CN116831288A - 一种益生元组合物及其制备方法及降低尿酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种益生元组合物及其制备方法及降低尿酸的方法。一种益生元组合物由50％～80％的麦绿素和20％～50％的益生菌两部分组成，并通过真空冷冻干燥方式制得，活菌数为1×108‑1×1012cfu/g。本发明所述益生元组合物与现有技术相比无毒副作用、营养价值高、服用方便、品质稳定，本发明具体还研究了麦绿素与益生菌二者的用量配比对降低尿酸的影响，研究得出麦绿素以及益生菌最佳用量。另外本发明还就益生菌和提取麦绿素的最佳原料组合及配比进行了研究，得出了最佳益生菌和提取麦绿素的原料组合及配比。
Description
技术领域
本发明涉及保健品的技术领域，具体为一种益生元组合物及其制备方法及降低尿酸的方法。
背景技术
高尿酸血症是仅次于糖尿病的第二大代谢性疾病，是由于嘌呤代谢紊乱导致尿酸在体内过度累积而引起的。健康人体中，尿酸可以通过排泄或被肠道内菌群分解利用而保持动态平衡。但近年来，随着社会发展和经济进步，人们的饮食结构发成了重大改变，高嘌呤高能量食物的摄入，使高尿酸血症患病率逐年攀升。大量研究结果显示，高尿酸血症会诱发痛风、高血压、肾病等慢性疾病，严重危害人们的健康。
根据治疗作用的不同，可将降尿素药物分为三类。第一种是抑制尿酸合成酶(主要为黄嘌呤氧化酶(XOD))活性、减少尿酸生成的别嘌呤醇、非布索坦、托匹司他等，前两者是普通痛风患者的首选药物；第二种是促进尿酸排泄的尿酸转运蛋白类药物，如丙磺舒、苯溴马隆、磺吡酮等；第三种是尿酸氧化酶类药物，如Uricozyme、拉布立酶(Rasburicase)、培戈洛酶(Pegloticase)，能够分解尿酸，达到降低血尿酸水平的目的，常用于重症患者的治疗。化学药物的疗效虽然显著，但都伴随严重的副作用，其中别嘌呤醇会引起严重的超敏综合征、苯溴马隆会导致肝功能异常甚至肝死亡、Lesinurad呈剂量依赖性，可能引发肾衰竭、而尿酸氧化酶类药物有潜在引起超敏反应的风险等。中国专利申请号为CN 114191532 A公开了一种降尿酸组合物、其制备方法及应用，所述降尿酸组合物的重量份数组成为：猫须草20-40份、黄芪10-20份、党参10-20份、枸杞10-20份、女贞子10-20份、山楂6-10份、甘草24份和干姜2-4份，混合后利用超声波-微波双波辅助提取，经过滤、喷雾干燥即得到降尿酸组合物。中药组方虽能够起到降低血尿酸水平的作用，但疗程较长、药效复杂、服用不方便。因此，开发一款安全、高效的降尿酸产品不仅能改善高尿酸血症患者的健康状况，同时能降低化学药物治疗带来的副作用，使患者生存质量得到显著提升。
发明内容
本发明提供一种益生元组合物及其制备方法及降低尿酸的方法，具体实施方式如下：
一种益生元组合物，按重量百分数计，所述益生元组合物由50％～80％的麦绿素和20％～50％的益生菌两部分组成，活菌数为1×108-1×1012cfu/g；
优选地，益生元组合物由80％的麦绿素和20％的益生菌两部分组成；
麦绿素由大麦苗、小麦苗、青稞苗、荞麦苗、黑麦苗和野燕麦苗之中的至少一种制得；
优选地，麦绿素由大麦苗和青稞苗制得，按重量百分数计，大麦苗制得的麦绿素与青稞苗制得的麦绿素的用量比例为(2-4):1；
