CN110771502B - 一种用于芍药胚根诱导的培养基及方法 - Google Patents

一种用于芍药胚根诱导的培养基及方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110771502B
CN110771502B CN201911032534.1A CN201911032534A CN110771502B CN 110771502 B CN110771502 B CN 110771502B CN 201911032534 A CN201911032534 A CN 201911032534A CN 110771502 B CN110771502 B CN 110771502B
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture medium
seeds
embryo
peony
induction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201911032534.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110771502A (zh
Inventor
黄位年
杨晓
叶霄
李钰
曾静
程蕾
尹存平
张敏
韦树谷
丰先红
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture Institute Of Agricultural Sciences
Industrial Crop Research Institute
Original Assignee
Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture Institute Of Agricultural Sciences
Industrial Crop Research Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture Institute Of Agricultural Sciences, Industrial Crop Research Institute filed Critical Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture Institute Of Agricultural Sciences
Priority to CN201911032534.1A priority Critical patent/CN110771502B/zh
Publication of CN110771502A publication Critical patent/CN110771502A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110771502B publication Critical patent/CN110771502B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于芍药胚根诱导的培养基及方法，所述的培养基为：1/2MS培养基+泛酸钙0.1～1.5mg/L+腺嘌呤0.1～1.5mg/L+L‑半胱氨酸0.1～1.5mg/L+生物素0.05～0.2mg/L+IBA0.5～2.0mg/L+活性炭0.4g/L+蔗糖25～35g/L+植物凝胶2.2g/L。该方法过程包括芍药种子脱壳、脱壳种子的消毒、取胚及胚处理、诱导培养基配制、接种及培养等步骤。本发明使用的外植体便于消毒，污染率可控在5％左右，无褐化，50天后根的诱导率可达40％以上，平均诱导根数可达8以上，平均根长2.6cm。

