益生菌液中含有阿拉伯糖，它进入人体有以下几方面的作用：一是能抑制水解双糖的酶，因此抑制因摄入蔗糖(在小肠蔗糖酶的作用下分解成葡萄糖和果糖而被吸收)而导致的血糖升高；简称抑制双糖水解的降糖作用。二是因阿拉伯糖对双糖水解酶的抑制作用，使在小肠里没被分解的蔗糖在大肠里被微生物分解产生出大量的有机酸，这种有机酸对肝脏合成脂肪有抑制作用，再加上阿拉伯糖在小肠里对吸收蔗糖的抑制作用，从而减少体内新脂肪的产生。阿拉伯糖可以与蔗糖配伍使用也可单独食用。在蔗糖中加入3.5%的比例，能够抑制人体60-70%蔗糖的吸收，长期使用可以降低血糖。三预防便秘，促进双歧杆菌的生长，日本的研究结果显示：有便秘倾向的女性将添加了3%阿拉伯糖的蔗糖加入红茶等饮品中连续服用，每周的排便次数有明显增加。据三和淀粉株式会社试验证明，摄入添加5%阿拉伯糖的蔗糖还可以有效促进双歧杆菌(Bifidobacterium)的生长。阿拉伯糖本身是难以被消化道吸收的糖，在体内得不到利用的部分可从尿中排出。
本发明中含有低聚木糖（一种较好的益生元），低聚木糖对病原菌有较强的吸附力，如大肠杆菌、肠炎门氏菌、肺炎克雷伯氏菌、嗜水气单胞菌等都能吸附到低聚木糖上，由于低聚木糖不被肠道中的消化酶所降解，可携带附着的病原菌通过肠道排出体外，从而防止疾病在肠道中集群，达到防止腹泻的目的。低取出木糖可以促进肠道中的双歧杆菌快速生长，是其他低聚糖等益生元效果20倍以上。双歧杆菌利用低聚木糖，产生大量的短链脂肪酸；能刺激肠道蠕动，增加粪便湿润度，并保持一定的渗透压，从而防止便秘发生。摄入低聚木糖，可减少有毒代谢产物形成，大大减少了肝脏分解毒素的负担。摄入低聚木糖，持续2周至3个月，总血清胆固醇可降低20-50dl。还可提高女性血清中多密度脂蛋白胆固醇占总胆固醇的比率。研究表明，46个高血脂患者摄入低聚木糖持续5周后，其心脏舒张压平均下降了799.8Pa(6mmHg)。结果显示，人的心脏舒张压的高低与其粪便中双歧杆菌占总菌数的比率呈明显的负相关关系。
本发明的复合益生菌液中含有大量的地衣芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌是具有耐酸、耐热特性的有益菌，在胃酸下四小时存活率为100%，同时具有强力的病原菌抑制能力,是各种益菌当中，对环境耐受力最好可以直达小肠的菌种之一，口服后可改变人体肠道菌群生态，帮助消化道机能正常化，以使排便顺畅，维持体内生理环保。能调节肠道菌群，增强动物细胞免疫放应。地衣芽孢杆菌为兼性厌氧菌，在肠道中可以起到整肠作用，能有效防治腹泻，便秘，可以快速吸收利用肠道中的葡萄糖，从而减少肠道对葡萄糖的吸收，降低血糖。
本发明的复合益生菌液中含有布拉氏酵母菌，布拉氏酵母菌是一种非致病性，目前为止唯一在临床使用的真菌类微生态制剂，其具有独特的药理作用，通过抑制致病微生物的生长繁殖，减少致病微生物对粘膜上皮细胞的粘附和侵袭，释放短肽蛋白中和、钝化和降解细菌毒素，从而发挥抗致病微生物的作用，另一方面，在肠道内布拉氏酵母菌通过代谢释放多胺类物质(亚精胺和精胺)发挥许多生理功能，如提高小肠绒毛膜二糖酶水平，提高碱性磷酸酶，刺激肠道释放分泌型IgA，提高肠道局部抗感染能力，尤其最近研究发现，布拉氏酵母菌通过抑制炎症信号途径中NF-κB的易位而抑制炎症信号途径，发挥抗炎症作用。以上研究表明使用布拉氏酵母菌可加快病情恢复，缩短住院时间。对于小儿腹泻的治疗和预防都有很显著的作用，并且具有较好的疗效及安全性，更重要的，布拉氏酵母菌具有强大的利用葡萄糖的能力，能快速降低肠道中葡萄糖的含量，减少血糖含量。
本发明复合益生菌液含有大量活的青春双歧杆菌与植物乳杆菌，本发明中的保健液中含有大量的活性的乳杆菌与双歧杆菌，乳杆菌与双歧杆菌能促进蛋白质、单糖及钙、镁等营养物质的吸收，产生维生素B族等大量有益物质；使肠道菌群的构成发生有益变化，改善人体胃肠道功能，恢复人体肠道内菌群平衡，形成抗菌生物屏障，维护人体健康；抑制腐败菌的繁殖，消解腐败菌产生的毒素，清除肠道垃圾；抑制胆固醇吸收，降血脂、降血压作用；可提高SOD酶活力，消除人体自由基，具抗衰老、延年益寿作用；有效预防女性泌尿生殖系统细菌感染；控制人体内毒素水平，保护肝脏并增强肝脏的解毒、排毒功能。
