CN106727730A - 调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法，涉及一种调节机体免疫力抗癌生物制剂，特别是涉及一种由食药用真菌通过益生菌发酵制得的抗癌多元生物菌液。其目的是为了提供一种由食药用真菌通过益生菌发酵制得的具有抗癌、调节机体免疫力的生物菌液及其制备方法，该生物菌液可以做为生物药剂或养生保健功能性饮品应用，可直接饮用或和培养基液调配饮用。本发明的制备方法包括培养基的制备；接种；发酵。本发明的技术方案一方面使食药用真菌、益生菌、食药用真菌和益生菌发酵产生的次生代谢产物共同作用于人体达到三效合一之功效，另一方面使食药用真菌制剂获得良好的口感适于长期服用。本发明属于医药和保健养生领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种调节机体免疫力抗癌生物制剂，特别是涉及一种由食药用真菌通过益生菌发酵制得的抗癌多元生物菌液。
背景技术
近年来，人们对食药用真菌调节机体免疫力和抗癌作用的研究越来越深入，其作用机理越来越明确，效果越来越被证实，在医疗和养生保健领域的应用也越来越广泛。但在联合应用和新型制剂的开发方面尚显不足，尤其对适于长期服用口感较好效果显著的新型制剂的创新性开发尚显不足。
发明内容
本发明是为了解决以上技术问题而提供了一种由食药用真菌通过益生菌发酵制得的具有抗癌、调节机体免疫力的生物菌液及其制备方法，该生物菌液可以做为生物药剂或养生保健功能性饮品应用，可直接饮用或和培养基液(食药用真菌水煎液)调配饮用，一方面使食药用真菌、益生菌、食药用真菌和益生菌发酵产生的次生代谢产物共同作用于人体达到三效合一之功效，另一方面使食药用真菌制剂获得良好的口感适于长期服用。
本发明涉及一种调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
一、食药用真菌培养基的制备：按照质量份数分别称取干重为2～5份的食药用真菌、3～10份的碳源和100～200份的水，混合后加热至100℃，保持5～30min，冷却至1～45℃，过滤去除药渣后即制得食药用真菌培养基；
二、接种：将步骤一制得的食药用真菌培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的食药用真菌培养基中；
三、发酵：将培养容器用灭菌后的毛巾或纱布封口后，发酵温度为10～45℃，发酵7～60d，所得发酵液和发酵液即得本发明调节机体免疫力抗癌生物药剂或养生保健功能性饮品的生物菌液；
所述步骤一中的食药用真菌包括树舌(Ganoderma applanatum(Pers.exWallr.)Pat.)、云芝(Coriolus versicolor)、桦褐孔菌(Inonqqus obliquus)、木蹄层孔菌(Pyropolyporus fomentarius(L.Ex F.)Teng)、血红栓菌(Trametes sanguinea(L.:Fr.)Lloyd.)、灰树花(Grifola frondosa)、红缘层孔菌(Fomitopsis pinicola)、桑黄(Phellinus igniarius(L.ex Fr.)Quel.)、薄皮纤孔菌(Inonotus cuticularis(Bull.:Fr.)Karst.)、裂蹄木层孔菌(Phellinus linteus(Berk.et Cart.)Teng)、松针层孔菌(Phellinuspini.)、东方栓菌(Trametes orientalis(Yasuda)Imaz.)、粗毛褐孔菌别名粗毛黄孔菌(Xanthochrous hispidus)、肉球菌(En-gleromyces goetzi Henn)、姬松茸(Agaricus blazei Murr.)中的一种或多种；
所述步骤一中的碳源包括白糖、冰糖、麦芽糖、葡萄糖、蜂蜜、木糖醇中的一种或多种；
所述步骤二中的菌种包括醋酸菌(Acetobactersp)、酵母菌(Candida albicans)、乳酸菌(Lactobacillus acidophilus)、双歧杆菌(Bifidobacterium)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophylus)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、BF-839脆弱拟杆菌(B.fragilis-839)中的一种或多种。