Description

一种用于芍药胚根诱导的培养基及方法
技术领域
本发明属于植物的组织培养技术领域，具体涉及一种用于芍药胚根诱导的培养基及方法。
背景技术
芍药(Paeonia lactiflora Pall.)是毛茛科芍药属植物，又名将离、余容、没骨花灯，属毛茛科芍药属多年生宿根草本植物，是我国传统观赏花卉，其根入药，分“赤芍”、“白芍”两种，前者善清热凉血、散瘀止痛、清泄肝火；后者善养血调经、柔肝止痛。我国大部分地区均有人工栽植。生产上采用的繁殖方式有分株法、扦插法、播种法，繁殖率低，速度慢。1棵2年生的母株1年只能分3—5棵子株，繁殖系低，周期长。播种法需打破种壳障碍和上胚轴休眠，不仅所需时间长，萌发缓慢，而且还有发芽率低、出苗不整齐等缺点，给芍药的人工栽培和品种选育带来很大的困难。
为了提高芍药的繁殖系数，组培技术是不错的选择，但芍药组织培养技术还存在许多问题，例如初代培养消毒不彻底导致的细菌和真菌污染，褐化，继代困难等问题。研究表明，芍药组培常用的外植体有鳞芽、茎尖等，保存困难，受季节影响，而且容易因消毒不彻底而发生污染；愈伤组织、茎段等组织易发生褐化、玻璃化，继代困难，诱导植株困难，繁殖系数低，规模化扩繁芍药种苗还未实现；使用芍药胚进行植株诱导同样存在易褐化、玻璃化，诱导植株困难，繁殖系数低的问题，继代2—5次，芍药组织就会发生严重退化，需要重新获取外植体。因此寻找到一种可以大量产生芍药组织，为下一步芍药组织培养研究提供足够材料的方法是现阶段芍药研究的关键。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于芍药胚根诱导的培养基及方法，利用芍药胚根对生长素IBA敏感和下胚轴不休眠的特性，在组织培养的条件下，通过浸泡高浓度的IBA或KIBA，接种到诱导培养基中生根，促进下胚轴细胞的分化，产生大量活性高的胚根。相比于芍药鳞芽、茎尖等外植体诱导的组织，该方法消毒方法简单方便，诱导的胚根污染率低、无褐化、繁殖系数高，能在短时间内直接使用胚诱导出大量的胚根，获得大量芍药胚根，且不受取样季节限制，有效地解决了芍药组织培养外植体获取困难的问题，将极大地促进芍药组培研究，为芍药“根—根—植株”扩繁途径的快繁体系建立奠定基础。
本发明具体通过以下技术方案实现：
一种芍药胚根诱导的培养基，所述的培养基配方为：1/2MS培养基+泛酸钙0.1～1.5mg/L+腺嘌呤0.1～1.5mg/L+L-半胱氨酸0.1～1.5mg/L+生物素0.05～0.2mg/L+IBA0.5～2.0mg/L+活性炭0.4g/L+蔗糖25～35g/L+植物凝胶2.2g/L。
在本发明的另一方面，提供了一种芍药胚根的诱导方法，包括以下步骤：
1)种子脱壳：选取当年或去年收获的成熟、种皮无破损的芍药种子，在室温条件下于水中浸泡，剥去种壳，选取表面光滑饱满无霉斑的带胚乳的脱壳种子；
2)脱壳种子的消毒：选取完整无霉斑的脱壳种子，无菌水清洗去除种皮，用酒精浸泡消毒，无菌水清洗后备用；
3)取胚及胚处理：在无菌条件下将种胚挑出，取完整的胚置于IBA或KIBA溶液中浸泡10～100s，操作过程中防止胚被吹干，以免影响胚活性；
4)诱导培养基配制：按照配方配置诱导培养基，在121℃的条件下灭菌15-30min；
5)接种及培养：将处理好的胚接种于配置好的诱导培养基表面，在温度25℃左右的条件下培养。
进一步的，步骤(1)中芍药种子在水中浸泡48～72h。
进一步的，步骤(2)中酒精消毒时间为30～80s。
进一步的，步骤(3)中取出的胚子叶和胚轴完整。
进一步的，步骤(3)中IBA或KIBA溶液的浓度为0.5～3.0mg/mL。
进一步的，步骤(4)中所述的培养基配方为：1/2MS培养基+泛酸钙0.1～1.5mg/L+腺嘌呤0.1～1.5mg/L+L-半胱氨酸0.1～1.5mg/L+生物素0.05～0.2mg/L+IBA0.5～2.0mg/L+活性炭0.4g/L+蔗糖25～35g/L+植物凝胶2.2g/L。
本发明的有益效果为：
本发明方法污染率可控制在5％左右，无褐化，50天后根的诱导率可达40％以上，平均诱导根数可达8以上，平均根长2.6cm，可在短时间内直接使用胚诱导出大量的胚根。
具体实施方式
下面将结合本发明具体的实施例，对本发明技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例具体提供了一种芍药胚根的诱导方法，具体包括以下内容：
1)种子脱壳
选取当年收获的成熟、种皮无破损的芍药种子放入水中室温条件下浸泡60h后，使用剪刀剥去种壳，选取表面光滑饱满无斑点的带胚乳的脱壳种子。
2)脱壳种子的消毒
在超净工作台上，将上述脱壳种子，用无菌水震荡摇晃，清洗去除表面种皮，用75％酒精浸泡40s，进行表面消毒，再用无菌水清洗3次，放在接种盘上备用。每次大约消毒30粒脱壳种子，以防消毒后长时间泡水或风干，影响下一步的取胚。
3)取胚
在无菌条件下将消毒后的脱壳种子放入盘子中，用大拇指和食指固定脱壳种子，避免手指接触到取胚的位置，胚向上，用解剖刀刀尖插入胚孔旁挑出胚，放置于接种盘中。挑出的胚子叶、胚轴完整，放置时间不宜过长，以免吹干，影响胚的活性。
4)培养基配制
按以下配方配置培养基，装入240ml的组培瓶中，在121℃的条件下，灭菌20min后取出，晾冷备用。
培养基配方：1/2MS培养基+泛酸钙0.1mg/L+腺嘌呤0.5mg/L+L-半胱氨酸0.5mg/L+生物素0.05mg/L+IBA1.5mg/L+活性炭0.4g/L+蔗糖30g/L+植物凝胶2.2g/L。
5)胚处理
往接种盘内倒入浓度为2.5mg/mL经过121℃、20min高温灭菌的KIBA溶液，将胚淹没，浸泡20s，适当地搅拌，便于浸泡均匀。
6)接种
在无菌条件下，用镊子把处理好的胚，平放接种于培养基表面，每瓶培养基接种2个胚。
7)培养
将接种好的胚置于温度25℃左右的培养室中培养。50天后统计污染率为3％，无褐化，胚根诱导率46％，平均每个胚诱导根数7，平均根长2.4cm。
实施例2
本实施例具体提供了一种芍药胚根的诱导方法，具体包括以下内容：
1)种子脱壳
选取当年收获的成熟、种皮无破损的芍药种子放入水中室温条件下浸泡48h后，使用剪刀剥去种壳，选取表面光滑饱满无斑点的带胚乳的脱壳种子。
2)脱壳种子的消毒
在超净工作台上，将上述脱壳种子，用无菌水震荡摇晃，清洗去除表面种皮，用75％酒精浸泡30s，进行表面消毒，再用无菌水清洗2次，放在接种盘上备用。每次大约消毒30粒脱壳种子，以防消毒后长时间泡水或风干，影响下一步的取胚。
3)取胚
在无菌条件下将消毒后的脱壳种子放入盘子中，用大拇指和食指固定脱壳种子，避免手指接触到取胚的位置，胚向上，用解剖刀刀尖插入胚孔旁挑出胚，放置于接种盘中。挑出的胚子叶、胚轴完整，放置时间不宜过长，以免吹干，影响胚的活性。
4)培养基配制
按以下配方配置培养基，装入240ml的组培瓶中，在121℃的条件下，灭菌20min后取出，晾冷备用。
培养基配方：1/2MS培养基+泛酸钙1.0mg/L+腺嘌呤1.0mg/L+L-半胱氨酸1.0mg/L+生物素0.1mg/L+IBA1.0mg/L+活性炭0.4g/L+蔗糖30g/L+植物凝胶2.2g/L。
5)胚处理
往接种盘内倒入浓度为1.5mg/mL经过121℃、20min高温灭菌的IBA溶液，将胚淹没，浸泡30s，适当地搅拌，便于浸泡均匀。
6)接种
在无菌条件下，用镊子把处理好的胚，平放接种于培养基表面，每瓶培养基接种2个胚。
7)培养
将接种好的胚置于温度25℃左右的培养室中培养。50天后统计污染率为2％，无褐化，胚根诱导率在50％，平均每个胚诱导根数8，平均根长2.6cm。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (4)