本发明中含有大量的丁酸梭菌，丁酸梭菌能促进有益的双歧杆菌、乳酸菌、拟杆菌的增殖和有效的抑制引起疾病的葡萄球菌、念珠菌、克雷伯菌、弯曲杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和伤寒沙门菌以及腐败菌的繁殖，从而减少了胺类、吲哚类和硫化氢等有害物质。丁酸梭菌通过利用大量的葡萄糖等还原糖代谢的主要产物为丁酸，而丁酸是肠道上皮组织细胞的再生和修复的主要营养物质。因此，对肠道上皮组织的再生和修复有很重要的意义。用丁酸梭菌或与双歧杆菌、益生元等合用，对于因菌群失调而引起的急慢性腹泻、肠易激综合症、抗生素相关性肠炎、便秘等症状有良好的疗效，对于肠炎、肝硬化和放疗、化疗造成的免疫功能下降也能起到辅助的治疗作用。不少资料还说明，该菌还能促进维生素E的吸收，降解胆酸和提高抗氧能力。
本发明的有益效果与优点：
、本发明的复合益生菌液使用的布拉氏酵母菌、木醋杆菌、植物乳杆菌、青春双歧杆菌、地衣芽孢杆菌，丁酸梭菌是经过仔细筛选，在发酵过程中是互惠互利的共生关系，采用了特殊的发酵工艺生产的。在发酵开始阶段（A发酵罐中），由于木醋杆菌不能直接利用蔗糖或利用蔗糖的速度很慢，由布拉氏酵母菌将蔗糖降解为葡萄糖和果糖，并进一步发酵产生乙醇，木醋杆菌则在培养液中有了葡萄糖、果糖和乙醇之后开始大量生长繁殖，将葡萄糖和果糖氧化产生葡萄糖酸、乙酸等代谢产物，并将酵母产生的乙醇氧化生成乙酸。在整个发酵的前期阶段布拉氏酵母菌繁殖起重要作用。有资料表明，酵母菌产生的乙醇能刺激木醋杆菌的生长，产生更多的纤维素膜和乙酸，而木醋杆菌产生的乙酸又会刺激酵母菌产生乙醇，而乙酸、乙醇的存在可保护木醋杆菌和酵母菌，从而使得残葡萄糖含量低于0.2 g/L,可以说其葡萄基本上都被代谢掉了，要么成为细菌纤维素，要么成为葡萄糖酸、乙酸等代谢产物。同样，在发酵罐B中，前期有较多的溶氧的时候，地衣芽孢杆菌会快速生长，随着溶氧的下降，地衣芽孢生长速度下降，此时，青春双歧杆菌、丁酸梭菌在L-阿拉伯糖与低聚木糖的促进下，快速生长，特别是丁酸梭菌在混菌发酵时，能达到20亿CFU/ml是没有预料到的。
、本发明中通过发酵产生了大量的细菌纤维素，其会使人体感到饱腹效果，从而减少糖类物质的食用，从而控制体重与降低血糖。
、本发明的复合益生菌液进入人体后，其中的L-阿拉伯糖能抑制水解双糖的酶，因此抑制因摄入蔗糖(在小肠蔗糖酶的作用下分解成葡萄糖和果糖而被吸收)而导致的血糖升高；另外，本发明的复合益生菌液本身的残葡萄糖含量就很低，摄入后其残葡萄糖无法被人体吸收。
、本发明中的布拉氏酵母菌，地衣芽孢杆菌，丁酸梭菌，木醋杆菌，青春双歧杆菌，植物乳杆菌，在肠道中大量繁殖，吸收利用大量的葡萄糖，果糖，起到了肠道的第一层防护，减少肠道对葡萄糖等糖原的吸收，从而控制体重与降低血糖。
、本发明中的低聚木糖，布拉氏酵母菌，地衣芽孢杆菌，丁酸梭菌，木醋杆菌，青春双歧杆菌，植物乳杆菌都可以调节肠道菌群，抑制有害菌的生长，体内有大量益生菌存在，而且它们都在积极消耗有害菌，从而在体内输送的葡萄糖就会减少。直接结果就是血液里的葡萄糖减少。如果血液里葡萄糖含量减少，被肝用来制造肝糖 (或进行其他活动)的葡萄糖就减少了，而身体就是通过把葡萄糖转化成肝糖来对其进行储存的。最后，如果制造的肝糖减少了，一段时间之后，身体能够转化为葡萄糖的肝糖就减少了，因此，体重与血糖也下降了。
、本发明复合益生菌液含有的多种益生菌都能促进蛋白质、单糖及钙、镁等营养物质的吸收，产生维生素B族等大量有益物质；使肠道菌群的构成发生有益变化，改善人体胃肠道功能，恢复人体肠道内菌群平衡，形成抗菌生物屏障，维护人体健康；抑制腐败菌的繁殖，消解腐败菌产生的毒素，清除肠道垃圾；抑制胆固醇吸收，降血脂、降血压作用；可提高SOD酶活力，消除人体自由基，具抗衰老、延年益寿作用；控制人体内毒素水平，保护肝脏并增强肝脏的解毒、排毒功能。
、临床试验结果表明：口服本发明的复合益生菌液的患者，初步判定在血糖达标时间、改善糖耐量、改善胰岛素及c肤释放方面要优于单纯应用二甲双胍者。另外，本发明的复合益生菌液在改善胰岛素抵抗、保护胰岛细胞功能方面确有疗效，并且无副作用。
具体实施方式
实施例1