益生菌选自植物乳杆菌、发酵乳杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌中的一种或一种以上；
优选地，益生菌为植物乳杆菌和发酵乳杆菌混合菌，按重量百分数计，植物乳杆菌和发酵乳杆菌的用量比为(1-3):1。
另，本发明还提供一种上述益生元组合物的制备方法，分别制备麦绿素浓缩液和益生菌菌体，将益生菌菌体加入麦绿素浓缩液中搅拌，于-25至-15℃预冻20～24h，采用真空冷冻干燥的方式制得益生元组合物；
麦绿素浓缩液的制备过程包括：将可提取麦绿素的嫩苗与水按照质量比为(1:5)-10的料液比加水榨汁后，在30-40℃下，超声辅助提取50-70min，过滤，收取滤液，滤渣再次加水并提取，重复2～3次，滤液合并，减压浓缩，得麦绿素浓缩液；
益生菌菌体的制备过程包括：低温保藏的菌种活化后，接种在MRS液体培养基中，待其发酵液活菌浓度达到或超过1×108CFU/g后，将培养基进行在10℃下以4000r/min离心20-25min，收集得到益生菌菌体；
一种降低尿酸的方法，所述方法包括使用上述的益生元组合物。
由于采用了以上技术方案，本发明的有益技术效果是：
1.本发明提供一种益生元组合物及其制备方法，新型益生元组合物与现有技术相比无毒副作用、营养价值高、服用方便、品质稳定。麦绿素呈现弱碱性，能减少胃酸对益生菌的“攻击”，保证益生菌的活性，使益生菌能“活着”到达肠道。麦绿素可同时作为益生元和植物营养物质被人体吸收利用，它能够促进双歧杆菌和乳杆菌的增殖，提升肠道中乙酸、丙酸和丁酸为主的短链脂肪酸含量，且降低大肠杆菌等有害菌的数量；
2.本发明具体研究了麦绿素以及益生菌菌体二者的用量配比对降低尿酸的影响，麦绿素与益生菌协同增效，按重量百分数计，当麦绿素为80％，益生菌为20％时，此时麦绿素与益生菌二者起到最佳降低尿酸的效果；
3.本发明还从麦绿素的原料出发，优选出提取麦绿素的最佳原料组合及配比，同时也选取出了最佳益生菌组合及用量；
4.本发明不仅为阐明肠道微生态调控影响高尿酸血症治疗效果的作用机制提供了重要的理论依据，同时将益生元组合物引入了降低尿酸的饮食治疗方案，为临床改善高尿酸血症的疗效提供了新途径。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种益生元组合物，按重量百分数计，所述益生元组合物由50％～80％的麦绿素和20％～50％的益生菌两部分组成，活菌数为1×108-1×1012cfu/g。
具体地，麦绿素富含膳食纤维、各种必需氨基酸、维生素、矿物质以及多糖、SOD酶、黄酮类化合物、叶绿素、二十六烷醇等活性物质，是一种天然碱性食物。麦绿素具有重要的药理作用，其所含的β-葡聚糖能够在结肠中被双歧杆菌和乳杆菌分解利用，使两种菌的数量和比例在肠道中得到明显提升。肠道菌群参与宿主的免疫、代谢、发育等生理活动，极大多数疾病的产生与发展也与肠道微生态的改变息息相关。益生菌会通过影响尿酸合成关键酶活性抑制尿酸合成，或者通过调节肠道菌群等方式促进尿酸的排泄达到对尿酸异常的调节作用。麦绿素能够降低胃酸对益生菌的破坏，使益生菌能“活着”到达肠道，同时，麦绿素与益生菌协同增效，在一定比例下其组合物降尿酸能力明显高于两者单独作用之和。
实施例1
按重量百分数计，益生元组合物由80％的麦绿素和20％的益生菌组成。其中，麦绿素由大麦苗和青稞苗制得，大麦苗制得的麦绿素与青稞苗制得的麦绿素的用量比例为3:1；益生菌为植物乳杆菌和发酵乳杆菌，植物乳杆菌和发酵乳杆菌的用量比为1:1。