优选地，所述步骤一中的食药用真菌为树舌、云芝、桦褐孔菌、木蹄层孔菌、血红栓菌和灰树花。
优选地，所述食药用真菌中树舌、云芝、桦褐孔菌、木蹄层孔菌、血红栓菌、灰树花的质量比为1:1:1:1:1:1。
优选地，所述步骤一中的食药用真菌还包括灵芝(FructificatioAmaurodermatis Rudae)和冬虫夏草(Cordyceps sinensis)。
优选地，所述食药用真菌中树舌、云芝、桦褐孔菌、木蹄层孔菌、血红栓菌、灰树花、灵芝、冬虫夏草的质量比为1:1:1:1:1:1:1:0.5。
优选地，所述步骤二中的菌种还包括嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、冠突散囊菌(Eurotium cristatum)。
优选地，所述步骤三中封口的毛巾的厚度为2～3层，封口的纱布厚度为5～8层。
优选地，所述步骤三中发酵温度为20～35℃。
本发明还涉及一种调节机体免疫力抗癌的生物菌液，所述药剂是由上述方法制备得到的。
本发明的步骤三中发酵结束后所获得的生物菌液可和食药用生物菌的水煎液调和饮用。
本发明调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法与现有技术不同之处在于：
本发明调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法
1、本发明的技术方案通过向食药用真菌和碳水化合物相配伍制作的培养基经接种单一或多元复合益生菌，也能像红茶菌一样快速发酵获得厚厚的菌膜和高浓度的多元菌共生液。
2、本发明的技术方案巧妙的利用了食药用真菌固有的生物活性、益生菌和发酵过程中的次生代谢产物液对人体发挥多重作用，使传统医学和现代生物技术完美结合服务于人类治疗和养生领域。
3、食药用真菌都已经现代医学和传统医学证实无明确毒性，本发明中用其作为培养基的原材料接种益生菌而获得的生物菌液具有双边安全性。
4、药用真菌大多味苦，长期服用难以坚持，本发明通过对食药用真菌的二次发酵改善了所取制剂的口味而形成即适于长期服用的治疗药剂又适于做为养生保健的日常功能性饮品
5、本发明的制备方法易于取材，工艺简单，易于推广。
具体实施方式
通过以下实施例和验证试验对本发明的调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法作进一步的说明。
实施例1
本实施例的调节机体免疫力抗癌的生物菌液按以下步骤制备：
一、食药用真菌培养基的制备：分别称取食药用真菌、碳源和水，混合后加热至100℃，保持30min，冷却至15℃，过滤去除药渣后即制得食药用真菌培养基；
二、接种：将步骤一制得的食药用真菌培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的食药用真菌培养基中；
三、发酵：将培养容器用灭菌后的毛巾封口，封口的毛巾的厚度为2层，，发酵温度为10℃，发酵8d，所得发酵液和发酵液即得本实施例的调节机体免疫力抗癌生物药剂或养生保健功能性饮品的生物菌液。
本实施例中培养基中食药用真菌的选择及用量见表1，碳源的选择及用量见表2，菌种的选择见表3。
实施例2
本实施例的调节机体免疫力抗癌的生物菌液按以下步骤制备：
一、食药用真菌培养基的制备：分别称取食药用真菌、碳源和水，混合后加热至100℃，保持5min，冷却至30℃，过滤去除药渣后即制得食药用真菌培养基；
二、接种：将步骤一制得的食药用真菌培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的食药用真菌培养基中；
三、发酵：将培养容器用灭菌后的纱布封口，封口的纱布厚度为8层，发酵温度为45℃，发酵30d，所得发酵液和发酵液即得本实施例的调节机体免疫力抗癌生物药剂或养生保健功能性饮品的生物菌液。
本实施例中培养基中食药用真菌的选择及用量见表1，碳源的选择及用量见表3，菌种的选择见表4。
实施例3
本实施例的调节机体免疫力抗癌的生物菌液按以下步骤制备：
一、食药用真菌培养基的制备：分别称取食药用真菌、碳源和水，混合后加热至100℃，保持15min，冷却至25℃，过滤去除药渣后即制得食药用真菌培养基；
