CN105039217A - 一种降血糖益生菌制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种降血糖益生菌制剂及其制备方法，所述降血糖益生菌制剂包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillus？acidophilus)BLCC2-0024，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC？NO:M2015129；干酪乳杆菌(Lactobacillus？casei)BLCC2-0003，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC？NO:M2015125；婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium？infantis)BLCC3-0002，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC？NO:M2015124。本发明的降血糖益生菌制剂，从健康人体内分离到3株益生菌菌株，3株菌株经液体发酵，发酵液离心收集菌体，加入保护剂，冻干成菌粉，3菌株冻干粉按比例复配，加入低聚糖混合物，混合均匀得降血糖益生菌制剂成品，经动物试验验证，具有很好的降血糖的作用。

Description

一种降血糖益生菌制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于食品领域，具体涉及一种降血糖益生菌制剂的制备方法。

背景技术

糖尿病是一种全身代谢性疾病，其特征是血糖水平的慢性增高，是由多种环境因素和遗传因素联合作用导致的胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗引起的疾病。糖尿病不积极治疗随时间的延长会引发一系列的并发症，如心脑血管疾病、视网膜病变、糖尿病肾病、神经病变、肢端坏死等。随着经济的发展、饮食结构的改变，糖尿病发病率逐年上升，现在已经成为严重威胁人类健康的世界公共卫生问题。中国糖尿病患者已经达到9200万，位居世界第一，79.4％的人45岁以后有糖尿病，给社会和经济带来沉重的负担。糖尿病分为1型和2型，1型发病人群主要是青少年，因体内不产胰岛素需终身体外补充胰岛素，2型发病人群主要为中、老年人，发病原因主要是机体对胰岛素敏感性下降或自身胰岛素分泌相对不足，95％以上的糖尿病患者属于2型糖尿病。目前，糖尿病仍是一种无法完全治愈的疾病。对糖尿病的预防采取四级预防措施，一级预防最重要，目的是减少糖尿病的发病率。国际糖尿病联盟(IDF)提出了糖尿病现代治疗的5个要点，分别是：饮食控制，运动疗法，血糖检测，药物治疗和糖尿病教育。临床上虽然认识到采用饮食疗法、运动疗法和药物治疗等相结合的方式治疗糖尿病，但总体上还是以药物治疗为主，主要是胰岛素和口服降糖药，大致分为磺脲类、双胍类、中药制剂、其他降糖药及辅助用药类，以控制血糖升高，减轻糖尿病的症状，延缓糖尿病进一步恶化及并发症的出现。

有研究表明，肠道菌群在健康者、肥胖者和2型糖尿病者之间的组成存在差异性，提示肠道菌群是影响机体代谢性疾病病理生理的可能因素，因此通过对肠道菌群的有效调节来预防或治疗由高脂饮食所引起的代谢性疾病是一行之有效的方法。“益生菌”是机体补充摄入的具有活性的微生物，可以有效改善肠道菌群的平衡，对宿主产生良好的健康效应。大量研究表明，益生菌株具有调节体内菌群平衡、提高机体免疫力、降低血清胆固醇、血压、血糖、抗癌等生理功能。

发明内容

本发明的目的之一是为提供一种具有降血糖功能的益生菌制剂及其制备方法，通过调节肠道菌群来预防或治疗由高脂饮食所引起的代谢性疾病，减少因服用药物而带来的副作用。

本发明提供一种降血糖益生菌制剂，包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024，干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)BLCC2-0003和婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)BLCC3-0002，所述嗜酸乳杆菌BLCC2-0024已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015129；所述干酪乳杆菌BLCC2-0003，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015125；所述婴儿双歧杆菌BLCC3-0002，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015124。

进一步的，所述降血糖益生菌制剂包括粉剂、片剂和胶囊。

进一步的，所述降血糖益生菌制剂在预防及辅助降血糖的药物中的应用。

本发明还提供一种上述降血糖益生菌制剂的制备方法，包括以下步骤：

取菌株，经斜面培养基活化后，将活化后的菌株转接到一级种子培养基中，制得一级种子液；然后再将所述一级种子液转接入发酵培养基进行高密度培养；

待所述发酵培养基中菌体密度达到10⁸cfu/mL，收集发酵液；

将所述发酵液离心，收集获得菌体，加入保护剂，冻干成菌粉；

将冻干菌粉按照一定的比例复配，加入低聚糖混合物，混合均匀即得到所述降血糖益生菌制剂。

进一步的，所述菌株包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015129；干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)BLCC2-0003，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015125；婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)BLCC3-0002，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015124。