制备方法：
(1)麦绿素浓缩液的制备：取新鲜采摘的大麦苗，按1:8的料液比加水榨汁后，在35℃下，超声辅助提取60min，过滤，得滤液，滤渣再次加水并提取，重复3次，滤液合并，减压浓缩至固形物为45％，得大麦苗麦绿素浓缩液；取新鲜采摘的青稞苗，按1:8的料液比加水榨汁后，在35℃下，超声辅助提取60min，过滤，得滤液，滤渣再次加水并提取，重复3次，滤液合并，减压浓缩至固形物为45％，得青稞苗麦绿素浓缩液，将大麦苗麦绿素浓缩液和青稞苗麦绿素浓缩液按比例进行混合得到麦绿素混合液；
(2)益生菌菌体的制备：将低温保藏的植物乳杆菌和发酵乳杆菌菌种活化后，分别接种在MRS液体培养基中，待其发酵液活菌浓度达到或超过2.2×1010cfu/g后，将培养基在8℃以4000r/min离心22min，收集得到植物乳杆菌菌体和发酵乳杆菌菌体；
(3)将植物乳杆菌菌体和发酵乳杆菌菌体按比例加入麦绿素混合液中，搅拌均匀，于-20℃预冻22h，采用真空冷冻干燥的方式制得益生元组合物。
实施例2
按重量百分数计，益生元组合物由50％的麦绿素和50％的益生菌组成。其中，麦绿素由大麦苗和荞麦苗制得，大麦苗制得的麦绿素与荞麦苗制得的麦绿素的用量比例为2:1；益生菌为植物乳杆菌。
制备方法：
(1)麦绿素浓缩液的制备：取新鲜采摘的大麦苗，按1:10的料液比加水榨汁后，在40℃下，超声辅助提取70min，过滤，得滤液，滤渣再次加水并提取，重复2次，滤液合并，减压浓缩至固形物为45％，得大麦苗麦绿素浓缩液；取新鲜采摘的荞麦苗，按1:10的料液比加水榨汁后，在40℃下，超声辅助提取70min，过滤，得滤液，滤渣再次加水并提取，重复2次，滤液合并，减压浓缩至固形物为45％，得荞麦苗麦绿素浓缩液，将大麦苗麦绿素浓缩液和荞麦苗麦绿素浓缩液按比例进行混合得到麦绿素混合液；
(2)益生菌菌体的制备：将低温保藏的植物乳杆菌菌种活化后，接种在MRS液体培养基中，待其发酵液活菌浓度达到或超过4.0×108cfu/g后，将培养基在9℃以3500r/min离心25min，收集得到植物乳杆菌菌体；
(3)将植物乳杆菌菌体加入麦绿素混合液中，搅拌均匀，于-25℃预冻20h，采用真空冷冻干燥的方式制得益生元组合物。
实施例3
按重量百分数计，益生元组合物由65％的麦绿素和35％的益生菌组成。其中，麦绿素由黑麦苗制得，益生菌为植物乳杆菌和发酵乳杆菌，植物乳杆菌和发酵乳杆菌的用量比为2:1。
制备方法：
(1)麦绿素浓缩液的制备：取新鲜采摘的黑麦苗，按1:5的料液比加水榨汁后，在40℃下，超声辅助提取50min，过滤，得滤液，滤渣再次加水并提取，重复3次，滤液合并，减压浓缩至固形物为45％，得黑麦苗麦绿素浓缩液；
(2)益生菌菌体的制备：将低温保藏的植物乳杆菌菌种和发酵乳杆菌菌种活化后，接种在MRS液体培养基中，待其发酵液活菌浓度达到或超过1.2×1010cfu/g后，将培养基在5℃以4500r/min离心20min，收集得到植物乳杆菌菌体和发酵乳杆菌菌体；
(3)将植物乳杆菌菌体和发酵乳杆菌菌体按比例加入黑麦苗麦绿素浓缩液中，搅拌均匀，于-20℃预冻24h，采用真空冷冻干燥的方式制得益生元组合物。
实施例4
按重量百分数计，益生元组合物由70％的麦绿素和30％的益生菌组成。其中，麦绿素由大麦苗和青稞苗制得，大麦苗制得的麦绿素与青稞苗制得的麦绿素的用量比例为2:1；益生菌为双歧杆菌和干酪乳杆菌，双歧杆菌和干酪乳杆菌的用量比为3:1。
