CN113621673B - 复合菌株发酵人参的方法及发酵产物和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种复合菌株发酵人参的方法及发酵产物和用途。其制备方法包括如下步骤：（1）将人参粉加水制备发酵匀浆，加入维生素C，调节发酵匀浆的pH为3.0~6.0；（2）向所述发酵匀浆中加入酶解剂，在50~60℃下酶解120~180min，调节pH到5.5~7.0，得到酶解液；（3）将所述酶解液在60~90℃下保温35~55min，得到灭菌液；（4）将所述灭菌液降温至10~30℃，向灭菌液中加入发酵菌粉溶液，以接入发酵菌粉溶液开始计时，在发酵温度20~30℃下发酵24~72h，得到发酵液。该方法可以提高发酵液中人参稀有皂苷Rg3的含量。
Description
技术领域
本发明属于发酵领域，具体涉及一种复合菌株发酵人参的方法及发酵产物和用途。
背景技术
人参为五加科人参属人参的干燥根，《神农本草经》列其为上品，称其补五脏、安精神、止惊悸、明目益智，久服有轻身延年的功效，广泛应用于保健和医疗，2012年被确定为新资源食品。现代药理分析人参含有人参皂苷、人参多糖、人参醇、挥发油、维生素（B1、B2、C）、氨基酸及多种微量元素等。其中，人参皂苷是人参的主要活性成分。目前已发现五加科植物中的原型人参皂苷有60多种，包括主要人参皂苷，如Rb1，Rd，Re和稀有人参皂苷Rg3，Rh1，Rh2，主要人参皂苷的含量占总人参皂苷含量的80%左右，主要皂苷可以转化为稀有人参皂苷。稀有人参皂苷Rg3是一种人参二醇类四环三萜皂苷，其化学式为：C42H72O13，分子量为：784.50。研究证明，人参皂苷Rg3具有抗肿瘤、舒张血管，增强免疫力及抗疲劳的功效。人参中皂苷由于其结构复杂，化学合成尚不可行，需从三七、人参、等植物中提取获得。
现代中药发酵是一种新工艺，它将发酵过程等现代工艺与传统中药发酵相结合，发酵过程主要是在中药材中加入一种或多种有益菌群，利用微生物生长代谢过程中产生的酶与中药中复杂的有效成分发生反应，这样既能提高有效成分含量，又能利用酶的催化作用加速反应的完成。已在提取人参皂苷的领域被广泛应用。
例如，中国专利CN111363774A公开了一种发酵乳杆菌发酵人参的方法及其人参发酵产物和用途，其包括如下步骤：(1)将人参粉末加水制备人参匀浆，灭菌，得到人参灭菌液；其中，人参匀浆中人参添加量为5～12wt％；(2)所述人参灭菌液冷却后接种发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)种子液，在24～36℃的发酵温度下进行摇床发酵，摇床转速为100～300rmp，发酵时间为20～50h，得到人参发酵产物；其中，所述发酵乳杆菌种子液为采用MRS液体培养基制备的发酵乳杆菌种子液；所述发酵乳杆菌种子液的活菌数为106～108CFU/mL；发酵乳杆菌种子液的接种量为人参灭菌液的重量的2～6wt%。然而该专利发酵产物重点在于制备人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、 人参皂苷Rc、人参皂苷Rd，用于抗氧化产品的用途，而非对稀有人参皂苷Rg3的研究。
发明内容
为此，本发明的目的在于提供一种复合菌株发酵人参的方法，该方法可以提高发酵液中人参稀有皂苷Rg3的含量。
本发明的另一个目的在于提供上述方法得到的人参发酵产物，其中稀有人参皂苷Rg3含量明显提高。
本发明的再一个目的在于提供一种发酵人参制剂，采用上述发酵人参产物添加适宜的辅料，用常规的方法制备成口服液、粉剂或膏剂，既可为终产品，也可以为原料使用。
本发明的再一个目的在于，提供上述发酵人参产物和发酵人参制剂在用于制备抗疲劳产品中的用途。
本发明的技术方案为：
一种复合菌株发酵人参的方法，包括如下步骤：（1）将人参粉加水制备发酵匀浆，加入维生素C，调节发酵匀浆的pH为3.0~6.0；（2）向所述发酵匀浆中加入酶解剂，在50~60℃下酶解120~180min，调节pH到5.5~7.0，得到酶解液；（3）将所述酶解液在60~90℃下保温35~55min，得到灭菌液；（4）将所述灭菌液降温至10~30℃，向灭菌液中加入发酵菌粉溶液，以接入发酵菌粉溶液开始计时，在发酵温度20~30℃下发酵24~72h，得到发酵液；其中所述发酵菌粉溶液由重量比为1:10的发酵菌粉与水配制得到；其中，所述发酵菌粉按重量份数计，由0.1~1份干酪乳杆菌、0.1~1份保加利亚乳杆菌、0.1~1份嗜酸乳杆菌、0.1~1份德氏乳杆菌、0.1~1份肠膜明串珠菌肠膜亚种、0.1~1份植物乳杆菌、0.1~1份乳双歧杆菌和0.1~1份青春双歧杆菌组成；所述酶解剂由纤维素酶，果胶酶，酸性蛋白酶和中温淀粉酶组成。