二、接种：将步骤一制得的食药用真菌培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的食药用真菌培养基中；
三、发酵：将培养容器用灭菌后的纱布封口，封口的纱布厚度为6层，发酵温度为35℃，发酵60d，所得发酵液和发酵液即得本实施例的调节机体免疫力抗癌生物药剂或养生保健功能性饮品的生物菌液。
本实施例中培养基中食药用真菌的选择及用量见表1，碳源的选择及用量见表3，菌种的选择见表4，其中序号10的实施例中还包括5g灵芝和5g冬虫夏草。
实施例4
本实施例的调节机体免疫力抗癌的生物菌液按以下步骤制备：
一、食药用真菌培养基的制备：分别称取食药用真菌、碳源和水，混合后加热至100℃，保持10min，冷却至45℃，过滤去除药渣后即制得食药用真菌培养基；
二、接种：将步骤一制得的食药用真菌培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的食药用真菌培养基中；
三、发酵：将培养容器用灭菌后的毛巾封口，封口的毛巾的厚度为3层，发酵温度为20℃，发酵10d，所得发酵液和发酵液即得本实施例的调节机体免疫力抗癌生物药剂或养生保健功能性饮品的生物菌液。
本实施例中培养基中食药用真菌的选择及用量见表2，碳源的选择及用量见表3，菌种的选择见表4。
实施例5
本实施例的调节机体免疫力抗癌的生物菌液按以下步骤制备：
一、食药用真菌培养基的制备：分别称取食药用真菌、碳源和水，混合后加热至100℃，保持25min，冷却至1℃，过滤去除药渣后即制得食药用真菌培养基；
二、接种：将步骤一制得的食药用真菌培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的食药用真菌培养基中；
三、发酵：将培养容器用灭菌后的纱布封口，封口的纱布厚度为5层，发酵温度为30℃，发酵7d，所得发酵液和发酵液即得本实施例的调节机体免疫力抗癌生物药剂或养生保健功能性饮品的生物菌液。
本实施例中培养基中食药用真菌的选择及用量见表2，碳源的选择及用量见表3，菌种的选择见表4。
表1实施例1-3中食药用真菌的选择及用量(单位：g)
注：上表中未填写即为无。
表2实施例4和5中食药用真菌的选择及用量(单位：g)
注：上表中未填写即为无。
表3实施例1-5中碳源的选择及用量和水的用量(单位：g)
注：上表中未填写即为无。
表4实施例1-5中菌种的选择及用量(单位：g)
注：上表中未填写即为无。
验证试验
对比观察本发明木蹄层孔菌多元生物菌液与同等剂量的木蹄层孔菌水煎液治疗早期胃癌的效果。
方法：将36例早期胃癌患者随机分为本发明观察组和木蹄层孔菌水煎液对照组，分别采用本发明生物菌液和木蹄层孔菌水煎液治疗，连用三个月，判断总有效率。
结论：本发明组有效率89％(18/16)。木蹄层孔菌水煎液组有效率50％(18/9),差异有显著性(p<0.05)。结论本发明治疗早期胃癌的有效率高于照组。
早期胃癌典型症状：
上腹痛、恶心、食欲不振、消瘦等，随着病情发展，胃的功能和周身状况逐渐发生改变，这些症状常无特异性，可时隐时现，可长期存在。如上腹胀痛、钝痛、隐痛，恶心，食欲不振，嗳气和消瘦等；少数溃疡型(Ⅱc型和Ⅲ型)早期胃癌也可有溃疡样症状，呈节律性疼痛，反酸，内科治疗可缓解等。有的患者胃癌与某些良性病变共存或在某些良性病变的基础上(如慢性萎缩性胃炎，消化性溃疡等)发生癌变，某些早期胃癌也可以出现呕血，黑便，或吞咽困难等症状而就诊。肿瘤侵犯仅限于浅层。
1临床资料
1.1一般资料
实验验证选取早期胃癌患者36例并随机分成观察组和对照组，也就是本发明治疗组18例，对照组木蹄层孔菌水煎液治疗组18例。观察组男性9例，女性9例，年龄56岁-69，平均年龄62岁。对照组男性9例，女性9例，年龄52岁-70，平均年龄61岁。两组临床资料经检验p>0.05,差异无显著性。
1.2诊断标准
1.2.1病史：无肿瘤发病史。
1.2.2临床表现：上腹痛、恶心、食欲不振、消瘦。
1.2.3检查：
经胃镜和病理切片确诊为胃恶性肿瘤，瘤体大小最大直径都在1cm以下，仅浅层侵犯。
2治疗方法
本发明观察组采用：经发酵三周的木蹄层孔菌多元生物菌液(基料35克/100ML，发酵菌种为醋酸菌、乳酸菌、酵母菌、双歧杆菌、F-839脆弱拟杆菌)，每次口服300ML，每天三次，连用两个月。对照组采用：木蹄层孔菌水煎液(木蹄层孔350克，水1000ML)，每次口服300ML，每天三次，连用两个月。停药三天后进行临床检查，记录结果。