一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌液，其特征在于，所述复合益生菌组份及重量份数配比为：丁酸梭菌种子液15份、脱脂大豆粉15份、布拉氏酵母菌种子液30份、植物乳杆菌种子液10份、木醋杆菌种子液8份、青春双歧杆菌种子液15份、地衣芽孢杆菌种子液15份、红糖40份、脱脂奶粉15份、蜂蜜15份、氯化钠3份、阿拉伯糖15份、低聚木糖8份和纯化水800份，其制备过程包括：（1）.在1000L发酵罐A中加入红糖40份、脱脂大豆粉15份、氯化钠2份、纯化水400份，混匀后再在115℃下保温30分钟，然后降温至30℃；再向发酵罐A中加入布拉氏酵母菌种子液30份、植物乳杆菌种子液10份、木醋杆菌种子液8份，每24小时搅拌30分钟；培养前期48小时，通气量为每分钟的液气比为1：0.8，通气过程维持发酵液pH5.8-6.8，48小时后不再通气，同时不再调pH，继续静置培养，在30℃-35℃下培养116小时，待PH降低至4.2，检测布拉氏酵母菌含量为1.8亿CFU/ml，细菌纤维含量为1.6g/L，残葡萄糖含量为0.12 g/L,总菌含量为15亿CFU/ml，即可停止A罐的第一阶段发酵；
（2）.在600L发酵罐B中加入蜂蜜15份、脱脂奶粉15份、阿拉伯糖15份、低聚木糖8份、氯化钠1份、纯化水400份，混匀后再在108℃下保温30分钟，然后降温至37℃；向发酵罐B中加入丁酸梭菌种子液15份、青春双歧杆菌种子液15份、地衣芽孢杆菌种子液15份，在35℃-37℃下静止厌氧培养88小时，检测丁酸梭菌的芽孢含量为24亿CFU/ml，总菌含量为45亿CFU/ml，即可停止发酵；
（3）. 当两个发酵罐达到指标后，将发酵罐B中的菌液移至发酵罐A中，搅拌均匀，在30℃-33℃下静止继续厌氧培养44小时，检测其PH降至3.0，总活菌含量为38亿CFU/ml，细菌纤维含量为0.9g/L，检测丁酸梭菌的芽孢含量为19亿CFU/ml，即可停止发酵，无菌灌装，100ml/瓶，包装成品。
其中，布拉氏酵母菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用YPD固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种150毫升YPD培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时。种子采用5%的接种量，接种至装有2L酵母菌培养基的 5L大三角瓶中，30℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过5亿CFU/ml，即可作为布拉氏酵母菌种子液接种；其中，所述的YPD固体培养基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂20 g，水1000mL；其中，所述的酵母菌培养基：红糖15 g/L，酵母膏3 g/L，蛋白胨5 g/L，硫酸铵3 g/L，硫酸镁0.5 g/L；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
其中，植物乳杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用MRS固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种250毫升MRS培养基中，在培养箱中37℃厌氧培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有9L乳酸菌培养基的 10L大三角瓶中，37℃厌氧培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过50亿CFU/ml，即可作为植物乳杆菌种子液接种，其中，所述的MRS培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取物5 g/L，牛肉膏10 g/L，葡萄糖20 g/L，醋酸钠5 g/L，柠檬酸二铵2 g/L，吐温-80 1 ml/L，硫酸镁0.6 g/L，硫酸锰0.05 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，琼脂20 g/L，碳酸钙20 g/L；其中，所述的乳酸菌培养基：葡萄糖4%，蛋白胨1.2%，牛肉膏0.75%，氯化钠0.1%，硫酸锰0.001%，硫酸镁0.02%，醋酸钠0.05%，碳酸钙1%，pH6.0；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