制备方法：
(1)麦绿素浓缩液的制备：取新鲜采摘的大麦苗，按1:6的料液比加水榨汁后，在38℃下，超声辅助提取55min，过滤，得滤液，滤渣再次加水并提取，重复2次，滤液合并，减压浓缩至固形物为45％，得大麦苗麦绿素浓缩液；取新鲜采摘的青稞苗，按1:6的料液比加水榨汁后，在38℃下，超声辅助提取55min，过滤，得滤液，滤渣再次加水并提取，重复2次，滤液合并，减压浓缩至固形物为45％，得青稞苗麦绿素浓缩液，将大麦苗麦绿素浓缩液和青稞苗麦绿素浓缩液按比例进行混合得到麦绿素混合液；
(2)益生菌菌体的制备：将低温保藏的双歧杆菌菌种和干酪乳杆菌菌种活化后，接种在MRS液体培养基中，待其发酵液活菌浓度达到或超过6.5×109cfu/g后，将培养基在3℃以3500r/min离心22min，收集得到双歧杆菌菌体和干酪乳杆菌菌体；
(3)将双歧杆菌菌体和干酪乳杆菌菌体按比例加入麦绿素混合液中，搅拌均匀，于-18℃预冻20h，采用真空冷冻干燥的方式制得益生元组合物。
实施例5
按重量百分数计，益生元组合物由60％的麦绿素和40％的益生菌组成。其中，麦绿素由大麦苗制得，益生菌为植物乳杆菌。
制备方法：
(1)麦绿素浓缩液的制备：取新鲜采摘的大麦苗，按1:8的料液比加水榨汁后，在35℃下，超声辅助提取60min，过滤，得滤液，滤渣再次加水并提取，重复3次，滤液合并，减压浓缩至固形物为45％，得大麦苗麦绿素浓缩液；
(2)益生菌菌体的制备：将低温保藏的植物乳杆菌菌种活化后，接种在MRS液体培养基中，待其发酵液活菌浓度达到或超过2.2×109cfu/g后，将培养基在8℃以3500r/min离心22min，收集得到植物乳杆菌菌体；
(3)将植物乳杆菌菌体加入大麦苗麦绿素浓缩液中，搅拌均匀，于-15℃预冻22h，采用真空冷冻干燥的方式制得益生元组合物。
实施例6
按重量百分数计，益生元组合物由80％的麦绿素和20％的益生菌组成。其中，麦绿素由青稞苗制得，益生菌为干酪乳杆菌。
制备方法：
(1)麦绿素浓缩液的制备：取新鲜采摘的青稞苗，按1:10的料液比加水榨汁后，在30℃下，超声辅助提取50min，过滤，得滤液，滤渣再次加水并提取，重复2次，滤液合并，减压浓缩至固形物为45％，得青稞苗麦绿素浓缩液；
(2)益生菌菌体的制备：将低温保藏的干酪乳杆菌菌种活化后，接种在MRS液体培养基中，待其发酵液活菌浓度达到或超过8.8×109cfu/g后，将培养基在5℃以3500r/min离心20min，收集得到干酪乳杆菌菌体；
(3)将干酪乳杆菌菌体加入青稞苗麦绿素浓缩液中，搅拌均匀，于-20℃预冻22h，采用真空冷冻干燥的方式制得益生元组合物。
对比例1
按重量百分数计，益生元组合物由90％的大麦苗粉和10％的益生菌菌粉简单混合而成。其中，益生菌为发酵乳杆菌。
制备方法：
(1)大麦苗粉的制备：大麦苗粉由大麦苗清水清洗，清水中注入臭氧灭菌，然后将叶片叶面水分通风干燥、榨汁、去渣，汁液除气，加入防氧化剂和可食用分散粉剂混匀，最后通过真空冷冻干燥或喷雾干燥制得。
(2)益生菌菌粉的制备：将低温保藏的发酵乳杆菌菌种活化后，接种在MRS液体培养基中，待其发酵液活菌浓度达到或超过4.4×1010cfu/g后，将培养基在6℃以3500r/min离心15min，收集得到发酵乳杆菌菌体，将菌体于-20℃预冻22h，采用真空冷冻干燥的方式制得发酵乳杆菌菌粉；