优选的，所述发酵菌粉中干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌、 嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、肠膜明串珠菌肠膜亚种、植物乳杆菌、乳双歧杆菌和青春双歧杆菌的重量比为1:1:1:1:1:1:1:1；所述干酪乳杆菌的有效菌含量为1800~2500亿CFU/g；保加利亚乳杆菌的有效菌含量为1800~2500亿CFU/g；嗜酸乳杆菌的有效菌含量为1800~2500亿CFU/g；德氏乳杆菌的有效菌含量为1800~2500亿CFU/g；肠膜明串珠菌肠膜亚种的有效菌含量为1800~2500亿CFU/g；植物乳杆菌的有效菌含量为1800~2500亿CFU/g份；乳双歧杆菌的有效菌含量为1800~2500亿CFU/g；青春双歧杆菌的有效菌含量为1800~2500亿CFU/g。
优选的，所述人参粉与所述酶解剂的重量为（7~12）:1。
进一步优选的，所述酶解剂中纤维素酶，果胶酶，酸性蛋白酶和中温淀粉酶的重量比为 1:1:1:1。
优选的，所述人参粉和所述发酵菌粉的重量比为（400~650）:1 。
进一步，优选的，所述步骤（1）中所述人参粉和所述维生素C的重量比（45~65）：1；所述人参粉和水的重量比为1：（6~9）。
优选的，所述步骤（1）中还可以加入碳酸氢钠调节发酵匀浆的pH；所述步骤（2）中选用碳酸氢钠调节pH。
一种发酵人参产物，采用上所述的复合菌株发酵人参的方法制备得到。
一种发酵人参制剂，制备方法为，将发酵人参产物添加适宜的辅料，用常规的方法制备成口服液、粉剂或膏剂。
根据上述人参发酵产物或上述发酵人参制剂在用于制备抗疲劳产品中的用途。
本发明技术方案，具有如下优点：
1、本发明提供了一种复合菌株发酵人参的方法，在发酵匀浆中添加维生素C调节发酵匀浆的pH为3.0-6.0，有利于酶解时保持酶的活性；而加入纤维素酶，果胶酶，酸性蛋白酶和中温淀粉酶作为酶解剂，其中纤维素酶能够将人参粉中纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质，果胶酶能够水解果胶使植物细胞壁解体，酸性蛋白酶能够有效水解蛋白质，中温淀粉酶能够使淀粉液化更彻底，四种酶解剂协同配合达到快速分解人参中的纤维素、果胶、蛋白质和淀粉的功效，使纤维素、果胶等成分经过酶的作用转化成葡萄糖，蛋白质分解成氨基酸，利于后续菌种更加迅速的获取营养，促成菌种的快速生长，进而产生更多的酶系，为Rg3的高产出提供能量；酶解后由于酶解液氨基酸中羧基的解离度远大于氨基的解离度，氨基酸的溶液会释放出大量的质子，导致的pH值下降，不利于益生菌的快速生长，因而酶解后调节酶解液pH至5.5至7.0，即弱酸性，有利于益生菌的快速生长繁殖；发酵前进行灭菌有利于去除发酵液中的有害细菌；本发明发现发酵菌粉由干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、肠膜明串珠菌肠膜亚种、植物乳杆菌、乳双歧杆菌和青春双歧杆菌组成时，上述乳酸菌菌株协同配合在发酵过程中可产生β-葡萄糖苷酶，其具有水解人参皂苷葡萄糖苷的特性，使得得到的发酵液中人参皂苷Rg3含量显著提高。
2、本发明提供的复合菌株发酵人参的方法，人参粉和发酵菌粉重量在（400~650）:1范围时，发酵菌粉中各菌株重量比为干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、肠膜明串珠菌肠膜亚种、植物乳杆菌、乳双歧杆菌和青春双歧杆菌的重量比为1:1:1:1:1:1:1:1，得到的发酵液中人参皂苷Rg3含量较高。
3、本发明提供的复合菌株发酵人参的方法，人参粉和酶解剂的重量比为（7~12）:1，酶解剂中纤维素酶，果胶酶，酸性蛋白酶和中温淀粉酶的重量比为1:1:1:1，能够让菌种更加迅速的获取营养，促成菌种的快速生长，进而产生更多的酶系，为Rg3的高产出提供能量。
4、本发明提供的复合菌株发酵人参的方法，将发酵液制备成粉剂，携带方便，可用于产品原料，应用范围广泛，不再局限于液体剂型，可应用于固体饮料或片剂等。
具体实施方式