进一步的，所述活化嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024和干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)BLCC2-0003的斜面培养基均为MRS固体培养基，所述MRS固体培养基以质量分数计包括：葡萄糖2.0％、柠檬酸铵0.2％、乙酸钠0.5％、磷酸氢二钾0.5％、硫酸锰0.02％、硫酸镁0.05％、蛋白胨1.0％、牛肉膏1.0％、酵母膏0.5％、土温-800.1％和琼脂粉1.5％，调pH5.8～6.0；所述一级种子培养基和所述发酵培养基均为不含琼脂的上述MRS液体培养基；所述MRS固体培养基活化培养条件为：25～40℃培养22～26h；所述一级种子培养基培养条件为：25～40℃条件下，静置培养12～24h；所述发酵培养基培养条件为：25～40℃条件下，间歇搅拌培养48～96h，搅拌速度为间歇搅拌100～200r/min，5～20min/2h。

进一步的，所述活化婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)BLCC3-0002的斜面培养基为TPY固体培养基，所述TPY固体培养基以质量分数计包括：酪蛋白胨1％、大豆蛋白胨0.5％、酵母粉0.25％、磷酸氢二钾0.2％、MgCl₂·6H₂O0.05％、氯化钙0.015％、ZnSO₄·7H₂O0.025％、氯化铁0.01％、L-半胱氨酸盐酸盐0.005％、葡萄糖1.5％、吐温-800.1％和琼脂粉1.5％，调节pH至6.3～6.6，115℃条件下灭菌20min；所述一级种子培养基和上述发酵培养基均为不含琼脂的上述TPY液体培养基；所述TPY固体培养基活化培养条件为：32～40℃厌氧培养20～28h；一级种子培养液培养条件为：32～40℃条件下静置培养16～30h；发酵培养基培养条件为：28～40℃，初始pH值为6.0～7.0，发酵时间为48～96h。

进一步的，所述一级种子液转接发酵培养基的接种量为1-5％。

进一步的，所述保护剂以质量百分比分计，包括：90-98％的10％脱脂奶粉和2-10％的丙三醇。

进一步的，所述冻干菌粉的复配比例为干酪乳杆菌BLCC2-0003：嗜酸乳杆菌BLCC2-0024：婴儿双歧杆菌BLCC3-0002＝2-4：2-5：3-5，所述降血糖益生菌制剂产品中3株菌菌落总数不少于2×10⁹cfu/g。

本发明的有益效果在于：本发明的降血糖益生菌制剂，其有效成分由嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌和婴儿双歧杆菌复配组成，经初步研究结果显示，该降血糖益生菌制剂对糖尿病及糖尿病并发症中的心脑血管疾病具有预防和辅助治疗的作用，具有广阔的市场前景。本发明的降血糖益生菌制剂的制备方法，操作简单，易于工业化生产。

本发明的嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024已于2015年3月18日保藏于中国武汉，武汉大学，中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015129；干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)BLCC2-0003，已于2015年3月18日保藏于中国武汉，武汉大学，中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015125；婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)BLCC3-0002，已于2015年3月18日保藏于中国武汉，武汉大学，中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015124。

附图说明

图1本发明的降血糖益生菌制剂预防糖尿病发病动物实验造模后各组血糖情况图；

图2本发明的降血糖益生菌制剂预防糖尿病发病动物实验造模后各组肝糖原情况图；

图3本发明的降血糖益生菌制剂预防糖尿病并发症的动物实验样品保护下血糖升高情况；

图4本发明的降血糖益生菌制剂预防糖尿病并发症的动物实验样品对高血糖小鼠体重的影响；

图5本发明的降血糖益生菌制剂预防糖尿病并发症的动物实验灌胃样品30d对高血糖小鼠血液指标的影响。

具体实施方式

下文将结合具体附图详细描述本发明具体实施例。应当注意的是，下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合从而达到更好的技术效果。

实施例13株益生菌耐受人工胃液和人工肠液能力测定

1.1菌株耐受人工胃液能力的测定

人工胃液的配制：准确量取20ml的1mol/L盐酸加蒸馏水调节pH值为2.5，加入胃蛋白酶(1g/100ml)，充分溶解后，用孔径为0.22微米滤膜过滤除菌即可。