对比例2
按重量百分数计，益生元组合物由60％的麦绿素和40％的低聚果糖组成。其中，麦绿素由大麦苗制得。
制备方法：
(1)麦绿素浓缩液的制备：取新鲜采摘的大麦苗，按1:10的料液比加水榨汁后，在30℃下，超声辅助提取50min，过滤，得滤液，滤渣再次加水并提取，重复2次，滤液合并，减压浓缩至固形物为45％，得大麦苗麦绿素浓缩液；
(2)将低聚果糖加入大麦苗麦绿素浓缩液中，搅拌均匀，于-20℃预冻22h，采用真空冷冻干燥的方式制得益生元组合物。
对比例3
按重量百分数计，益生元组合物由60％的低聚果糖和40％的益生菌菌粉简单混合而成。其中，益生菌为植物乳杆菌。
制备方法：
植物乳杆菌菌粉的制备：将低温保藏的植物乳杆菌菌种活化后，接种在MRS液体培养基中，待其发酵液活菌浓度达到或超过1.1×1010cfu/g后，将培养基在8℃以3500r/min离心15min，收集得到植物乳杆菌菌体，将菌体于-20℃预冻22h，采用真空冷冻干燥的方式即制得植物乳杆菌菌粉。
分别对实施例1-6和对比例1-3制得益生元组合物进行乳酸菌总数测定、体外耐胃酸试验和黄嘌呤氧化酶活性测定。
1、乳酸菌总数测定方法：
将制备好的产品置于30℃恒温培养箱中30天，分别测定0天、15天、30天乳酸菌存活率。乳酸菌总数测定方法参考食品安全国家标准GB 4789.35-2016。
2、体外耐胃酸试验：
人工胃液制备：首先制备50mL 0.1mlo/L的盐酸溶液，取5g胃蛋白酶加入至8.2mL0.1mlo/L的盐酸溶液中，加适量去离子水搅拌均匀，并定容至500mL容量瓶中，调节pH至2.0，最后用0.22μm滤膜过滤除菌，备用。
耐胃酸测试：分别称取1.0g待测样品置于100mL锥形瓶中，加入50mL人工胃液，混合均匀后放置在恒温摇床中，速度和温度设置为180r/min，37±1℃，震荡40min后，取样测试各样品中的活菌数。
3、黄嘌呤氧化酶活性测定方法：
溶液制备：采用pH7.5的磷酸缓冲液分别制备100μg/mL的黄嘌呤溶液、2.0U/mL的黄嘌呤氧化酶溶液、1000μg/mL的待测样品母液。黄嘌呤氧化酶活性检测：在实验组中分别加入100μL PBS缓冲液、100μL XOD溶液和100μL待测样品(由麦绿素母液稀释100倍制得)，对照组加入200μL PBS缓冲液、100μL待测样品。分别将实验组和对照组置于37℃恒温水浴中孵育5min，向各组中分别加入100μL于37℃水浴中预热的黄嘌呤溶液后，再于37℃水浴中孵育30min后，沸水浴灭菌，于295nm处测吸光度。
待测样品对XOD的抑制率计算公式如下：
XOD抑制率＝[(A1-A0)-(A 2-A3)]/(A 1-A0)×100％
式中：A0为PBS缓冲液和黄嘌呤混合后的吸光度；A1为PBS缓冲液、XOD和黄嘌呤混合后的吸光度；A2为待测样品、PBS缓冲液、XOD和黄嘌呤混合后的吸光度；A3为待测样品、PBS缓冲液和黄嘌呤混合后的吸光度。
表1实施例1-6以及对比例1-3得到的益生元组合物测试结果汇总