为使本发明的目的，技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施方式做进一步的详细描述。基于本发明公开中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本公开保护的范围。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内文献所描述的常规步骤的操作或条件即可进行。所有试剂未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
人参粉为将挑拣干净的人参进行粉碎，使用60目筛网对粉碎好的人参粉进行过筛得到。
实施例1
本实施例提供了一种复合菌株发酵人参制备得到人参发酵液的方法，包括如下步骤：
（1）将480g人参粉同3300mL水混合均匀制备发酵匀浆，加入8g维生素C，搅拌均匀后，加入碳酸氢钠调节发酵匀浆的pH至4.8；
（2）向所述发酵匀浆中加入12g纤维素酶、12g果胶酶、12g酸性蛋白酶和12g中温淀粉酶，在60℃下搅拌酶解120min后，加入碳酸氢钠调节pH至5.6，得酶解液；其中，纤维素酶的酶活力为2万U/g；果胶酶的酶活力为3万U/g；酸性蛋白酶的酶活力为4000U/g；中温淀粉酶的酶活力为1万U/g；
（3）将酶解液在温度为90℃的条件下保温35min，得到灭菌液；
（4）将灭菌液降温至室温30℃后，加入发酵菌粉溶液，以接入发酵菌粉溶液计时，控制温度为30℃，发酵72h，得到发酵液；
其中发酵菌粉溶液由0.8g发酵菌粉与8g水配制得到；所述发酵菌粉由0.1g干酪乳杆菌、0.1g保加利亚乳杆菌、0.1g嗜酸乳杆菌、0.1g德式乳杆菌、0.1g肠膜明串珠菌肠膜亚种、0.1g植物乳杆菌、0.1g乳双歧杆菌和0.1g青春双歧杆菌组成。干酪乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；保加利亚乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；嗜酸乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；德氏乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；肠膜明串珠菌肠膜亚种的有效菌含量为2000亿CFU/g；植物乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；乳双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；青春双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g。
实施例2
本实施例提供了一种复合菌株发酵人参制备得到人参发酵液的方法，包括如下步骤：
（1）将540g人参粉同3240mL水混合均匀制备发酵匀浆，加入12g维生素C，搅拌均匀后，加入碳酸氢钠调节发酵匀浆的pH至3.0；
（2）向所述发酵匀浆中加入19g纤维素酶、19g果胶酶、19g酸性蛋白酶和19g中温淀粉酶，在50℃下搅拌酶解180min后，加入碳酸氢钠调节pH至7.0，得酶解液；其中，纤维素酶的酶活力为2万U/g；果胶酶的酶活力为3万U/g；酸性蛋白酶的酶活力为4000U/g；中温淀粉酶的酶活力为1万U/g；
（3）将酶解液在温度为60℃的条件下保温55min，得到灭菌液；
（4）将灭菌液降温至室温20℃后，加入发酵菌粉溶液，以接入发酵菌粉溶液计时，控制温度为20℃，发酵24h，得到发酵液；
其中发酵菌粉溶液由1.2g发酵菌粉与12g水配制得到；所述发酵菌粉由0.15g干酪乳杆菌、0.15g保加利亚乳杆菌、0.15g嗜酸乳杆菌、0.15g德式乳杆菌、0.15g肠膜明串珠菌肠膜亚种、0.15g植物乳杆菌、0.15g乳双歧杆菌和0.15g青春双歧杆菌组成。干酪乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；保加利亚乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；嗜酸乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；德氏乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；肠膜明串珠菌肠膜亚种的有效菌含量为2000亿CFU/g；植物乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；乳双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；青春双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g。