耐受能力测定：菌液按2％(v/v)接种于模拟胃液中，在37℃条件下培养2h，取样进行平板菌落计数，以0h活菌数为对照，计算菌株存活率。

1.2菌株耐受人工肠液能力的测定

人工肠液配制：取磷酸二氢钾6.8g，加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节PH值至6.8，另取胰酶10g，加水适量使溶解，将两液混合后加水稀释至1000ml，即得。

耐受能力测定：菌液按2％(v/v)接种于模拟肠液中，在37℃条件下培养4h，取样进行平板菌落计数，以0h活菌数为对照，计算菌株存活率。

结果见表1。

表13株菌对人工胃液和人工肠液的耐受性

由表1可知，3株菌在经过人工胃液和人工肠液后，存活率均在50％以上，耐受能力较强，特别是嗜酸乳杆菌BLCC2-0024。

实施例2降血糖益生菌制剂的制备

2.1实验菌株：嗜酸乳杆菌BLCC2-0024、干酪乳杆菌BLCC2-0003和婴儿双歧杆菌BLCC3-0002

2.2培养基

MRS固体培养基配方为：葡萄糖2.0％、柠檬酸铵0.2％、乙酸钠0.5％、磷酸氢二钾0.5％、硫酸锰0.02％、硫酸镁0.05％、蛋白胨1.0％、牛肉膏1.0％、酵母膏0.5％、土温-800.1％和琼脂粉(进口)1.5％，调pH6.0(5.8-6.0范围即可)。液体培养基为不含琼脂的固体培养基配方。各成份均按质量分数添加。

TPY固体培养基配方为：酪蛋白胨1％、大豆蛋白胨0.5％、酵母粉0.25％、磷酸氢二钾0.2％、MgCl₂·6H₂O0.05％、氯化钙0.015％、ZnSO₄·7H₂O0.025％、氯化铁0.01％、L-半胱氨酸盐酸盐0.005％、葡萄糖1.5％、吐温-800.1％和琼脂粉(进口)1.5％，调节pH至6.5(6.3-6.6范围即可)，115℃条件下灭菌20min。液体培养基为不含琼脂的固体培养基配方。各成份均按质量分数添加。

2.3实验步骤

1)嗜酸乳杆菌BLCC2-0024、干酪乳杆菌BLCC2-0003接入MRS固体斜面培养基中，37℃培养24h(25～40℃培养22～26h)；接着转接到MRS液体培养基(一级种子培养基)中，37℃静置培养24h(25～40℃培养12～24h)，制得一级种子液；然后再以5％的接种量将一级种子液转接入发酵培养基进行高密度培养，发酵条件为37℃间歇搅拌培养72h(25～40℃，48～96h)。搅拌频率为100r/min，5min/2h(100～200r/min，5～20min/2h)。

2)婴儿双歧杆菌BLCC3-0002接入TPY固体斜面培养基中，37℃厌氧培养24h(32～40℃，20～28h)；接着转接到TPY液体培养基(一级种子培养基)中，37℃静置培养24h(32～40℃，16～30h)，制得一级种子液；然后再以5％的接种量转接入发酵培养基进行高密度培养，发酵条件为初始pH值6.0～7.0，37℃静置72h(28～40℃，48～96h)。

3)待发酵液中菌体密度达到10⁸cfu/mL，收集发酵液。离心收集获得菌体，加入由95％的10％脱脂奶粉和5％的丙三醇构成的保护剂，冻干成菌粉。最后按照干酪乳杆菌BLCC2-0003：嗜酸乳杆菌BLCC2-0024：婴儿双歧杆菌BLCC3-0002＝2：3：5的比例复配冻干菌粉后，加入低聚糖混合物，混合均匀即得降血糖益生菌制剂产品，降血糖益生菌制剂成品中3株菌菌落总数不少于2×10⁹cfu/g。

保护剂中10％脱脂奶粉和丙三醇的质量百分比分还可分别为90-98％和2-10％。

冻干菌粉中复配比例在干酪乳杆菌BLCC2-0003：嗜酸乳杆菌BLCC2-0024：婴儿双歧杆菌BLCC3-0002＝2-4：2-5：3-5范围内即可，具体比值可为2:2:3、4:5:3、2:5:4或3:3:5。

实施例3动物实验

3.1安全性试验

3.1.1材料与方法

材料：昆明小鼠购自山东鲁抗，益生菌粉实验室冻干。

试验分组及设计：健康成年动物按禁食12h的血糖水平分组，分成1个对照组和1个菌粉组。对照组给予溶剂，菌粉组给予高剂量浓度益生菌粉，连续30天，测空腹血糖值(禁食同实验前)，比较两组动物血糖值。

试验剂量：小鼠菌粉组剂量设定为人体剂量，人体剂量为5.0×10⁹CFU/d，其中干酪乳杆菌为1.0×10⁹CFU/d，嗜酸乳杆菌为1.5×10⁹CFU/d，婴儿双歧杆菌为2.5×10⁹CFU/d。

3.1.2结果与分析

3.1.2.1试验前血糖和灌胃20d小鼠血糖，结果见表2。

表2试验前血糖和灌胃20d小鼠血糖统计表

由表2可知，灌胃样品前和灌胃样品20d后各组禁食15h血糖(一般来说空腹血糖(FPG)的正常值为3.9～6.1mmol/L)都在正常范围内，灌胃样品前和灌胃样品20d后进食2h血糖各组没有显著性的差异(p＞0.05)，所以各组样品都没有升高血糖的作用。

3.1.2.2各组小鼠体重变化，结果见表3。

表3各组小鼠体重变化表

由表3可知，菌粉组7d、14d和21d体重与空白对照组相比，差异不显著(p＞0.05)，所以各组样品灌胃20d对小鼠体重变化没影响。

3.1.2.3肝、脾、肾指数

各组小鼠肝、脾和肾都没有病变，肝、脾和肾指数见表4。

表4各组肝、脾、肾指数表

由表4可知，菌粉组与空白对照组相比，差异不显著(p＞0.05)。

3.1.3结论

灌胃样品前和灌胃样品20d后各组空腹血糖和进食2h血糖没有显著性差异(p＞0.05)，说明该降血糖益生菌制剂对正常小鼠血糖无影响。且菌粉组小鼠体重、肝指数、脾指数和肾指数与空白对照组小鼠也无显著性差异。

3.2预防糖尿病发病的动物试验

3.2.1材料与方法

材料：昆明小鼠购自山东鲁抗，益生菌粉实验室冻干，四氧嘧啶购自sigma公司。

试验分组及设计：选健康成年小鼠，按禁食3～5h的血糖水平分组，随机分为对照组和菌粉组。空白对照组正常饮食，不作处理。阴性对照组给予溶剂，菌粉组给予高剂量浓度益生菌粉，连续灌胃20d，禁食24h，尾静脉注射60mg/kg的四氧嘧啶，3～5d后测血糖，看各组血糖升高的情况，杀死小鼠、测脏器指数、肝糖原等指标。菌粉：人体剂量50亿。

3.2.2结果与分析

3.2.2.1造模后各组血糖情况

尾静脉注射四氧嘧啶3-5d后，阴性对照组及菌粉组血糖升高情况如图1所示。菌粉组血糖显著小于阴性对照组(p≤0.05)，说明菌粉有预防血糖升高的作用。

3.2.2.2造模后各组肝糖原

糖原是葡萄糖的储存形式。当机体细胞中能量充足时，葡萄糖转变成糖原而储存能量。机体糖原合成减少，分解增加，导致血糖升高，肝糖原、肌糖原降低。通过测定各组造模后肝糖原的量，验证菌粉降糖机理，结果如图2所示。与空白对照组和阴性对照组相比，菌粉组能明显提高高血糖小鼠肝糖原含量(P<0.05)，说明菌粉降血糖可能是通过调节糖代谢、促进肝糖原合成、减少肝糖原分解引起的。

3.3预防糖尿病并发症的动物实验

糖尿病并发症有几块，眼病、肾病、心脑血管疾病、足病，本试验主要针对心脑血管疾病，根据卫生部保健食品功能评价检验方法，在血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白三项指标检测中血清总胆固醇和甘油三酯二项指标阳性，可判定该受试样品辅助降血脂功能动物试验结果阳性，试验通过检测血液指标胆固醇、甘油三酯、高低密度脂蛋白来判定组方具不具有辅助降血脂的功能。

3.3.1材料与方法

材料：昆明小鼠购自山东鲁抗，益生菌粉实验室冻干，四氧嘧啶购自sigma公司，津力旺饮料购自以岭药业。

试验分组及设计：选健康成年小鼠，除空白对照组小鼠外，其余小鼠饲喂高脂料的同时，给予样品的灌胃，自然恢复组给予溶剂，剂量组给予各剂量浓度受试样品，剂量组包括阳性对照组(以岭药业的津力旺饮料)，剂量设定为人体剂量为58.33mL/kg；菌粉组，人体剂量50亿。25d尾静脉注射60mg/kg的四氧嘧啶，4d后测血糖，再继续灌胃样品，阳性对照组样品换成盐酸二甲双胍，小鼠剂量为200mg/kg，30d。每10d禁食测定血糖，30d杀死小鼠、取血、取内脏，测脏器指数、血液指标等。

3.3.2结果与分析

3.3.2.1样品保护下小鼠血糖升高情况

小鼠高脂料饲喂同时灌胃样品25d后，尾静脉注射四氧嘧啶，各组血糖升高情况如图3所示。血糖升高情况为菌粉＜自然恢复组＜阳性对照组，说明菌粉预防血糖升高的效果显著。

3.3.2.2样品预防糖尿病并发症结果

3.3.2.2.1高血糖小鼠灌胃样品30d内血糖变化

小鼠高脂饲料饲喂同时，阳性对照组灌胃盐酸二甲双胍，自然恢复组灌胃生理盐水，菌粉组灌胃益生菌粉，每10d禁食测定血糖，连续灌胃30d。30d内各组小鼠血糖变化结果如表5所示。

表5高血糖小鼠灌胃样品30d内血糖变化

由表5可知，菌粉组30d内血糖降低率持续增高，30d时达到48.44％，降糖效果显著，说明本发明的益生菌粉样品具有降血糖的作用。

3.3.2.2.2样品对高血糖小鼠体重的影响

小鼠高脂饲料饲喂同时，阳性对照组灌胃盐酸二甲双胍，自然恢复组灌胃生理盐水，菌粉组灌胃益生菌粉，每10d测定各组小鼠的平均体重，结果如图4所示。造模小鼠8周龄，处在生长发育期，造模后小鼠体重的增加比正常对照组要慢一些，结果与此一致。各组前10d体重增加低于正常对照组或跟正常对照组差异不显著；中间10d除阳性对照组外，各组体重有不同程度的增加，菌粉组体重增加最为显著；后30d，除正常对照组外，各组体重有不同程度的下降。总体来说，菌粉组小鼠生长情况良好。

3.3.2.2.3样品对高血糖小鼠肝、脾、肾指数的影响

小鼠高脂饲料饲喂同时，阳性对照组灌胃盐酸二甲双胍，自然恢复组灌胃生理盐水，菌粉组灌胃益生菌粉，30d杀死小鼠、取血、取内脏，测脏器指数，结果见表6。

表630d后各组肝、脾和肾指数表

由表6可知，肝指数顺序为：空白对照组﹥自然恢复组﹥阳性对照组﹥菌粉组，有些组之间存在显著差异，但肉眼观察各组肝脏也没有病变，肝脏指数小也不能说是肝脏萎缩。各组脾指数和肾指数差异不显著。

3.3.2.2.4灌胃样品30d后对高血糖小鼠血液指标的影响

小鼠高脂饲料饲喂同时，阳性对照组灌胃盐酸二甲双胍，自然恢复组灌胃生理盐水，菌粉组灌胃益生菌粉，30d杀死小鼠、取血、取内脏，测血液指标，结果如图5所示。总胆固醇是空白对照组<菌粉组<阳性对照组<自然恢复组，甘油三酯是阳性对照组<菌粉组<自然恢复组，高密度脂蛋白是>菌粉组>空白对照组>阳性对照组>自然恢复组，低密度脂蛋白是阳性对照组<菌粉组<空白对照组<自然恢复组。菌粉组2项与自然恢复组差异显著，根据卫生部保健食品功能评价检验方法，在血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白三项指标检测中血清总胆固醇和甘油三酯二项指标阳性，可判定该受试样品辅助降血脂功能动物试验结果阳性。所以该降血糖益生菌制剂有辅助降血脂的作用。

本发明的降血糖益生菌制剂，从健康人体内分离到3株益生菌菌株，3株菌株经液体发酵，发酵液离心收集菌体，加入保护剂，冻干成菌粉，3菌株冻干粉按比例复配，加入低聚糖混合物，混合均匀得降血糖益生菌制剂成品，经动物试验验证，具有很好的降血糖的作用。

本文虽然已经给出了本发明的一些实施例，但是本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明精神的情况下，可以对本文的实施例进行改变。上述实施例只是示例性的，不应以本文的实施例作为本发明权利范围的限定。

Claims (10)

1.一种降血糖益生菌制剂，其特征在于，包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024，干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)BLCC2-0003和婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)BLCC3-0002，所述嗜酸乳杆菌BLCC2-0024，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015129；所述干酪乳杆菌BLCC2-0003，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015125；所述婴儿双歧杆菌BLCC3-0002，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015124。

2.如权利要求1所述的降血糖益生菌制剂，其特征在于，所述降血糖益生菌制剂包括粉剂、片剂和胶囊。

3.如权利要求1或2任一项所述的降血糖益生菌制剂，其特征在于，所述降血糖益生菌制剂在预防及辅助降血糖的药物中的应用。

4.一种降血糖益生菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

取嗜酸乳杆菌BLCC2-0024、干酪乳杆菌BLCC2-0003和婴儿双歧杆菌BLCC3-0002菌株，分别经斜面培养基活化后，将活化后的菌株转接到一级种子培养基中，制得一级种子液；然后再将所述一级种子液转接入发酵培养基进行高密度培养；

待所述发酵培养基中菌体密度达到10⁸cfu/mL，收集发酵液；

将所述发酵液离心，收集获得菌体，加入保护剂，冻干成菌粉；

将冻干菌粉复配，加入低聚糖混合物，混合均匀即得到所述降血糖益生菌制剂。

5.如权利要求4所述的降血糖益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述菌株包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)BLCC2-0024，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015129；干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)BLCC2-0003，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015125；婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)BLCC3-0002，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2015124。

6.如权利要求5所述的降血糖益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述活化嗜酸乳杆菌BLCC2-0024和干酪乳杆菌BLCC2-0003的斜面培养基均为MRS固体培养基，所述MRS固体培养基以质量分数计包括：葡萄糖2.0％、柠檬酸铵0.2％、乙酸钠0.5％、磷酸氢二钾0.5％、硫酸锰0.02％、硫酸镁0.05％、蛋白胨1.0％、牛肉膏1.0％、酵母膏0.5％、土温-800.1％和琼脂粉1.5％，调pH5.8～6.0；所述一级种子培养基和所述发酵培养基均为不含琼脂的上述MRS液体培养基；所述MRS固体培养基活化培养条件为：25～40℃培养22～26h；所述一级种子培养基培养条件为：25～40℃条件下，静置培养12～24h；所述发酵培养基培养条件为：25～40℃条件下，间歇搅拌培养48～96h，搅拌速度为间歇搅拌100～200r/min，5～20min/2h。

7.如权利要求6所述的降血糖益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述活化婴儿双歧杆菌BLCC3-0002的斜面培养基为TPY固体培养基，所述TPY固体培养基以质量分数计包括：酪蛋白胨1％、大豆蛋白胨0.5％、酵母粉0.25％、磷酸氢二钾0.2％、MgCl₂·6H₂O0.05％、氯化钙0.015％、ZnSO₄·7H₂O0.025％、氯化铁0.01％、L-半胱氨酸盐酸盐0.005％、葡萄糖1.5％、吐温-800.1％和琼脂粉1.5％，调节pH至6.3～6.6，115℃条件下灭菌20min；所述一级种子培养基和上述发酵培养基均为不含琼脂的上述TPY液体培养基；所述TPY液体培养基活化培养条件为：32～40℃厌氧培养20～28h；一级种子培养基培养条件为：32～40℃条件下静置培养16～30h；发酵培养基培养条件为：28～40℃，初始pH值为6.0～7.0，发酵时间为48～96h。

8.如权利要求7所述的降血糖益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述一级种子液转接发酵培养基的接种量为1-5％。

9.如权利要求8所述的降血糖益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述保护剂以质量百分比分计，包括：90-98％的10％脱脂奶粉和2-10％的丙三醇。

10.如权利要求9所述的降血糖益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述冻干菌粉的复配比例为干酪乳杆菌BLCC2-0003：嗜酸乳杆菌BLCC2-0024：婴儿双歧杆菌BLCC3-0002＝2-4：2-5：3-5，所述降血糖益生菌制剂产品中3株菌菌落总数不少于2×10⁹cfu/g。