其中，木醋杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用木醋杆菌固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至50毫升木醋杆菌液体培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有2L木醋杆菌液体培养基的 5L大三角瓶中，30℃，150r/min震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过10亿CFU/ml，即可作为木醋杆菌种子液接种，其中，所述木醋杆菌固体培养基：葡萄糖40.0，蛋白胨8，柠檬酸1.2，磷酸氢二钠1.0，磷酸二氢钠 2.0，硫酸镁0.3，琼脂18.0，去离子水1L，pH6.8，121℃灭菌20分钟；其中，所述的木醋杆菌液体培养基：葡萄糖20.0，蛋白胨4.0，柠檬酸2.0，磷酸二氢钠 2.7，硫酸镁0.25，去离子水1L，pH6.8，12l℃灭菌20分钟。
其中，地衣芽孢杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有2L 地衣芽孢杆菌液体培养基的5L大三角瓶中，37℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，芽孢含量超过60亿CFU/ml，即可作为地衣芽孢杆菌种子液接种。其中所述LB固体培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20 g，水1000mL，pH7.2；其中所述地衣芽孢杆菌液体培养基：葡萄糖10g/L，玉米淀粉10 g/L， 豆粕粉30 g/L，硫酸镁0.5 g/L，硫酸锰0.5g/L，磷酸二氢钠0.5 g/L，氯化钠2 g/L，pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
其中，青春双歧杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用双歧杆菌固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养72小时。在平板下挑取单个菌落接种50毫升双歧杆菌培养基中，在培养箱中37℃厌氧培养48小时，种子采用5%的接种量，接种至装有9.5L双歧杆菌培养基的 10L大三角瓶中，37℃厌氧培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过10亿CFU/ml，即可作为青春双歧杆菌种子液接种；其中，所述的双歧杆菌培养基：蛋白胨5.0g/L，酵母提取物5 g/L，牛肉膏5.0 g/L，胰蛋白胨10.0g/L，葡萄糖10.0 g/L，醋酸钠5.0 g/L，柠檬酸二铵2.0 g/L，吐温-80 1.0 ml/L，硫酸镁0.1 g/L，硫酸锌0.25 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，琼脂20 g；培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。
其中，丁酸梭菌种子液按以下方法制备：
取-80℃甘油管保藏的菌种1mL接种于装有9mLRCM培养基的试管中，37℃条件下静态厌氧活化48h，将活化好的菌种按1%(v/v)的接种量转接到灭过菌的10L丁酸梭菌种子培养基中，37℃条件下静态厌氧培养24h~36h，菌含量超过5亿CFU/ml，即可作为丁酸梭菌种子液接种；
其中，所述的RCM培养基：胰蛋白陈10g/L，牛肉膏10g，酵母膏10g/L，葡萄糖5g/L，氯化钠5g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5克/L，醋酸钠3g/L，pH7.0，121℃灭菌20min；
其中，所述的丁酸梭菌种子培养基：:酵母膏15g/L，牛肉膏5g/L，KH2PO4 2g/L硫酸镁1g/L，半胱氨酸盐酸盐1g/L，NaHCO3 1g/L，CaCO3 1g/L，葡萄糖20g/L， PH7.0，121℃灭菌20min。
实施例2