实施例3
本实施例提供了一种复合菌株发酵人参制备得到人参发酵液的方法，包括如下步骤：
（1）将540g人参粉同4800mL水混合均匀制备发酵匀浆，加入8.5g维生素C，搅拌均匀后，加入碳酸氢钠调节发酵匀浆的pH至6.0；
（2）向所述发酵匀浆中加入11g纤维素酶、11g果胶酶、11g酸性蛋白酶和12g中温淀粉酶，在60℃下搅拌酶解120min后，加入碳酸氢钠调节pH至5.6，得酶解液；其中，纤维素酶的酶活力为2万U/g；果胶酶的酶活力为3万U/g；酸性蛋白酶的酶活力为4000U/g；中温淀粉酶的酶活力为1万U/g；
（3）将酶解液在温度为90℃的条件下保温35min，得到灭菌液；
（4）将灭菌液降温至室温30℃后，加入发酵菌粉溶液，以接入发酵菌粉溶液计时，控制温度为30℃，发酵72h，得到发酵液；
其中发酵菌粉溶液由0.84g发酵菌粉与8.4g水配制得到；所述发酵菌粉由0.105g干酪乳杆菌、0.105g保加利亚乳杆菌、0.105g嗜酸乳杆菌、0.105g德式乳杆菌、0.105g肠膜明串珠菌肠膜亚种、0.105g植物乳杆菌、0.105g乳双歧杆菌和0.105g青春双歧杆菌组成。干酪乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；保加利亚乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；嗜酸乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；德氏乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；肠膜明串珠菌肠膜亚种的有效菌含量为2000亿CFU/g；植物乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；乳双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；青春双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g。
实施例4
本实施例提供了一种复合菌株发酵人参制备得到人参发酵液的方法，包括如下步骤：
（1）将480g人参粉同3300mL水混合均匀制备发酵匀浆，加入8g维生素C，搅拌均匀后，加入碳酸氢钠调节发酵匀浆的pH至4.8；
（2）向所述发酵匀浆中加入12g纤维素酶、12g果胶酶、12g酸性蛋白酶和12g中温淀粉酶，在60℃下搅拌酶解120min后，加入碳酸氢钠调节pH至5.6，得酶解液；其中，纤维素酶的酶活力为2万U/g；果胶酶的酶活力为3万U/g；酸性蛋白酶的酶活力为4000U/g；中温淀粉酶的酶活力为1万U/g；
（3）将酶解液在温度为90℃的条件下保温35min，得到灭菌液；
（4）将灭菌液降温至室温30℃后，加入发酵菌粉溶液，以接入发酵菌粉溶液计时，控制温度为30℃，发酵72h，得到发酵液；
其中发酵菌粉溶液由0.84g发酵菌粉与8.4g水配制得到；所述发酵菌粉由0.01g干酪乳杆菌、0.2g保加利亚乳杆菌、0.01g嗜酸乳杆菌、0.2g德式乳杆菌、0.01g肠膜明串珠菌肠膜亚种、0.2g植物乳杆菌、0.01g乳双歧杆菌和0.2g青春双歧杆菌组成。。干酪乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；保加利亚乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；嗜酸乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；德氏乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；肠膜明串珠菌肠膜亚种的有效菌含量为2000亿CFU/g；植物乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；乳双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；青春双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g。