3治疗结果
3.1疗效判定：
治愈：治疗后临床症状及体征消失，肿瘤消失，一年内无复发。
显效：治疗后临床症状及体征明显好转，肿瘤缩小。
无效：治疗后临床症状、体征及瘤体大小无明显改变。
3.3结果
3.3.1效果:
本发明观察组18例,有效16例，总有效率89％。其中：治愈2例，显效14例，无效2例。对照组18例，有效9例，总有效率50％；其中：治愈无，显效9例，无效9例，治愈无。两组总有效率比较差异有显著性(p<0.05)，见表5。
表5两组疗效比较
| 组别 | 例数 | 痊愈 | 显效 | 无效 | 有效率 |
| 本发明观察组 | 18 | 2 | 14 | 2 | 89％ |
| 水煎液对照组 | 18 | 无 | 9 | 9 | 50％ |
p<0.05差异有显著性。
本发明其他实施例疗效验证典型例：
1、李某某，女，58岁，胰腺癌。
自述：腹痛、腹胀，黄疸，呕吐泛酸，上腹部隐痛向背、前胸、右肩胛部放射。外院增强CT提示：胰头占位癌，后行胰腺癌姑息治疗术后35天，
患者曾在外院开腹后发现晚期肿瘤无法切除，给予保守治疗，放化疗以及生其他中药治疗，6周化疗身体虚弱，中医治疗效果欠佳，致使患者一般情况极差差，消瘦，睡眠不好，精神欠佳，恶病质状态。
查体腹软，右腹部可见一长约18cm手术疤痕，愈合尚可。剑突下可触及质硬包块，边界不清。
外院增强CT示：胰头占位癌。
给予本发明基料为血红栓菌的多元生物菌液(基料45克/100ML，发酵菌种为醋酸菌、乳酸菌、酵母菌、双歧杆菌、F-839脆弱拟杆菌)，治疗，1月后精神明显好转，腹痛、腹胀，呕吐，泛酸好转，继续服用本产品2月后，患者体重增加3公斤，瘤体缩小1/3，获得良好效果，目前患者仍在服药中。
2、曹某，男，62岁，乙状结肠癌术后。
患者1年前在医院查出乙状结肠癌，后在其他医院行乙状结肠癌根治并结肠造瘘，术后恢复一般，化疗6周，后复发又作了切除及化疗，不久前感觉右上腹隐疼，CT查出肝部又有包块。显示肝内有38*45mm稍高回声肿块，提示肝内占位性病变。由于患者体质差，老年男性，患有冠心病、高血压、糖尿病，身体状况不能适应多疗程的化疗和继续手术。
查体：右上腹压痛，消瘦、轻度黄疸，未出现腹水。
给予本发明基料为木蹄层孔菌、裂蹄木层孔菌、松针层孔菌、东方栓菌、血红栓菌、灵芝、冬虫夏草的生物菌液治疗，服药10天后，黄疸消失，服药一月，腹痛，腹胀症状好转，继续服药，3月后复查肝区肿块明显缩小，CT检查以前38*45mm肿块，缩小至22*26mm，目前仍在服药中。
3、张某某，男，73岁，肾盂癌。
患者因尿频、尿急、尿痛、血尿、脓尿，就医。诊断为“肾盂肾炎”给予抗炎对症治疗，效果欠佳。半年前上述症状加重，尿血加重，血色鲜红，腰痛加剧，医院CT检查，确诊为”确诊为“右肾盂癌”，由于患者年岁已高，患有心脏病，家属拒绝接受手术及放化疗治疗。
给予本发明基料为红缘层孔菌、桑黄、薄皮纤孔菌、粗毛褐孔菌、灰树花、肉球菌、灵芝治疗，服药一个月后病情平稳。服药2月，血尿、脓尿症状好转，但时有，尿频、尿急、尿痛，2年来，患者一致坚持服药，期间未作任何放、化疗治疗，也未服过其它抗癌药物。虽然有时会反复尿频、尿痛，但精神、饮食良好，生活质量较高，达到了服药治疗带瘤生存的理想效果。
4、吴某，女，76岁，食道鳞状上皮癌。
患者大约半年前无明显诱因出现进食困难，进硬食梗阻不能下咽，只能进少量流食，胃镜检查，食道左侧壁见一不规则隆起环，病理学检查示：食道鳞状上皮癌。由于患者年岁较大，医院建议保守治疗，经西医中医各种治疗效果欠佳，经人介绍来诊。
主诉：进食困难，胸背部疼痛，剑突下烧灼感、针刺样痛加重半月。
经给予本发明基料为木蹄层孔菌、红缘层孔菌、桑黄、薄皮纤孔菌、粗毛褐孔菌、灰树花、肉球菌的生物菌液，半个月后，进食梗阻症状减轻，食欲有所增强，后来又连续服用3月后。全身症状明显恢复，食欲大增，无进食困难症状。目前仍在坚持服药。
5、高某，女，45岁。
患者1年前胃肠不适，腹胀、食欲不振、腰腹部隐痛，经消化科检查没有发现胃肠道疾病，妇科检查诊断为卵巢肿瘤。后行手术治疗。术后实施以化疗，化疗8周期后，恢复尚可。而后偶尔发现右下腹部有一肿块，质硬，按压疼痛加剧。
经原医院检查诊为：卵巢癌盆腔淋巴转移。
来诊时患者腹痛，右下肢肿胀，行走困难；伴头晕头痛、乏力、不思饮食、手足麻木。检查见形体消瘦，痛苦面容，腹部坚硬，压痛明显。
