CN103609224A - 一种路易斯安娜鸢尾杂交种子萌发的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及种子萌发技术，旨在提供一种路易斯安娜鸢尾杂交种子萌发的方法。包括步骤：将成熟的路易斯安娜鸢尾杂交种子在无菌水中浸泡24h，吸水饱满后消毒，剥取完整胚接种于固体培养基中进行离体暗培养，直至胚萌发后接种于相同组分的固体培养基中进行光照培养，得到杂交苗。本发明采用胚培养技术、对存在休眠期的杂交种子的胚进行离体培养，使杂交种子打破休眠，胚在培养基中迅速膨大、伸长。与常规播种方法相比，本发明中的萌发率提高60%，萌发时间缩短12天、出苗时间缩短20天，而且操作简便并未增加很多工作量。

Description

一种路易斯安娜鸢尾杂交种子萌发的方法
技术领域
本发明涉及种子萌发技术，特别涉及路易斯安娜鸢尾杂交种子萌发的方法。
背景技术
路易斯安娜鸢尾是鸢尾科鸢尾属多年生常绿宿根水生花卉，其花大、花色丰富艳丽、花型多、适应性较强，在华东地区冬季叶片保持常绿，可以作为杂交育种的优良材料。但路易斯安娜鸢尾自然繁殖系数低，而且在自然条件下杂交种子萌发率低，出苗不整齐。其原因在于，鸢尾属植物大部分种的杂交种子具有休眠特性，阻碍其在园艺栽培上的应用，且给杂交育种工作带来了一定的困难。
造成鸢尾属植物杂交种子休眠的主要因素是种皮和胚乳的作用，种皮和胚乳的作用包括机械阻力和含有抑制物质。胚具有形成新植株的潜能，离体萌发容易，不需经过休眠期；胚培养需要的设备及操作简便，在普通的无菌实验室即可进行，不受季节的限制；较无菌播种污染率低、萌发率高。利用胚培养技术可以有效的打破种皮和胚乳的机械阻力，缩短杂交种子萌发的时间，提高出苗整齐度，有利于杂交育种工作的开展。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供一种路易斯安娜鸢尾杂交种子萌发的方法。通过预处理使杂交种子吸水饱满，剥取种胚进行离体培养，保证杂交种子的胚能够快速、稳定的萌发生长。
为解决技术问题，本发明的解决方案是：
提供一种路易斯安娜鸢尾杂交种子萌发的方法，包括以下步骤：将成熟的路易斯安娜鸢尾杂交种子在无菌水中浸泡24h，吸水饱满后消毒，剥取完整胚接种于固体培养基中进行离体暗培养，直至胚萌发后接种于相同组分的固体培养基中进行光照培养，得到杂交苗；所述的固体培养基的配方为：MS培养基2.2g/L、蔗糖50～60g/L、琼脂4～6g/L、苄氨基嘌呤（BA）0.5～1mg/L。
本发明中，所述的离体暗培养是指：将胚播种于固体培养基中恒温静置全遮光培养4d；培养温度为25℃。
本发明中，所述的路易斯安娜鸢尾杂交种子为路易斯安娜鸢尾品种间杂交所获得的种子。
本发明中，所述的消毒是指：将路易斯安娜鸢尾杂交种子用85%～95%乙醇浸泡60s后，浸入2%的次氯酸钠溶液中消毒10min，最后用蒸馏水冲洗干净。
本发明中，所述的光照培养的条件是：培养温度为25℃，光强为1500Lx，光照时间为12h/d。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明提供的路易斯安娜鸢尾杂交种子萌发方法采用胚培养技术、对存在休眠期的杂交种子的胚进行离体培养，使杂交种子打破休眠，胚在培养基中迅速膨大、伸长。与常规播种方法相比，本发明中的萌发率提高60%，萌发时间缩短12天、出苗时间缩短20天，而且操作简便未增加太多工作量。
具体实施方式
实施例1
（1）固体培养基的配方：MS培养基2.2g/L，蔗糖60g/L，琼脂6g/L，BA0.5mg/L。
（2）选取离体开裂的路易斯安娜鸢尾杂交蒴果，将蒴果内种子用自来水冲洗2h后，置于无菌水中浸泡24h；然后用95%酒精消毒60s，再放入2%的次氯酸钠的溶液中消毒10min，最后用蒸馏水冲洗干净。