由上表1的数据可以看出：与对比例所制得益生元组合物相比：首先本发明制备的麦绿素与益生菌组合物对黄嘌呤氧化酶的抑制能力高于麦绿素与益生菌单独对黄嘌呤氧化酶的抑制能力，麦绿素与益生菌达到协同增效的目的；其次，提取麦绿素的原料以及配比、益生菌的选择以及用量对黄嘌呤氧化酶的抑制能力、耐胃酸能力也会产生影响，尤其是由实施例1制得的益生元组合物对黄嘌呤氧化酶的抑制能力达到76.6％，耐胃酸的能力达到94％。其次，本发明的制备方法新颖，将菌体和麦绿素浓缩液按比例混合后进行真空冷冻干燥，与直接采用大麦苗粉和益生菌粉简单混合而成的组合物相比，更能够使得麦绿素与益生菌相互作用，达到协同增效的目的，起到更好的对黄嘌呤氧化酶的抑制的效果。本发明制备的益生元组合物还可以用于降尿酸，为临床改善高尿酸血症的疗效提供了新途径。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (10)
1.一种益生元组合物，其特征在于，按重量百分数计，所述益生元组合物由50％～80％的麦绿素和20％～50％的益生菌两部分组成，其中，益生元组合物中活菌数为1×108-1×1012cfu/g。
2.根据权利要求1所述的一种益生元组合物，其特征在于，所述益生元组合物由80％的麦绿素和20％的益生菌两部分组成。
3.根据权利要求1或2所述的一种益生元组合物，其特征在于，所述麦绿素由大麦苗、小麦苗、青稞苗、荞麦苗、黑麦苗和野燕麦苗之中的至少一种制得。
4.根据权利要求3所述的一种益生元组合物，其特征在于所述麦绿素由大麦苗和青稞苗制得，按重量百分数计，大麦苗制得的麦绿素与青稞苗制得的麦绿素的用量比例为(2-4):1。
5.根据权利要求1或2所述的一种益生元组合物，其特征在于，所述益生菌为植物乳杆菌、发酵乳杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌中的一种或一种以上。
6.根据权利要求5所述的一种益生元组合物，其特征在于，按重量百分数计，所述益生菌为植物乳杆菌和发酵乳杆菌的混合菌，植物乳杆菌和发酵乳杆菌的用量比为(1-3):1。
7.一种制备权利要求1-6任一项所述的益生元组合物的制备方法，其特征在于，分别制备麦绿素浓缩液和益生菌菌体，将益生菌菌体加入麦绿素浓缩液中搅拌，于-25至-15℃预冻20～24h，采用真空冷冻干燥的方式制得益生元组合物。
8.根据权利要求7所述的一种益生元组合物的制备方法，其特征在于，麦绿素浓缩液的制备过程包括：将可提取麦绿素的嫩苗与水按照质量比为1:(5-10)的料液比加水榨汁后，在30-40℃下，超声辅助提取50-70min，过滤，收取滤液，滤渣再次加水并提取，重复2～3次，滤液合并，减压浓缩，得麦绿素浓缩液。
9.根据权利要求7所述的一种益生元组合物的制备方法，其特征在于，所述益生菌菌体的制备过程包括：低温保藏的菌种活化后，接种在MRS液体培养基中，待其发酵液活菌浓度达到或超过1×108cfu/g后，将培养基在10℃下以3500-4500r/min离心20-25min，收集得到益生菌菌体。
10.一种降低尿酸的方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求1-6任一项所述的益生元组合物。
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN118109376A (zh) * | 2024-04-30 | 2024-05-31 | 晏龙国科(山东)微生物科技有限公司 | 一种用于治疗高尿酸血症和痛风的中药发酵液及其应用 |
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