给予本发明基料为裂蹄木层孔菌、松针层孔菌灵芝、红缘层孔菌、桑黄、薄皮纤孔菌、粗毛褐孔菌的生物菌液，连服60天后，腹部坚硬肿块变软，按压无疼痛，饮食增加，大小便正常。后又连续服药3月，腹部肿块消失，一年后复查，卵巢及腹部未见病灶。
6、张某，女，60岁，肺癌晚期。
患者于2014年6月份初发现自己咳嗽明显增多，且多伴有血丝，到医院进行CT、PE-CT等多种检查，诊断为肺部原位癌晚期，同时转移至纵膈淋巴并有向腰椎转移迹象。于7月份开始做放疗6个疗程后，检查报告显示，肿瘤得到明显控制，原病灶明显缩小。于是出院，在家里休养。休养期间口服西药及喝中药。大约半年后复查报告显示，病灶又开始增大，并转移腰椎。家属担心患者身体虚弱无法承受化疗，拒绝继续化疗，只能继续口服西药和中药调理。但是服药期间复查，癌症细胞并未得到控制。
给予本发明基料为：树舌、云芝、桦褐孔菌、血红栓菌、灵芝、冬虫夏草的生物菌液进行治疗，服药一个月后病情平稳。服药2月，咳血等症状明显好转，病灶明显缩小。达到了服药治疗带瘤生存的理想效果。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式作出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
一、食药用真菌培养基的制备：按照质量份数分别称取干重为2～5份的食药用真菌、3～10份的碳源和100～200份的水，混合后加热至100℃，保持5～30min，冷却至1～45℃，过滤去除药渣后即制得食药用真菌培养基；
二、接种：将步骤一制得的食药用真菌培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的食药用真菌培养基中；
三、发酵：将培养容器用灭菌后的毛巾或纱布封口后，发酵温度为10～45℃，发酵7～60d，所得发酵液和发酵液即得本发明调节机体免疫力抗癌生物药剂或养生保健功能性饮品的生物菌液；
所述步骤一中的食药用真菌包括树舌、云芝、桦褐孔菌、木蹄层孔菌、血红栓菌、灰树花、红缘层孔菌、桑黄、薄皮纤孔菌、裂蹄木层孔菌、松针层孔菌、东方栓菌、粗毛褐孔菌、肉球菌、姬松茸中的一种或多种；
所述步骤一中的碳源包括白糖、冰糖、麦芽糖、葡萄糖、蜂蜜、木糖醇中的一种或多种；
所述步骤二中的菌种包括醋酸菌、酵母菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、BF-839脆弱拟杆菌中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法，其特征在于：所述步骤一中的食药用真菌为树舌、云芝、桦褐孔菌、木蹄层孔菌、血红栓菌和灰树花。
3.根据权利要求2所述的调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法，其特征在于：所述食药用真菌中树舌、云芝、桦褐孔菌、木蹄层孔菌、血红栓菌、灰树花的质量比为1:1:1:1:1:1。
4.根据权利要求2所述的调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法，其特征在于：所述步骤一中的食药用真菌还包括灵芝和冬虫夏草。
5.根据权利要求4所述的调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法，其特征在于：所述食药用真菌中树舌、云芝、桦褐孔菌、木蹄层孔菌、血红栓菌、灰树花、灵芝、冬虫夏草的质量比为1:1:1:1:1:1:1:0.5。
6.根据权利要求1所述的调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法，其特征在于：所述步骤二中的菌种还包括嗜热链球菌、粪肠球菌、冠突散囊菌。
7.根据权利要求1所述的调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法，其特征在于：所述步骤三中封口的毛巾的厚度为2～3层，封口的纱布厚度为5～8层。
8.根据权利要求1所述的调节机体免疫力抗癌的生物菌液及其制备方法，其特征在于：所述步骤三中发酵温度为20～35℃。
9.一种调节机体免疫力抗癌的生物菌液，其特征在于：所述药剂是由权利要求1中所述的方法制备得到的。
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