在240例2型肥胖型糖尿病患者进行试验，均符合WHO诊断标准，且符合以下条件：初次确诊或确诊不超过半年未治疗且空腹血糖≥10.9mmol/L；无严重急慢性并发症。
治疗方法：
将符合条件的240例患者按肥胖程度与糖尿病严重程度分为两组。
对照组：在对患者进行糖尿病健康知识教育和饮食治疗的基础上联合应用二甲双胍，二甲双胍每次0.5g，每日2次。
试验组：在对患者进行糖尿病健康知识教育和饮食治疗的基础上联合应用复合益生菌液，每日三次，饭前饮用，每日一瓶。两组患者在性别，年龄、体重指数、糖化血红蛋白，空腹血糖、大致发病时间分布上差异无统计学意义。
观察指标
安全性指标：如血常规，大便常规，肝功能、肾功能检查、心电图等；疗效性指标：治疗前后体重指数，血糖达标时间；实验室检查：治疗后糖化血红蛋白，糖耐量实验、胰岛素及C肽释放试验。胃肠道不良反应指标：如恶心、呕吐、腹胀、腹痛等。
2结果
只经过一个月的试验，试验组对减轻肥胖程度有明显的效果，体重指数治疗前后变化见表1。后来在试验组的基础上，继续服用本发明的复合益生菌液一天一次，每次30mL，总共三个月后，试验组有28人BMI达到正常指标（小于24），偏胖（BMI24-27.9）人数为58人，肥胖（BMI27.9-29）20人，肥胖（BMI29-30）13人，重度肥胖（BMI30-35）1人。
表1体重指数变化
肥胖程度BMI 对照组治疗前 对照组治疗后 试验组治疗前 试验组治疗后
偏胖24-27.9 28 30 28 50
27.9-29 48 48 46 44
29-30 32 30 35 20
重度肥胖30-35 12 12 11 6
血糖达标时间试验组明显少于对照组，见表2。
表2 血糖达标时间
治疗后的实验室检查结果
糖化血红蛋白试验组显著低于对照组。.糖耐量试验：餐后3小时两组无显著差异，余时间试验组比对照组明显降低。C肽释放试验：试验组较对照组在空腹及餐后1小时释放明显增多，餐后2小时，3小时也差异明显。胰岛素释放试验：试验组1小时较对照组胰岛素释放明显增多，见表3-6。
表3两组患者治疗前后HbAlc(%)结果比较
组别 治疗前 治疗后
试验组 9.8±2.4 5.3±1.2
对照组 9.7±2.2 6.7±1.8
表4两组患者治疗前后糖耐量试验（mmol/L）结果
表5两组患者治疗前后C肽释放试验（ng/ml）结果
表6两组患者治疗前后胰岛素释放试验结果（Uu/ml）
安全性观察结果
本发明中的试验组受试者于治疗前后分别进行安全性指标检测，结果未发现明显异常改变，说明本发明的复合益生菌液使用安全，无明显不良反应。胃肠道不良反应结果见表7。
表7胃肠道不良反应结果
组别 胃肠道反应人数
试验组 0
对照组 55
曲型病例：
张某：男，57岁，患糖尿病10年，打胰岛素5年，肥胖BMI系数为30.24，未服用本发明的复合益生菌液前，控制饮食，体质虚弱，最高血糖18.4mmol/L、甘油三脂7.9mmol/L、总胆固醇9.5mmol/L。服用本发明复合益生菌液33mL /次，一天三次，15天后，即停止打胰岛素，30天后，改为一天服用本发明复合益生菌液一天一次，每次33mL，两个月后，检查，血糖5.4mmol/L、甘油三脂2.1mmol/L、总胆固醇4.3mmol/L、BMI系为28.1，体质全面恢复正常。
孙某：男，69岁，患糖尿病18年，打胰岛素13年，肥胖BMI系数为29.93，未服用本发明的复合益生菌液前，控制饮食，最高血糖17.8mmol/L、甘油三脂7.7mmol/L、总胆固醇9.5mmol/L。服用本发明复合益生菌液33mL /次，一天三次，15天后，即停止打胰岛素，30天后，改为一天服用本发明复合益生菌液一天两次，每次30mL，45天后，检查，血糖5.7mmol/L、甘油三脂2.4mmol/L、总胆固醇4.5mmol/L、BMI系为28.3，体质全面恢复正常。

Claims (1)