实施例5
本实施例提供了一种复合菌株发酵人参制备得到人参发酵液的方法，包括如下步骤：
（1）将500g人参粉同3400mL水混合均匀制备发酵匀浆，加入10g维生素C，搅拌均匀后，加入碳酸氢钠调节发酵匀浆的pH至4.8；
（2）向所述发酵匀浆中加入14g纤维素酶、14g果胶酶、14g酸性蛋白酶和14g中温淀粉酶，在63℃下搅拌酶解140min后，加入碳酸氢钠调节pH至5.6，得酶解液；其中，纤维素酶的酶活力为3万U/g；果胶酶的酶活力为3.5万U/g；酸性蛋白酶的酶活力为3800U/g；中温淀粉酶的酶活力为1.2万U/g；
（3）将酶解液在温度为92℃的条件下保温37min，得到灭菌液；
（4）将灭菌液降温至室温28℃后，加入发酵菌粉溶液，以接入发酵菌粉溶液计时，控制温度为28℃，发酵68h，得到发酵液；
其中发酵菌粉溶液由1.2g发酵菌粉与12g水配制得到；所述发酵菌粉由0.15g干酪乳杆菌、0.15g保加利亚乳杆菌、0.15g嗜酸乳杆菌、0.15g德式乳杆菌、0.15g肠膜明串珠菌肠膜亚种、0.15g植物乳杆菌、0.15g乳双歧杆菌和0.15g青春双歧杆菌组成。干酪乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；保加利亚乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；嗜酸乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；德氏乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；肠膜明串珠菌肠膜亚种的有效菌含量为2000亿CFU/g；植物乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；乳双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；青春双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g。
实施例6
本实施例提供了一种发酵人参粉，包括如下步骤：
（1）将实施例1制备得到的发酵液进行离心，离心转速4000rpm/min，时间10min，取上清液；
（2）将上清液浓缩至原有发酵液体积的25%，固形物含量在40%，得浓缩产物；
（3）将浓缩产物加入300g的麦芽糊精，混合后进行喷雾干燥得发酵人参粉，喷雾干燥条件为入口温度115℃，鼓风机功率20%，进料速度8mL/min。
实施例7
本实施例提供了一种发酵人参浸膏，包括如下步骤：
（1）将实施例1制备得到的发酵液进行离心，离心转速4000rpm/min，时间10min，取上清液；
（2）将上清液浓缩至原有发酵液体积的25%，固形物含量在40%，得浓缩产物，的发酵浸膏。
对比例1
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.8g干酪乳杆菌组成。其余同实施例1。
对比例2
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.8g保加利亚乳杆菌组成。其余同实施例1。
对比例3
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.8g德式乳杆菌组成。其余同实施例1。
对比例4
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.8g嗜酸乳杆菌组成。其余同实施例1。
对比例5
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.8g肠膜明串珠菌肠膜亚种组成。其余同实施例1。
对比例6
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.8g植物乳杆菌组成。其余同实施例1。
对比例7
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.8g乳双歧杆菌组成。其余同实施例1。