1.一种芍药胚根的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）种子脱壳：将当年或去年的芍药种子浸泡于水中，软化后剥去外壳，获得带胚乳的脱壳种子；
2）脱壳种子的消毒：选取完整无霉斑的脱壳种子，无菌水清洗去除种皮，用酒精浸泡消毒，无菌水清洗后备用；
3）取胚及胚处理：在无菌条件下将种胚挑出，取完整的胚置于浓度为1.5~2.5mg/mL的IBA或KIBA溶液中浸泡10~100s，操作过程中防止胚被吹干，以免影响胚活性；
4）诱导培养基配制：按配方配置诱导培养基，在121℃的条件下灭菌15-30min，所述培养基配方为1/2MS培养基+泛酸钙0.1~1.5mg/L+腺嘌呤0.1~1.5mg/L+L-半胱氨酸0.1~1.5mg/L+生物素0.05~0.2mg/L+IBA 1.5~2.0mg/L+活性炭0.4g/L+蔗糖25~35g/L+植物凝胶2.2g/L；
5）接种及培养：将处理好的胚接种于配置好的诱导培养基表面，在温度25℃的条件下培养。
2.根据权利要求1所述的一种芍药胚根的诱导方法，其特征在于，步骤1）中芍药种子在水中浸泡48~72h。
3.根据权利要求1所述的一种芍药胚根的诱导方法，其特征在于，步骤2）中酒精消毒时间为30~80s。
4.根据权利要求1所述的一种芍药胚根的诱导方法，其特征在于，步骤3）中取出的胚子叶和胚轴完整。
CN201911032534.1A 2019-10-28 2019-10-28 一种用于芍药胚根诱导的培养基及方法 Active CN110771502B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911032534.1A CN110771502B (zh) 2019-10-28 2019-10-28 一种用于芍药胚根诱导的培养基及方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911032534.1A CN110771502B (zh) 2019-10-28 2019-10-28 一种用于芍药胚根诱导的培养基及方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110771502A CN110771502A (zh) 2020-02-11
CN110771502B true CN110771502B (zh) 2021-12-31