（3）在超净工作台上将饱满的杂交种子沿腹缝线小心的剖开，剥取完整的胚，转入上述固体培养基中，每皿接种9粒胚。然后将其置于25℃恒温无菌培养室进行暗培养，24h后胚根一端开始膨大，48h后胚变为黄绿色，4d后胚发生向地性弯曲，胚萌发率达到87.6%；然后将生长健壮的芽转入相同固体培养基的柱形瓶中进行光照培养，培养温度为25℃，光强为1500Lx，每天光照时间为12h/d；20d后苗高8cm，进行炼苗移栽。
实施例2
（1）固体培养基的配方：MS培养基2.2g/L，蔗糖53g/L，琼脂4g/L，BA0.8mg/L。
（2）采收未离体未开裂的成熟路易斯安娜鸢尾杂交蒴果，将采收的杂交蒴果轻轻的用软毛刷刷洗干净，于含有0.2%吐温和洗洁精的自来水中冲洗2h。然后用85%酒精消毒60s，再放入2%的次氯酸钠的溶液中消毒10min，最后用蒸馏水冲洗干净。
（3）在超净工作台上将消毒后的杂交蒴果切开，选取饱满的杂交种子沿腹缝线小心的剖开，剥取完整的胚，转入上述固体培养基中，每皿接种9粒胚。然后将其置于25℃恒温无菌培养室进行暗培养，24h后胚根一端开始膨大，48h后胚变为黄绿色，4d后胚发生向地性弯曲，胚萌发率达到90%；然后将生长健壮的芽转入相同培养基的柱形瓶中进行光照培养，培养温度为25℃，光强为1500Lx，每天光照时间为12h/d；20d后苗高8cm，进行炼苗移栽。
实施例3
（1）固体培养基的配方：MS培养基2.2g/L，蔗糖50g/L，琼脂5g/L，BA1mg/L。
（2）在超净工作台上将无菌播种60d而未萌动的路易斯安娜鸢尾杂交种子沿腹缝线小心的剖开，剥取完整的胚，转入上述固体培养基中，每皿接种9粒胚。然后将其置于25℃恒温无菌培养室进行暗培养，24h后胚根一端开始膨大，48h后胚变为黄绿色，4d后胚发生向地性弯曲，胚萌发率达到82.5%；然后将生长健壮的芽转入相同培养基的柱形瓶中进行光照培养，培养温度为25℃，光强为1500Lx，每天光照时间为12h/d；20d后苗高8cm，进行炼苗移栽。
本发明中，MS培养基购自美国Sigma试剂公司。MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。

Claims (5)

1.一种路易斯安娜鸢尾杂交种子萌发的方法，其特征在于，包括以下步骤：将成熟的路易斯安娜鸢尾杂交种子在无菌水中浸泡24h，吸水饱满后消毒，剥取完整胚接种于固体培养基中进行离体暗培养，直至胚萌发后接种于相同组分的固体培养基中进行光照培养，得到杂交苗；所述的固体培养基的配方为：MS培养基2.2g/L、蔗糖50～60g/L、琼脂4～6g/L、苄氨基嘌呤0.5～1mg/L。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的离体暗培养是指：将胚播种于固体培养基中恒温静置全遮光培养4d；培养温度为25℃。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的路易斯安娜鸢尾杂交种子为路易斯安娜鸢尾品种间杂交所获得的种子。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的消毒是指：将路易斯安娜鸢尾杂交种子用85%～95%乙醇浸泡60s后，浸入2%的次氯酸钠溶液中消毒10min，最后用蒸馏水冲洗干净。
5.根据权利要求1所述，其特征在于，所述的光照培养的条件是：培养温度为25℃，光强为1500Lx，光照时间为12h/d。
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