对比例8
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.8g青春双歧杆菌组成。其余同实施例1。
对比例9
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.4g青春双歧杆菌和0.4g植物乳杆菌组成。其余同实施例1。
对比例10
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.4g乳双歧杆菌和0.4g植物乳杆菌组成。其余同实施例1。
对比例11
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.4g保加利亚乳杆菌和0.4g植物乳杆菌组成。其余同实施例1。
对比例12
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉由0.2g干酪乳杆菌、0.2g保加利亚乳杆菌、0.2g肠膜明串珠菌肠膜亚种和0.2g植物乳杆菌组成。其余同实施例1。
对比例13
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉0.16g干酪乳杆菌、0.16g保加利亚乳杆菌、0.16g嗜酸乳杆菌、0.16g肠膜明串珠菌肠膜亚种和0.16g植物乳杆菌组成。其余同实施例1。
对比例14
该对比例同实施例1的区别在于，发酵菌粉中菌株种类不同，本对比例中发酵菌粉0.13g干酪乳杆菌、0.13g保加利亚乳杆菌、0.13g嗜酸乳杆菌、0.13g肠膜明串珠菌肠膜亚种、0.13g乳双歧杆菌和0.15g植物乳杆菌组成。其余同实施例1。
对比例15
本对比例提供了一种复合菌株发酵人参制备得到人参发酵液的方法，包括如下步骤：
（1）将480g人参粉同3300mL水混合均匀制备发酵匀浆，加入8g维生素C，搅拌均匀后，加入碳酸氢钠调节发酵匀浆的pH至4.8；
（2）将所述发酵匀浆在温度为90℃的条件下保温35min，得到灭菌液；
（3）将所述灭菌液降温至室温30℃后，控制温度为30℃，保温72h，得到发酵液。
对比例16
本对比例提供了一种复合菌株发酵人参制备得到人参发酵液的方法，包括如下步骤：
（1）将480g人参粉同3300mL水混合均匀制备发酵匀浆，加入8g维生素C，搅拌均匀后，加入碳酸氢钠调节发酵匀浆的pH至4.8；
（2）将发酵匀浆在温度为90℃的条件下保温35min，得到灭菌液；
（3）将灭菌液降温至室温30℃后，加入发酵菌粉溶液，以接入发酵菌粉溶液计时，控制温度为30℃，发酵72h，得到发酵液；
其中发酵菌粉溶液由0.8g发酵菌粉与8g水配制得到；所述发酵菌粉由0.1g干酪乳杆菌、0.1g保加利亚乳杆菌、0.1g嗜酸乳杆菌、0.1g德式乳杆菌、0.1g肠膜明串珠菌肠膜亚种、0.1g植物乳杆菌、0.1g乳双歧杆菌和0.1g青春双歧杆菌组成。干酪乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；保加利亚乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；嗜酸乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；德氏乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；肠膜明串珠菌肠膜亚种的有效菌含量为2000亿CFU/g；植物乳杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；乳双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g；青春双歧杆菌的有效菌含量为2000亿CFU/g。
实验例1
人参皂苷Rg3含量的测定
将实施例1-5和对比例1-16制备得到的发酵液，按照实施例6的方法制备得到发酵人参粉作为样品。采用高效液相色谱法测定发酵人参粉中人参皂苷Rg3的含量。
1对照品溶液的制备
精密称取人参皂苷标准品Rg3适量，加入甲醇配制成浓度为0.1082mg/ml的标准品溶液，0.45μm的滤膜过滤后待用。
2线性关系考察
精密吸取人参皂苷Rg3标准品溶液2，4，6，8，10μL进样，以质量浓度为横坐标（X），色谱峰面积为纵坐标（Y），进行回归统计，Rg3的线性方程为Y=751288x+24057，r=0.9991，线性范围0.32~1.70μg。