1.一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌液，其特征在于，所述复合益生菌液组份及重量份数配比为：丁酸梭菌种子液10-20份、脱脂大豆粉10-20份、布拉氏酵母菌种子液10-40份、植物乳杆菌种子液5-15份、木醋杆菌种子液5-10份、青春双歧杆菌种子液10-20份、地衣芽孢杆菌种子液10-20份、红糖30-60份、脱脂奶粉10-20份、蜂蜜10-20份、氯化钠2-4份、阿拉伯糖10-20份、低聚木糖2-10份和纯化水800份，其制备过程包括：（1）.在1000L发酵罐A中加入红糖30-60份、脱脂大豆粉10-20份、氯化钠1-2份、纯化水400份，混匀后再在115℃下保温30分钟，然后降温至30℃；再向发酵罐A中加入布拉氏酵母菌种子液10-40份、植物乳杆菌种子液5-15份、木醋杆菌种子液5-10份，在30℃-35℃下培养72-120小时，每24小时搅拌30分钟；培养前期48小时，通气量为每分钟的液气比为1：0.8，通气过程维持发酵液pH5.8-6.8，48小时后不再通气，同时不再调pH，继续静置培养，待PH降低至4.2，布拉氏酵母菌含量不低于1亿CFU/ml，细菌纤维含量不低于1g/L，残葡萄糖含量低于0.2 g/L，总菌含量不低于10亿CFU/ml，即可停止A罐的第一阶段发酵；
（2）.在600L发酵罐B中加入蜂蜜10-20份、脱脂奶粉10-20份、阿拉伯糖10-20份、低聚木糖2-10份、氯化钠1-2份、纯化水400份，混匀后再在108℃下保温30分钟，然后降温至37℃；向发酵罐B中加入丁酸梭菌种子液10-20份、青春双歧杆菌种子液10-20份、地衣芽孢杆菌种子液10-20份，在35℃-37℃下静止厌氧培养72-96小时，检测丁酸梭菌的芽孢含量不低于20亿CFU/ml，总菌含量不低于30亿CFU/ml，即可停止发酵；
当两个发酵罐达到指标后，将发酵罐B中的菌液移至发酵罐A中，搅拌均匀，在30℃-33℃下静止继续厌氧培养24-48小时，检测其PH降至3.0-3.2，总活菌含量不低于30亿CFU/ml，细菌纤维含量不低于0.5g/L，检测丁酸梭菌的芽孢含量不低于15亿CFU/ml，即可停止发酵，无菌灌装，100 ml/瓶，包装成品；
其中，布拉氏酵母菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用YPD固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种150毫升YPD培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有2L酵母菌培养基的 5L大三角瓶中，30℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过5亿CFU/ml，即可作为布拉氏酵母菌种子液接种；其中，所述的YPD固体培养基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂20 g，水1000mL；其中，所述的酵母菌培养基：红糖15 g/L，酵母膏3 g/L，蛋白胨5 g/L，硫酸铵3 g/L，硫酸镁0.5 g/L；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
其中，植物乳杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用MRS固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种250毫升MRS培养基中，在培养箱中37℃厌氧培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有9L乳酸菌培养基的 10L大三角瓶中，37℃厌氧培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过50亿CFU/ml，即可作为植物乳杆菌种子液接种，其中，所述的MRS培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取物5 g/L，牛肉膏10 g/L，葡萄糖20 g/L，醋酸钠5 g/L，柠檬酸二铵2 g/L，吐温-80 1 ml/L，硫酸镁0.6 g/L，硫酸锰0.05 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，琼脂20 g/L，碳酸钙20 g/L；其中，所述的乳酸菌培养基：葡萄糖4%，蛋白胨1.2%，牛肉膏0.75%，氯化钠0.1%，硫酸锰0.001%，硫酸镁0.02%，醋酸钠0.05%，碳酸钙1%，pH6.0；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
