CN102934611A - 一种从牡丹种子中取胚接种方法 - Google Patents

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Abstract

一种从牡丹种子中取胚接种的方法，属于植物生物技术领域。该方法包括：选材、清洗、切割牡丹种子、消毒、取胚、接种等步骤。本发明大部分操作在超净工作台外完成，不仅能够使实验人员更方便的操作、提高工作效率，还大大降低了污染率；而且本发明中切割牡丹种子时，采取从牡丹种子腹缝线对应的背面开始，以不含胚轴的一端为起点切割，切至牡丹种子高度的三分之二处停止的方法，大大降低了切割种子时损伤胚的可能性，减少了牡丹种子的浪费。

Description

一种从牡丹种子中取胚接种方法
技术领域
本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种从牡丹种子中取胚接种方法。
背景技术
牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.)，雍容华贵，富丽堂皇，深受人们的喜爱。伴随着人民生活水平的提高，我国牡丹的栽培面积越来越大。传统的繁殖方法生产周期长，生产成本高，同时易导致牡丹感染病毒，种性下降。为了实现牡丹种植的规模化、工厂化，降低生产成本，通过组织培养快速繁殖是一条有效的途径。而在牡丹组织培养快速繁殖中，目前用的最多也是最有效的方法就是牡丹的成熟胚培养。牡丹成熟胚培养的第一步就是如何从牡丹种子里面取出胚进行无菌接种。
传统的从牡丹种子中取胚接种的方法是：采取当年的牡丹种子，在超净工作台内，先对牡丹种子进行无菌消毒，再用解剖刀沿种子腹缝线切去一半，然后用镊子固定好种子，再取一个镊子将胚取出。取胚成功率一般为60~70%，取胚后成功繁殖率为90~95%。
此种方法由于将种子直接切去一半，容易伤及胚，而且实验人员在超净工作台内工作受到一定程度的束缚，不仅耗时、操作不小心易损伤胚，对操作人员实验水平也有较高要求。 
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，找到一种操作简单方便，不易损伤胚，而且大大提高取胚效率的方法。
本发明提供的技术方案如下：
一种从牡丹种子中取胚接种方法，包括以下步骤：
A.     选取当年6月底至7月初采取牡丹种子；将牡丹种子表面的黏液用自来水清洗掉；
B.     用手指固定牡丹种子，从牡丹种子腹缝线对应的背面开始，以不含胚轴的一端为起点切割，切至牡丹种子高度的三分之二处，胚保留在未切割的剩下的牡丹种子内，最后将处理过的牡丹种子再用清水清洗一遍，备用；
C.     在超净工作台内，将牡丹种子放置在75 %酒精内消毒20~30 s，之后用0.1 %升汞消毒5 min，再将消毒后的牡丹种子用无菌水冲洗5~6次，吸干牡丹种子上的水份；
D.     固定好牡丹种子切口的两侧，将其掰开，胚保留在其中的一半上，用消过毒的镊子将胚取出；
E.      将胚根朝下，子叶朝上，垂直插放于培养基中培养。
本发明的有益效果是：本发明提供了一种从牡丹种子中取胚接种方法，其有益效果有以下几个方面：
1、本发明在超净工作台外先对种子进行初步的处理，即从牡丹种子腹缝线对应的背面开始，以不含胚轴的一端为起点切割，切至牡丹种子高度的三分之二处，胚保留在未切割的剩下的牡丹种子内；由于在超净工作台外处理，实验人员能够更随意的进行实验操作，切割效率大大提高，而且本方法仅切牡丹种子的一部分，大大降低了损伤胚的可能性。
2、本发明可以大大避免在取胚的时候对胚的伤害，因为胚很小不容易被看见，直接在超净工作台中用解剖刀切割，很容易将胚切伤，或者直接就找不到胚，而降低了接种胚的成功率。而本发明方法在超净工作台内仅需要将牡丹种子沿切口掰开，即可见到胚。
3、牡丹种子很光滑，传统方法的在超净工作台内用镊子固定，用解剖刀切胚时容易使种子逃脱，造成种子的浪费；通过采用本发明，在切割牡丹种子时，可以用手指固定牡丹种子，相比传统方法更方便、牢固、简单，减少了牡丹种子的浪费。
4、通过采用本发明，大部分的操作步骤在超净工作台外进行，减少了超净工作台内工作的时间，降低了污染率。
具体实施方式
下面对本发明的实施例做详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
A.     采取600粒牡丹种子，每150粒作为一组；
B.     将牡丹种子表面的黏液用自来水清洗掉；
C.     用手指固定牡丹种子，从牡丹种子腹缝线对应的背面开始，以不含胚轴的一端为起点切割，切至牡丹种子高度的三分之二处，胚保留在未切割的剩下的牡丹种子内，最后将处理过的牡丹种子再用清水清洗一遍，备用；
D.     将处理过的牡丹种子再用清水清洗一遍；
E.      在超净工作台里，用镊子固定好牡丹种子切口的两侧，将其掰开，胚保留在其中的一半上，用消过毒的镊子将胚取出；
F.      将胚根朝下，子叶朝上，垂直插放于培养基中培养。
G.     统计四组实验结果，成功取胚的牡丹种子分别为135粒、137粒、132粒、136粒，取胚后成功繁殖的有132粒、133粒、130粒、133粒。即四组实验的取胚成功率分别为90%、91.3%、88%、90.7%，取胚后成功繁殖率为97.8%、97.1%、98.5%、97.8%。
上述实施例结果表明，通过采用本发明，大大提高了取胚的成功率，而且采用本发明对取出的胚没有不良影响，为大批牡丹成熟胚组培工作提供了一种很好的从牡丹种子中取胚接种的方法。 

Claims (1)

1.一种从牡丹种子中取胚接种方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、选取当年6月底至7月初之间采取的牡丹种子，将牡丹种子表面的黏液用自来水清洗掉；
B、用手指固定牡丹种子，从牡丹种子腹缝线对应的背面开始，以不含胚轴的一端为起点切割，切至牡丹种子高度的三分之二处，胚保留在未切割的剩下的牡丹种子内，最后将处理过的牡丹种子再用清水清洗一遍，备用；
C、在超净工作台内，将牡丹种子放置在75 %酒精内消毒20~30 s，之后用0.1 %升汞消毒5 ~6 min，再将消毒后的牡丹种子用无菌水冲洗5~6次，吸干牡丹种子上的水份；
D、固定好牡丹种子切口的两侧，将其掰开，胚保留在其中的一半上，用消过毒的镊子将胚取出；
E、将牡丹胚体的胚根朝下，子叶朝上，垂直插放于培养基中培养。
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