3样品处理
精密称取各样品1g (平行实验2次)，经索氏提取脱脂脱色后，再用水饱和正丁醇溶液除杂，收集萃取液，水浴蒸干得提取物。提取物加甲醇溶解后制成浓度为0.5mg/ml 的供试品溶液，0.45μm 的滤膜过滤后待用。
4 色谱条件
ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；柱温35℃；进样量10μL；流速1mL·min-1；流动相水（A）-乙腈（B），梯度洗脱，0~35min，19% B，35~55min，19%~28% B，55~80min，28% B，80~105min，28%~40% B，105~110 min，40% B，110~113min，40%~19% B，113~120min，19% B；检测波长为203mm。
5 人参皂苷的HPLC结果
表1
| Rg3含量/mg·g-1 | Rg3含量/mg·g-1 | Rg3含量/mg·g-1 | |||
| 实施例1 | 4.982 | 对比例3 | 1.562 | 对比例10 | 1.268 |
| 实施例2 | 4.875 | 对比例4 | 1.320 | 对比例11 | 1.789 |
| 实施例3 | 4.649 | 对比例5 | 1.336 | 对比例12 | 1.385 |
| 实施例4 | 4.213 | 对比例6 | 0.989 | 对比例13 | 1.826 |
| 实施例5 | 4.796 | 对比例7 | 1.178 | 对比例14 | 1.962 |
| 对比例1 | 1.019 | 对比例8 | 1.268 | 对比例15 | 0.691 |
| 对比例2 | 1.191 | 对比例9 | 1.286 | 对比例16 | 0.878 |
由表1可知，实施例1-5发酵液中人参皂苷Rg3含量明显高于对比例15发酵液中人参皂苷Rg3含量，可知，将人参酶解和发酵后有助于人参皂苷Rg3含量的提高；由实施例1、对比例15和对比例16中人参皂苷Rg3含量可知，酶解有助于发酵过程中人参皂苷Rg3的释放；实施例1同对比例1-14发酵液中人参皂苷Rg3含量可知，本发明提供的菌株组合更有利于人参皂苷Rg3的释放，菌株协同配合使得发酵液中含有高含量的人参皂苷Rg3。
实验例2 抗疲劳小鼠实验
样品：选用实施例6制备得到的发酵人参粉作为样品1；
对比例15得到的发酵液经离心，离心转速4000rpm/min，时间10min，取上清液；将上清液浓缩至原有发酵液体积的25%，固形物含量在40%，得浓缩产物；将浓缩产物加入300g的麦芽糊精，混合后进行喷雾干燥得发酵人参粉作为样品2。喷雾干燥条件为入口温度115℃，鼓风机功率20%，进料速度8mL/min。
实验过程
挑选状态良好的小鼠50只，将其随机分为5组，雌雄各半，每组10只。分组见表2.
表2
| 组别 | 给药剂 | 给药剂量 |
| 空白组 | 给与生理盐水 | 1.976g/kg |
| 对比例组 | 样品1 | 1.976g/kg |
| 低剂量组 | 样品1 | 0.657g/kg |
| 中剂量组 | 样品1 | 1.316g/kg |
| 高剂量组 | 样品2 | 1.976g/kg |
按低、中、高三个计量，每组动物每天灌胃1次。连续用药15天。室温为23±1℃，小鼠自觉进食喝水，定期更换鼠粮，保持小鼠所处环境的干净，观察小鼠状况并在基本上详细记录。
小鼠的负重游泳试验
各剂量组组动物在末次药后的1h，按照小鼠负重体重的5%，放入水温25±0.5℃深水槽内游泳，进行力竭负重游泳试验。小鼠放入游泳槽后，立即用秒表计时，观察并详细记录小鼠状况，并在恰当的时候用事先准备好的玻璃棒搅动小鼠，让试验小鼠始终处于游泳活动、运动的状态。从放入水槽游泳至小鼠不再运动而沉于水面下10s后不再露出水面的时间作为力竭负重游泳时间/min。实验结果见表3。
表3小鼠的负重游泳试验的结果
| 组别 | 动物数（只） | 剂量（g/kg ） | 游泳时间（s） |
| 空白组 | 10 | 1.976 | 496.3±92.3 |
| 对比例组 | 10 | 1.976 | 546.2±101.2 |
| 低剂量组 | 10 | 0.65 | 674.3±136.5 |
| 中剂量组 | 10 | 1.316 | 723.5±157.2 |
| 高剂量组 | 10 | 1.976 | 802.3±192.7 |
通过数据进行对比，可以看出发酵人参粉使得小鼠的负重游泳时间得到明显的增加，可增强小鼠的抗疲劳能力。
血乳酸的测定
末次给予样品1和样品2半个小时后，放到温度为30±1℃的水槽中。小鼠负重4%游泳，秒表计时10min停止游泳。然后分别从未在水中运动、运动之后0min、运动之后15min、运动之后一个小时的眼内眦静脉中取血，加入抗凝剂混匀。依据江苏南京建成生物工程研究所所提供的血乳酸试剂盒说明书测定血乳酸的含量。结果见表4。
表4 血乳酸的测定结果（mmol/L）
| 组别 | 小鼠数n | 游泳前 | 游泳后0min | 游泳后15min | 游泳后60min |
| 空白组 | 10 | 22.8±4.8 | 46.2±4.3 | 29.9±6.6 | 18.8±2.7 |
| 对比例组 | 10 | 23.7±6.0 | 44.8±4.2 | 29.2±6.1 | 18.7±3.7 |
| 低剂量组 | 10 | 22.3±4.6 | 40.9±5.5 | 24.6±3.9 | 17.3±5.2 |
| 中剂量组 | 10 | 21.6±3.9 | 34.8±4.8 | 24.1±3.5 | 16.9±2.8 |
| 高剂量组 | 10 | 22.3±4.9 | 30.3±4.9 | 21.7±2.8 | 16.3±3.3 |
在小鼠以游泳的方式运动后 0min 和 15min，高剂量灌胃发酵人参粉组小鼠与灌胃未发酵人参粉对照组小鼠进行对比，高剂量灌胃发酵人参粉组的小鼠的血乳酸含量分别降低了 32.4%（P<0.01）和 25.7%（P<0.05），灌胃发酵人参粉造成对小鼠血乳酸的影响的显示，小鼠游泳后 15min 内血乳酸量降低，并接近灌胃未发酵人参粉对照组，说明该产品具有调整机体的代谢，起到了体力性疲劳消除的效果。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (5)
1.一种复合菌株发酵人参的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将人参粉加水制备发酵匀浆，加入维生素C，调节发酵匀浆的pH为3.0～6.0；
(2)向所述发酵匀浆中加入酶解剂，在50～60℃下酶解120～180min，调节pH到5.5～7.0，得到酶解液；
(3)将所述酶解液在60～90℃下保温35～55min，得到灭菌液；
(4)将所述灭菌液降温至10～30℃，向灭菌液中加入发酵菌粉溶液，以接入发酵菌粉溶液开始计时，在发酵温度20～30℃下发酵24～72h，得到发酵液；
其中所述发酵菌粉溶液由重量比为1:10的发酵菌粉与水配制得到；所述发酵菌粉由重量比为1:1:1:1:1:1:1:1的干酪乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、肠膜明串珠菌肠膜亚种、植物乳杆菌、乳双歧杆菌和青春双歧杆菌组成；
所述干酪乳杆菌的有效菌含量为1800～2500亿CFU/g；保加利亚乳杆菌的有效菌含量为1800～2500亿CFU/g；嗜酸乳杆菌的有效菌含量为1800～2500亿CFU/g；德氏乳杆菌的有效菌含量为1800～2500亿CFU/g；肠膜明串珠菌肠膜亚种的有效菌含量为1800～2500亿CFU/g；植物乳杆菌的有效菌含量为1800～2500亿CFU/g份；乳双歧杆菌的有效菌含量为1800～2500亿CFU/g；青春双歧杆菌的有效菌含量为1800～2500亿CFU/g；
所述人参粉和所述发酵菌粉的重量比为(400～650):1；
所述酶解剂由纤维素酶，果胶酶，酸性蛋白酶和中温淀粉酶组成。
2.根据权利要求1所述的复合发酵菌株发酵人参的方法，其特征在于，所述人参粉与所述酶解剂的重量为(7～12):1。
3.根据权利要求1所述的复合发酵菌株发酵人参的方法，其特征在于，所述酶解剂中纤维素酶，果胶酶，酸性蛋白酶和中温淀粉酶的重量比为1:1:1:1。
4.根据权利要求1所述的复合菌株发酵人参的方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述人参粉和所述维生素C的重量比(45～65)：1；所述人参粉和水的重量比为1：(6～9)。
5.根据权利要求1所述的复合发酵菌株发酵人参的方法，其特征在于，所述步骤(1)中加入碳酸氢钠调节发酵匀浆的pH；所述步骤(2)中选用碳酸氢钠调节pH。
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