其中，木醋杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用木醋杆菌固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至50毫升木醋杆菌液体培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有2L木醋杆菌液体培养基的 5L大三角瓶中，30℃，150r/min震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过10亿CFU/ml，即可作为木醋杆菌种子液接种，其中，所述木醋杆菌固体培养基：葡萄糖40.0，蛋白胨8，柠檬酸1.2，磷酸氢二钠1.0，磷酸二氢钠 2.0，硫酸镁0.3，琼脂18.0，去离子水1L，pH6.8，121℃灭菌20分钟；其中，所述的木醋杆菌液体培养基：葡萄糖20.0，蛋白胨4.0，柠檬酸2.0，磷酸二氢钠 2.7，硫酸镁0.25，去离子水1L，pH6.8，12l℃灭菌20分钟；
其中，地衣芽孢杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有2L 地衣芽孢杆菌液体培养基的5L大三角瓶中，37℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，芽孢含量超过60亿CFU/ml，即可作为地衣芽孢杆菌种子液接种；其中所述LB固体培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20 g，水1000mL，pH7.2；其中所述地衣芽孢杆菌液体培养基：葡萄糖10g/L，玉米淀粉10 g/L， 豆粕粉30 g/L，硫酸镁0.5 g/L，硫酸锰0.5g/L，磷酸二氢钠0.5 g/L，氯化钠2 g/L，pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
其中，青春双歧杆菌种子液按以下方法制备：
取出菌种保藏管，用双歧杆菌固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养72小时，在平板下挑取单个菌落接种50毫升双歧杆菌培养基中，在培养箱中37℃厌氧培养48小时，种子采用5%的接种量，接种至装有9.5L双歧杆菌培养基的 10L大三角瓶中，37℃厌氧培养20-28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过10亿CFU/ml，即可作为青春双歧杆菌种子液接种；其中，所述的双歧杆菌培养基：蛋白胨5.0g/L，酵母提取物5 g/L，牛肉膏5.0 g/L，胰蛋白胨10.0g/L，葡萄糖10.0 g/L，醋酸钠5.0 g/L，柠檬酸二铵2.0 g/L，吐温-80 1.0 ml/L，硫酸镁0.1 g/L，硫酸锌0.25 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，琼脂20 g；培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；
其中，丁酸梭菌种子液按以下方法制备：
取-80℃甘油管保藏的菌种1mL接种于装有9mLRCM培养基的试管中，37℃条件下静态厌氧活化48h，将活化好的菌种按1%(v/v)的接种量转接到灭过菌的10L丁酸梭菌种子培养基中，37℃条件下静态厌氧培养24h~36h，菌含量超过5亿CFU/ml，即可作为丁酸梭菌种子液接种；
其中，所述的RCM培养基：胰蛋白陈10g/L，牛肉膏10g，酵母膏10g/L，葡萄糖5g/L，氯化钠5g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5克/L，醋酸钠3g/L，pH7.0，121℃灭菌20min；
其中，所述的丁酸梭菌种子培养基：:酵母膏15g/L，牛肉膏5g/L，KH2PO4 2g/L硫酸镁1g/L，半胱氨酸盐酸盐1g/L，NaHCO3 1g/L，CaCO3 1g/L，葡萄糖20g/L， PH7.0，121℃灭菌20min。
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