Family

ID=69387164

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911032534.1A Active CN110771502B (zh) 2019-10-28 2019-10-28 一种用于芍药胚根诱导的培养基及方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110771502B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009232691A (ja) * 2008-03-26 2009-10-15 Naraken Chusho Kigyo Sien Center シャクヤクの組織培養法および褐変化抑制方法
CN102934611A (zh) * 2012-10-23 2013-02-20 河南科技大学 一种从牡丹种子中取胚接种方法
CN109220810A (zh) * 2018-11-19 2019-01-18 武汉市农业科学院 一种无菌条件下牡丹胚高效生根的方法
CN109566412A (zh) * 2018-12-13 2019-04-05 北京林业大学 一种提高芍药属组间远缘杂交种子成苗率的方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9117634D0 (en) * 1991-08-15 1991-10-02 Evans Lloyd T Method of treating plants or plant tissues
CN102763592B (zh) * 2012-07-12 2014-05-07 北京林业大学 一种芍药胚培养方法
CN106538395B (zh) * 2017-01-18 2018-11-13 西藏农牧学院 一种提高濒危植物西藏大花黄牡丹成苗率及幼苗成活率的方法
CN108142287A (zh) * 2017-11-30 2018-06-12 安徽心缘康生物科技有限公司 一种牡丹离体培养防褐变促生根剂

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009232691A (ja) * 2008-03-26 2009-10-15 Naraken Chusho Kigyo Sien Center シャクヤクの組織培養法および褐変化抑制方法
CN102934611A (zh) * 2012-10-23 2013-02-20 河南科技大学 一种从牡丹种子中取胚接种方法
CN109220810A (zh) * 2018-11-19 2019-01-18 武汉市农业科学院 一种无菌条件下牡丹胚高效生根的方法
CN109566412A (zh) * 2018-12-13 2019-04-05 北京林业大学 一种提高芍药属组间远缘杂交种子成苗率的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A review of the seed biology of Paeonia species (Paeoniaceae),;Keliang Zhang等;《Planta》;20181001;第249卷;第291-303页 *
两个牡丹杂交系种子胚培养技术研究;曾端香等;《热带农业科学》;20110315;第31卷(第3期);摘要、第11页右栏最后一段和第12页左栏第一段 *
牡丹胚离体植株再生及组培中褐化问题的研究;李新凤;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）农业科技辑》;20081115;第13页第2.1.2节、第14页第2.2.1节、表2-1、第22页第1段，表2-9 *
芍药胚离体培养的研究;高昌勇;《北方园艺》;20100830(第16期);第157-158页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN110771502A (zh) 2020-02-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101361458B (zh) 一种甘蔗健康种苗高效繁育方法
CN1653888A (zh) 淮山(山药)组织培养方法
CN103609224A (zh) 一种路易斯安娜鸢尾杂交种子萌发的方法
CN111758559A (zh) 一种蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交种子无菌播种及其育苗的方法
CN108077071B (zh) 穗花牡荆组织培养用培养基及快速繁殖方法
CN111084103A (zh) 一种欧李组培快繁的方法
CN102487829A (zh) 一种粉用型荸荠综合脱毒快繁的方法
CN105766636B (zh) 一种牡丹组织培养再生的方法
CN110402818B (zh) 一种优种板栗成熟胚组织培养快繁育苗的方法
CN110476807B (zh) 一种建立油用牡丹‘凤丹’成熟种胚无菌培养体系的方法
CN112470929A (zh) 大花红景天根颈顶端组织获得再生植株的方法
CN107873517A (zh) 一种通过芍药子叶诱导愈伤组织再生不定芽的方法
CN112042541A (zh) 黄杉属植物通过体细胞胚胎发生的繁殖方法
CN110771502B (zh) 一种用于芍药胚根诱导的培养基及方法
CN110741937A (zh) 一种黄精快速繁殖的方法
CN111280058B (zh) 一种川丹参茎尖脱毒种苗快速繁育方法
Hosseini-Nasr et al. Thidiazuron-induced high-frequency shoot regeneration from root region of Robinia pseudoacacia L. seedlings
CN109937880B (zh) 一种降低卫矛种子内生菌污染率、快速诱导胚状体的方法
CN113317202A (zh) 一种冰糖脆樱桃胚培养方法
CN101595845A (zh) 圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法
CN116171863B (zh) 一种蝴蝶花高效再生的方法
CN114568305B (zh) 一种夏栎组织培养提高再生效率的处理方法
CN114342805B (zh) 一种福鼎大白茶茶种诱导体细胞胚再生植株的方法
CN110199872B (zh) 一种短消毒时间的白掌茎尖组培快繁的方法
CN111264393B (zh) 一种快速繁育淫羊藿试管苗的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant